MICROTBULOS

Os microtbulos (MT) so polmeros longos e rgidos que se estendem por

todo o citoplasma e coordenam a localizao intracelular das organelas e de
outros componentes celulares.
Os MT so constitudos por molculas de tubulina, cada uma delas sendo
um heterodmero composto de duas protenas globulares de 55 Kd, muito
similares, denominadas a-tubulina e b-tubulina, fortemente ligadas por
ligaes no covalentes.
Nos mamferos, existem pelo menos, 6 formas de a-tubulinas e nmero
similar de b-tubulinas; embora muito similares, estas formas tm
localizaes distintas na clula e realizam discretas funes diferentes.
ESTRUTURA DE UM MICROTBULO vide Alberts, 2001.
MICROTBULOS E DROGAS ANTIMITTICAS
Muitos dos conjuntos de MTs celulares so lbeis e dependem desta
labilidade para suas funes. O fuso mittico um dos mais extraordinrios
exemplos para o estudo dessa labilidade, sendo alvo de drogas
antimitticas.
A droga colchicina, um alcalide extrado da Colchicum autummale, liga-se
firmemente a uma molcula de tubulina, impedindo sua polimerizao no
se ligando, no entanto, tubulina j polimerizada, constituindo os MTs.
Expondo uma clula em diviso colchicina ( ou colcemide), observa-se um
rpido desaparecimento do fuso mittico indicando que o equilbrio qumico
mantido atravs de uma troca contnua de subunidades entre os MTs do
fuso e o pool de tubulinas livres.
A droga taxol tem ao oposta a nvel molecular; ela liga-se firmemente aos
MTs evitando a perda de subunidades de tubulinas. Entretanto, novas
subunidades de tubulinas podem ser adicionadas ao MTs que cresce, mas
no diminui em tamanho.
POLIMERIZAO DAS TUBULINAS: NUCLEAO E ALONGAMENTO
Vide Alberts et al., 2001

CRESCIMENTO DOS MICROTBULOS

A polaridade estrutural de um MT, que reflete a orientao regular das
subunidades de tubulinas, torna diferentes as duas extremidades do
polmero produzindo um grande efeito na sua velocidade de crescimento.

Se molculas purificadas de tubulinas so colocadas em condies de

polimerizarem nas extremidades de um MT estvel, por um curto perodo de
tempo, observa-se que uma das extremidades alonga com uma velocidade
3 vezes MAIOR do que a outra.
A extremidade que cresce mais rpido definida como MAIS e a outra
extremidade conhecida como MENOS.
Tem sido mostrado que as extremidades MAIS dos MTs se estendem na
clulas a partir de stios de nucleao como o centrossomo, os polos do fuso
mittico ou o corpsculo basal dos clios.

CENTROSSOMO MAIOR CENTRO DE ORGANIZAO DE MTs.

Nas clulas animais, o centrossomo o principal centro organizador de MTs.
Est localizado ao lado do ncleo, prximo da superfcie externa do
envelope nuclear.
O centrossomo contm centenas de estruturas com formato de anis,
constitudas por um outro tipo de tubulina g-tubulina, com dimetro de
25 a 28 nm - sendo que cada uma serve como stio de nucleao para o
crescimento de um MT.
Os dmeros de ab-tubulinas adicionados ao anel de g-tubulina numa
orientao especfica, tem como resultado: a embebio do terminal
MENOS de cada MT no centrossomo, e; o crescimento ocorrendo apenas no
terminal MAIS.
Na maioria das clulas animais, alm dos anis de g-tubulina, encontra-se
imerso no centrossomo, uma estrutura constituda por um curto arranjo
cilndrico de MT, os centrolos.
Os centrolos no tem nenhuma funo na nucleao dos MTs, mas,
estruturas similares - os corpsculos basais - so os centros organizadores
de MTs, nos clios e flagelos.
Centros de organizao contendo stios de nucleao e a manuteno de
baixas concentraes de subunidades de ab-tubulinas, possibilitam s
clulas controlar onde os MTs se formam.
Nem todo o centro organizador de MTs contm centrolos;
1. nas clulas mitticas de plantas superiores, os MTs terminam numa
regio eltron-densa pobremente definida e completamente desprovida de
centrolos.
2. os centrolos esto ausentes no fuso meitico dos ovcitos de
camundongos, embora mais tarde,
apaream no embrio em
desenvolvimento.

Nos fungos e diatomceas, o centro organizador de MTs consiste numa

placa denominada corpsculo polar do fuso, imersa no envelope nuclear.

DESPOLIMERIZAO E REPOLIMERIZAO DOS MTs

A meia-vida de um MT individual de aproximadamente 10 minutos,
enquanto que a vida mdia de uma molcula de tubulina, entre sua sntese
e degradao proteoltica superior a 20 horas.
Assim, cada molcula de tubulina poder participar na formao e
desagregao de muitos MTs, durante sua vida mdia.
Denomina-se Instabilidade Dinmica s transies entre longos perodos de
polimerizao e despolimerizao de subunidades de tubulinas, sendo
fundamental no posicionamento dos MTs na clula.

CRESCIMENTO DO MT e a INSTABILIDADE DINMICA

A Instabilidade Dinmica dos MTs necessita de entrada de energia para
alterar o balano qumico entre a polimerizao e despolimerizao
energia esta que fornecida pela hidrlise de GTP.
A molcula de GTP liga-se subunidade da b-tubulina na molcula do
heterodmero e, quando a tubulina adicionada extremidade do MT, o
GTP hidrolisado a GDP.
IMP a a-tubulina tambm carrega GTP, mas este no pode ser hidrolisado,
de forma que podemos consider-lo parte integrante da estrutura da
protena.
A Instabilidade Dinmica uma conseqncia do retardamento da hidrlise
do GTP aps a ligao da tubulina.
Quando um MT cresce rapidamente, molculas de tubulina juntam-se
extremidade do polmero mais rpidamente do que o GTP que carregado
por eles, possa ser hidrolisado.
Isto resulta na presena de um quepe de GTP na extremidade do MT, o
que estimula a polimerizao, uma vez que as molculas de tubulina
contendo GTP ligam-se umas s outras com maior afinidade do que as
molculas que contm GDP.
Ao contrrio, quando um MT perde seu quepe de GTP por exemplo, se a
velocidade instantnea de polimerizao diminui ele comear a encurtar
e tender a continuar encolhendo.
As clulas podem modificar a instabilidade dinmica de seus MTs, com
propsitos especficos; na Mitose, os MTs se agregam e se desagregam com
muita rapidez, ao passo que, numa clula com morfologia definida, a

Instabilidade Dinmica suprimida por protenas que se ligam aos MTs,

estabilizando-os contra a despolimerizao

ESTABILIZAO SELETIVA DOS MTs

POLARIZAO CELULAR

Vimos que tanto in vivo quanto in vitro, os MTs tendem a existir em dois
estados crescimento estvel e desagregao rpida e catastrfica.
Nas clulas animais os MTs tendem a irradiar em todas as direes, a partir
do centrossomo, onde esto ancoradas suas extremidades MENOS,
mudando continuamente, a medida que novos MTs crescem e substituem
aqueles que despolimerizam.
Um MT que cresce a partir do centrossomo pode ser estabilizado se sua
extremidade MAIS for bloqueada, prevenindo a despolimerizao. Se o
bloqueio for feito por uma estrutura numa regio especfica da clula, ser
estabelecida uma ligao estvel entre esta estrutura e o centrossomo.
A POLARIDADE CELULAR seria determinada por estruturas ou fatores
localizados em regies especficas do crtex celular que capturam as
extremidades MAIS dos MTs.

MODIFICAES PS-TRADUCIONAIS DA TUBULINA MTs MADUROS

As subunidades de tubulina podem ser covalentemente modificadas aps
sua polimerizao.
Estas modificaes ocorrem na a-tubulina, consistindo na acetilao de um
resduo especfico de lisina e na remoo do resduo de tirosina da
extremidade carboxiterminal da protena.
Ambas so reaes enzimticas lentas que ocorrem somente nos MTs e
NO nas molculas de tubulina livres. Alm disso, so rapidamente
reversveis, to logo a despolimerizao acontea, liberando as tubulinas.
Uma modificao completa demora vrias horas; nos fibroblastos, onde a
reciclagem de MTS relativamente rpida, poucos estaro modificados. Nos
axnios, a maioria dos MTs estvel e na sua maior parte esto
modificados.
IMP Essas modificaes so indicadores teis para o estudo da
estabilidade dos MTs na clula. Acredita-se que sua funo seja colocar
disposio stios para ligao de protenas especficas que iro estabilizar os
MTs maduros.

PROTENAS ASSOCIADAS AOS MICROTBULOS (MAPs)

A polaridade celular reflete a polarizao dos sistemas de MTs em seu
interior. importante ressaltar que os MTs no atuam sozinhos mas,
associam-se uma grande variedade de protenas acessrias para juntos,
exercerem as vrias funes.
Enquanto as modificaes ps-traducionais da tubulina caracterizam
determinados MTs como maduros e podem promover a sua estabilidade,
as modificaes mais abrangentes e versteis so aquelas obtidas pela
ligao com outras protenas, as MAPs.

FUNES - As MAPS servem tanto para estabilizar os MTs contra a

desagregao como para mediar sua interao com outros componentes
celulares.
Dadas as diferentes funes dos MTs, existem muitos tipos de MAPs
algumas amplamente distribudas na maioria das clulas, enquanto outras
so encontradas somente em tipos celulares especficos.

CLASSES de MAPs - isoladas do crebro

1. protenas HMV com peso molecular de 200.000 a 300.00 ou mais, que
incluem MAP-1 e a MAP-2;
2. protenas tau com peso molecular entre 55.000 a 62.000.

IMP 1. Ambas as classes possuem dois domnios; um deles se liga aos

MTs e o outro, auxilia na ligao do MT a outros componentes celulares;
2. as protenas MAPs estabilizam os MTs por inibirem a liberao da
tubulina das suas extremidades
Alm das citadas, muitas outras MAPs tm sido descritas, algumas
funcionando como componentes estruturais e outras, como protenas
motoras.
Compartimentalizao Citoplasmtica das clulas nervosas Participao
das MAPs

As clulas nervosas possuem dois tipos de prolongamentos:

1. axnio - apresentam dimetro uniforme, podem ter muitos centrmetros
de comprimento e so responsveis pela propagao dos sinais eltricos a
partir do corpo celular;

2. dendritos so prolongamentos delgados, raramente excedendo 500 mm

de comprimento, cuja funo consiste em receber as informaes eltricas
procedentes de outros neurnios e transmiti-las ao corpo celular.
A maioria das clulas nervosas possui vrios dendritos mas somente um
axnio.
Tanto os axnios como os dendritos so carregados com MTs, em arranjos
diferentes.
Axnios os MTs so muito longos e esto todos orientados com suas
extremidades MAIS no sentido oposto ao do corpo celular; apresentam
apenas a protenas tau;
Dendritos so mais curtos e sua polaridade mista: alguns possuem suas
respectivas extremidades MAIS orientadas em direo ao corpo celular e
outros orientam-se na direo contrria. Apresentam a MAP-2 (presente
tambm no corpo celular).

PROTENAS MOTORAS E O TRANSPORTE INTRACELULAR

Foram identificadas e isoladas duas classes de protenas
dependentes de MTs as cinesinas e as dinenas citoplasmticas.

motoras

CINESINAS apresentam maior diversidade do que as dinenas, e membros

de diferentes famlias esto envolvidos no transporte de organelas, na
mitose e meiose e no transporte de vesculas sinpticas ao longo dos
axnios.
So molculas com cerca de 350 Kd, consistindo de 2 cadeias pesadas
(cerca de 110 Kd cada uma) e 2 cadeias leves (60 a 70 Kd).
As cadeias pesadas tem longas regies a-helicoidal que se entrelaam; a
cabea globular amino-terminal so domnios motores da molcula, ligandose aos MTs e ATP, cuja hidrlise (atividade ATPase) fornece energia para o
movimento.
A poro da cauda consiste das cadeias leves associadas com cada um dos
domnios carboxi-terminal das cadeias pesadas. Esta parte responsvel
pela ligao a outros componentes celulares (vesculas membranosas,
organelas) que so transportadas ao longo dos MTs pela ao das
quinesinas.

DINENAS esto envolvidas com o transporte de organelas e com a

mitose, sendo relacionadas com as dinenas ciliares, protenas motoras dos
clios e flagelos.
A Dinena uma molcula extremamente grande (acima de 2.000 Kd),
consistindo de 2 ou 3 cadeias pesadas (cada uma com 500 Kd)
complexadas com um nmero varivel de polipeptdeos (cadeias) leves e
intermedirios (14 a 120 Kd).
As cadeias pesadas formam domnios globulares motores que se ligam ao
ATP (com atividade ATPase) e so responsveis pelo movimento ao longo
dos MTs e a poro basal, que se liga a outras estruturas tais como
vesculas e organelas.

DIREO DO MOVIMENTO AO LONGO DOS MTs

A maioria das protenas motoras conhecidas deslocam-se somente numa
direo ao longo dos MTs as QUINESINAS para a extremidade MAIS e as
DINENAS para a extremidade MENOS.
Uma exceo a quinesina da Drosophila chamada Ncd, necessria na
meiose; ela difere da quinesina axonal tanto na direo quanto na
velocidade de deslocamento: a axonal dirige-se para a extremidade MAIS a
2 mm/Seg e a Ncd, se desloca para a extremidade MENOS a 0,1 mm/Seg.
RELAO:

MTs e ORGANELAS (Aparelho de Golgi, RE e Vesculas)

RELAO:

MTS e MITOSE

MTs - CLIOS E FLAGELOS

Muitos MTs nas clulas esto estabilizados atravs de suas associaes com
outras protenas, e por conseqncia, mostram instabilidade dinmica.
Os MTs estveis so empregados pelas clulas como rgidos suportes (vigas)
para construrem uma variedade de estruturas polarizadas, como os clios e
os flagelos.
CLIOS - so apndices finos, semelhantes aos cabelos, com 0,25 mm de
dimetro e 10 mm de comprimento, contendo no seu interior um feixe de
MTs; estendem-se a partir da superfcie de muitos tipos de clulas.
A funo primria dos clios consiste em movimentar fluido sobre a
superfcie celular ou deslocar clulas isoladas atravs de um fluido.
Nas clulas epiteliais que revestem o trato respiratrio humano, os clios
(109/cm2 ou mais) limpam as camadas de muco contendo partculas de
poeira e clulas mortas em direo boca, onde sero engolidas e
eliminadas.
Os clios tambm auxiliam no deslocamento do vulo pelo oviduto.

FLAGELOS - dos espermatozides e de muitos protozorios so muito

semelhantes aos clios na sua estrutura interna, mas normalmente so
muito mais longos, 200 mm de comprimento.
As clulas normalmente possuem um ou dois flagelos. Os flagelos das
bactrias so completamente diferentes daqueles presentes nas clulas
eucariontes.

AXONEMA ESTRUTURA FUNDAMENTAL DOS CLIOS E FLAGELOS

MOVIMENTO dos Clios e Flagelos
Os MTs de um axonema esto associados com numerosas protenas,
algumas estruturais, outras geradoras de fora (motora), sendo que, dessas
protenas, a mais importante a Dinena Ciliar.
A Dinena Ciliar um grande complexo protico (2.000 Kd), composta por 9
a 12 cadeias polipeptdicas (a maior, uma cadeia pesada com 512 Kd); as
cadeias pesadas formariam a poro principal das cabeas globulares e os
domnios das hastes e, muitas cadeias leves estariam agrupadas ao redor
da base das hastes.
A base da molcula se liga firmemente ao microtbulo A, de forma
independente de ATP e, as cabeas globulares possuem um stio,
dependente de ATP, para ligao ao microtbulo B.

CORPSCULOS BASAIS so estruturas cilndricas, com 0,2 um de largura

e 0,4um de comprimento. Nove grupos de 3 MTs, fundidos em tripletes
formam a parede do corpsculo e cada um inclina-se para dentro, como
lminas de uma turbina
Cada par de MTs do Axonema dos clios se origina a partir de dois MTs do
triplete do corpsculo basal; no se sabe como o par central se forma.
Assim, o Corpsculo Basal serve para iniciar o crescimento dos MTs axonais,
bem como, ancorar os clios e flagelos na superfcie das clulas.
Por autoradiografia, sugere-se que a adio de tubulinas e de outras
protenas tem lugar na regio distal da estrutura, extremidade MAIS do MT.