PREPARACIN DE COLORANTES

Prctica No. 5 (Tincin Simple).

Cristal violeta.
Cristal violeta.................................... 1 g
Agua destilada.............................. 100 ml.
Preparacin:
Disolver el colorante en el agua.
Safranina.
Safranina...................................... 0,5 g
Agua destilada.............................. 100 ml.
Preparacin:
Disolver el colorante en el agua.
Prctica No. 6 (Tincin de bacterias usando azul de metileno)
Azul de metileno.
Azul de metileno............................ 3 ml.
Etanol de 95%............................. 20 ml.
Agua destilada............................ 100 ml.
Preparacin:
Disolver el colorante en alcohol.
Agregar el agua y filtrar.
Prctica No. 7 (Tincin de Gram).
Tincin de Gram Modificado
Colorante primario.
Cristal violeta: .. 2,5 gr.
Agua destilada: 1000 ml.
Preparacin:
Disolver el colorante en agua destilada y llevar a un volumen de 1 litro. Guardar en
frasco de vidrio color mbar.
Solucin sensibilizante.
Bicarbonato de sodio: .. 12,5 grs.
Agua destilada: .. 1000 ml.
Preparacin:
Disolver el bicarbonato en agua destilada y llevar a un volumen de 1 litro. Guardar
en frasco de vidrio.
Mordiente (lugol).
Yodo: . 20 grs.
Hidrxido de sodio 1M: 100 ml.

Preparacin:
Disolver el yodo en 100 ml. de hidrxido de sodio 1M, agregar agua destilada y
llevar a un volumen de 1 litro. Guardar en frasco de vidrio color mbar.
Decolorante.
Etanol de 95 %: .. 750 ml.
Acetona: .. 250 ml.
Colorante de contraste.
Fucsina bsica (solucin saturada en Etanol) ......100 ml.
Agua destilada: ................... 900 ml.
Preparacin:
En 100 ml de etanol al 96%, disolver poco a poco Fucsina bsica, hasta obtener
una solucin saturada, se adiciona agua destilada hasta completar un volumen de
1 litro. Guardar en frasco de vidrio color mbar.
NOTA:
Estos colorantes deben madurar por un mnimo de 30 das para obtener mejores
resultados. Otra tcnica para preparar colorantes para la Tincin de GRAM Cristal
violeta y oxalato de amonio. (Reactivo de Hucker)
Solucin A:
Cristal violeta (pureza del colorante de por lo menos, el 90%)........ 2 g.
Etanol (95%)................................................................................... 20 ml.
Solucin B:
Oxalato de amonio.............................................. 0,8 g.
Agua destilada..................................................... 80 ml.
Preparacin:
Mezclar cada uno de los solutos en su disolvente respectivo.
Dejar la solucin de oxalato de amonio en reposo durante una noche o calentar
ligeramente hasta que se solubilice.
Mezclar las dos soluciones y filtrar.
Solucin de yodo yodurado. (Lugol)
Yodo (qumicamente puro).............. 1 g
Yoduro de potasio........................... 2 g
Agua destilada............................ 300 ml.
Preparacin:
Combinar el yodo y el yoduro de potasio con la ayuda de un mortero.
Lavar el contenido de ste con pequeas alcuotas de agua destilada.
Agregar agua suficiente para obtener un total de 300 ml.
Agitar fuertemente.
Almacenar la solucin en un frasco de vidrio color mbar.
Alcohol acetona.
Etanol 95% ................................... 500 ml.
Acetona ....................................... 300 ml.
Preparacin:

Mezclar los ingredientes respectivos de cada combinacin para su uso.

Safranina.
Safranina (pureza del colorante, 90% ....... 0,25 g
Etanol (95%) ....................................... 10 ml.
Agua destilada............................................ 1000 ml.
Preparacin:
Disolver el colorante en 10 ml. de etanol.
Agregar el agua destilada.
Filtrar.
Almacenar en frasco de vidrio color mbar.
Prctica No. 8 Tcnicas especiales para Tincin de Organelos.
Tincin de esporas.
Tcnica de Wirtz
Verde de malaquita:
Solucin acuosa saturada de verde malaquita.
Safranina
Safranina .............................. 0,25 g
Agua destilada ....................... 100 ml.
Tcnica de Moeller:
cido crmico 5%
cido crmico ...... 5 g.
Agua destilada .. 100 ml.
Fucsina fenicada (Zielhl-Neelsen).
Fucsina bsica 1 g.
Fenol . 5 g.
Etanol 95% . 10 ml.
Agua destilada 90 ml.
Preparacin:
Mezclar en un mortero hasta conseguir un homogeneizado completo; una vez
logrado, aadir lentamente el agua destilada a completar un volumen de 100 ml.
Tcnica de Schaeffer y Fulton
Verde de malaquita al 5%
Verde de malaquita 5 g.
Agua destilada 100 ml.
Safranina al 5%
Safranina . 5 g.
Agua destilada 100 ml.
Nigrosina 10%
Nigrosina .. 10 g.
Formaldehido 37% 0,5 ml.

Preparacin
Disover 10 g de nigrosina en 100 ml de agua destilada, hervir durante 10 minutos,
dejar enfriar, aadir 0,5 ml de formaldehido y filtrar.
Tincin de Flagelos
Colorante para Flagelos de Leifson:
Solucin A
Fucsina bsica ................................... 1,2 g.
Etanol 95% ......................................... 100 ml.
Solucin B
cido tnico ................................... 3 g
Agua destilada ................................. 100 ml
Solucin C
Cloruro de sodio ............................. 1,5 g
Agua destilada ................................ 100 ml
Para preparar la solucin de uso, se mezclan cantidades iguales de las soluciones
A, B y C y se guarda en frasco cerrado hermticamente en el refrigerador donde
es estable durante varias semanas.
Colorante para Flagelos Solucin de Loffler
Solucin acuosa de cido tnico al 20 %
cido tnico .. 20 g.
Agua destilada . 100 ml.
Solucin saturada de sulfato ferroso
Solucin alcohlica saturada de fucsina cida
Solucin de fucsina bsica 5% en agua de anilina bsica:
Anilina bsica .... 0,5 g
Agua destilada ... 100 ml.
Fucsina bsica ... 5 g
Agua de anilina bsica ....... 100 ml
Colorantes para cpsulas
Colorantes de Maneval modificado
Colorante de Maneval A (colorante primario)
Solucin acuosa de rojo congo al 1%
Rojo congo . 1g
Agua destilada .. 100 ml.
Colorante de Maneval B (colorante de contraste)
Solucin acuosa de fenol al 5% ------------------------ 30 ml

Fernol ... 5 g.
Agua destilada .. 100 ml.
Disolver los 5 g. de fenol en agua destilada y completar el volumen a 100 ml.
Solucin acuosa de cido actico glacial al 20% ---- 10 ml
cido actico glacial .. 20 ml.
Agua destilada .. 80 ml.
Solucin acuosa de cloruro frrico al 30% ----------- 4 ml
Cloruro frrico . 30 g.
Agua destilada .. 100 ml.
Disolver los 30 g. de cloruro frrico en agua destilada y completar el volumen a
100 ml.
Solucin acuosa de fucsina cida al 1% ------------ 2 ml
Fucsina cida . 1 g
Agua destilada . 100 ml
Preparacin del colorante de Maneval B (colorante de contraste)
Mezclar :
Solucin acuosa de fenol al 5% ------------------------- 30 ml
Solucin acuosa de cido actico glacial al 20% ---- 10 ml
Solucin acuosa de cloruro frrico al 30% ----------- 4 ml
Solucin acuosa de fucsina cida al 1% ------------ 2 ml
AZUL DE ALGODN.
Para preparaciones microscpicas en fresco de mohos.
Lactofenol:
cido lctico ....................... 100 ml
Fenol ................................. 100 g
Glicerol ................................ 200 ml
Agua .................................. 100 ml
Azul Algodn o azul de lactofenol
Solucin de azul algodn
Sol. saturada de azul algodn (azul anilina soluble) ........... 10 ml
Glicerol ............................................................................. 10 ml
Agua ................................................................................. 80 ml
Mezclar la solucin de azul algodn con la solucin de lacto fenol a partes iguales.
Otra forma de prepararlo es:
Fenol 0,1 gr
Acido lctico .. 8 ml
Agua destilada . 10 ml
Glicerina 20 ml
Azul de anilina . 0,5 g
Se disuelve calentando ligeramente en fenol, el cido lctico, el agua destilada y la
glicerina; se deja enfriar y se aade el azul de anilina. Se deja reposar durante 24
horas. Se filtra y se guarda en botella de color topacio.

Mezcla Crmica : se prepara con 4 o 5 gramos de dicromato de sodio o de

potasio, grado tcnico, disueltos en la menor cantidad de agua(ms o menos 5 ml)
, y disolver con mucho cuidado con100 ml de cido sulfrico concentrado.