de Fungos
Roteiro
Coleta da amostra
Fatores relacionados contaminao de
alimentos por fungos
Tcnicas de isolamento e identificao de fungos
relacionados a contaminantes de alimentos
Microscopia do material
Semeadura do material
COLETA
Colheita da Amostra
Utilizar utenslios esterilizados.
Material clnico:
- Somente aps suspenso de medicao antifngica: 15 dias (uso
tpico), 30 dias (uso sistmico).
- Informaes sobre o paciente acompanhando a amostra.
Alimentos:
- Produtos prontos para consumo devem ser coletados em suas
embalagens originais fechadas.
- Embalagens abertas: devem ser acondicionadas adequadamente
para evitar contaminao com outros alimentos, com
manipuladores, com o ambiente, etc.
Fatores Intrnsecos
Relacionados com as
caractersticas prprias do alimento
Fatores Extrnsecos
Fatores Intrnsecos
Atividade de gua (Aa)
Acidez (pH)
Potencial de oxi-reduo (Eh)
Composio qumica
Presena de fatores antimicrobianos naturais
Interaes entre os microrganismos presentes nos alimentos
Fatores Intrnsecos
Atividade de gua (Aa):
Fatores Intrnsecos
Acidez (pH):
pH em torno da neutralidade (entre 6,5 e 7,5) o mais
favorvel para a maioria dos microrganismos.
Fatores Intrnsecos
Potencial de Oxi-reduo (Eh):
Fatores Intrnsecos
Composio qumica:
gua
Fonte de energia: acares, lipdios.
Sais minerais: Na, K, Ca, Mg, Fe, Cu, Mn, Mo, Zn, Co, P, S.
Fatores Intrnsecos
Presena de fatores antimicrobianos naturais:
Presentes naturalmente em alguns alimentos, com
capacidade de retardar ou impedir a multiplicao
microbiana.
Exemplos: leos essenciais com atividade antimicrobiana
presentes em condimentos; derivados do cido
hidroxicinmico, tanino, cidos orgnicos e leos essenciais,
encontrados em frutas e vegetais.
Estruturas biolgicas que funcionam como barreiras
mecnicas para penetrao do microrganismo: cascas, peles
dos animais, pelcula das sementes.
Fatores Intrnsecos
Interaes entre os microrganismos presentes nos alimentos:
Fatores Extrnsecos
Umidade ambiental
Temperatura ambiental
Composio qumica da atmosfera que envolve o alimento
Fatores Extrnsecos
Temperatura ambiental:
Fungos podem crescer em faixas de temperatura mais ampla
do que as bactrias.
Fatores Extrnsecos
Composio qumica da atmosfera que envolve o alimento:
MICROSCOPIA DO MATERIAL
(Exame Direto)
Exame Direto
Preparaes montadas entre lmina e lamnula, imersas em
uma substncia que facilite a visualizao microscpica
(KOH, tinta da China, K-tinta).
Indica, na maioria das vezes, se o material examinado
contm ou no estruturas fngicas.
Preparados imediatos utilizados como auxiliares no
diagnstico clnico.
KOH a 10-40%
Prata-metenamina
(corante)
KOH a 10-40%
PAS, GrocottGomori ou HE
SEMEADURA DO MATERIAL
(Cultura)
Cultura
Absolutamente necessria para o isolamento e identificao
dos fungos.
Exame direto ou microscopia com colorao -> semeadura
em diversos meios de isolamento.
A escolha dos meios orientada pelos achados micolgicos
do exame direto ou das preparaes coradas e tambm pela
suspeita clnica.
Meios de cultura primrios:
antibitico
- Sabouraud simples
- Sabouraud + cloranfenicol
- Sabouraud + cloranfenicol + cicloeximida
inibe crescimento de
fungos oportunistas
Cultura
fneros = cabelos,
pelos e unhas.
Fluxograma mostrando os meios primrios que devem ser utilizados para cada espcime
clnico, bem como os intervalos de tempo sugeridos para observao do crescimento
fngico.
Cultura
Meios de cultura diferenciais:
- CHROMagar: usado para facilitar evidenciao de infeco mista
por leveduras (quando a pesquisa direta indica possvel existncia
de leveduras).
- Sabouraud + BHI (Brain Heart Infusion) -> SABHI: para suspeita
clnica de histoplasmose e/ou coccidioidomicose.
Cultura
Caracterizao das Colnias:
Geralmente apresentam morfologias tpicas, quando os
microrganismos so semeados em meios com a mesma
composio qumica.
Atravs do aspectos macroestruturais, possvel sugerir a
espcie microbiana presente na colnia.
Na observao das caractersticas deve-se ressaltar os
seguintes aspectos:
- Tamanho da colnia,
- Caractersticas dos bordos,
- Textura,
- Relevo,
- Pigmentao.
Cultura
Caracterizao das Colnias Tamanho:
A colnia pode apresentar-se com tamanho bastante
varivel, dependendo da qualidade e quantidade do
substrato ofertado;
Colnias de uma mesma espcie fngica, aps semeadas e
crescidas isoladamente em placa de Petri, se apresentam
como macrocolnias.
Cultura
Caracterizao das Colnias Bordos:
Podem ser observados muitos desenhos, desde morfologias
bem delimitadas at achados de projees irregulares (que
lembram franjas);
Podem ser observada, nos bordos das colnias, uma
variao da colorao em relao ao centro pea-chave
para identificar o possvel patgeno implicado.
Cultura
Caracterizao das Colnias Tamanho e bordos:
Cultura
Caracterizao das Colnias Textura:
colnias algodonosas: apresentam-se macroscopicamente com
aspecto de algodo;
colnias furfurceas: lembram um punhado de substncia
farincea espalhado em uma superfcie;
colnias penugentas: evidenciam-se estruturas que lembram
pequenos fragmentos de penugem de aves;
colnias arenosas: assemelham-se a areia de praia;
colnias veludosas: apresentam aspecto de tecido aveludado;
colnias glabrosas: apresentam aspecto visual de cera ou
manteiga.
Cultura
Caracterizao das Colnias Textura:
Aspecto das colnias fngicas quanto textura: 1- colnias algodonosas; 2colnias furfurceas; 3- colnias penugentas; 4- colnias arenosas; 5- colnias
veludosas; 6- colnias glabrosas.
Cultura
Caracterizao das Colnias Relevo:
colnias cerebriformes: topografia de altos e baixos, fazendo
circunvolues e lembrando o aspecto encontrado no crebro;
colnias rugosas: variao da cerebriforme, s que as pregas
topogrficas se fazem menos evidentes e, s vezes, radiais, a
partir do centro da colnia;
colnias apiculadas: presena de uma salincia na parte central,
lembrando um pequeno cume;
colnias crateriformes: aprofundam no meio, assumindo o
aspecto de uma cratera.
Cultura
Caracterizao das Colnias Relevo:
Aspecto das colnias fngicas quanto ao relevo: 1- colnias cerebriformes; 2colnias rugosas; 3- colnias apiculadas; 4- colnias crateriformes.
Cultura
Caracterizao das Colnias Pigmentao:
Cultura
Achados Micromorfolgicos: estruturas de frutificao e de
ornamentao.
Cultura
Provas Nutricionais:
Provas
nutricionais
nos
meios
Trichophyton (7 meios), para auxiliar na
identificao dos dermatfitos.
Bibliografia
SIDRIM, J. J. C. Fundamentos Clnicos e Laboratoriais da Micologia
Mdica. Editora Guanabara Koogan. 1999.