Anda di halaman 1dari 30

UjipadaPengawasanKualitas

MikrobiologipadaProdukFarmasi
danMakanan
MarliaSinggihWibowo

JenisUji

Ujilangsung
Teknikkultur
MetodeEnumerasi
MetodeAlternatif
MetodeCepat

UjiLangsung
Pengamatanlangsungdenganmata
(makroskopik)
Pengamatandibawahmikroskop
(mikroskopik)
Metodepewarnaan
DEFT(DirectEpifluorescentFilterTechnique)

Pengamatanlangsungdenganmata(makroskopik):morfologi
mikroorganisme,warnaspora,warnadanbentukkoloni
Pengamatandibawahmikroskop(mikroskopik):bentukdan
motilitasmikroorganisme,bentukdanwarnahifa.Adadua
jenismikroskop:optikdanfasekontras
Metodepewarnaan:pewarnaangramuntukbakteri
DEFT(DirectEpifluorescentFilterTechnique):Sampeldisaring
denganfilter,bakteridiwarnaidenganzatwarnatertentulalu
dilihatdibawahmikroskopepifluoresens

DEFT(DirectEpifluorescentFilterTechnique)
Filtermembranpolikarbonat
Zatwarnasenyawafluorokromatisyang
berfluoresensisetelahberikatan
Acridineorange :
IkatandenandsDNA:hijau
IkatandenganssRNA:oranye
Ikatandenganselhidup:kuning
Ikatandenganselmati:hijauterang

TeknikKultur
Walaupunberbagaimetodeanalisiscepatdan
sensitiftelahdikembangkanuntukidentifikasi
dankarakterisasimikrobapatogen,teknik
pembiakanmikrobadidalammedium
mikrobiologimasihdiperlukanterutamauntuk
konfirmasiidentitas.Mediamikrobiologiyang
seringdigunakanumumnyaadalahmedium
padatataucair.Mediumpadatumumnya
mengandungagar.

Kulturpadamediaagar

TujuanIsolasi
TujuanDeterminasi
TujuanPenyimpanan
TujuanPertumbuhan
TujuanProduksi
TujuanAnalisis

MetodeEnumerasi

PlateCount :metodeperhitunganmikroba
yangditumbuhkandiatascawanpetri
MPNCount (MostprobableNumber):
metodeperhitunganrelatifberdasarkan
fenomenakekeruhan
AnalisisFisikokimia :metodeperhitungan
mikrobaberdasarkankomponenselatau
metabolityangdihasilkan

MetodeAlternatif
DyereductionTest
ElectricalMethods
ATPDetermination

DyereductionTest
Berdasarkanreaksiredoksdarisuatuzatwarna(dye)
Dyeakanmengambilelektrondarisuatusistembiologiyang
aktifdanakanmenghasilkanperubahanwarna
Umumnyabentukteroksidasiakanberwarnadanbentuk
tereduksitidakberwarna
Contohdyeyangseringdigunakan:metilenblue,resazurin,
trifeniltetrazoliumklorida

ElectricalMethods
Ketikamikroorganismetumbuh,aktivitasnya
akanmenyebabkanperubahankomposisi
mediumdanolehkarenanyaakanmerubah
sifatelektriknya.
Sifatelektrikyangdapatdiukur:konduktansi,
kapasitans,danimpedansi

PenetapanATP
ATPditemukandalamaktivitasselhidupyang
melakukanmetabolisme
Diukurmelaluiaktivitasenzimluciferasedan
substratluciferinmenghasilkanpendaran
cahaya(chemiluminesence)

Metodecepat
MetodeImunokimia
Metodemolekuler

MetodeImunokimia
Prinsipanalisis:berdasarkanreaksiAntigen
Antibodi
Komponenselataumetabolitselmikroba
bertindaksebagaiantigen,direaksikan
denganpereaksi(suatuAbyangspesifik)
menghasilkankompleksAgAb
KompleksAgAbdivisualisasidengan
berbagaicarayangdapatdiukur
(spektrofotometri,spektofluorometri,dll.)

PrinsipELISA(EnzymeLinked
ImmunosorbentAssay)
Antigen
Kompleks AgAb

Konjugat
enzim pada
Ag-Ab
Substrat

Antibodi
Reaksi
enzimatik

Produk
berwarna

JenisMetodeImunokimia

EIA/ELISA(EnzymeImmunoAssay)
RIA(RadioImmunoAssay)
IFA(ImmunoFluoresenceAssay)
LIA(LuminescenceImmunoAssay)

MetodeMolekuler
CaraHibridisasi
CaraAmplifikasi

Teknikhibridisasi
ProsesdenaturasidsDNAmenjadissDNA
menggunakanpemanasan
KombinasissDNAtersebutdengansuatu
segmenssDNAlainyangtelahdiberiprobe
(label)
HibridDNAyangtelahmengandunglabel
dapatdideteksidenganberbagai

TeknikHibridisasi
ssDNA
dsDNA

denaturasi

ssDNA dgn probe

ssDNA

Hibrid DNA berlabel

Teknikamplifikasi
PCR(polymerasechainreaction):reaksipolimerisasiberantai
DNAtargetdidenaturasimenggunakanpanas
Pelekatanprimer(suatuoligonukleotidapendek)yang
komplemendengansalahsatuujungssDNA
SintesisDNAyangdiawalidariprimer
Prosespengulangan20 50x

3
5

5
3
Denaturasi pada 94 C

3
Annealing primer pd 72C

5
Polimerisasi
pada 72 C

dsDNA baru

dsDNA baru

Proses berulang

Denaturasi
Annealing
Polimerisasi

ProsessetelahPCR
Setelahpengulangan20 50xdiperoleh
jumlahfragmenDNAyangcukupbanyak
sehinggadapatdideteksi
ProdukPCRdapatdideteksidengan
elektroforesis
PitapitaDNAdibandingkandenganmarker
DNA

ElektroforesisDNA

DNA
marker

Produk PCR

PCR Fingerprints of Replicates of an isolate


of Metarhizium anisopliae, After 2 Years of
Preservation with Mr Primer

L to R:1,18 100 bp ladder,2-6 lyophilised ,7-11 mycelial plugs in


water , 12-16 cryopreserved, 17 control

M. Ryan

InstrumendanBahanuntuk
analisisPCR

DNAThermalcycler
DNAtarget
Primer
DNApolimerase
Nukleotida
LarutanMg2+
AlatElektroforesis

BiochemicalMethods:Enzymes

An APIZYM strip
Enzymes tested for include: acid/alkaline phophatase,
trypsin, chymotrypsin, galactosidase, glucosidase,
glucuronidase, proteases, fucosidase.

M. Ryan

BiochemicalMethods:Metabolites

Thin Layer Chromatography of Secondary Metabolites


(Example of Patulin production by Penicillium spp.)

Quiz
1.Jelaskanperbedaanujilangsungdengan
ujienumerasiuntukmikrobapatogen
2.Sebutkanmetodeujimikrobiologiyang
termasukmetodekualitatifdanmetode
kuantitatif
3.Apabedaprinsipujipadametode
imunokimiadanmetodePCR