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Segn Simone Golunski ,Viviane Astolfi ,Naira Carniel ,Dbora de

Oliveira ,Marco Di Luccio ,Marcio A. Mazutti ,Helen Treichel en


artculo de investigacin Precipitacin con etanol y ultrafiltracin de
inulinasas de Kluyveromyces marxianus nos menciona que:
Las tcnicas ms utilizadas para la purificacin de protenas se basan en los
procesos cromatogrficos que son muy especficos y que permiten la
obtencin de fracciones muy puras. Sin embargo, estos procesos presentan
bajos rendimientos, y son difciles de escalar en marcha, lo que aumenta los
costos del producto final. Para la aplicacin en la industria de alimentos y
bebidas, enzimas microbianas requieren un cierto grado de purificacin, sin
embargo, los costes de separacin deben reducirse al mnimo para hacer
que el uso de enzimas en el proceso de alimentos factible [5] . Para la
minimizacin de costes es importante encontrar mtodos de procesamiento
aguas abajo econmicos y eficaces.
Segn Simone Golunski ,Viviane Astolfi ,Naira Carniel ,Dbora de
Oliveira ,Marco Di Luccio ,Marcio A. Mazutti ,Helen Treichel en
artculo de investigacin Precipitacin con etanol y ultrafiltracin de
inulinasas de Kluyveromyces marxianus nos menciona que:
Ensayo de protenas (mtodo estndar). Solucin de protena que contiene
10 a 100, la protena ug en un volumen de hasta 0,1 ml se pipetearon en 12
x 100 mm Tubos de ensayo. El volumen en el tubo de ensayo se ajust a 0,1
ml con tampn apropiado. Cinco mililitros de reactivo de protena se aadi
a la tubo de ensayo y los contenidos mezclados ya sea por inversin o
vrtex. Los absorbancia a 595 nm se midi despus de 2 min y antes de 1 h
en 3 ml cubetas contra un blanco de reactivo preparado a partir de 0,1 ml
de la apropiada tampn y 5 ml de reactivo de protena. El peso de la
protena se represent en contra de la absorbancia correspondiente que
resulta en una curva estndar utilizado para determinar la protena en
muestras desconocidas.
Segn Simone Golunski ,Viviane Astolfi ,Naira Carniel ,Dbora de
Oliveira ,Marco Di Luccio ,Marcio A. Mazutti ,Helen Treichel en
artculo de investigacin Precipitacin con etanol y ultrafiltracin de
inulinasas de Kluyveromyces marxianus nos menciona que:

ENSAYO DE PROTENAS POR VINCULANCION DE COLORANTE

FIG. 1. Protenas de tinte modelo de respuesta de unin para


diversas protenas.
La Figura 1 muestra los resultados de diversas protenas se ensay en el
sistema como a las respuestas individuales. Hay una dispersin de puntos
alrededor de la lnea trazada en el grfico. La dispersin se cree que es una
funcin multifactico compuesto por las dificultades para determinar la
exacta cantidad de protena presente en una muestra dada debido a la
variacin de la extincin coeficientes en la literatura, los mtodos utilizados
para determinar la exacta cantidad de protena utilizada en la medicin de
los coeficientes de extincin, y algunos grado de variacin en la eficiencia
de colorante de unin a protenas diferentes.

FIG. 2. Patrn de Respuesta obtenida de Lowry (1) en ensayos de


Protenas
La Figura 2 muestra el patrn de respuesta obtenida de Lowry (1) ensayos
de las mismas protenas. El grado de dispersin en respuesta de las
protenas de Lowry (1) de ensayo es similar al que se muestra para el
ensayo de fijacin de colorante que aqu se presenta. Los sensibilidad de la
Lowry (1) mtodo es una absorbancia de 0,110 unidades de DO para la
correspondi estndar 25 pg a 8 pg proteina ml de ensayo final volumen. Por
clculo, a continuacin, el ensayo de unin de colorante es de
aproximadamente cuatro veces ms sensible que el Lowry (1) de ensayo. El
grado de dispersin alrededor del Lowry (1) parcela de ensayo tambin
apunta a la dificultad de establecer un valor cuantitativo de una protena en
soluciones estndar. Estabilidad de la protena-colorante de color compleja.

La Figura 3 muestra la tasa de formacin de protena-colorante complejo en


el sistema de ensayo y la estabilidad del complejo de color. La absorbancia
se monitoriz a intervalos fijos 7.5 durante 2 min y luego a intervalos de 1
min para un perodo de 1 hr. Como se ve a partir del grfico, el desarrollo
del color es esencialmente completo en 2 minutos, y replatos principales y
estable o menos 4% por un perodo de 1 hora. Dado que la protenacolorante complejo tiene una tendencia a agregarse con el tiempo, hay una
disminucin en color despus de este perodo de tiempo, simplemente por
la eliminacin fsica de la protena-colorante complejo de la solucin. Si
determinaciones son muy precisas requeridos, los investigadores deben
tomar precauciones para leer la absorban muestras durante una de las
partes ms planas de la curva de estabilidad del color ser- entre 5 y 20 min
despus de la adicin del reactivo. Esto todava le da tiempo suficiente para
leer un nmero relativamente grande de muestras

FIG. 3. La protena-colorante tasa de formacin de complejos y


estabilidad de color