Biologa Molecular II
Unidad II
Resultado de aprendizaje
5to. Cuatrimestre
Grupo: A
INTRODUCCIN
Un organismo genticamente modificado (abreviado OMG u OGM) es un
organismo cuyo material gentico ha sido alterado usando tcnicas de ingeniera
gentica. La definicin estadounidense incluye igualmente las modificaciones
realizadas mediante la seleccin artificial. La ingeniera gentica permite modificar
organismos mediante la transgnesis o la cisgnesis, es decir, la insercin de uno
o varios genes en el genoma. Los OGM incluyen microorganismos como bacterias
o levaduras, insectos, plantas, peces y animales. Estos organismos son la fuente
de los alimentos genticamente modificados, y son ampliamente utilizados en
investigaciones cientficas para producir otros bienes distintos a los alimentos. El
trmino OGM est muy asociado al trmino tcnico legal, organismo viviente
modificado, definido en el Protocolo de Cartagena en Bioseguridad, que regula
internacionalmente el comercio de los OGM vivientes (especialmente, "cualquier
organismo viviente que posee una combinacin de material gentico obtenida
mediante el uso de biotecnologias modernas").
Las posibles modificaciones genticas que se pueden usar incluyen la mutacin,
insercin y delecin de genes. Cuando se inserta material gentico ste suele
provenir de otra especie, de forma parecida a la transferencia horizontal que se
produce en la naturaleza. Para producir de forma artificial esta transferencia suele
ser necesario recurrir a diferentes tcnicas. Los genes pueden ser incorporados a
un virus o pueden ser fsicamente inyectados en el ncleo de la clula con una
aguja ultrafina o con un can de genes. Otras tcnicas aprovechan la habilidad
de ciertos organismos como los lentivirus o algunas bacterias como la
Agrobacterium tumefaciens para transferir material gentico a animales y plantas.
La produccin agrcola actual se basa en el cultivo de un nmero reducido de
especies vegetales, domesticadas por el hombre a lo largo de muchos siglos, de
tal forma que en la mayora de los casos las variedades actualmente cultivadas se
extinguiran en pocos aos si los agricultores dejaran de cultivarlas.
Esta domesticacin consiste en una serie de modificaciones genticas naturales,
que el hombre ha seleccionado de forma emprica, seguidas de nuevas
modificaciones buscadas y obtenidas mediante cruzamientos dirigidos,
hibridaciones, mutaciones, duplicaciones de cromosomas, etc., que en diferentes
cultivos se utilizan y consumen sin problemas.
El presente trabajo se describir los procesos para la produccin de una especie
de maz modificada genticamente, mediante la introduccin de plsmido
bacteriano, de la especie BT.
-Diagrama de flujo.
El proceso de ingeniera gentica requiere del cumplimiento exitoso de una serie
de cuatro etapas. Para entender mejor cada una de esas etapas, se usar como
ejemplo el desarrollo del maz Bt (Bt corn). Antes de iniciar el proceso de
ingeniera gentica, debe localizarse un organismo viviente que presente la
caracterstica que se desea incorporar a una planta.
Extraccin del ADN: Seleccin del
organismo, caracterstica del Maz BT
(resistencia al barrenador Europeo del
maz.).
ADN obtenido fue suficientemente puro para electroforesis y digestin por enzimas
de restriccin. Se us la enzima EcoRI para digerir el ADN genmico y los
fragmentos obtenidos se ligaron mediante la enzima T4 ligasa en el plsmido
suicida pES. La mezcla de ligacin se us para transformar E. coli. As se
obtuvieron diferentes transformantes en E. coli con insertos que variaban en
tamao.
-Seleccin de recombinantes: El plsmido pHT3101, conteniendo una regin de
replicacin del plsmido pHT1030 de B. thuringiensis y sus derivados, se usaron
para transformar Bti por el procedimiento de electroporacin y evaluar la eficiencia
del proceso. Para ello se inocularon 20 mL de BHI (infusin de cerebrocorazn)
(Difco) con 100 L de esporas (5107108 mL1) y se incubaron con agitacin a
200 rpm a 28 C para alcanzar OD600nm=0.300.40. Las clulas se recuperaron
por centrifugacin durante 5 min a 4000 rpm y a 4 C; se lavaron dos veces con 20
mL de agua destilada estril a 4 C y una vez con 10 mL de una solucin estril de
glicerol al 10 %. Finalmente, se resuspendieron en 400 Lde glicerol al 10 %. Esta
suspensin celular se us inmediatamente despus de su preparacin. La
electroporacin se realiz con un Gene Pulser II (BioRad*) acoplado a un
selector de resistencia paralelo (controlador de pulso BioRad*). Para la
electroporacin se mezclaron 200 L de clulas de Bti a 4 C con ADN plasmdico
y se transfirieron a cubetas de plstico de electroporacin (0.2 cm ancho). Se
aplicaron 1400 V, 25 F y 400 Ohms, en un pulso. Despus de la electroporacin
las clulas se recuperaron con 1 mL de BHI y se incubaron 3 h a 28 C con
agitacin suave. Alcuotas de 200 L de estas clulas se colocaron en placas con
LB ms eritromicina (2g mL1). Las transformantes de Bt formaron colonias
despus de una noche (12 h) de incubacin a 28 C. Las transformantes
resistentes a eritromicina se seleccionaron y se midi la eficiencia de
transformacin.
-Caracterizacin de recombinantes: Para corroborar la recombinacin homloga,
el ADN total de las transformantes de Bt fue extrado y digerido con enzimas de
restriccin como BamHI, KpnI, EcoRI y HindIII. Los fragmentos de ADN se
separaron en un gel de agarosa al 0.8 % por electroforesis, se transfirieron a una
membrana de nylon; stas fueron hibridadas con una sonda marcada con 32P y
se obtuvo la autoradiografa usando pelculas de rayos X de Kodak..
Se evaluaron algunos efectos secundarios en las recombinantes. Se midi el
porcentaje de esporulacin creciendo las recombinantes y la cepa silvestre en un
medio TrisG para inducir la esporulacin a 28 C por 3 d. Las esporas fueron
contadas como unidades formadoras de colonia (ufc) realizando diluciones y
sembrndolas en placas de LB. Tambin se comprob el efecto de la integracin
sobre la produccin de protenas realizando geles SDSPAGE (electroforesis
CONLUSIN
El origen del maz ha sido objeto de numerosos trabajos, con base en los cuales
se han sugerido varios sitios de origen que van desde Paraguay en Sur Amrica
hasta Guatemala y Mxico en Mesoamrica. El lugar de origen que sugiere la
evidencia cientfica como ms razonable identifica a Mxico como el lugar ms
probable de origen o a Guatemala como segunda opcin. Una de las
caractersticas del maz era su nula capacidad para defenderse de ciertos
depredadores por lo cual se opt por su transformacin mediante la insercin de
un plsmido de una bacteria, la cual produce una protena denominada BT, esta es
toxica para algunos insectos y por ende despus del estudio de este plasmido se
logr insertarlo en cayos de maz para inducir su crecimiento mediante las
tcnicas de cultivo In Vitro.
REFERENCIAS
-Organismos modificados genticamente. Instituto Nacional De Ecologa. SEMARNAT
-Mejoramiento Gentico del maz BT. Plant And Soils Sciences e Library.
-Maz genticamente modificado. Agro-Bio.
-Recombinacin homloga en un paso en el cromosoma de Bacillus thuringiensis.
Estibaliz SansineneaRoyano1, Gabriela Olmedolvarez2 y Candelario VzquezCruz2.
1Centro de Investigaciones en Ciencias Microbiolgicas del Instituto de Ciencias de la
Benemrita Universidad Autnoma de Puebla, 72570, Puebla, Puebla, Mxico. 2Centro de
Investigacin y Estudios Avanzados, Campus Irapuato, Irapuato 36000, Guanajuato,
Mxico.