1

ANALIZADORES HEMATOL?GICOS
Los avances mencionados se aplican tambin a los analizadores o
complejos hematolgicos, los cuales se diferencian de los qumicos por
la singularidad de algunas tcnicas hematolgicas. Los primeros equipos
que aparecieron en el mercado hace ms de 4 dcadas, solo eran
capaces de realizar recuentos celulares (eritrocitos y leucocitos). Para
ello utilizaban un principio descubierto por la firma norteamericana
Coulter (apertura-impedancia), en el que se bas toda una generacin
de estos analizadores. Durante a?os, los principios utilizados se fueron
perfeccionando para sumar a la etapa de los recuentos globales, la de la
identificacin de los tipos celulares o recuentos diferenciales. Los
sistemas patrones de reconocimiento que se crearon fueron los
siguientes:
Apertura-impedancia (sistema Coulter): en este sistema, las clulas se
suspenden en una solucin diluente que tiene como caracterstica
principal una conductividad fija. Cuando estas clulas pasan a travs de
una peque?a abertura u orificio, se produce un cambio en la impedancia
(resistencia) de una corriente elctrica constante que atraviesa esta
abertura. Los impulsos producidos se registran y permiten calcular,
segn el nmero de interrupciones, la cantidad de clulas. Este principio
para los recuentos celulares, an se mantiene vigente.
Dispersin de la luz: este principio sigui al anterior. La muestra de
sangre diluida pasa a travs de un detector celular colocado en el paso
de luz de un rayo luminoso muy estrecho. Cuando las clulas pasan,
interrumpen la luz y el nmero de estas interrupciones es registrado por
un detector y se obtiene as el recuento de clulas. El dimetro celular
se logra por la dispersin de la luz, la cual es una suma de un conjunto
de propiedades celulares como el volumen, el contorno y la
granulosidad. De todas ellas, el tama?o es la ms importante. Algunos
instrumentos alcanzaron un buen perfeccionamiento en su parte ptica
luego del uso de un rayo lser monocromtico. De esta forma qued
resuelto el recuento diferencial de leucocitos, limitado a tres
subpoblaciones: neutrfilos, monocitos y linfocitos. Este recuento,
aunque limitado, era vlido desde el punto de vista clnico. Cualquier
anormalidad era detectada por el esquema de distribucin que apareca
en la pantalla y por una alarma sonora.
Citometra de flujo: la introduccin de la citometra de flujo enriqueci
mucho ms las posibilidades de los analizadores hematolgicos. Esta
tcnica permite la identificacin, caracterizacin y aislamiento de clulas
por medios pticos, basndose en las propiedades fsicas, qumicas o
inmunolgicas. Entre las propiedades se incluyen el tama?o, la forma, el
contenido de ADN, la distribucin de antgenos y la actividad enzimtica.
En los a?os 50 del siglo xx, las limitaciones del microscopio de luz y de
las determinaciones bioqumicas, obligaron a emprender la bsqueda de

otras tcnicas que permitieran obtener informacin sobre clulas

aisladas y subpoblaciones celulares. Dos dcadas despus, la citometra
de flujo era una realidad y comenzaron a aparecer los primeros
analizadores hematolgicos que utilizaban este principio. Su
perfeccionamiento le a?adi a estos equipos la posibilidad de realizar un
recuento diferencial de seis poblaciones, un recuento absoluto para cada
una de ellas y detectar las desviaciones a la izquierda (presencia de
leucocitos con ncleos no segmentados). Para realizar los recuentos, los
eritrocitos son lisados. A continuacin, los leucocitos son estabilizados y
coloreados, para evidenciar su actividad peroxidsica y de esta forma
identificarlos (absorbancia de la luz) y conocer su tama?o (dispersin de
la luz), cuando son registrados al pasar las clulas independientes, una
tras otra, entre dos detectores. Las poblaciones celulares se muestran
en una pantalla; el eje vertical indica el tama?o celular y el horizontal, la
intensidad de la coloracin peroxidsica.
Los linfocitos y las clulas grandes no coloreadas (blastos) no se
desplazan horizontalmente y, por lo tanto, son medidas solo por su
tama?o y a lo largo del eje vertical (izquierda). Los monocitos tienen
una actividad peroxidsica discreta y un tama?o moderado, por lo que
aparecen en el centro de la pantalla. Los neutrfilos, algo menores, pero
con una actividad peroxidsica intensa, aparecen a la derecha y ocupan
la parte media y superior de la pantalla. Los eosinfilos, menores que
los monocitos y los neutrfilos, pero con la actividad peroxidsica ms
elevada, aparecen a la derecha y en el extremo inferior. Los basfilos
son detectados como grandes clulas, en un canal separado, despus
que el resto de los leucocitos han sido despojados de su citoplasma
(figura 1.16).

Figura 1.16 Esquema de la ubicacin celular (leucocitos) en la pantalla

1
2
3

1
2
3
4
5
6

de un analizador hematolgico capaz de realizar recuentos celulares

diferenciales segn el principio de la citometra de flujo.
Por lo general, los analizadores hematolgicos disponen de tres canales
para realizar las determinaciones:
Canal A: determinacin de la concentracin de hemoglobina.
Canal B: recuentos celulares de eritrocitos, trombocitos y otros ndices.
Canal C: recuento global y diferencial de leucocitos (canal de la
peroxidasa).
Los analizadores hematolgicos estn dise?ados para realizar hasta 28
determinaciones diferentes, entre las que se encuentran:
Hemoglobina.
Hematcrito.
Recuentos celulares globales.
Recuentos diferenciales absolutos y relativos.
Recuento de reticulocitos.
Constantes corpusculares y un conjunto de ndices, entre los que se
destacan la amplitud de la distribucin de eritrocitos (RDW), que
constituye una medida de la anisocitosis; la amplitud de la distribucin
de los trombocitos (PDW); las clulas grandes no coloreadas (LUC); el
ndice de lobularidad (LI), y el ndice de la actividad peroxidsica
promedio (MPXI).
A estos analizadores, igual que ocurre con los qumicos, se les ha
incorporado la robtica. Como ejemplo se puede mencionar la
posibilidad de realizar de forma automtica las extensiones de sangre
sobre portaobjetos y efectuar las coloraciones. La ayuda ofrecida por
estos equipos es primordial, pues los profesionales del laboratorio solo
tienen que examinar las extensiones en las que el analizador ha se?
alado, mediante la alarma sonora, la presencia de alguna anormalidad
en la cantidad o en el tipo de alguno de los elementos celulares.
En resumen, los analizadores hematolgicos actuales combinan dos
principios para realizar las determinaciones antes mencionadas: la
apertura-impedancia y la citometra de flujo, para realizar los recuentos
globales (eritrocitos, leucocitos y trombocitos), y el estudio de
subpoblaciones celulares (recuentos diferenciales), respectivamente.