Revista Biotecnologia Ed.38 PDF

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 38
Colaboraram nesta edio:
BIOTECNOLOGIA
Cincia & Desenvolvimento
KL3 Publicaes
Fundador
Henrique da Silva Castro
Direo Geral e Edio
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Diretor de Arte
Henrique Castro F
Projeto Grfico
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E-mail
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Portal
www.biotecnologia.com.br
Departamento Comercial,
Redao e Edio:
SHIN CA 01 - Lote A - Bloco A - Sala 223

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Os artigos assinados so de
inteira responsabilidade
de seus autores.
ISSN 1414-6347
Aline Oliboni de Azambuja

Biloga (UNISINOS) e Mestre em Biologia: Diversidade e
Manejo de Vida Silvestre (UNISINOS).
Andresa Patrcia Regert Lucho
Engenheira Agrnoma (UFRGS) e Mestre em Biologia:
Diversidade e Manejo de Vida Silvestre (UNISINOS).
Diouneia Lisiane Berlitz
Biloga (UNISINOS) e Mestre em Biologia: Diversidade e
Emerson Lus Nunes Costa
Engenheiro Agrnomo (UFRGS) e Mestre e Doutor em
Fitotecnia Fitossanidade (UFRGS)
Gabriela Cristina Alles
Biloga (UNISINOS) e Mestre e Doutoranda em Biologia:
Jaime Vargas de Oliveira
Engenheiro Agrnomo (UFSM), Mestre em Fitotecnia
Fitossanidade/Entomologia (UFPEL),
Laura Massochin Nunes Pinto
Biloga (PUCRS) e Mestre e Doutoranda em Biologia:
Leila Lucia Fritz
Biloga (UNISINOS) e Mestranda em Biologia: Diversidade e
Lidia Mariana Fiza
Engenheira Agrnoma (UPF), Mestre em Fitotecnia
Fitossanidade (UFRGS), Doutora em Cincias Agronmicas
(ENSAM-Montpellier) e Ps-Doutora em biotecnologia Vegetal
(CIRAD-Montpellier).
Marcus Hbner
Bilogo (FURG) e Mestre em Biologia: Diversidade e Manejo
de Vida Silvestre (UNISINOS).
Maria Helena Ribeiro Reche
Biloga (UPF) e Mestre e Doutoranda em Biologia:
Neiva Knaak
Biloga (UNISINOS) e Mestre e Doutoranda em Biologia:
Raquel Castilhos-Fortes
Biloga (UNISINOS) e Mestre em Microbiologia Agrcola e do
Ambiente (UFRGS)
Rogrio Schnemann
Bilogo (UNISINOS) e Mestre em Biologia: Diversidade e
Vilmar Machado
Bilogo (UNISINOS) e Mestre e Doutor em Gentica e
Biologia Molecular (UFRGS)
Nota: A Revista Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento,

indexada na AGROBASE ( base de dados da Agricultura Brasileira)
BINAGRI- Biblioteca Nacional de Agricultura- MAPA- Ministrio da
Agricultura, Pecuria e Abastecimento. no Agris ( International
Information System for the Agricultural Sciences and Technology)
da FAO e atende a obrigatoriedade do Depsito Legal na Biblioteca
Nacional do Rio de Janeiro - Fundao Biblioteca Nacional.
Conselho Cientfico
Carta ao Leitor
EDIO 38 - 2009/2010
Dr. Aluzio Borm - Gentica e Melhoramento Vegetal

Dr. Ivan Rud de Moraes - Sade - Toxicologia;
Dr. Joo de Deus Medeiros - Embriologia Vegetal;
Dra. Lidia Mariana Fiuza - Microbiologia e Entomologia Agrcola;
Dr. Maao Tadano - Agricultura;
Dr. Naftale Katz - Sade;
Dr. Pedro Jurberg - Cincias;
Dr. Srgio Costa Oliveira - Imunologia e Vacinas;
Dr. Vasco Ariston de Carvalho Azevedo - Gentica de Microorganismos;
Dr. William Gerson Matias - Toxicologia Ambiental.
Conselho Brasileiro de Fitossanidade - Cobrafi
Dr. Lus Carlos Bhering Nasser - Fitopatologia
Fundao Dalmo Catauli Giacometti
Dr. Eugen Silvano Gander - Engenharia Gentica;
Dr. Jos Manuel Cabral de Sousa Dias - Controle Biolgico;
Dra. Marisa de Goes - Recursos Genticos
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN
Dr. Jos Roberto Rogero
Sociedade Brasileira de Biotecnologia - SBBiotec
Dr. Luiz Antonio Barreto de Castro - EMBRAPA
Dr. Digenes Santiago Santos - UFRGS
Dr. Jos Luiz Lima Filho - UFPE
Dra. Elba P. S. Bon - UFRJ
bactria Bacillus thuringiensis (Bt) tem o carisma mundial dos microbiologistas e entomologistas. Esse entomopatgeno ubquo mpar no potencial biotecnolgico aplicado no
controle biolgico nas reas agrcolas, florestais, de
sade animal e humana. Nessas reas, o microrganismo pode ser utilizado como biopesticida formulado,
registrado e comercializado ou seus genes podem ser
adaptados e incorporados no genoma das plantas por
meio da engenharia gentica, atualmente denominadas plantas-Bt. Nos estudos dessa bactria h cooperaes multidisciplinares que permitem as anlises da
biologia, toxicologia e ecologia microbiana, as quais
so tratadas nessa edio. O objetivo dessa publicao apresentar o estado da arte sobre o entomopatgeno B. thuringiensis, com dados bibliogrficos e
resultados de pesquisa obtidos pelo grupo de pesquisa CNPq/UNISINOS: Manejo e Toxicologia em Agroecossistemas, onde atuam estudantes de Graduao e
Ps-Graduao da Biologia da UNISINOS, alm de professores e pesquisadores colaboradores do IRGA, UFRGS, UFPEL, UFSM, UCS, FIOCRUZ, EMBRAPA, CIRADMontpellier, Universidade de Otawa e Universidade
de Nebraska.
Dra. Lidia Mariana Fiuza
Edio Especial - Ecotoxicologia de Bacillus thuringiensis, organizada e coordenada pela Dra. Ldia
Mariana Fiuza, Professora Titular e Coordenadora Executiva do Programa de Ps-Graduao em
Biologia: Diversidade e Manejo de Vida Silvestre da Universidade do Vale do Rio dos Sinos; Bolsista de
Produtividade em Pesquisa do Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico,
Consultora Tcnica do Instituto Rio Grandense do Arroz.
fiuza@unisinos.br
lmfiuza@pesquisador.cnpq.br
PESQUISA
ARTRPODES E BACTRIAS ENTOMOPATOGNICOS
ECOLOGIA DE BACILLUS ENTOMOPATOGNICOS
04
14
TOXINAS DE BACILLUS THURINGIENSIS

MECANISMO DE AO DE BACILLUS THURINGIENSIS
24
32
TOXICOLOGIA DE BACILLUS THURINGIENSIS S PRAGAS AGRCOLAS

TOXICOLOGIA DE BACILLUS THURINGIENSIS AOS INSETOS SOCIAIS
36
40
TOXICOLOGIA DE BACILLUS THURINGIENSIS S PRAGAS URBANAS E VETORES

INTERAES DE BACILLUS THURINGIENSIS E O CONTROLE DE FITOPATGENOS
44
48
TOXICIDADE DE BACILLUS THURINGIENSIS EM ORGANISMOS NO-ALVO

PRODUTOS DE BACILLUS THURINGIENSIS: REGISTRO E COMERCIALIZAO
54
58
PLANTAS TRANSGNICAS QUE SINTETIZAM TOXINAS DE BACILLUS THURINGIENSIS E OUTRAS

EVOLUO E MANEJO DA RESISTNCIA DE INSETOS
62
68
Pesquisa
ARTRPODES E BACTRIAS
ENTOMOPATOGNICOS
Pesquisa
Emerson Lus Nunes Costa
Engenheiro Agrnomo (UFRGS) e
Mestre e Doutor em Fitotecnia
Fitossanidade (UFRGS)

Engenheira Agrnoma (UFRGS) e
Mestre em Biologia: Diversidade e
Manejo de Vida Silvestre
(UNISINOS).
ntre os artrpodes, os insetos so a maioria das espcies animais e tm importncia

nas mais diversas reas. Na agricultura,
podem ser teis ou nocivos, atuando na
manuteno do equilbrio das populaes
como inimigos naturais, na polinizao, na
decomposio da matria orgnica do solo e como
pragas das culturas. Nesse trabalho so apresentadas algumas informaes sobre a classe Insecta, destacando-se os insetos de importncia agrcola, com a caracterizao de ordens e subordens
e exemplos de famlias e espcies de insetos-praga, vetores de fitopatgenos, predadores e parasitides. Tambm constam dados sobre as bactrias que atuam como agentes microbianos aplicados no controle biolgico de insetos.
1.1 A Classe Insecta
A classe Insecta, com 29 ordens, pertence
superclasse Hexapoda e ao filo Arthropoda. Entre os aspectos que caracterizam a maioria dos
representantes da classe Insecta esto: corpo dividido em trs pores (cabea, trax e abdome),
cabea com um par de antenas, olhos compostos, peas bucais expostas (ectognatos), trax com
trs segmentos, trs pares de pernas, nenhum,
um ou dois pares de asas, e abdome com 6 a 11
segmentos.
Durante o desenvolvimento, os insetos sofrem metamorfose, por meio de muda do tegumento (ecdise). Insetos hemimetbolos so aqueles que sofrem metamorfose chamada incompleta, passando pelas fases de ovo, ninfa e adulto.
Nesse caso os indivduos jovens so muito semelhantes aos adultos, mas apresentam o sistema
reprodutivo imaturo e, no caso de insetos alados,
nota-se o desenvolvimento das asas, observandose a presena de tecas alares. Insetos holometbolos tm metamorfose completa, passando pelas fases de ovo, larva, pupa e adulto. Nesse caso,
os indivduos jovens so bem diferentes dos adultos, como ocorre com as borboletas e moscas,
onde inclusive h mudana no aparelho bucal.
Os besouros tambm tm metamorfose completa, com larvas morfologicamente diferentes dos
adultos, mas normalmente o tipo de aparelho
bucal se mantm.
A classe Insecta representa 70% das espcies
animais, e encontra-se distribuda nos mais diferentes ambientes, onde os insetos, com aspectos
positivos ou negativos, destacam-se como organismos de importncia, como na indstria txtil
(o bicho da seda), na alimentao (o mel produzido pela abelha), na sade humana (moscas, mos4
Leila Lucia Fritz

Biloga (UNISINOS) e
Mestranda em Biologia:
Diversidade e Manejo de
Vida Silvestre (UNISINOS).
quitos, percevejos e outros insetos transmissores

de agentes patognicos), na veterinria (insetos
transmissores de molstias em animais) e na agricultura.
1.2 Importncia dos
insetos na agricultura
Na agricultura, a ocorrncia de insetos tambm tem seus aspectos positivos e negativos.
Sob o aspecto negativo esto os insetos que
se alimentam de plantas e causam danos econmicos a diversas culturas agrcolas. Os insetospraga, pelo hbito de alimentarem-se de vegetais, so chamados de fitfagos. Dependendo da
estrutura vegetal da qual se alimentam, tambm
recebem denominaes especficas. Assim, os que
se alimentam de frutos so os carpfagos; de razes, rizfagos; de folhas, filfagos; de madeira,
xilfagos; sugadores de seiva so fitossucsvoros.
Alm dos danos causados de forma direta,
pela alimentao, alguns insetos causam danos
indiretos s culturas, atuando como vetores de
fitopatgenos (Tabela 1). Tambm h insetos que
esto associados ocorrncia de molstias, devido a injrias que causam nos tecidos vegetais pelos
hbitos alimentares ou de postura, favorecendo a
penetrao de patgenos. Como exemplos podem ser citados o minador-dos-citros (Phyllocnistis citrela), que favorece a ocorrncia do cancro ctrico, causado pela bactria Xanthomonas
axonopodis pv. citri, o tripes Thrips tabaci associado ocorrncia do fungo Alternaria porri, causador da mancha prpura em alho e cebola, e as
moscas-das-frutas, cujos hbitos de postura, alimentao e desenvolvimento facilitam a ocorrncia de patgenos causadores de podrides em
frutos, como o fungo Monilinia fructicola, causador da podrido parda em frutos de pssego. Insetos sugadores que excretam substncias aucaradas esto associados ocorrncia de fumagina,
caracterizada pelas estruturas fuliginosas do fungo Capnodium sp.
Sob o aspecto positivo esto os insetos polinizadores, muitos deles essenciais para a formao de frutos e conseqentemente de sementes;
os insetos subterrneos que atuam na decomposio da matria orgnica e em outras caractersticas desejveis nos solos destinados produo
agrcola e, ainda, os inimigos naturais, que se alimentam de outros insetos, muitas vezes mantendo as populaes de pragas em nveis que no
causam dano econmico e sem necessidade de
adoo de outros mtodos de controle.
Entre os inimigos naturais, na classe Insecta,
Lidia Mariana Fiuza

Engenheira Agrnoma (UPF), Mestre em
Fitotecnia Fitossanidade (UFRGS),
Doutora em Cincias Agronmicas
(ENSAM-Montpellier) e Ps-Doutora em
biotecnologia Vegetal (CIRADMontpellier).
espcies predadoras ocorrem em 22 ordens, enquanto cinco ordens tm representantes parasticos (Berti Filho & Ciociola, 2002).
Os predadores, durante seu ciclo evolutivo,
podem consumir diversas presas. Normalmente
so mais generalistas, pois atacam diferentes espcies, que podem pertencer a diferentes famlias ou ordens, incluindo insetos-praga ou no.
Na Tabela 2 so apresentados alguns insetos predadores e suas presas.
Os parasitides so em geral mais especficos, ou seja, especializados a determinados hospedeiros. Assim, normalmente so mais restritos
espcie, famlia ou ordem. Tais inimigos naturais dependem de apenas um hospedeiro para
completar seu ciclo de desenvolvimento, e diferenciam-se dos parasitas porque causam a morte do hospedeiro e os adultos tm vida livre.
Atacam em geral as formas jovens dos insetospraga, inclusive ovos. Quando ocorrem em posturas, controlam a praga antes dessa causar danos s culturas. Na Tabela 3 so apresentados
alguns insetos parasitides e seus hospedeiros.
De acordo com Berti Filho & Ciociola (2002),
o impacto de predadores mais difcil de avaliar
do que o de parasitides, pois estes podem ser
observados em seus hospedeiros, enquanto os
predadores dificilmente deixam sinais de ataque,
principalmente quando consomem toda a presa. Ao contrrio dos predadores, os parasitides
tm alta capacidade de encontrar seus hospedeiros, inclusive quando a densidade populacional de fitfagos baixa (Shepard et al., 1987 e
1995).
1.3 Ordens, subordens e famlias
de insetos de importncia agrcola
Dentre as 29 ordens da classe Insecta, nove
destacam-se pela importncia agrcola de seus
representantes: Coleoptera, Diptera, Hemiptera,
Hymenoptera, Isoptera, Lepidoptera, Neuroptera, Orthoptera e Thysanoptera. O Quadro 1 apresenta informaes sobre caractersticas gerais,
famlias e espcies das principais ordens e subordens de insetos de importncia agrcola.
Nesse contexto, as plantas de arroz (Orysa
sativa L.) so hospedeiros para um grande nmero de insetos-praga e a ao desses artrpodes um dos principais fatores que afetam a
orizicultura, pois as perdas variam entre 10 e
35% da produo. No entanto, so poucos os
insetos que podem ser considerados pragas, pois
muitos deles so inimigos naturais que esto
associados ao controle biolgico dos insetos-pra-
ga. Fritz et al. (2008) analisaram a abundncia de insetos-praga e inimigos naturais presentes em reas
de arroz irrigado em Cachoeirinha (RS). Foram quantificados 1015 indivduos subdivididos em 10 ordens
de insetos e 2 ordens de aracndeos (Figura 1). Os
dpteros apresentaram maior abundncia dentre os
insetos (51,92%), seguido de Hemiptera (14%), Hymenoptera (8,87%), Collembola (8,18%), Coleoptera
(3,05%), Orthoptera (2,56%), Odonata (1,28%), Psocoptera (0,98%), Lepidoptera (0,69%) e Dermaptera
(0,1%). Acredita-se que as larvas de mosquitos vm
desenvolvendo resistncia aos inseticidas que so utilizados frequentemente em lavouras orizcolas, tornando-se conseqentemente abundantes nesses agroecossistemas (Victor & Reuben, 2000).
Entre os insetos, Coleoptera a ordem dos besouros ou cascudos. H inmeras espcies de colepteros fitfagos, sendo que em muitos casos, tanto
as larvas quanto os adultos alimentam-se de plantas.
Nessa ordem, h insetos-praga de diferentes hbitos:
filfagos, rizfagos, xilfagos, carpfagos, entre outros. H tambm vrias espcies que atacam produtos armazenados. Entre as famlias, destaca-se Curculionidae, dos gorgulhos ou bicudos, que a maior
famlia do mundo, com cerca de 50.000 espcies descritas, sendo a maioria das espcies fitfagas, e as
larvas geralmente desenvolvem-se no interior de partes vegetais, como brocas.
Na ordem Coleoptera tambm h insetos que so
inimigos naturais, pois atuam no controle biolgico
como predadores de outros insetos. Nesse caso destacam-se as famlias Carabidae e Coccinellidae (joaninhas), onde a maioria das espcies, tanto na fase de
larva como de adulto, so predadoras de insetos-praga.
Em Diptera, a ordem das moscas e mosquitos,
tambm h insetos-praga e inimigos naturais. Entre
os insetos fitfagos destaca-se a famlia Tephritidae,
das moscas-das-frutas. Entre os inimigos naturais destacam-se as famlias Syrphidae, com espcies cujas
larvas so predadoras, e Tachinidae, com espcies
que desenvolvem-se como parasitides.
A ordem Hemiptera composta por insetos de
hbito sugador. Anteriormente, Hemiptera era a ordem apenas dos percevejos. Atualmente, inclui tambm cigarras, cigarrinhas, pulges, cochonilhas, psildeos e moscas-brancas, que pertenciam ordem Homoptera, atualmente no mais considerada como ordem em Insecta.
Alm dos danos diretos causados pelos insetos
fitfagos da ordem Hemiptera, que sugam lquidos
de diferentes partes vegetais, tambm h os danos
indiretos, principalmente relacionados transmisso
de fitopatgenos.
Em Hemiptera, inimigos naturais ocorrem apenas na subordem dos percevejos (Heteroptera), onde
em algumas famlias h espcies predadoras de insetos (sugam hemolinfa). No entanto, tais famlias no
so exclusivas de espcies entomfagas. Em Reduviidae h tambm espcies hematfagas (os barbeiros)
e em outras, como Pentatomidae, h um grande nmero de espcies fitfagas. Em Hymenoptera esto
as abelhas, vespas, vespinhas e formigas. Nessa ordem h diversas espcies que atuam como polinizadores. Entre os fitfagos destaca-se a famlia Formicidae, que inclui as formigas-cortadeiras. Mas no controle biolgico que a ordem Hymenoptera destacase, pela grande quantidade de famlias e espcies de
parasitides. Entre os predadores, destaca-se a famlia Vespidae.
Na ordem Isoptera esto os cupins, com espcies
consideradas pragas de diversas culturas, como pastagens, cana-de-acar e florestais.
Em Lepidoptera, a ordem das mariposas e borboletas, esto espcies de insetos-praga com diferentes hbitos alimentares, como filfagos, xilfagos, car-
Figura 1. Abundncia de insetos e inimigos naturais em lavouras de arroz

irrigado, RS
pfagos, rizfagos, minadores de folhas, espcies
que atacam produtos armazenados, entre outras.
No entanto, os danos dos lepidpteros s culturas so causados quase que exclusivamente pelas
formas jovens, conhecidas como lagartas.
Entre as famlias de Lepidoptera destaca-se
Noctuidae, que inclui diversas espcies que causam danos a culturas de grande importncia econmica. Em Noctuidae esto a lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis) e Spodoptera frugiperda, uma
praga polfaga conhecida como lagarta-militar, lagarta-do-cartucho-do-milho ou lagarta-da-folhado-arroz.
A ordem Neuroptera composta por insetos
predadores, com destaque para a famlia Chrysopidae, cujas larvas so conhecidas como bicholixeiro, pois carregam os restos mortais das presas aderidos ao corpo.
Em Orthoptera, ordem dos gafanhotos, grilos, esperanas e grilotalpas, as espcies de insetos-praga so normalmente polfagas, com destaque para as famlias Acrididae, do gafanhoto-crioulo e Gryllotalpidae, dos grilotalpas ou cachorrinhos-da-terra.
Na ordem Thysanoptera esto os insetos conhecidos como tripes ou trips, sendo a maioria
das espcies fitfagas e algumas associadas transmisso de viroses de plantas.
A ordem Araneae conta com mais de 38.834 espcies, includas em 3.694 gneros e 109 famlias
no mundo (Platnick, 2008). Elas esto distribudas em agroecossistemas terrestres e so consideradas um dos mais abundantes grupos de invertebrados predadores, alm de possurem a vantagem de no danificar as plantas e controlarem
eventuais exploses populacionais de insetos, limitando o canibalismo e territoriedade. No entanto, os pesticidas no seletivos tm sido considerados um risco para as espcies de aranhas
benficas. Fritz et al. (2008) analisaram as populaes de aranhas em lavouras orzicolas orgnicas
e convencionais (com aplicao de inseticida),
coletadas de 3 regies produtoras de arroz irrigado do RS. Nesses agroecossistemas foram coletadas 1148 aranhas, entre jovens e adultos, havendo maior abundncia em lavouras orgnicas (765)
que diferiram significativamente das lavouras com
aplicaes de inseticidas (383). Das 12 famlias
registradas predominaram Araneidae e Tetragnathidae que foram fortemente afetadas pelos inseticidas, reduzindo em at 80% da populao (Figura 2).
1.4 Bactrias Entomopatognicas
As toxinas bacterianas com atividade insetici-
da potencialmente aplicadas no controle de insetos-praga das plantas cultivadas e vetores de doenas animais e humanas foram casualmente descobertas no final do sculo XIX, atravs das investigaes das doenas que ocorriam nas criaes
de abelhas melferas (Apis mellifera) e do bichoda-seda (Bombyx mori).
A documentao da taxonomia geral bacteriana efetuada por Breed et al. (1957) e o levantamento de espcies de bactrias relacionadas com
insetos hospedeiros descrito por Steinhaus (1947),
podem ser considerados trabalhos pioneiros e fundamentais taxonomia de bactrias que causam
doenas em insetos. A taxonomia bacteriana moderna baseia-se em critrios morfolgicos, fisiolgicos, sorolgicos e genticos.
Atualmente so conhecidas inmeras espcies de bactrias associadas a insetos, porm poucas apresentam as caractersticas desejveis aplicao no controle biolgico de pragas, sendo na
classificao das bactrias entomopatognicas, os
critrios de Falcon (1971) os mais viveis por agruparem as bactrias em apenas duas categorias: esporulantes e no-esporulantes. Entre essas categorias destacam-se com maior importncia patologia de insetos as espcies das famlias Bacillaceae e Enterobacteriaceae.
As bactrias esporulantes apresentam uma caracterstica de persistncia, as quais podem se manter em condies ambientais adversas atravs de
estruturas de resistncia denominadas endsporos. Esta caracterstica dessa categoria de bactrias
vem sendo considerada um pr-requisito produo de agentes microbianos em escala comercial.
Como caracterstica de bactrias entomopatognicas potencialmente aplicadas no controle microbiano de insetos, destacam-se as espcies que
apresentam alta virulncia, elevada capacidade invasora e produo de toxinas, causando toxemias
nos insetos alvo. Com essas caractersticas, na categoria de bactrias esporulantes destacam-se como
gneros de maior importncia: Bacillus e Clostridium.
1.4.1. Gnero Bacillus
Bacillus spp., em geral aerbicas ou facultativamente anaerbicas, encontram-se em substratos variveis devido ao complexo enzimtico produzido pelas clulas em forma de bastonetes, podendo essas se apresentarem individuais ou em
cadeias. Esse gnero apresenta uma grande variao entre as espcies, porm as caractersticas entomopatognicas associadas formao de ends-
poros e a produo de toxinas e enzimas determinam as seguintes espcies como promissoras

ao controle de insetos prejudiciais:
A. Bacillus thuringiensis
Este microrganismo foi descoberto em 1902
por Ishiwata no Japo, atravs da criao massal
de Bombix mori. Em 1911, B. thuringiensis foi
novamente isolado por Berliner a partir de larvas
de Ephestia kuehniella, na cidade de Thringe,
na Alemanha, de onde originrio seu atual
nome. Os primeiros ensaios utilizando B. thuringiensis foram realizados na Europa entre os anos
de 1920 e 1930, no controle de Ostrinia nubilalis, lepidptero da famlia Pyralidae. Nos Estados
Unidos e na Europa, entre os anos de 1930 e
1940, numerosos testes foram realizados contra
outras espcies de lepidpteros. Atualmente, no
caso do controle biolgico, B. thuringiensis o
microrganismo mais utilizado em nvel mundial .
Para os microbiologistas, B. thuringiensis (Figura 3) uma bactria gram-positiva, esporulante, aerbica ou facultativamente anaerbica, naturalmente encontrado no solo. As espcies thuringiensis, cereus e anthracis do gnero Bacillus
apresentam um grau de parentesco to elevado,
que muitas vezes dificulta, se no impossibilita,
diferenci-las atravs de provas bioqumicas e bacteriolgicas mais simples. Durante muito tempo,
as duas primeiras espcies foram consideradas
como sendo uma nica. O principal critrio utilizado para a distino entre essas bactrias a
produo de corpos de incluses paraesporais
durante o processo de esporulao do B. thuringiensis.
No controle microbiano dos insetos, o entomopatgeno Bacillus thuringiensis (Bt) oferece
as melhores alternativas como bioinseticida, mostrando-se tambm um bom candidato obteno de formulaes comerciais, bem como engenharia gentica de plantas.
B. Bacillus cereus
B. cereus pode ser considerado como patgeno facultativo, devido ao seu hbito saproftico e adaptao vida parastica das linhagens
entomopatognicas, sendo atualmente ainda utilizado como opcional no controle de alguns lepidpteros, colepteros e himenpteros quando
o B. thuringiensis mostra-se ineficaz.
O ingrediente ativo responsvel pela virulncia dessa bactria corresponde a ao enzimtica da lecitinase, descrita por Heimpel (1954,
1955). Em 1989, Rahmet-Alla & Rowley descreveram que a fosfolipase C de B. cereus estaria
relacionada a sua atividade entomopatognica.
Essa bactria caracteriza-se por apresentar clulas em forma de bastonetes com esporos centrais, no-cristalferas e ausncia de esporngio
estendido. Alguns autores mencionam que alm
da lecitinase que levou certas linhagens a vida
parastica, o endsporo dessa bactria contm
protena txica de baixa atividade especfica, estruturalmente semelhante ao cristal de B. thuringiensis.
Diversos estudos do modo de ao B. cereus
mencionam que essa espcie no tolera meio alcalino e a enzima para ser ativa exige um pH
entre 6,6 e 7,4, tornando essa bactria especfica
a insetos cujo contedo intestinal encontra-se na
faixa neutra, quando ento so provocadas alteraes no epitlio do intestino mdio das larvas
sensveis, sendo os sintomas patolgicos variveis em funo do modo de infeco por esse
patgeno.
C. Bacillus larvae
6
Figura 2. Araneofauna em sistema de cultivo orgnico e convencional de

arroz irrigado, RS
Essa bactria apresenta esporos centrais ou
terminais que variam de elpticos a cilndricos num
esporngio distinto, sem corpo de incluso paraesporal (cristal). Quando os esporos de B. larvae
so ingeridos pelas larvas e pupas das abelhas,
causam a doena americana das abelhas ou ptrida dos berrios.
D. Bacillus alvei
Essa espcie caracteriza-se por apresentar esporos centrais ou sub-terminais que variam de
elpticos a cilndricos. Essa espcie causa doena
europia das crias das abelhas.
E. Bacillus popilliae e Bacillus lentimorbus
Essas espcies so patgenos obrigatrios,
crescem pouco em meio de cultura, e tm como
caractersticas esporos elpticos a cilndricos, em
esporngio ntido num bastonete. B. popilliae causa a doena leitosa do tipo A e B. lentimorbus
causa a doena leitosa tipo B, ambas em larvas
de escarabedeos. As caractersticas de resistncia
dos esporos ao calor, dessecao e radiao,
alm da sua longevidade em larvas mortas e partculas de solo, tornam essas bactrias agentes
promissores no controle de larvas de Popillia japonica e Amphimallon mojalis (na Europa e Austrlia), alm de Eutheola humilis, Stenocrates spp.
e Migdolus morretesi (no Brasil).
O mecanismo de ao semelhante em ambas s espcies, cujas bactrias atuam por ingesto, passando do trato digestivo hemolinfa, multiplicando-se, esporulando, causando a septicemia e morte dos insetos.
F. Bacillus sphaericus
Trata-se de uma espcie que apresenta esporos esfricos em posio terminal num esporngio distendido. Certas cepas dessa espcie produzem incluses cristalinas (ou cristais), compostas por dois peptdeos de 42 e 51 kDa que representam a toxina binria, com ao inseticida. H
cepas que sintetizam protenas inseticidas de
100kDa.
Essa bactria cosmopolita, tendo sido isolada de solo, gua e do seu hospedeiro natural
(pernilongos mortos). As cepas foram classificadas por sorotipos conforme o antgeno flagelar,
totalizando atualmente cerca de 50 sorotipos, entre os quais 7 contm cepas ativas contra larvas
de dpteros e as cepas mais txicas apresentam
como particularidade incluses paraesporais cristalinas. Existem mais de 300 cepas de B. sphaericus
catalogadas pelo Instituto Pasteur (Paris, Frana),
sendo 50% dessas txicas s larvas de dpteros.
1.4.2 Gnero Clostridium
O gnero Clostridium compreende cerca de 100
espcies distribudas em 19 grupos de acordo com
a homologia de ARN16s. As clulas so em forma
de bastonetes, geralmente Gram-positivas, com endsporos ovais ou esfricos que as deformam. As
espcies desse gnero so estritamente anaerbias,
havendo algumas que toleram a presena de oxignio livre, porm no formam esporos. Essas bactrias so encontradas naturalmente no solo, sedimentos marinhos, restos animais e vegetais, assim
como na flora intestinal de vertebrados e invertebrados, como os insetos.
Os efeitos entomopatognicos de C. brevifasciens e C. malacosomae foram observados em larvas de Malacosoma pluviale, havendo a germinao dos esporos na luz intestinal e o rpido crescimento vegetativo, o qual causa a morte em poucos
dias, sem haver invaso na cavidade do corpo do
inseto. Alguns autores citam que C. bifermentans
malaysia sintetiza uma protena txica s larvas de
Aedes aegypti, Culex pipiens e Anopheles stephensi,
a qual apresenta elevada similaridade as delta-endotoxinas sintetizadas pelo entomopatgeno B. thuringiensis.
Figura 3. Bacillus thuringiensis

em microscopia eletrnica de
transmisso
Quadro 1. Caracterizao das principais ordens e subordens de insetos de importncia agrcola, com
exemplos de famlias e espcies
ORDEM COLEOPTERA besouros
Caractersticas gerais
Asas anteriores do tipo litros (consistncia coricea ou crnea) e posteriores membranosas;
Aparelho bucal mastigador;
Metamorfose completa : Holometbolos (ovo, larva, pupa, adulto);
Mais de 300.000 espcies descritas.
Subordem Adephaga
Poro ventral do segmento abdominal (urosternito) basal divido pelas cavidades coxais do terceiro par de
pernas;
Em geral, predadores.
Principal famlia de importncia agrcola
Carabidae: adultos e larvas predadores (Ver Tabela 2)
Subordem Polyphaga
Poro ventral do segmento abdominal (urosternito) basal no divido pelas cavidades coxais do terceiro
par de pernas;
Maioria das famlias de Coleoptera.
Principais famlias de importncia agrcola
Anobiidae: Lasioderma serricorne besouro-do-fumo
Bostrichidae: Rhyzopertha dominica - besourinho-do-trigo
Buprestidae: Colobogaster cyanitarsis broca-da-figueira
Bruchidae: Acanthoscelides obtectus caruncho-do-feijo
Cerambycidae: Oncideres impluviata - serrador-da-accia-negra
Chrysomelidae: Diabrotica speciosa vaquinha ou brasileirinho
Coccinellidae: joaninhas larvas e adultos predadores (Ver Tabela 2)
Epilachna cacica joaninha-das-cucurbitceas (fitfaga)
Curculionidae: Anthonomus grandis bicudo-do-algodoeiro
Oryzophagus oryzae gorgulho-aqutico (adulto), bicheira-da-raiz-do-arroz (larva)
Sitophilus zeamais gorgulho-do-milho
Elateridae: Conoderus scalaris - larva-arame
Meloidae: Epicauta atomaria burrinho
Scarabaeidae: Euetheola humilis cascudo-preto-do-arroz
Scolytidae: Hypothenemus hampei broca-do-caf
Tenebrionidae: Tribolium castaneum - besouro-do-milho
Observao: As outras duas subordens (Archostemata e Myxophaga) tm pouco mais de 50 espcies descritas.
ORDEM DIPTERA moscas e mosquitos
Asas anteriores membranosas;
Asas posteriores modificadas em halteres ou balancins;
Aparelho bucal sugador labial;
Metamorfose completa: Holometbolos (ovo, larva, pupa, adulto).
Subordem Nematocera mosquitos, pernilongos e borrachudos
Caracterstica geral
Antenas mais longas que o trax.
Cecidomyiidae: Jatrophobia brasiliensis mosca-das-galhas-da-folha-da-mandioca
Stenodiplosis sorghicola mosca-do-sorgo
Subordem Brachycera moscas
Caracterstica geral
Antenas curtas, com arista ou estilo no ltimo segmento.
Agromyzidae: Liriomyza trifolii - mosca-minadora
Syrphidae: larvas predadoras (Ver Tabela 2)
Tachinidae: parasitides (Ver Tabela 3)

Tephritidae: moscas-das-frutas - Ceratitis
capitata mosca-do-mediterrneo
Anastrepha fraterculus mosca-sul-americana
Anastrepha grandis - mosca-das-cucurbitceas
ORDEM HEMIPTERA - percevejos, cigarras, cigarrinhas, pulges, cochonilhas, psildeos e moscas-brancas

aparelho bucal sugador labial (rostro);
pteros ou com dois pares de asas, membranosas ou com o anterior total ou parcialmente mais resistente que
o posterior;
metamorfose incompleta: Hemimetbolos (ovo, ninfa, adulto ou ovo, ninfa, puprio, adulto)
Subordem Sternorrhyncha - cochonilhas, pulges, moscas brancas e psildeos
rostro emergindo entre as pernas anteriores;
antenas longas ou curtas;
pteros ou alados (membranosas ou anteriores tgminas);
ninfas e/ou adultos podem viver aderidos s plantas.
Aleyrodidae: moscas-brancas - Aleurothrixus floccosus
Bemisia tabaci
Aphididae: Aphis gossypii pulgo-do-algodoeiro
Myzus persicae - pulgo-verde
Toxoptera citricida - pulgo-preto-dos-citros
Phylloxeridae: Daktulosphaira vitifoliae - filoxera-da-videira
Psyllidae: Diaphorina citri - psildeo-dos-citros
Coccidae: Coccus viridis - cochonilha-verde
Saissetia coffeae - cochonilha-parda
Diaspididae: Chrysomphalus ficus cabea-de-prego
Lepidosaphis beckii - escama-vrgula
Pinnaspis aspidistrae - escama-farinha
Margarodidae: Eurhizococcus brasiliensis prola-da-terra
Icerya purchasi cochonilha-australiana
Pseudococcidae: Planococcus citri cochonilha-branca
Pseudococcus maritimus - cochonilha-branca
Subordem Auchenorrhyncha cigarras e cigarrinhas
rostro emergindo da parte inferior da cabea;
antenas setceas curtas;
asas membranosas ou anteriores tgminas;
ninfas e adultos de vida livre.
Cicadidae: Quesada gigas cigarra-do-cafeeiro
Cercopidae: Deois flavopicta - cigarrinha-das-pastagens
Mahanarva fimbriolata cigarrinha-da-raiz-da-cana-de-acar
Mahanarva posticata cigarrinha-da-folha-da-cana-de-acar
Notozulia entreriana - cigarrinha-das-pastagens
Cicadellidae: Dalbulus maidis cigarrinha-do-milho
Empoasca kraemeri - cigarrinha-verde-do-feijoeiro
Subordem Heteroptera percevejos
rostro articulado;
asas anteriores do tipo hemilitro.
Cydnidae: Scaptocoris castanea - percevejo-castanho
Coreidae: Diactor bilineatus - percevejo-do-maracuj
Phthia picta percevejo-do-tomate
Pentatomidae: Nezara viridula percevejo-verde-da-soja
Oebalus poecilus - percevejo-do-gro-do-arroz
Tibraca limbativentris percevejo-do-colmo-do-arroz
Reduviidae : predadores (Ver Tabela 2)
ORDEM HYMENOPTERA abelhas, formigas, vespas, vespinhas

Asas membranosas;
Metamorfose completa: Holometbolos (ovo, larva, pupa, adulto)
Subordem Apocrita abelhas, formigas, marimbondos, vespinhas
Caracterstica geral
Abdome livre ou pedunculado
Apidae: abelhas - Trigona spinipes - abelha-irapu (fitfaga)
Formicidae: Atta spp. - savas
Acromyrmex spp. - quenquns
Vespidae: predadores (ver Tabela 2)
Observao: Famlias de hymenpteros parasitides (ver Tabela 3)
Subordem Symphita Caracterstica geral
Abdome sssil
Famlia de importncia agrcola
Siricidae: Sirex noctilio - vespa-da-madeira
ORDEM ISOPTERA cupins
Antenas moniliformes;
Asas presentes nas formas reprodutivas, membranosas, ambos os pares iguais;
Asas com sutura basal, que se rompe aps a revoada, destacando as asas do corpo;
Metamorfose completa: holometbolos (ovo, larva, pupa, adulto);
Espcies sociais, formando castas: sexuados alados (formam novos cupinzeiros), sexuados pteros (rei e
rainha) e estreis (operrios e soldados);
Fontanela: onde localiza-se glndula com funo de defesa dos cupins superiores.
Termitidae: Cornitermes cumulans
Nasutitermes globiceps
ORDEM LEPIDOPTERA borboletas e mariposas
Asas membranosas cobertas por escamas
Aparelho bucal sugador maxilar (espiritromba ou probscida)
Metamorfose completa: Holometbolos (ovo, larva (=lagarta), pupa (=crislida), adulto)
Subordem Glossata
Caracterstica geral
Espiritromba formada pelas gleas maxilares
Crambidae: Azochis gripusalis broca-da-figueira
Diatraea saccharalis - broca-da-cana-de-acar
Gelechiidae: Phthorimaea operculella traa-da-batata
Sitotroga cerealella - traa-dos-cereais
Noctuidae: Agrotis ipsilon lagarta-rosca
Alabama argillacea - curuquer-do-algodoeiro
Anticarsia gemmatalis lagarta-da-soja
Helicoverpa zea - lagarta-da-espiga-do-milho
Mocis latipes lagarta-dos-capinzais
Spodoptera frugiperda lagarta-do-cartucho-do-milho, lagarta-da-folha-do-arroz
Pseudaletia sequax lagarta-do-trigo
Pieridae: Ascia monuste orseis - curuquer-da-couve
Pyralidae: Elasmopalpus lignosellus lagarta-elasmo
Plodia interpunctella traa-indiana
Sphingidae: Erinnyis ello mandarov-da-mandioca
Manduca sexta - mandarov-do-fumo
Tortricidae: Cydia pomonella traa-da-ma
Grapholita molesta mariposa-oriental
Observao: Cada uma das outras trs subordens (Aglossata, Heterobathmiina e Zeugloptera) tem apenas uma
famlia. Como caracterstica geral dessas subordens, as gleas maxilares no formam espiritromba (probscida).
ORDEM NEUROPTERA
Asas membranosas com sistema variado de nervuras ;
Metamorfose completa: Holometbolos (ovo, larva, pupa, adulto);
Larvas predadoras.
Chrysopidae predadores (ver Tabela 2)
ORDEM ORTHOPTERA gafanhotos, grilos, esperanas e grilotalpas
Terceiro par de pernas saltatorial;
Antenas filiformes ou setceas;
Asas com par anterior do tipo tgmina e posterior membranosa;
Metamorfose incompleta: Hemimetbolos (ovo, ninfa, adulto).
Subordem Caelifera - gafanhotos
Antenas curtas;
Tmpanos, quando presentes, localizados no primeiro segmento do abdome.
Acrididae: Rhammatocerus schistocercoides gafanhoto-crioulo
Subordem Ensifera - esperanas, grilos e grilotalpas
Antenas longas;
Tmpanos, quando presentes, localizados nas tbias anteriores.
Gryllotalpidae Neocurtilla hexadactyla grilotalpa ou cachorrinho-da-terra
ORDEM THYSANOPTERA - tripes ou trips
Aparelho bucal sugador labial triqueta (raspador-sugador);
Antenas filiformes ou moniliformes;
Asas franjadas;
Metamorfose incompleta: Hemimetbolos (ovo-ninfa-ninfa imvel-adulto).
Subordem Tubulifera Caracterstica geral
ltimo segmento abdominal em forma de tubo.
Subordem Terebrantia Caracterstica geral
ltimo segmento abdominal arredondado ou cnico.
Thripidae: Frankliniella schultzei
Thrips palmi
Thrips tabaci
Croft, 1990; Heinrichs, 1994; Gallo et al., 2002; Heinrichs & Barrion, 2004; Lucho, 2004.
10
Tabela 1: Alguns insetos vetores de fitopatgenos

INSETOS VETORES
PATGENOS
Acrogonia citrina (Hem.:

Cicadellidae)
Aphis gossypii (Hem.:
Aphididae)
Bactria - Xylella fastidiosa
Clorose variegada dos citros (CVC)
Citros
Cucumber mosaic virus (CMV)

Papaya ringspot virus type P (PRSV-P)
Passion fruit woodiness virus (PWV)
Mosaico da bananeira
Mosaico do mamoeiro
Endurecimento dos frutos
Bananeira
Mamoeiro
Maracujazeiro
Bean golden mosaic virus (BGMV)
Mosaico dourado do feijoeiro
Feijoeiro
Bean rugose mosaic virus (BRMV)
Mosaico rugoso da soja
Feijoeiro e soja
Fitoplasma
Maize rayado fino virus (MRFV)
Spiroplasma kunkelii
Bean rugose mosaic virus (BRMV)
Enfezamento vermelho do milho

Risca do milho
Enfezamento plido
Mosaico rugoso da soja
Milho
Milho
Milho
Feijoeiro e soja
Bactria - Candidatus liberibacter spp.
Greening ou Huanglongbing (HLB)
Citros
Citros
Tospovrus
Vira-cabea
Fumo, tomate e outras solanceas
Tospovrus
Vira-cabea
Fungo: Ceratocystis fimbriata
Seca da mangueira
Mangueira

Potato leafroll virus (PLRV)
Potato virus Y (PVY)
Soybean mosaic virus (SMV)
Phytoplasma palmae
Mosaico do mamoeiro
Enrolamento da folha da batateira
Mosaico do pimento
Mosaico comum da soja
Amarelecimento letal
Mamoeiro
Maracujazeiro
Batata
Solanceas
Soja
Coqueiro
Citros
Grapevine leafroll-associated virus

(GLRaV)
Grapevine leafroll-associated virus
(GLRaV)
Enrolamento da folha
Videira
Enrolamento da folha
Videira
Soybean mosaic virus (SMV)

Sugarcane mosaic virus (SCMV)
Mosaico comum da soja

Mosaico comum
Soja
Milho, sorgo, cana-de-acar
Tospovrus
Citrus tristeza virus (CTV)
Vira-cabea
Tristeza dos citros
Mosaico do mamoeiro

Citros
Mamoeiro
Maracujazeiro
Bemisia tabaci (Hem.:

Aleyrodidae)
Cerotoma arcuata(Col.:
Chrysomelidae)
Dalbulus maidis(Hem.:
Cicadellidae)
Diabrotica speciosa (Col.:
Chrysomelidae)
Diaphorina citri (Hem.:
Psyllidae)
Dilobopterus costalimai(Hem.:
Cicadellidae)
Frankliniella
occidentalis(Thy.: Thripidae)
Frankliniella schultzei(Thy.:
Thripidae)
Hypocryphalus mangiferae
(Col.: Scolytidae)
Myzus persicae (Hem.:
Aphididae)
Myndus crudus(Hem.:
Cixiidae)
Oncometopia facialis (Hem.:
Cicadellidae)
Planococcus ficus (Hem.:
Pseudococcidae)
Pseudococcus
longispinus(Hem.:
Pseudococcidae)
Rhopalosiphum maidis(Hem.:
Aphididae)
Thrips palmi(Thy.: Thripidae)
Toxoptera citricidus(Hem.:
Aphididae)
DOENAS
CULTURAS
Kimati et al., 1997; Gallo et al., 2002; Oliveira et al., 2003.
Tabela 2: Alguns insetos predadores e suas presas

ORDENS E FAMLIAS
Coleoptera
Carabidae
Coccinellidae (joaninhas)
Dermaptera
Forficulidae (tesourinhas)
Diptera
Syrphidae
Hemiptera
Anthocoridae
Lygaeidae
Nabidae
Pentatomidae
Reduviidae
Hymenoptera
Vespidae
Neuroptera
Chrysopidae
PREDADORES
PRESAS
Callida scutellaris
Calosoma granulatum
Lebia concina
lagartas
lagartas
lagartas
Azya luteipes
Eriopis connexa
Cycloneda sanguinea
Pentilia egena
Rodolia cardinalis
cochonilhas
pulges
pulges
cochonilhas
cochonilhas
Doru luteipes
lagartas e ovos
Pseudodoros clavatus
Salpingogaster nigra
pulges
ninfas de cigarrinhas
Orius insidiosus
Geocoris sp.
Nabis sp.
Podisus nigrispinus
Zelus sp.
lagartas, ovos, tripes, pulges

lagartas e ovos
lagartas e ovos
lagartas e ovos
lagartas, colepteros
Polistes sp.
Polybia sp.
lagartas
lagartas
Chrysopa sp.
Chrysoperla sp.
Gallo et al., 2002; Silva et al., 2002; De Bortoli et al., 2008.
pulges, cochonilhas, moscas-brancas

pulges, cochonilhas, moscas-brancas
11
Tabela 3: Alguns insetos parasitides e seus respectivos hospedeiros

ORDENS E FAMLIAS
Hymenoptera
Aphelinidae
PARASITIDES
Aphelinus mali
Encarsia (Prospaltella) berlesei
Bethylidae
Vespa-de-uganda Prorops nasuta
Braconidae
Apanteles sp.
Aphidius sp.
Apanteles subandinus
Chelonus insularis
Colastes letifer
Cotesia flavipes
Diachasmimorpha longicaudata
Hypomicrogaster hypsipylae
Chalcididae
Brachymeria pseudoovata
Encyrtidae
Ageniaspis citricola
Eulophidae
Proacrias coffeae
Tetrastichus giffardianus
Ibaliidae
Ibalia leucospoides
Ichneumonidae
Campoletis flavicincta
Coccygomimus tomyris
Microcharops bimaculata
Scelionidae
Telenomus podisi
Trissolcus basalis
Trissolcus urichi
Trichogrammatidae
Trichogramma galloi
Trichogramma pretiosum
Diptera
Tachinidae
Archytas incertus
Archytas lopesi
Archytas pseudodaemon
Hemisturmia sp.
Lespesia affinis
Trichopoda nitens
Xanthozona melanopyga
HOSPEDEIROS
CULTURAS
Pulgo-langero Eriosoma
lanigerum(Hem.: Aphididae)
Cochonilha-branca Pseudaulacaspis
pentagona (Hem.: Diaspididae)
Broca-do-caf Hypothenemus hampei
(Col.: Scolytidae)
Mandarov-do-fumo Manduca sexta
(Lep.: Sphingidae)
Pulgo-verdeMyzus persicae (Hem.:
Aphididae)
Pulgo-do-algodoeiroAphis gossypii(Hem.:
Aphididae)
Pulgo-da-espigaSitobion avenae(Hem.:
Aphididae)
Traa-da-batataPhthorimaea
operculella(Lep.: Gelechiidae)
Lagarta-do-cartucho-do-milho Spodoptera
frugiperda(Lep.: Noctuidae)
Bicho-mineiro Leucoptera coffeella(Lep.:
Lyonetiidae)
Broca-da-cana Diatraea saccharalis(Lep.:
Crambidae)
Mosca-do-mediterrneo Ceratitis capitata
(Dip.: Tephritidae)
Broca-do-cedroHypsipyla grandella(Lep.:
Pyralidae)
Traa-dos-cachos Cryptoblabes
gnidiella(Lep.: Pyralidae)
Minador-dos-citros Phyllocnistis
citrella(Lep.: Gracillariidae)
Bicho-mineiro Leucoptera coffeella(Lep.:
Lyonetiidae)
Mosca-do-mediterrneo Ceratitis
capitata(Dip.: Tephritidae)
Vespa-da-madeira Sirex noctilio(Hym.:
Siricidae)
Lagarta-cachorrinho Eupseudosoma
aberrans (Lep.: Arctiidae)
Lagarta-mede-palmo Sabulodes caberata
caberata (Lep.: Geometridae)
Lagarta-da-soja Anticarsia
gemmatalis(Lep.: Noctuidae)
Percevejo-marrom Euschistus heros(Hem.:
Pentatomidae)
Percevejo-do-colmoTibraca
limbativentris(Hem.: Pentatomidae)
Percevejo-verde-da-soja Nezara viridula
(Hem.: Pentatomidae)
Percevejo-do-colmoTibraca
limbativentris(Hem.: Pentatomidae)
Broca-da-cana Diatraea saccharalis(Lep.:
Crambidae)
Broca-pequena-do-fruto Neoleucinodes
elegantalis(Lep.: Crambidae)
Lagarta-da-espiga-do-milho Helicoverpa
zea(Lep.: Noctuidae)
Macieira e outras rosceas
Lagarta-das-folhas Rolepa unimoda(Lep.:
Lymantriidae)
aberrans (Lep.: Arctiidae
Mariposa-violcea Sarsina violascens(Lep.:
Lymantriidae)
Lagarta urticante Lonomia
circumstans(Lep.: Saturniidae)
aberrans (Lep.: Arctiidae)
Percevejo-verde-da-soja Nezara viridula
(Hem.: Pentatomidae)
Lagarta-das-palmeiras Brassolis
sophorae(Lep.: Nymphalidae)
Diversas culturas, como milho,

arroz, algodoeiro
Ip
Pessegueiro, amoreira e outras

frutferas
Cafeeiro
Fumo
Diversas culturas, como as
solanceas
Diversas culturas, como algodo,
solanceas e cucurbitceas
Diversas culturas, como trigo,
aveia, cevada
Batata
arroz, algodoeiro
Cafeeiro
Cana-de-acar, milho e outras
Poaceae (gramneas)
Frutferas diversas
Cedro, mogno e outras espcies
florestais
Videira
Citros
Cafeeiro
Frutferas diversas
Pinus
arroz, algodoeiro
Eucalipto
Eucalipto
Soja e outras Fabaceae
(leguminosas)
Soja
Arroz
Diversas culturas, como soja e
mamoeiro
Arroz
Cana-de-acar, milho e outras
Poaceae (gramneas)
Tomateiro e outras solanceas
Milho, sorgo e outras Poaceae
(gramneas)
Eucalipto
Eucalipto
Cafeeiro
Eucalipto
Diversas culturas, como soja e
mamoeiro
Coqueiro, dendezeiro e outras
palmeiras
Sampaio et al., 2001; Gallo et al., 2002; Rodrigues et al., 2004; Pratissoli et al., 2005; Carvalho, 2005; Maciel et al., 2007.
12
1.5
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13
Pesquisa
ECOLOGIA DE BACILLUS
ENTOMOPATOGNICOS
Pesquisa
1.1 Biologia e ecologia

de Bacillus spp.
Atualmente so conhecidas inmeras espcies de bactrias associadas a
insetos. Porm poucas apresentam as caractersticas desejveis aplicao do
controle biolgico de insetos-praga das plantas cultivadas (Fiuza, 2001). No
entanto, o crescente interesse pela utilizao de
bioinseticidas para o controle de populaes de instudos ecolgicos visando conservao de Bacillus spp.
setos prejudiciais, levou o homem a pesquisar mais
em ecossistemas aquticos e terrestres justificam-se pela
profundamente as bactrias (Habib & Andrade,
aplicao de algumas espcies no controle biolgico de
1998). Entre as bactrias entomopatognicas, o ginsetos. Apesar desses microrganismos apresentarem
nero Bacillus apresenta especial importncia no
semelhanas quanto biologia e modo de ao, eles
controle biolgico de pragas, destacando-se o Badiferem entre si por caractersticas particulares de cada espcie.
cillus sphaericus e o Bacillus thuringiensis (Priest,
Os aspectos relacionados distribuio geogrfica, habitat
1992, 2000; Rabinovitch, 2000; Brighenti et al., 2005;
preferencial, interaes com a microbiota local, fatores que
Capalbo et al., 2005; Crickmore et al., 2008; De Melo,
afetam crescimento, esporulao e atividade inseticida dos
2008).
entomopatgenos servem como parmetros s anlises de
Embora seja reconhecido que B. thuringiensis
impacto ambiental, especialmente em agroecossistemas
um
patgeno de insetos, a ecologia dessa bactria
orizcolas. Esse conjunto de elementos fornece subsdios que
ainda pouco conhecida (Jensen et al., 2003). Ele
auxiliam na seleo de isolados com potencial inseticida e
ampliam a escassa literatura sobre o papel ecolgico desses
um microrganismo ubquo do solo, mas tammicrorganismos no ambiente.
bm encontrado nos demais ambientes terrestres,
aquticos e tambm em insetos mortos, produtos
armazenados, plantas e detritos (Meadows et al.,
1992; Meadows, 1993; Bernhard et al., 1997, Hossain et al., 1997; Forsyth &
Biloga (UNISINOS) e Mestre em Biologia:
Logan, 2000; Hongyu et al., 2000; Maeda et al., 2000; Sneath, 2001; Martinez &
Diversidade e Manejo de Vida Silvestre
(UNISINOS).
Caballero, 2002; Silva et al., 2002; Uribe et al., 2003; Wang et al., 2003). De
toda forma, ele habita mais comumente o solo e a superfcie das folhas (ForGabriela Cristina Alles
syth & Logan, 2000). No solo, o nmero de clulas varia de 102 a 104 UnidaBiloga (UNISINOS) e Mestre e Doutoranda
des Formadoras de Colnias (UFC) por grama de solo, enquanto em plantas,
em Biologia: Diversidade e Manejo de Vida
Silvestre (UNISINOS).
esse nmero varia de 0 a 100 UFC cm-2 (Damgaard, 2000).
De acordo com Meadows (1993) existem quatro possveis explicaes para
Leila Lucia Fritz
a
presena
de B. thuringiensis no solo: a primeira considera que B. thuringiBiloga (UNISINOS) e Mestranda em Biologia:
ensis raramente desenvolve-se no solo, mas depositado nesse substrato por
(UNISINOS).
folhas, insetos, entre outros. A segunda hiptese assume que esse microrganismo pode ser patgeno de insetos do solo que apresentem reduzida imporMaria Helena Ribeiro Reche
tncia econmica, com os quais poucos estudos foram realizados. A terceira
Biloga (UPF) e Mestre e Doutoranda em
Biologia: Diversidade e Manejo de Vida
hiptese pressupe que B. thuringiensis pode desenvolver-se no solo quando
existem nutrientes suficientes, obtidos de resduos orgnicos em decomposio. Enquanto a ltima teoria afirma a existncia de afinidade de B. thuringiLidia Mariana Fiuza
ensis e Bacillus cereus, com o qual B. thuringiensis pode trocar material genFitotecnia Fitossanidade (UFRGS), Doutora
tico, possibilitando sua permanncia no ambiente.
em Cincias Agronmicas (ENSAMAlm de B. thuringiensis e B. cereus, existem as espcies: B. mycoides, B.
Montpellier) e Ps-Doutora em biotecnologia
pseudomycoides, B. anthracis e B. weihenstephanensis (Hansen, et al., 2003;
Vegetal (CIRAD-Montpellier).
14
Figura 1. Bactrias esporulantes

provenientes de amostras de solo
em regies produtoras de arroz
irrigado do RS
Hu et al., 2004). As espcies, B. cereus e B. thuringiensis so fenotipicamente e geneticamente muito similares entre si, havendo dificuldade na
distino entre as duas espcies (Lecadet et al., 1999; Shisa et al., 2002).
No entanto, B. cereus considerado
patgeno facultativo devido ao seu
hbito saproftico no solo e parasita
de linhagens de insetos, possuindo
uma protena txica de baixa atividade especfica (Habib & Andrade,
1998). Esta espcie no produz incluses paraesporais inseticidas atuando
atravs de ao enzimtica (Guttmann
& Ellar, 2000; Shisa et al., 2002). Muitas cepas de B. cereus so consideradas patgenas oportunistas de mam-
feros, causando intoxicaes alimentares seguidas de vmitos e diarrias,

dificultando o seu emprego no controle de insetos-praga (Hansen & Hendriksen, 2001).
As informaes sobre o destino
das toxinas de B. thuringiensis no solo
so limitadas, embora alguns trabalhos mostrem que elas unem-se a cidos hmicos e suplementos orgnicos ou partculas do solo, que as protegem da degradao sem perder sua
atividade inseticida (Polanczyk & Alves, 2003). De modo geral, as bactrias entomopatognicas permanecem
no solo por meses ou anos aps a
sua liberao. B. thuringiensis capaz de permanecer vivel por mais
de trs anos aps liberado (Fuxa,
1992). A sensibilidade dos esporos
desse entomopatgeno radiao
solar e dessecao est associada
com os plasmdeos, ocorrendo trocas
na composio qumica da cobertura
dos esporos, reduzindo sua tolerncia aos fatores fsicos do ambiente.
Nas folhas, a limitao dos esporos
pode ocorrer pelo tipo de folha e seus
exudados, os quais contm inibidores da germinao de esporos (Ynez & Cabriales, 2000).
Considerando a hiptese de que
os esporos do B. thuringiensis encontram-se no ambiente como resultado
da morte do inseto alvo, espera-se que
a distribuio dessa bactria ocorra
aleatoriamente, e que os isolados de
um mesmo lugar sejam similares (Fiuza, 2001). No entanto, os isolados de
B. thuringiensis tm sido encontrados
em todos os tipos de solos e regies
do mundo, incluindo tundra rtica, es-
tepe, regies temperadas e tropicais,

savanas e desertos quentes. Sua abrangncia foi relatada em reas da Escandinvia a Nova Zelndia e da Islndia a Cadeias Montanhosas. No entanto, ele raramente encontrado em
areias de praias e camadas de solo
abaixo de 10 cm de profundidade
(Landn et al., 1994; Chilcott & Ellar,
1998).
B. thuringiensis tem sido freqentemente isolado de florestas, reas urbanas, campos e principalmente de
lavouras agrcolas (Martin, 1994; Fiuza, 2001).
Em um levantamento do Banco de
Bactrias Entomopotagonnicas da
Microbiologia da UNISINOS (BBEMU), foram analisadas 278 amostras
de solo, oriundas de 29 municpios,
de cinco regies produtoras de arroz
irrigado do RS. Foram isoladas 674
amostras de bactrias esporulantes, a
maioria pertencente ao Litoral Norte
(41%), seguido do Litoral Sul (21%),
da Campanha (14,4%), da Depresso
Central (14%) e da Fronteira Oeste
(10%) (Figura 1).
Dessas, 31,1% correspondem a B.
thuringiensis; 6% a B. cereus; 4% a B.
sphaericus e 58,9% equivalem a outras espcies de Bacillus (Fritz et al.,
2007). Outras pesquisas em solos de
reas de arroz irrigado revelam a
ampla ocorrncia de Bacillus no RS.
Em 2006, Azambuja estudou a freqncia de isolados de Bacillus spp.
durante o perodo que compreende
o ciclo do cultivo do arroz irrigado
no sistema convencional e obteve 245
colnias de bactrias esporulantes,
onde 143 pertenciam ao gnero Ba-
Figura 2. Freqncia de Bacillus spp. nos diferentes sistemas de cultivo e fases da cultura do arroz irrigado no RS; (C)
pousio, (SCC) sistema de cultivo convencional, (SCG) sistema de cultivo pr-germinado, (SCD) sistema de cultivo direto
15
Figura 3. Abundncia de Bacillus thuringiensis em relao aos distintos tratamentos fitossanitrios e perodo de irrigao do arroz no RS; (C) rea controle, (H) rea somente com herbicidas, (H+I) rea com herbicidas e inseticida, (H+F)
rea com herbicidas e fungicida
cillus, entre as quais foram identificadas 26,6% como B. thuringiensis; 4,2%

como B. sphaericus e 69,2% foram
agrupadas como outras espcies de
Bacillus.
Silva et al. (2002) reforam a predominncia de B. thuringiensis (9,1%)
em solos de todas as regies brasileiras se comparado a B. sphaericus
(5,1%), com exceo da regio Sul do
pas que B. sphaericus (10,1%) foi
mais freqente que B. thuringiensis
(4,6%). No entanto, em solos agrcolas de diferentes reas da Argentina a
freqncia de B. sphaericus foi maior
(2,1%) em relao de B. thuringiensis (1,6%) conforme os dados de
Dias et al. (1999).
Como foi verificada nas diversas
pesquisas, a freqncia de B. thuringiensis em vrios locais e as diferenas encontradas podem ser atribudas
a inmeros fatores, incluindo variaes geogrficas, climticas, atividade agrcola, tipo de solo e mtodo de
isolamento. Contudo, Martin (1984)
discute que B. thuringiensis no possui um habitat natural bem definido,
pois esse entomopatgeno caracterizado como um microrganismo saproftico, sem exigncias nutricionais
restritas, podendo adaptar-se a diferentes condies ambientais.
Diante disso, ainda que os entomopatgenos apresentados possuam
semelhanas quanto biologia e
modo de ao, eles diferem entre si
por caractersticas particulares de cada
espcie. Estudos ecolgicos facilitam
16
a compreenso dessas bactrias no

ambiente, suas relaes patgeno/
hospedeiro e a estrutura de populaes, permitindo conhecer o comportamento de microrganismos naturais
e novos isolados, sejam eles modificados geneticamente ou introduzidos
atravs de programa de controle microbiano (Sosa-Gmez et al., 1998).
Ainda assim, as bactrias entomopatognicas do gnero Bacillus so
matria-prima industrializao de
inseticidas bacterianos. Seus efeitos
sobre as larvas so to pronunciados
que as indstrias de inseticidas convencionais buscam ampliar suas utilizaes com o objetivo de controlar
as pragas da agricultura e vetores de
agentes etiolgicos de doenas humanas e vegetais.
1.2 Bacillus spp. em amostras
de solos de agroecossistemas
O crescente aumento de reas agrcolas vem causando diversos efeitos
ambientais, como a mudana microbiana do solo que mediada por diversos processos e funes (Motavalli
et al., 2004). Em agroecossistemas, as
mudanas significativas e perceptveis
na comunidade microbiana do solo
esto relacionadas com as condies
ambientais, sendo conseqncia principalmente do uso das prticas de
manejo desse ambiente (Atlas et al.,
1991). Prticas agrcolas, tais como
tipo de manejo do solo, rotao de
culturas, aplicao de agrotxicos e
uso de maquinrios interferem na

microbiota terrestre, afetando a qualidade do solo, modificando as propriedades fsicas, qumicas e biolgicas (Valarini et al., 2002; Andra &
Hollweg, 2004). Dessa forma, ocorrem variaes no nmero de indivduos ou na dinmica bioqumica natural da comunidade de microrganismos. Porm, pouco conhecido sobre a distribuio desses microrganismos terrestres e a maneira com que
eles respondem as mudanas de manejo na terra (Buckley & Schmidt,
2003).
Diversas populaes de bactrias
formadoras de endsporos ocorrem
em reas agrcolas e podem contribuir diretamente ou indiretamente na
produtividade das culturas (Gardener,
2004). As bactrias gram-positivas formam uma parte importante da microbiota de solo, o qual constitui o principal ambiente natural que abriga
bactrias do gnero Bacillus (Ibarra
et al., 2003; Mohamed et al., 2007).
Muitas espcies desse gnero so consideradas de importncia prtica (Caccamo et al., 2001), j que espcies de
Bacillus so utilizadas para a sntese
de uma grande variedade de produtos mdicos, agrcolas, farmacuticos
entre outros (Mohamed et al., 2007).
No entanto, as transformaes microbianas ocorrem devido s diferentes populaes que habitam o solo, e
as suas distintas reaes qumicas podem ser alteradas sempre que o ecossistema sofrer algum tipo de interfe-
Figura 4. Freqencia de Bacillus spp. em amostras de gua do Canal de

Irrigao das 5 regies produtoras de arroz do RS: Litoral Norte-LN, Campanha-CA, Fronteira Oeste-FO, Depresso Central- DC e Litoral Sul- LS
rncia. Assim, na aplicao de diversos tipos de manejo, podem existir

diferentes disponibilidades de substratos que determinaro o favorecimento ou a inibio do estabelecimento dos diferentes grupos microbianos (Castro & Prado, 1993).
Fritz (2007) analisou a abundncia de bactrias entomopatognicas
pertencentes ao gnero Bacillus obtidas de 36 amostras de solo coletadas de diferentes sistemas de cultivo
de arroz irrigado: sistema de cultivo
convencional (SCC), sistema de cultivo pr-germinado (SCG) e sistema de
cultivo direto (SCD) e de uma rea
de pousio (sem cultivo) por aproximadamente 12 anos (C). Foram selecionadas 336 colnias pertencentes ao
gnero Bacillus spp., onde foram
identificadas, 35,42% como B. thuringiensis, 16,96% como B. cereus, 9,52%
como B. sphaericus e 38,10% como

Bacillus sp. Todavia, no houve diferena significativa na freqncia
de Bacillus spp. entre os sistemas
de plantio (p>0,05), embora as fases da cultura tenham influenciado a abundncia das espcies
(P<0,01). A irrigao revelou-se
capaz de favorecer a variao na
abundncia de Bacillus spp., principalmente no caso de B. sphaericus, uma vez que representou
71,4% do total de isolados encontrados durante a referida etapa da
cultura (Figura 2).
O fato dos solos agrcolas sofrerem mudanas nas suas propriedades fsicas e qumicas pela introduo da cultura contribui para
a diversidade de bactrias em funo da aerao, profundidade e
melhor distribuio ao longo das
Figura 5. Freqencia de Bacillus spp. Isolados em amostras de gua das

Parcelas de cultivo de arroz, das 5 regies produtora do RS: Litoral Norte-LN,
Campanha-CA, Fronteira Oeste-FO, Depresso Central- DC e Litoral Sul- LS
camadas (Kennedy, 1999).

Pfller et al. (2000) analisaram a
freqncia de microrganismos utilizando diferentes sistemas de plantio, e em seus estudos a populao
microbiana no diferiu significativamente, embora tenha ocorrido uma
maior variao no SCC. No entanto,
Garbeva et al. (2003) compararam a
diversidade de Bacillus em solos
agrcolas, e observaram maior nmero de esporos em solos que apresentavam cultivos, em tempo reduzido em comparao aos cultivados
em longo prazo.
De acordo com Buckley & Thomas (2003), uma possvel explicao para que as comunidades microbianas em campos abandonados
de cultivo continuem a apresentar
freqncias semelhantes com campos atualmente cultivados, se deve
ao fato de que as comunidades microbianas do solo respondem s caractersticas do ambiente, que requerem longos perodos de tempo para
recuperao dos efeitos antrpicos.
Em geral, os microrganismos respondem de diversas formas aplicao de pesticidas em seu hbitat,
podendo ocorrer principalmente seleo de populaes resistentes. Essa
seleo pode ser em funo de suas
caractersticas fisiolgicas e morfolgicas. Com o passar do tempo, a
diversidade microbiana entra em
equilbrio, porm passa a ser composta por um menor nmero de espcies, mantendo-se por meses ou
anos, atingindo o clmax a semelhana da fase original (Borges et al.,
2004). Por outro lado, alguns autores relatam que a diminuio das
bactrias pode estar relacionada com
a sensibilidade aos herbicidas, resultando na eliminao de algumas
espcies. (Wardle & Parkinson,
1990).
Nesse sentido, Azambuja (2006)
avaliou a influencia do cultivo convencional de arroz irrigado sobre a
abundncia de bacilos entomopatognicos, em quatro reas tratadas
com distintos produtos fitossanitrios e a fase de irrigao da cultura,
concluindo que no houve diferena significativa entre os parmetros
avaliados separadamente sobre a
abundncia de B. thuringiensis e B.
sphaericus. No entanto, a interao
entre os fatores apresentou signifiBiotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 38
17
Figura 6. Ocorrncia de espcies de Bacillus isoladas de amostras de gua

durante o ciclo da cultura 2001/02 de arroz irrigado do Rio Grande do Sul
cativa diferena para B. thuringiensis. Antes da irrigao, o microrganismo foi mais freqente na rea tratada
somente com os herbicidas, contudo
quando o arroz foi inundado a abundncia foi mais pronunciada nesse
perodo de irrigao e no tratamento
com herbicidas/fungicida (Figura 3).
Os solos de arroz irrigado so predominantemente cidos, quando
ocorre inundao, o pH elevado
naturalmente, prximo neutralidade pelo processo de reduo. Em funo dessa nova condio, a disponibilidade de nutrientes atinge nveis
estveis durante um perodo de 4 a 6
semanas aps a inundao (IRGA,
2005).
As mudanas climticas interferem
de diferentes formas numa srie de
organismos, que conseqentemente,
afetam outros e o conjunto destas mudanas pode prejudicar o meio ambiente fsico. Sendo assim, os microrganismos esto entre os seres mais
sensveis as variaes ambientais, pois
formam grandes populaes, possuem crescimento rpido, facilidade de
disperso e reduzido tempo de geraes, constituindo-se em potenciais
indicadores biolgicos para o estudo
de impactos das mudanas climticas
globais (Ghini, 2008).
A influncia de fatores climticos
na ocorrncia de B. thuringiensis e
B. sphaericus, em solos de orizicultura irrigada, foi avaliada por Azambuja (2006) e a autora sugere que a predominncia dos entomopatgenos foi
mais acentuada no perodo de vero
com valores mdios de temperatura
do ar de 26 oC, umidade relativa de
66 % e temperatura do solo de 24,7
18
C, contudo, essas diferenas no foram submetidas anlise estatstica.

Todavia, a temperatura um importante fator de influncia alterando a
eficincia de bioinseticidas a base de
Bacillus entomopatognicos. Baixas
e altas temperaturas reduzem a atividade larvicida, indicando a necessidade de estudos potenciais devido ao
grande nmero de insetos vetores em
climas tropicais (Consoli et al., 1995).
Em agroecossistemas, a variao da
diversidade microbiana ao longo das
estaes do ano ainda no bem
compreendida, j que em cada estao parece ocorrer uma comunidade
microbiana dominante acompanhada
de outras pouco abundantes. Essas variaes esto diretamente ligadas ao
regime hdrico, ao clima da regio, a
estrutura e manejo do solo e ao teor
e a qualidade dos resduos vegetais
aportados (Torsvisk & Ovreas, 2002).
Os solos representam um ecossistema complexo e as variaes nos nveis de pH, compostos inorgnicos e
matria orgnica podem representar
um fator limitante na colonizao, estabelecimento e esporulao de microrganismos residentes (Melo & Azevedo, 1998). Diante desse fato, muitas pesquisas procuram elucidar quais
os componentes minerais so mais favorveis ou limitantes do crescimento microbiano no solo. Alm disso,
determinadas concentraes de um
dado elemento podem apresentar
efeitos adversos para um mesmo microrganismo. Alguns autores descrevem que a presena de clcio favorece o crescimento, esporulao e a
produo da delta-endotoxina de B.
thuringiensis no solo, mas em eleva-
das concentraes inibe os trs processos (Sikdar et al., 1991; Igen et

al., 2002; Polanczyk, 2004). Por
outro lado, h divergncias quanto
presena de magnsio, sendo importante na biossntese do cristal
protico ou limitante do crescimento (Igen et al., 2002; Polanczyk
2004) . Tambm h relatos na literatura de que a adio de fosfato
orgnico (3 a 100 mM) no influencia na biossntese do cristal, apesar de reduzir o crescimento de
clulas e esporos (Igen et al.,
2002), porm Azambuja (2006) observou que B. thuringiensis foi favorecido pelas quantidades de potssio no solo.
Em relao ao pH, alguns autores mencionam que a acidez do solo
favorece a adsoro da toxina de
B. thuringiensis pela frao argilosa do mesmo protegendo da biodegradao por microrganismos
competidores que tm sua atividade inibida nessa condio. Os valores acima de 5,2 favorecem o crescimento da bactria, mas quando o
pH no controlado prximo
neutralidade ocorre baixa produo da toxina (West et al., 1985; Sikdar et al., 1991; Tapp & Stotzky,
1998). Sabe-se que a disponibilidade de nutrientes minerais, pH neutro e umidade dos solos favorecem
a germinao de B. thuringiensis
representando importantes fatores
nos nveis de crescimento do microrganismo (West et al., 1985).
Contudo, os nveis timos de metais para o crescimento de B. thuringiensis e produo da delta-endotoxina so variveis e ainda no
foram claramente demonstrados,
conforme discutem alguns autores
(Sikdar et al., 1991; Igen et al.,
2002).
B. sphaericus, tem ao mosquitocida, especialmente para larvas de
Culex pipiens, sendo potencializada aps crescimento em meio de
cultura com os elementos minerais
KH2PO4, MgSO4, MnSO4, Fe2(SO4)3,
ZnSO4, CaCl2 e pH 7,2 conforme
estudos realizados por Kaflon et al.,
(1983). Nos estudos de Azambuja
(2006), o ndice de B. sphaericus
no foi afetado pelas propriedades
fsico-qumicas dos solos avaliados
de arroz irrigado. Os resultados
anteriores dos referidos autores
podem possivelmente ser explicadas por Silva et al. (1999) e Alles

(2008) que relacionam s diferentes origens do entomopatgeno,
como solos e guas, a utilizao de
algumas cepas em estudos ecolgicos pela resistncia a diferentes condies de estresse.
Na tentativa de caracterizar cepas com atividade inseticida e verificar a influncia do cultivo convencional sobre os Bacillus entomopatognicos, Azambuja (2006) obteve
a distribuio de isolados de B. thuringiensis com genes cry4, (atividade inseticida a dpteros) em cepas
provenientes de solos de todos os
tratamentos fitossanitrios, exceto
da rea tratada com herbicidas/inseticida, sendo igualmente distribudas entre os perodos de irrigao.
Como justificativa deste dado podese ressaltar que as reas inundadas
de cultivo de arroz so habitats favorveis criao de mosquitos, devido presena de elevada matria
orgnica e resduos poluentes provenientes das fontes utilizadas (Batista-Filho et al., 1998).
1.3 Bacillus spp. em
ecossistemas aquticos
Entre as bactrias melhor adaptadas vida no solo e na gua, esto quelas pertencentes ao gnero
Bacillus. O gnero Bacillus fenotipicamente heterogneo, com
membros exibindo um amplo conjunto de requerimentos nutricionais,
condies de crescimento, diversidade metablica e na composio
base do DNA. O conhecimento da
ecologia de espcies de Bacillus no
solo e na gua ainda no completo (Vilain et al., 2006).
Espcies de Bacillus foram referidas por sua capacidade metablica distinta (Fernandes et al., 2007;
Fu et al., 2007; Fisher & Hollibaugh,
2008), no Mono Lake, um lago hipersalino, alcalino do leste da Califrnia, onde existem processos de
oxidao e reduo de selnio e arsnio em presena de fontes de carbono dissolvido. Em lavouras de arroz no Rio Grande do Sul, (RS),
Mattos et al. (2007), avaliaram o impacto do uso do inseticida carbosulfano sobre os microrganismos do
solo, o risco de contaminao do
solo, da gua e do sedimento, e a

degradao microbiana. Os resultados apontaram espcies do gnero
Bacillus entre os grupos Gram-positivos dos consrcios de bactrias,
com maior capacidade metablica
em degradar o carbosulfano.
Relacionando diferentes ambientes aquticos, com a viabilidade dos
esporos de B. sphaericus, Yousten
et al. (1995) destacam que na gua
doce a frao de esporos viveis
maior do que no mar. Pouco se sabe
sobre quais fatores ambientais so
mais importantes para a perda de
viabilidade dos esporos dessa bactria. Fatores como a temperatura
de crescimento, pH, aerao, presena de minerais e certos compostos carbonados e nitrogenados afetam a formao dos endsporos
(Sneath, 2001). Nesse sentido, Alles
(2008) avaliou o crescimento de
cepas de B. sphaericus, frente a pesticidas qumicos, compostos orgnicos e metais pesados, obtendo
uma expressiva heterogeneidade
entre as estirpes e uma resistncia
ao metal Cdmio, considerando tais
caractersticas fenotpicas importantes para o controle e manejo biolgico, dependendo do local onde o
agente de biocontrole ser aplicado.
Contudo, sabe-se que as formulaes comerciais de B. sphaericus
so mais resistentes a habitats poludos e a sua reciclagem favorecida em certas condies, mas com
estreito nmero de hospedeiros em
relao B. thuringiensis israelensis (Singh e Gill, 1988; Thanabalu et
al., 1991 e 1993; Nielsen-Leroux e
Charles, 1992; Nicolas et al., 1993;
Consoli et al, 1995; Charles et al.,
1996; Silva-Filho e Regis, 2003;
Schwartz et al., 2001; Silva-Filho e
Peixoto, 1997).
Em estudos de diversidade bacteriana em orizicultura no RS, Reche & Fiuza (2005) e Fritz et al.
(2007) isolaram e identificaram espcies de Bacillus em guas de irrigao e em amostras de guas de
reas orizcolas do RS. Nessas pesquisas, B. thuringiensis, B. sphaericus, B. cereus e Bacillus sp. foram
identificados em amostras de gua
coletadas nos Canais de Irrigao e
nos Canais de Drenagem das lavouras orizcolas do RS. As coletas fo-
ram realizadas durante o ciclo da

cultura do arroz, 2001/02, em 5 regies produtoras de arroz do RS: Depresso Central- DC, Fronteira Oeste- FO, Campanha- CA, Litoral Norte- LN e Litoral Sul- LS (Figuras 4 e
5).
Os resultados apresentados nas
Figuras 4 e 5, referem-se abundncia de Bacillus spp. nas regies
orizcolas estudadas e nos dois tratamentos, Canal de Irrigao e Parcelas de cultivo de Arroz. Caractersticas adaptativas a vrios ambientes e sob condies adversas de temperatura, pH e salinidade, lhes so
conferidas por sua capacidade de
permanecer em latncia devido a
formao de esporos. As variaes
de temperatura entre as regies e a
disponibilidade de recursos, podem
influenciar as diferenas de abundncia na distribuio das espcies
(Ricackanov, 2003).
As parcelas de cultivo apresentaram maior abundncia de colnias bacterianas (Figura 5) quando
comparadas com as guas de irrigao da lavoura (Figura 4). guas
de lavoura de arroz recebem tratamentos fitossanitrios e Bacillus
parecem ter afinidade com ambientes que receberam agroqumicos,
transformando-os em fontes de carbono para a sua produo de energia. Alm disso, o ambiente de lavoura alterna inundao e drenagem, o que favorece o desenvolvimento de bactrias esporulantes (Liesack, 2001).
Os resultados de pesquisa quanto aos isolados de Bacillus em guas
de lavouras orizcolas durante o ciclo da cultura, expressaram a presena de B. thuringiensis em 39,7%
das amostras de gua analisadas. Em
segundo lugar, Bacillus sp., 35,8%,
seguidos de B. cereus, 14,6% e B.
sphaericus, 9,9% (Figura 6).
B. thuringiensis foi encontrado
em maior freqncia nas guas de
cultivo de arroz (Figura 6). A presena de Bacillus sp. mencionada
por Martiny et al. (2005), como um
dos grupo bacterianos mais comuns
em sistemas de distribuio de gua
potvel. Em estudos aps desinfeco com cloro, em sistemas de gua
potvel, Szabo et al. (2007), encontraram esporos de bactrias do gnero Bacillus, aderidos nas depresBiotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 38
19
ses da tubulao de ferro corrodo.

Os autores concluram que esses esporos so capazes de persistir por
longos perodos de tempo em presena de altos nveis de cloro. Esse
microrganismo pode desenvolver-se
em guas ricas em nutrientes liberados pela decomposio de resduos
orgnicos, assim como foi citado para
o solo, por Polanczyk & Alves (2003).
Esses autores tambm levantaram a
hiptese dessa bactria ter algum tipo
de relao simbitica com plantas, o
que explicaria a produo de toxinas
to especficas e eficientes.
B. sphaericus muito comum e
de distribuio cosmopolita, sendo
principalmente isolada do solo em sistemas aquticos ou mesmo de larvas
de pernilongos mortos, seu hospedeiro natural (Singer, 1981; Priest et al.,
1997; Alves, 1998; Wirth et al., 2001;
Partridge e Berry, 2002; Wei et al.,
2006).
B. cereus, de acordo Vilain et al.
(2006), uma bactria de solo que
pode ocorrer na rizosfera das plantas
e algumas estirpes produzem antibiticos capazes de inibir o desenvolvimento de doenas fngicas na rizosfera; Galvo et al. (2006), em anlises microbiolgicas de gua de cultivo de mexilhes, detectaram B. cereus em 6,7% das amostras. Rowan et
al. (2003) referem-se a B. cereus,
como um grupo heterogneo de bactrias Gram-positivas, que devido a
sua habilidade em formar esporos, tolera melhor ambientes hostis do que
outros entomopatgenos bacterianos
no esporulantes. B. cereus um patgeno humano oportunista, que est
presente no solo e na gua, podendo
proliferar em uma gama de ambientes incluindo matrias-primas e alimentos processados (From et al.,
2005; Tourasse et al., 2006).
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23
Pesquisa
TOXINAS DE BACILLUS
THURINGIENSIS
Pesquisa
toxicidade de B. thuringiensis est relacionada sntese das protenas Cry que

atuam especificamente no
intestino mdio dos insetos,
as quais so codificadas por
genes cry. Essas protenas tm atividade
inseticida a diferentes ordens de insetospraga, de acordo com a presena dos genes cry, nas cepas bacterianas. Alm dessas protenas, o entomopatgeno produz
outros tipos de toxinas, como exotoxinas,
protenas Vip, endotoxinas, entre outras.
Sendo assim, esse artigo apresenta a atual
classificao dos genes cry, as ordens de
insetos-alvo das protenas Cry e outros fatores de toxicidade da bactria.
1.1 Protenas Cry

Biloga (PUCRS) e Mestre e Doutoranda
(UNISINOS).
Raquel Castilhos-Fortes
Biloga (UNISINOS) e Mestre em
Microbiologia Agrcola e do Ambiente
(UFRGS)
Lidia Mariana Fiuza
biotecnologia Vegetal (CIRAD-Montpellier).
24
Juntamente com a esporulao, B. thuringiensis libera incluses cristalinas paraesporais que podem conter uma ou mais
protenas inseticidas, denominadas Cry, as
quais so codificadas por genes tambm
denominados cry. Estas protenas apresentam peso molecular entre 40 e 140kDa e
tornam-se txicas a insetos, aps sua ingesto e solubilizao, no intestino mdio
das larvas (Bravo, 1997).
Estudos sobre a seleo de B. thuringiensis tm identificado diferentes cepas
desta bactria, as quais mostram ao sobre diversas ordens de insetos, como Lepidoptera, Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Homoptera, Hemiptera, Isoptera, Orthoptera, Siphonaptera, Thisanoptera e
Mallophaga (Feitelson et al., 1992; Maagd
et al., 2001; Cavados et al., 2001; CastilhosFortes et al., 2002; Pinto et al., 2003; Maagd et al., 2003), alm de nematides (Marroquim et al., 2000).
Assim, sabe-se que diversos grupos de
insetos so suscetveis aos cristais txicos
de B. thuringiensis e que uma espcie de
inseto pode ser afetada por mais de uma
cepa da bactria, pois estas freqentemente produzem diferentes protenas inseticidas. Isso significa que um cristal protico
pode ser txico a uma grande variedade
de insetos, principalmente lepidpteros.
Alm disso, as protenas Cry de B. thuringiensis podem ter seu efeito alterado de
acordo com a radiao solar, temperatura
e pH (Nishiitsutsuji-Uwo et al., 1977; Ro-
sas-Garca et al., 2008).

A busca por novos genes cry, que sintetizem novas protenas Cry, com diferentes efeitos inseticidas tem sido uma das
grandes metas na pesquisa com B. thuringiensis, desde os primeiros trabalhos publicados sobre a manipulao gentica de
B. thuringiensis (Schnepf & Whiteley, 1981).
As toxinas Cry tm sido classificadas de
acordo com sua homologia na seqncia
de aminocidos (Figura 1), na qual a denominao Cry apresenta quatro ranques
hierrquicos de nmeros e letras (maisculas e minsculas), como por exemplo,
Cry3Aa2. As protenas Cry (Tabela 1) com
cerca de 45% de homologia em sua seqncia so colocadas no primeiro ranque e
quando apresentam 78 e 95% de identidade, constituem o segundo e terceiro ranque, respectivamente.
Cinco blocos de seqncias so comuns
a maioria das protenas Cry. Quando se
analisa o tamanho destas protenas tambm
fica evidente sua diversidade entre as diferentes protoxinas. A extenso C-terminal,
encontrada nas protenas mais longas, no
faz parte da toxina ativa, pois digerida
pelas proteases no intestino dos insetos,
mas pode ter ao na formao do cristal
(Schnepf et al., 1998).
A estrutura tridimensional das formas
ativas das toxinas Cry1 (Grochulski et al.,
1995), Cry2 e Cry3 (Li et al.,1991), quando
analisadas em cristalografia de raio X, mostraram-se muito similares, cada uma apresentando trs domnios. As incluses cristalferas ingeridas por larvas susceptveis
dissolvem-se no intestino dos insetos e as
protoxinas inativas so solubilizadas e clivadas na longa regio C-terminal, por proteases intestinais, originando fragmentos resistentes a proteases com cerca de 60 kDa
(Maagd et al., 2003).
O domnio I, N-terminal, consiste em sete
alfa-hlices e participa na insero da membrana intestinal e formao do poro. O domnio II, ou beta-prisma, apresenta trs
folhas dobradas simtricas, formando as
beta-folha. O domnio III C-terminal consiste em duas beta-folha antiparalelas. Estes dois domnios esto envolvidos no reconhecimento dos receptores e ligao,
alm do domnio III tambm ter sido associado formao de poros (Maagd et al.,
2001).
Figura 1. Dendograma de protenas Cry

de Bacillus thuringiensis (Fonte http://
www.lifesci.susx.ac.uk/home/
Neil_Crickmore/Bt. Acesso em 19/11/
2008).
25
Tabela 1. Classificao e caracterizao das protenas Cry de Bacillus thuringiensis.
26
L- Lepidoptera; C- Coleoptera; D- Diptera; H- Hymenoptera; N- Nematoda; Le- leuccitos cancerosos humanos.

27
Figura 2. Dendograma das protenas Vip sintetizadas por Bacillus thuringiensis

(Fonte: http://www.lifesci.susx.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt)
Atualmente, existem 428 protenas Cry
descritas, que esto classificadas em 55 classes Cry (Tabela 1). O autor Crickmore mantm um site na internet, o qual rene as
informaes sobre todas as toxinas Cry j
publicadas, alm de permitir o acesso s
caractersticas moleculares de cada uma.
Estes dados so atualizados periodicamente e podem ser acessados no endereo:
http://www.lifesci.susx.ac.uk/home/
Neil_Crickmore/Bt.
Este nmero tem crescido regularmente, pois a descoberta de novos genes implica na obteno de novas toxinas que
possam ter maior especificidade ou toxicidade. Dentre os grupos de genes cry mais
estudados, destacam-se cry1, cry2, e cry9,
os quais j foram descritos com amplo es28
pectro inseticida aos lepidpteros.

Dentre estes grupos, os genes cry1 so
os mais freqentes na natureza, representando mais de 43% dos genes cry caracterizados e freqentemente as bactrias que
possuem genes deste grupo codificam protoxinas entre 130 e 140kDa, que so armazenados em cristais bipiramidais (Hofte &
Whiteley, 1989; Rosas-Garca et al., 2008;
Thammasittirong & Tipvadee, 2008).
O dendograma da Figura 1 mostra os
grupos de protenas Cry, que so classificados de acordo com a similaridade entre
a seqncia de genes que codificam as referidas toxinas bacterianas.
De acordo com Crickmore et al. (1998),
o primeiro domnio apresenta em torno de
45% de similaridade entre si, ao passo que
o segundo domnio mostra-se entre 45 e 75%

similares e o terceiro domnio a partir de 75%
de similaridade, quando se trata da seqncia
de aminocidos.
Carlson et al. (1994) relatam que B. thuringiensis apresenta em seu genoma de 2,4 a
5,7 milhes de pares de bases, e a maioria dos
isolados apresentam elementos extra cromossmicos lineares ou circulares. Os genes cry
esto localizados em plasmdios e muitos isolados de B. thuringiensis possuem diversos genes cry responsveis pela sntese de diferentes protenas inseticidas (Lereclus et al., 1993).
Durante seu desenvolvimento, B. thuringiensis passa por duas fases, a fase vegetativa e a
estacionria, semelhantes ao desenvolvimento
de Bacillus subtilis.
A primeira fase caracteriza-se pelo crescimento exponencial das clulas de B. thuringiensis, momento em que h grande disponibilidade de nutrientes no meio. A fase estacionria ocorre quando o meio se torna hostil e a
bactria adapta-se diminuio de nutrientes
atravs de mecanismos genticos. A expresso dos genes cry de B. thuringiensis geralmente ocorre na fase estacionria da clula,
acumulando seu produto na clula me, na
forma de uma incluso cristalfera, a qual
liberada no meio ao final da esporulao (Lereclus et al., 2000). Esta incluso pode representar cerca de 25% do peso seco de clulas j
esporuladas (Agaisse & Lereclus, 1995). Esses
autores relatam que apesar da expresso dos
genes cry estarem estreitamente relacionada
ao evento da esporulao, existem genes cry
que so expressos independentemente da esporulao.
A quantidade de protena produzida por
uma clula de B. thuringiensis no est diretamente relacionada com o nmero de cpias
de genes cry, pois a capacidade de produo
de protena pela clula, mesmo com apenas
uma cpia de um determinado gene cry, pode
ser elevada. Por exemplo, a cepa B. thuringiensis kurstaki HD73, possui apenas uma cpia
de gene cry1, mas sintetiza cristais bipiramidais em quantidades semelhantes quelas produzidas por cepas que apresentam trs ou quatro diferentes genes cry1. Desta forma, a sntese protica atinge um limite mximo, com certo nmero de cpias de genes cry na clula e
acima deste no h acrscimo na produo de
toxinas (Agaisse & Lereclus, 1995).
As toxinas Cry so as mais proeminentes
de uma srie de fatores que permitem o desenvolvimento de sua virulncia morte ou enfraquecimento dos insetos. Esses dados sugerem
que muitas estirpes de B. thuringiensis podem
ser consideradas como patgenos oportunistas
de insetos. Seria de grande importncia uma
compreenso mais profunda das verdadeiras
funes ecolgicas de B. thuringiensis, tanto
para melhorar a confiabilidade da avaliao dos
riscos e para o desenvolvimento de mtodos
eficientes de isolamento de estirpes de B. thuringiensis, contendo genes cry ativos.
1.2 Protenas Vip
As protenas VIP foram descritas por Estru-
Tabela 2. Protenas Vip com efeito txico a diferentes insetos
Estruch (1996) e 23% das cepas avaliadas

por Rice (1999). As subfamlias Vip1 e Vip2
(Tabela 2) so componentes de uma protena binria com atividade inseticida contra Diabrotica virgifera e D. longicornis
(Han et al., 1999; Warren, 1997). As protenas Vip 3 so ativas contra lepidpteros
(Tabela 2), como Spodoptera frugiperda e
Helicoverpa zea. Seu modo de ao est
relacionado formao de poros na membrana do epitlio do intestino mdio (Yu
et al., 1997; Loguercio et al., 2002; Lee et
al., 2003). Ao mesmo tempo que a Vip 3
apresentou toxicidade sobre lepidpteros
e no mostrou efeitos sobre insetos noalvo (Whitehouse, 2007).
Devido a sua atividade inseticida relacionada a Heliothis zea, as protenas Vip
3A esto sendo expressas em plantas de
algodo, conferindo resistncia ao inseto.
Nesse sentido, Bommireddy et al. (2007),
avaliaram plantas de algodo modificadas
somente com a protena Vip 3A, ou com a
combinao de Vip 3A e Cry 1Ab (Vip Cot)
nos lepidpteros H. zea e H. virescens. Considerando o comportamento das lagartas,
os resultados desses autores mostram que
houve maior ndice de infestao em plantas no modificadas em relao s demais
(Vip 3A e Vip Cot).
O conjunto desses dados demonstra
que s protenas Vip so promissoras no
controle de insetos-praga, uma vez que possuem diferenas estruturais em relao s
demais protenas de B. thuringiensis, o que
pode retardar o processo de resistncia nas
populaes de insetos.
1.3 Demais fatores de virulncia
de B. thuringiensis
ch et al. (1996) e recebem essa denominao por serem produzidas na fase vegetativa de crescimento de B. thuringiensis. Sua
concentrao tambm permanece alta antes e depois da fase de esporulao.
Vrios estudos foram realizados aps
sua descoberta visando a caracterizao,
identificao de novos tipos, ao inseticida e tambm produo de plantas com capacidade de express-las. Estes estudos, porm, so incipientes quando comparados
com as endotoxinas.
A localizao dos genes responsveis
por sua produo ainda no foi determinada, embora existam vrios conjuntos de
primers que podem ser utilizados para identific-las como vip1 e vip2 (Rice, 1999; Fang
et al., 2007; Selvapandiyan et al., 2001 )
vip3A (Rice, 1999), vip3Aa (Seifinejad et al.,
2008), vip5 e vip6 (Loguercio et al., 2002).
A Figura 2 apresenta um dendograma
com as protenas Vip, j identificadas e cahttp://
talogadas,
no
site:
www.lifesci.susx.ac.uk/home/
Neil_Crickmore/Bt. Esse dendograma mostra primeiramente dois grandes agrupamentos de protenas onde so encontradas seqncias genticas semelhantes entre si,
subdivididos em cinco grupos menores, de

acordo com essa seqncia gentica. Percebe-se, claramente que esses cinco grupos similares so formados por protenas
da mesma classe, ou seja, Vip1, Vip2 e Vip
3. A diferena entre a seqncia de genes
que codificam essas protenas que define
sua classificao, como Vip1Aa, Vip1Ab, entre outras.
De acordo com Rang et al. (2005), as
protenas Vip2 exibem entre 21 e 22% de
similaridade com a protena Vip3Ba1, enquanto as protenas da classe Vip1 so entre 8 e 22% similares Vip3Ba1.
Segundo Fang (2007) estas protenas
representam uma das maiores descobertas
de toxinas com capacidade inseticida, sendo extremamente relevante a ausncia de
similaridade nas seqncias de aminocidos destas protenas com as seqncias de
aminocidos das endotoxinas, especialmente, em termos de manejo e evoluo da
resistncia.
De acordo com o dendograma da Figura 2, estas protenas so classificadas em
trs subfamlias diferentes (Crickmore et al.,
2005), sendo que ocorrem em torno de 15%
das cepas de B. thuringiensis avaliadas por
Alm das protenas Cry e Vip, os isolados de B. thuringiensis podem sintetizar

protenas denominadas Cyt, que possuem
atividade citoltica in vitro e especificidade
in vivo aos dpteros (Hfte & Whitheley,
1989; De Maagd et al., 2003). De acordo
com esses autores fazem parte desse grupo as protenas Cyt1Ca e Cyt2Aa e seu
modo de ao tambm pode estar relacionado a um sinergismo com outras toxinas
produzidas pelos isolados.
O entomopatgeno tambm produz
outros fatores de virulncia, como as exotoxinas, -exotoxinas, hemolisinas, enterotoxinas, quitinases e fosfolipases (Hfte & Whiteley, 1989; De Maagd et al., 2001).
Esses autores declaram desconhecida a
exata contribuio de cada fator na virulncia da bactria, sendo uma dificuldade
determinar o espectro txico de um isolado que sintetiza mais de uma protena. Isso
porque, quando os fragmentos txicos vo
se ligar aos receptores da membrana do
intestino mdio do inseto, ocorre uma competio pelos stios de ligao, que pode
interferir na toxicidade do isolado.
Guttmann & Ellar (2000) identificaram
isolados de B. thuringiensis com a presena de hemolisinas, quitinases e lecitinases,
29
de Barreto et al. (1999) utilizando S. frugiper-
Tabela 3. Subespcies de Bacillus thuringiensis produtores da -exotoxina da em seus ensaios de toxicidade. Porm, de-
vido as suas propriedades no especficas aos

insetos, ou seja, pode tambm afetar organismos no-alvo, os isolados bacterianos que so
produtores dessa toxina no podem ser comercializados para serem utilizados na agricultura visando o controle de insetos-praga.
1.1 Referncias
sendo eles: Bt kurstaki, Bt israelensis, Bt

fukuokaensis Bt kyushuensis, Bt darmastadiensis, Bt thompsoni, Bt tolworthii e Bt ostrinae. J as subespcies Bt galleriae, Bt aizawai e Bt wuhanensis apresentaram somente hemolisina e quitinase.
Os mesmos autores tambm relatam a
presena do gene que codifica a enterotoxina, uma toxina produzida por diferentes
cepas de B. thuringiensis, com peso molecular em torno de 45kDa, e que pode ser
txica a vertebrados, uma vez que anloga toxina produzida por B. cereus. Considerando a anlise de 13 isolados de B.
thuringiensis avaliados, 9 foram positivos
para o gene entS que codifica a enterotoxina. No mesmo sentido, Rivera et al. (2000)
avaliaram 74 isolados do entomopatgeno,
em relao a presena dos genes bce, hbl e
nhe para a enterotoxina. Os seus resultados mostram que o gene nhe foi o mais
freqente, seguido de hbl e bce mostrando
assim, uma pequena diferena na distribuio desses genes entre B. thuringiensis e
B .cereus.
Outros dados de pesquisa sobre enterotoxina (Ngamwongsatit et al., 2008), revelaram a presena dos genes hbl, nhe, cytK
e entFM em 205 isolados de B. thuringiensis e 411 isolados de B. cereus. Os dados
desses autores mostram que, em 149 isolados de B. thuringiensis todos os genes ocorreram simultaneamente, sendo os genes nhe
e entFM aqueles de menor freqncia. Esses autores relatam a importncia desse
conhecimento uma vez que a enterotoxina
30
pode causar intoxicao alimentar, quando relacionada ao patgeno B. cereus.

Em relao -exotoxina, tambm chamada thuringiensina, uma protena com
peso molecular de 0,7 kDa (Gohar & Perchat 2001), insespecfica, termoestvel,
identificada por inibir a sntese de rRNA
(Mackedonski & Hadjilov, 1972) e prejudicar a formao do fuso mittico, dentre
outros efeitos observados em ensaios in vitro com Alium cepa (Sharma & Sahu, 1977).
Por ser inespecfica e txica a vertebrados,
a thuringiensina avaliada em testes laboratoriais, utilizando roedores como cobaias.
Os dados de Ohba et al. (1981) mostram que, de 740 isolados de B. thuringiensis avaliados quanto a presena da -exotoxina, 28 produziram essa toxina. Alm
desses, dois isolados da espcie B. subtilis,
um isolado de B. natto e dois isolados da
espcie B. megaterium tambm foram produtores da thuringiensina.
Nesse sentido, Hernandz et al. (2003)
revelam que 79% dos isolados de B. thuringiensis thuringiensis so produtores dessa toxina, seguidos de 20% para B. thuringiensis kenyae, 13% para B. thuringiensis
kurstaki, contrastando com 0% de produo para B. thuringiensis aizawai.
Na Tabela 3 constam dados sobre a produo da -exotoxina pelas diferentes subespcies de B. thuringiensis.
A thuringiensina tambm apresenta atividade inseticida a diferentes espcies de
insetos-praga, como demonstra o trabalho
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31
Pesquisa
MECANISMO DE AO
DE BACILLUS THURINGIENSIS
Pesquisa
Lidia Mariana Fiuza
Engenheira Agrnoma (UPF), Mestre em Fitotecnia Fitossanidade (UFRGS),
Doutora em Cincias Agronmicas (ENSAM-Montpellier) e Ps-Doutora em
estudo do modo de ao das

protenas Cry de B. thuringiensis ser abordado revelando a especificidade dessas toxinas atravs da deteco de receptores
presentes no sistema digestivo dos insetos-alvo. O tema trata do modo de
ao completo de B. thuringiensis, desde a ingesto do entomopatgeno at a
morte do inseto. O processo de anlise
de receptores nos tecidos dos insetos
descrito detalhadamente, envolvendo
diferentes abordagens metodolgicas de
deteco de stios de ligao das protenas inseticidas e uma discusso com
dados de diversos autores que desenvolvem pesquisas nessa rea.
(i)
1.1 Modo de ao das protenas

Cry de B. thuringiensis
(iii)
As anlises do modo de ao das

protenas Cry de B. thuringiensis visam
esclarecer os mecanismos pelos quais
estas protenas exercem seu efeito entomopatognico e elucidar a especificidade das diferentes toxinas (Endo e
Nishiitsutsuji-Uwo, 1980; Hfte e Whiteley, 1989; Gill et at., 1992; Schnepf et
al., 1998; Fiuza, 2004). Considerando o
conjunto de informaes atualmente disponveis sobre as fases entre a ingesto
dos cristais e a morte das larvas dos insetos suscetveis s protenas Cry de B.
thuringiensis, descreve-se como fases do
mecanismo de ao:
32
(ii)
Inicia pela solubilizao dos cristais em pH alcalino no intestino

mdio dos insetos, liberando as
protoxinas de 130-140 kDa para
Cry1 e 70 kDa para Cry2. Essa
etapa determinante especificidade do isolado de B. thuringiensis espcie alvo, tanto pela
alcalinidade do sistema digestivo quanto pela composio dos
cristais de B. thuringiensis.
Protoxinas so ativadas pelas
enzimas digestivas, formando
fragmentos txicos de 60-65 kDa.
Nessa etapa tanto a composio
proteoltica quanto a estrutura
protica do cristal so importantes.
Toxinas reconhecem receptores
especficos s microvilosidades
das clulas epiteliais do intestino mdio das larvas suscetveis
s quais elas se ligam. Os estudos realizados com BBMV (Brush
Border Membrane Vesicles) isoladas de larvas de lepidpteros
mostram que a ligao de forte
afinidade entre a toxina e o receptor reconhecido como um
fator importante na determinao
do espectro inseticida das protenas Cry (Fiuza et al., 1996). Dados de pesquisa mostram que h
uma correlao positiva entre a
ligao, in vitro, da toxina no
receptor intestinal e a toxicidade, in vivo. Por outro lado, outros estudos descrevem que o
reconhecimento do receptor
necessrio, mas no suficiente
para provocar a toxicidade, sugerindo a existncia de outros
fatores relacionados ao modo de
ao das protenas Cry. Em 1994,
Knight et al., isolaram de BBMV
de larvas de Manduca sexta
(Lep., Sphingidae) uma aminopeptidase N implicada na interao da toxina Cry1Ac. Os modelos de receptores atualmente descritos mostram que um
inseto pode apresentar, em
quantidade varivel, diversas
classes de receptores que podem ser reconhecidos por diferentes toxinas. Dados de pesquisa revelam que estes modelos podem explicar a especificidade das toxinas de B. thuringiensis.
(iv)
Aps o reconhecimento do receptor, a toxina induz a formao de poros na membrana celular do epitlio intestinal. A
formao dos poros na membrana celular provoca o desequilbrio inico entre o citoplasma e a o meio externo
clula. As anlises histopatolgicas realizadas aps a intoxicao dos insetos mostram a
destruio das microvilosidades, hipertrofia das clulas epiteliais, vacuolizao do citoplasma e lyse celular, levando
o inseto a paralisia e morte.
Na seleo das protenas inseticidas, sintetizadas por essa bactria, as
anlises in vitro dos receptores membranares podem viabilizar uma rpida
determinao do espectro de ao das
protenas Cry contra as espcies alvo,
sendo em seguida efetuada a avaliao da toxicidade in vivo, apenas para
os isolados pr-selecionados como ativos in vitro. Sendo assim, o presente
trabalho trata de diferentes mtodos
de anlise de receptores de protenas
de B. thuringiensis em formas imaturas de lepidpteros.
1.2 Anlise de receptores em
cortes histolgicos de insetos
1.2.1 Tecidos dos insetos
As larvas de insetos podem ser
obtidas de coletas a campo, as quais
devem passar por um perodo de quarenta em condies controladas, ou
oriundas de criao massal de insetos
mantida em laboratrio, em condies
controladas de temperatura, umidade
relativa e fotofase, as quais podem
variar de acordo com a espcie do inseto. Os tubos digestivos dos insetos
so dissecados e fixados 24 h, em Bouin Hollande Sublim a 10%, lavados
por 12 h em gua destilada e desidratados em sries crescentes de etanol,
70 a 100% (Brandtzaeg, 1982). Em seguida os tecidos so impregnados em
Figura 1. Receptores de protenas Cry biotiniladas, revelados nos tecidos de

larvas de lepidpteros, com fosfatase alcalina e peroxidase (Fiuza, 1995)
banhos mistos (etanol/tolueno/paraplasto) e includos em paraplasto

100% a 58oC. Os cortes longitudinais ou transversais, de 7 a 10 m
de espessura, preparados com micrtomo LKB, so montados em lminas de vidro, tanadas com polyl-lysina a 10%, e conservadas a 4oC
para posterior anlise de receptores em cortes histolgicos.
1.2.2 Protenas Cry
As cepas de B. thuringiensis podem ser cultivadas em meio usual
glicosado por aproximadamente 5
dias, conforme o mtodo de Mahillon & Delcour (1984). Aps a lise
bacteriana devem ser centrifugadas
e lavadas com tampo fosfato, pH
6. Os cristais so separados dos esporos e das clulas bacterianas em
gradiente de renografina ou sacarose por ultra centrifugao, conforme metodologia descrita por
Sharpe et al. (1975). As bandas, contendo os cristais puros, so lavadas
e diludas em gua milli-Q esterilizada, contendo phenylmethylsulfonyl (PMSF).
As protenas Cry so solubilizadas em tampo fosfato, pH 10. Esse
pH deve ser ajustado a 8,6 por dilise contra o tampo 20 mM Tris e
as protenas Cry so ativadas por
bovine pancreatic trypsin (Type I),
sendo a reao inativada com trypsin inhibitor (Type II). A pureza e
a integridade das protenas pode ser
avaliada por eletroforese em gel de
poliacrilamida a 10%, SDS-PAGE
(Laemmli, 1970). A concentrao
pode ser determinada pelo mtodo Bradford (1976), usando a bovine serum albumin (BSA) como protena padro.
1.2.3 Protenas biotiniladas
As protenas Cry podem ser biotiniladas, conforme o mtodo descrito por
Bayer & Wilcheck (1990), onde a incorporao da biotina na parte N-terminal
da protena feita usando o BNHS (biotinyl-N-hydroxysuccinimide) em tampo de bicarbonato de sdio, pH 9. O
produto da reao deve ser purificado
em sephadex G-25 (Sigma) e as fraes
biotiniladas identificadas por dot-blot,
onde se utiliza membrana de nitrocelulose, o conjugado de estreptavidina-fosfatase-alcalina diluda no tampo TST
(Tris-Saline-Triton, pH 7;6) e o substrato de revelao (BCIP e NBT em tampo Tris; pH 9,5). A concentrao das
protenas Cry biotiniladas pode ser determinada pelo mtodo Bradford (1976),
usando a BSA como protena padro. A
pureza e a integridade das protenas
marcadas pode ser avaliada em westernblot, usando membrana de nitrocelulose (Sigma) e o tampo Towbin, pH 8,3
com 10% etanol. As membranas podem
ser reveladas usando a mesma tcnica
descrita no dot-blot.
1.2.4 Anticorpos
As protenas Cry so preparadas,
conforme descrito anteriormente na
purificao, e depois so utilizadas na
obteno de anticorpos em pequenos
animais como: coelhos, ratos e camundongos, entre outros. O soro coletado
dos animais utilizado na obteno das
imunoglobulinas (IgGs), as quais podem
33
Figura 2. Receptores de protenas Cry biotiniladas, detectados nos

tecidos de larvas de lepidpteros com fluorescena e observados em
microscopia de varredura laser (Fiza, 1995)
ser separadas em colunas de sepharose

protein-A e as fraes purificadas por
afinidade incubando os IgGs e as membranas de nitrocelulose, contendo os
antgenos previamente transferidos por
western-blot conforme descrito por
Burke et al. (1982). A especificidade e
sensibilidade dos anticorpos policlonais
determinada pelo mtodo de dot-blot
e ELISA - Enzyme-linked immunosorbent assay.
res
1.2.5 Deteco in vitro de recepto-
As anlises in vitro dos receptores

de protenas Cry de B. thuringiensis so
realizada com cortes histolgicos do sistema digestivo das larvas dos insetos em
estudo. A deteco propriamente dita
corresponde a incubao dos tecidos
com as protenas, previamente desparafinados e reidratados.
Nas anlises com protenas Cry biotiniladas, os cortes histolgicos so incubados temperatura ambiente, durante 1h, com as protenas biotiniladas. As
protenas no ligadas aos stios receptores so removidas com TST, pH 7,6.
Na etapa posterior, os tecidos so
tratados com estreptavidina conjugada
a uma enzima (peroxidase ou fosfatase
alcalina) ou fluorocromo (fluorescena
ou ficoeritrina), diludos em tampo TST.
O complexo da reao protena-receptor, usando o conjugado com enzimas
pode ser revelado com substrato DAB
para peroxidase e BCIP/NBT para fosfatase alcalina (Figura 1), sendo as seces montadas com Pertex, entre lmi34
na e lamnula de vidro.
Nas revelaes com fluorocromos,
com a fluorescena (Figura 2), os cortes
histolgicos so montados com Mowiol
e conservados a 4C para anlise em
microscopia ptica - MO ou microscopia de varredura Laser MVL.
Nas anlises imunohistoqumicas,
com protenas no marcadas (protenas
nativas), os receptores so revelados
com o complexo anticorpo primrio
(AC , especfico contra a protena Cry)
1
e anticorpo secundrio (AC , dirigido
2
contra o AC ) conjugado a uma enzima
1
ou fluorocromo, os quais so revelados
e montados de acordo com o mtodo
descrito anteriormente. As testemunhas
so preparadas pela omisso alternada
de cada etapa da reao, a fim de eliminar a hiptese de reaes falso-positivas. As amostras reveladas com enzimas,
tipo peroxidase e fosfatase alcalina,
podem ser avaliadas em microscopia
ptica. Para as anlises onde so utilizados os fluorocromos pode ser utilizada a microscopia de fluorescncia convencional ou de varredura laser.
1.3 Consideraes
As marcagens detectadas na regio
das microvilosidades das clulas do epitlio intestinal revelam a presena de
receptores membranares s protenas
Cry, nas microvilosidades das clulas
epiteliais do intestino mdio das larvas
dos insetos (Figuras 1 e 2).
No caso dos tecidos tratados como
controle, representantes da omisso al-
ternada dos diferentes componentes da

reao, pode-se observar a ausncia de
colorao nas microvilosidades das clulas do epitlio intestinal dos insetos
em estudo.
As imunodeteces e as deteces
de protenas Cry biotiniladas foram utilizadas por diversos autores, para revelao de receptores membranares intestinais, em larvas de diferentes espcies
de lepidpteros (Bravo et al., 1992a;
Denolf et al., 1993a; Estada e Ferre, 1994;
Fiuza, 1995), de dpteros (Ravoahangimalala et al., 1993) e de colepteros
(Bravo et al. 1992b; Denolf et al., 1993b;
Boets et al., 1994). Esses autores comprovaram que as ligaes das protenas
Cry nas microvilosidades do intestino
mdio das larvas de insetos correspondem existncia de um receptor especfico referida protena no inseto-alvo.
Considerando, os estudos dos receptores in vitro e as anlises da toxicidade
in vivo, pode-se inferir que os mtodos
de deteco de receptores membranares podem ser aplicados na seleo das
protenas ativas contra insetos, havendo uma correlao positiva entre as anlises in vitro e in vivo. Porm, para determinar a Concentrao Letal Mdia
(CL50) de uma protena Cry faz-se necessrio o bioensaio uma vez que as ligaes das protenas aos receptores
podem variar em concentrao e afinidade, como j descrito por diversos autores, para diferentes espcies de insetos (Denolf et al., 1993a; Van Rie et al.,
1990; Fiuza et al., 1996; Lee et al., 1996;
Hua et al., 2001). Tambm h estudos
demonstrando que as protenas Cry txicas aos insetos correspondem quelas que se ligam de forma irreversvel
aos receptores das clulas epiteliais dos
insetos alvo (Liang et al., 1995).
No controle biolgico de insetos, a
espcie Bacillus thuringiensis oferece
as melhores alternativas produo de
biopesticidas e engenharia gentica de
plantas. Sendo assim, fundamental
avaliar o espectro de ao e a especificidade das protenas potencialmente
inseticidas e, nesse contexto, Fiuza
(2004) menciona que a anlise in vitro
dos receptores membranas pode ser
considerada uma ferramenta indispensvel face ao grande nmero de isolados, cepas e protenas de B. thuringiensis j identificados, que representam
um potencial no manejo de insetos-praga.
1.4 Referncias
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35
Pesquisa
TOXICOLOGIA DE BACILLUS THURINGIENSIS

S PRAGAS AGRCOLAS
Pesquisa
(UNISINOS).
(UNISINOS).
Engenheira Agrnoma (UFRGS) e Mestre em
Neiva Knaak
Biloga (UNISINOS) e Mestre e Doutoranda
Rogrio Schnemann
Bilogo (UNISINOS) e Mestre em Biologia:
(UNISINOS).
Jaime Vargas de Oliveira
Engenheiro Agrnomo (UFSM), Mestre em
Fitotecnia Fitossanidade/Entomologia
(UFPEL),
Lidia Mariana Fiuza
Fitotecnia Fitossanidade (UFRGS), Doutora
em Cincias Agronmicas (ENSAMMontpellier) e Ps-Doutora em biotecnologia
36
controle microbiano de insetos tem sido considerado um

mtodo de controle seguro
aos humanos e ao meio ambiente, sendo assim nesse trabalho so apresentados dados de toxicidade de B. thuringiensis a insetospraga, especialmente aos lepidpteros
e colepteros pragas de importncia
agrcola. Os trabalhos de pesquisa enfatizam os mtodos de ensaios toxicolgicos em laboratrio e campo, utilizando o entomopatgeno B. thuringiensis e as formas imaturas das espcies-alvo.
1.1 Os insetos-praga
Entre os insetos-praga para os quais
tm sido desenvolvidos estudos e aplicaes de controle com B. thuringiensis esto os lepidpteros, Spodoptera
frugiperda e Anticarsia gemmatalis, e
o coleptero Oryzophagus oryzae, os
quais sero apresentados como modelo de estudos de toxicidade com B. thuringiensis.
A lagarta militar, S. frugiperda, ata-
ca e causa danos a vrias culturas de

importncia econmica, como: sorgo,
milho, arroz, alfafa, cana-de-acar e algodoeiro (Cruz et al., 1999; Gallo et al.,
2002), ao passo que, a lagarta da soja A.
gemmatalis praga-chave para essa cultura e tambm tem importncia para
culturas como amendoim, feijo e alfafa (Gallo et al., 2002). J o gorgulho aqutico, O. oryzae, cujas larvas so conhecidas como bicheira-da-raiz-do-arroz,
o principal inseto-praga da cultura do
arroz irrigado no sul do Brasil (Martins
et al., 2004) e, por isso, tambm um
dos mais estudados pelas instituies de
pesquisa dessa regio (Costa, 2003).
As lagartas de S. frugiperda e A. gemmatalis podem ser criadas em laboratrio, desde que respeitados determinados padres de temperatura, umidade
relativa e fotoperodo (28C, 70%U.R.,
12h de fotoperodo). O ciclo evolutivo
desses insetos, em laboratrio, ocorre
em torno de 30 dias, desde a fase de
ovo at a emergncia do adulto. Os adultos so mantidos em gaiolas de acrlico
com alimentao a base de glicose aquosa (10%), onde acasalam e realizam a
postura. Os ovos so retirados diariamente e acondicionados junto dieta
artificial, sendo dieta de Poitout para S.
frugiperda e dieta de Greene para A.
gemmatalis. As lagartas desenvolvemse nessa dieta at a formao da pupa,
que ento so separadas em macho ou
fmea at emergir o adulto, finalizando
o ciclo.
No caso de O. oryzae, por se tratar
de uma larva aqutica, que se alimenta
das razes das plantas de arroz, no
descrito nenhum mtodo de criao eficiente desse inseto, em laboratrio. Portanto, quando realizados os bioensaios,
esses insetos so coletados diretamente
de reas de plantio de arroz infestadas,
trazidos ao laboratrio para ento se-
Figura 1. Bioensaios com lagartas de Spodoptera frugiperda (A) ou Anticarsia gemmatalis e larvas de
Oryzophagus oryzae (B)
rem utilizados nos ensaios biolgicos.

1.2 Bioensaios
de B. thuringiensis
com os insetos-praga
Para determinar a atividade inseticida de isolados bacterianos, os bioensaios podem ser classificados como preliminares ou seletivos. A utilizao de
suspenso de clulas e esporos bacterianos uma forma de identificar isolados ativos cujas propriedades mostram
eficincia no controle de insetos-praga.
Bioensaios tambm so utilizados
para determinar a Concentrao Letal
Mdia (CL50), ou seja, a quantidade de
entomopatgeno que deve ser utilizada
para controlar a metade da populao
do inseto. Para esses, so usados os isolados que causaram um eficiente ndice
de mortalidade nos testes preliminares.
Nesta anlise so utilizadas suspenses
contendo clulas e esporos ou a protena purificada, dosados em diferentes
concentraes. Os ensaios de toxicidade so importantes tambm, pois revelam injurias e detrimento morfolgico,
alm de determinar em quanto tempo
ocorre a morte do inseto, Tempo Letal
Mdio (TL50). Esses dados so ento analisados para que, quando aplicado em
lavouras, o bioinseticida seja eficiente
no controle dos insetos-alvo.
Os ensaios utilizando as lagartas de
S. frugiperda e A. gemmatalis podem
ser realizados em mini-placas de acrlico, contendo dieta artificial, onde aplicada a quantidade de inculo pr-determinada para uma lagarta por placa
(Figura 1A). A quantidade de insetos
pode variar entre 20 e 50 e o nmero de
repeties entre trs e cinco. No caso
do coleptero O. oryzae, os testes podem

ser realizados em tubos de ensaio contendo uma planta de arroz, gua e a suspenso bacteriana, com 5 larvas do inseto por tubo (Figura 1B). Todos os bioensaios utilizam placas ou tubos controle,
contendo os insetos e sem adio dos tratamentos. Os ensaios so acondicionados
em cmaras climatizadas nas mesmas condies de criao ou manuteno dos insetos em laboratrio, descritas anteriormente. Os experimentos so avaliados at
o 7 dia aps a aplicao dos tratamentos
e os dados so utilizados para o clculo
da mortalidade corrigida pela frmula de
Abbott (1970).
1.3 Controle de S. frugiperda
com B. thuringiensis
Apesar de inmeras pesquisas envolvendo esse lepidptero e seu controle, h
dificuldade em encontrar um isolado bacteriano patognico a essa espcie. Essa
afirmao comprovada no trabalho de
Polanczyky et al. (2003) que, utilizando
58 subespcies de B. thuringiensis em S.
frugiperda demonstraram que apenas B.
thuringiensis morrisoni apresentou 80%
de mortalidade das lagartas. Tambm Silva et al. (2004), testaram 77 isolados sendo que somente 4 foram ativos a espciealvo.
Recentemente, Berlitz & Fiza (dados
no publicados) testaram 132 isolados
onde apenas um apresentou alta toxicidade ao inseto, com 100% de mortalidade, quando utilizada a suspenso de clulas e esporos bacterianos. Em outro trabalho, Berlitz et al. (2003) testaram 24 isolados de B. thuringiensis provenientes de
diversas regies orizcolas do RS e obteve
as maiores mortalidades entre 31,6 e 100%
com apenas cinco isolados, sendo que a

cepa com maior potencial inseticida foi
analisada quanto ao perfil protico confirmando a presena de protenas ativas
contra lepidpteros. As reduzidas taxas de
mortalidade podem estar relacionadas a
diferentes fatores, como por exemplo, o
modo de ao das protenas bacterianas
no intestino do inseto, ou modificaes
no stio de ligao dessas toxinas na membrana intestinal. Alm disso, cada isolado
tem uma caracterstica gentica particular, ou seja, essas toxinas so codificadas
por genes e esses tm uma determinada
especificidade.
Em outro trabalho, Berlitz & Fiuza
(2004) testaram B. thuringiensis aizawai
proveniente do produto formulado Xentari mostrando que a suspenso celular
apresentou CL50 de 1,9x108 UFC/mL (Unidade Formadora de Colnia/mL) reduzindo em 56,7% o consumo alimentar das
lagartas. Isso indica que a bactria inibe a
alimentao do inseto-praga, o que tambm est relacionado com a mortalidade
das lagartas.
Entretanto o fato de um isolado causar mortalidade s lagartas no implica
que, quando purificadas as protenas txicas, essas sero ativas ao inseto. o que
ocorreu na pesquisa de Berlitz (2006), que,
quando utilizada a suspenso de clulas
e esporos bacterianos obtiveram 100% de
mortalidade, entretanto quando purificadas as protenas do isolado, essas causaram baixa mortalidade s lagartas apresentando CL10 de 268g/mL. Esse fato pode
estar relacionado ao conjunto de fatores
de virulncia presentes na bactria, ou
ento a presena de outras toxinas como,
por exemplo, protena Vip, exotoxinas, hemolisinas, quitinases, entre outras, que
esto presentes na suspenso bacteriana.
37
A CL50 de protenas Cry de B. thuringiensis aizawai para lagartas de 3

nstar de S. frugiperda foi determinada por Lucho (2004). As protenas Cry
foram obtidas a partir de bioinseticida comercial (Xentari), purificadas
em gradiente de sacarose, solubilizadas em tampo fosfato (pH 10) e avaliadas em SDS-PAGE. Nos bioensaios
foram avaliadas seis concentraes de
protenas Cry (0,27 a 8,80 g/mL) e
testemunha (gua destilada e esterilizada), sendo aplicados 10 L sobre a
superfcie de folhas de milho acondicionadas em mini-placas de acrlico,
contendo um inseto. Cada tratamento foi constitudo de 30 lagartas e 3
repeties, totalizando 630 insetos.
Os resultados obtidos por Lucho
(2004) apontaram CL50 de 2,22; 0,41 e
0,18 g/mL para 2, 3 e 4 dias aps a
aplicao dos tratamentos, respectivamente, e revelaram que as protenas Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1C e Cry1D
sintetizadas por B. thuringiensis aizawai so altamente txicas S. frugiperda.
Para a mesma espcie, S. frugiperda, os dados de Knaak et al. (2006)
mostram que a toxicidade das protenas Cry1Ab e Cry1Ac, sintetizadas por
B.thuringiensis thuringiensis 407 (pH
408) e B.thuringiensis kurstaki HD73, respectivamente, revelaram uma
CL50 de 9,29 e 1,79 g/cm2 s lagartas
de 1 instar.
Nesse sentido, os dados de Lambert et al. (1996) revelam que a protena Cry1Ac muito txica para Heliothis virescens, mas no mostra nenhuma atividade contra Helicoverpa
armigera. Os mesmos autores relatam que Cry1Ca exibe uma atividade
forte contra S. exigua e S. littoralis,
mas no contra S. frugiperda. Peyronnet et al. (1997) utilizaram Cry1Aa em
Lymantria dispar causando uma despolarizao rpida e irreversvel da
membrana intestinal, mas Cry1Ab e
Cry1Ac eram inativas. Estes resultados esto de acordo com Van Frankenhyzen et al. (1991) que demonstraram um nvel alto de toxicidade para
Cry1Aa, mas nenhuma atividade s
outras duas toxinas, confirmando assim a especificidade das protenas Cry
de B. thuringiensis aos lepidpteros.
Considerando os isolados brasileiros, Praa et al. (2004) selecionando cepas de B. thuringiensis efetivas
contra lagartas de 2 nstar de S. frugiperda, compararam novas cepas ao
B. thuringiensis kurstaki HD-1 (CL50
de 0,285 g/cm2), obtendo CL50 de
0,09 e 0,52 g /cm2, para S234 e S997,
respectivamente, que revelou a nova
cepa S234 como a mais txica S.
38
frugiperda. J nos estudos com protenas Cry, Aranda et al. (1996) determinaram que a CL50 para S. frugiperda das
protenas Cry1Ab e Cry1Ac foram superiores a 2 g/cm2.
1.4 Controle de A. gemmatalis
As anlises de mortalidade de isolados de B. thuringiensis s lagartas de A.
gemmatalis, realizados por Schnemann
(2006), mostraram que entre os 158 isolados testados, 138 foram ativos e 20
inativos. Entre os isolados patognicos,
39 deles causaram at 29% de mortalidade, 93 entre 30 e 69% e 6 entre 70 e
100%. Anlises similares foram encontrados por Bobrowski et al. (2001) com
o mesmo banco de bactrias.
Azambuja & Fiuza (2003) obtiveram
37 e 50% de mortalidade corrigida contra a lagarta-da-soja utilizando dois isolados naturais de B. thuringiensis provenientes de regies orizcolas do RS.
Nas avaliaes de patogenicidade realizados com isolados primitivos, Souza et
al. (1999) e Silva et al. (2004), revelam
grandes ndices de isolados patognicos a mesma ordem de inseto. Por outro lado, a ocorrncia de isolados inativos a lepidpteros bastante freqente. As variaes entre as concentraes
de protenas inseticidas presentes em
cada suspenso bacteriana pode ser a
causa dessas diferenas entre a atividade inseticida dos isolados.
A ausncia de patogenicidade de isolados de B. thuringiensis pode estar relacionada classe de protenas sintetizadas pelo mesmo, a qual no apresenta especificidade ao inseto praga-alvo.
Porm, Fiuza (2003) e Praa et al. (2004)
destacam que o mesmo isolado bacteriano pode ter atividade inseticida sobre
espcies da mesma ordem, ou at mesmo a outras ordens de insetos.
Em muitos casos a diferena de toxicidade das cepas de B. thuringiensis
pode estar relaciona ao prprio inseto,
onde, por exemplo, a extenso da variao gentica de A. gemmatalis pode
estar relacionada a transferncia de genes entre populaes geogrficas e o
tempo em que essas populaes encontram-se separadas, onde o mecanismo
de isolamento reprodutivo se torna uma
barreira efetiva (Sosa-Gmez, 2004).
Sendo assim, os dados da suscetibilidade de A. gemmatalis aos diferentes isolados de B. thuringiensis so importantes para um manejo local ou regional
desse inseto-praga, pois em m trabalhos
envolvendo cepas de B. thuringiensis
kurstaki, por exemplo, Mascarenhas et
al. (1998) e Dias et al. (1999) encontraram diferentes ndices de mortalidade
da mesma espcie.
1.5 Controle de O. oryzae
Para O. oryzae so relacionados poucos dados na literatura a respeito da ao
de protenas de B. thuringiensis. Por se
tratar de uma larva que se alimenta das
razes da planta de arroz, portanto fica
submersa, difcil o acesso de bioinseticidas ao local. Os atuais mtodos de controle dessa praga restringem-se aos inseticidas qumicos que so utilizados basicamente no tratamento de semente ou distribudos em cobertura na gua de irrigao.
Na busca de mtodos alternativos de
controle desse inseto, o entomopatgeno
B. thuringiensis mostra-se promissor na
obteno de plantas transgnicas resistentes praga-alvo. Nesse sentido, Pinto et
al. (2003), selecionaram 6 isolados de B.
thuringiensis com a presena de genes
da classe cry 3 ou cry 7, que sintetizam as
protenas inseticidas ordem dos colepteros, e avaliaram sua atividade inseticida
O. oryzae. Dentre os isolados testados
pelos autores, dois causaram mortalidade
corrigida de 100%, trs entre 59 e 67% e
um em torno de 50%.
Esses dados foram utilizados por Berlitz (2006) que selecionou um isolado com
a presena do gene cry3 que causou 53%
de mortalidade com a suspenso de clulas e esporos bacterianos, onde as protenas inseticidas foram purificadas, dosadas e aplicadas nos bioensaios com os
insetos (Figura 1B). Os resultados dessa
pesquisa podem ser aplicados na utilizao de genes cry, uma vez que causou a
mortalidade das larvas do coleptero,
quando utilizadas s protenas purificadas,
obtendo uma CL50 de 5,4g/mL. Em estudos preliminares com essa espcie-alvo,
Steffens et al. (2000) obtiveram 53,41% de
mortalidade s larvas do gorgulho aqutico com um isolado de B. thuringiensis
contendo genes cry 3, especficos a colepteros. Considerando os dados mencionados, os resultados obtidos pelos diferentes autores confirmaram a predio da
atividade inseticida de B. thuringiensis
possivelmente devido presena dos genes cry3 e cry7, os quais codificam toxinas especficas a colepteros (Ben-Dov et
al., 1997).
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39

Pesquisa
AOS INSETOS SOCIAIS
Pesquisa
as interaes com as plantas, as formigas e os cupins

podem se tornar pragas e
nesse caso faz-se necessrio
o controle, onde os entomopatgenos assumem um papel importante no controle biolgico.
Nesse contexto, alguns dados de pesquisa sobre os ensaios de toxicidade
de B. thuringiensis s formigas cortadeiras e aos cupins de montculo so
apresentados nesse artigo.
1.1 Os insetos sociais
Nas sociedades de insetos, o sistema de castas possibilita uma diviso
do trabalho, permitindo a execuo de
mltiplas tarefas, nas quais indivduos
estreis so responsveis pela manuteno da colnia (obteno de alimento, defesa e cuidados com a prole), e
os reprodutores limitam-se a reproduo. O Brasil est entre os pases que
contemplam a maior diversidade de
insetos sociais do mundo.

As formigas esto entre os organismos mais abundantes do planeta,
somando, em conjunto, mais de 10%
da massa de todos os organismos terrestres, incluindo mamferos de grande porte (Hlldobler e Wilson, 1990).
De acordo com estes autores, em um
hectare da Floresta Amaznica vivem
mais de oito milhes de formigas.
As formigas cortadeiras so os
principais herbvoros dos Neotrpicos. Abundantes nas suas numerosas colnias desfolham a vegetao,
sendo consideradas importantes pragas agrcolas no Brasil, com prejuzos estimados em milhes de reais.
O gnero Acromyrmex representa
uma ameaa s plantas cultivadas.
Esses insetos tambm se destacam
por atacarem uma ampla variedade
de vegetais, incluindo plantas ornamentais, reflorestamento e pastagens.
As diferentes espcies deste gnero
apresentam ampla distribuio geo-
Raquel de Castilhos-Fortes
Biloga (UNISINOS) e Mestre em Microbiologia
Agrcola e do Ambiente (UFRGS)
(UNISINOS).
Biloga (PUCRS) e Mestre e Doutoranda em
Biologia: Diversidade e Manejo de Vida Silvestre
(UNISINOS).
Lidia Mariana Fiuza
Fitotecnia Fitossanidade (UFRGS), Doutora em
Cincias Agronmicas (ENSAM-Montpellier) e
Ps-Doutora em biotecnologia Vegetal (CIRADMontpellier).
40
Figura 1. Bioensaios com cepas de Bacillus thuringiensis e Nasutitermes

ehrhardti, em laboratrio
Figura 2. Representao esquemtica dos bioensaios com Acromyrmex

lundi e Bacillus thuringiensis
grfica no Rio Grande do Sul, evidenciando hbitos de forrageamento bastante diversos (Gusmo e Loeck, 1999).
Os cupins esto presentes praticamente em todos os ambientes terrestres ou que sofreram alguma perturbao antrpica, alimentando-se basicamente de celulose, obtida atravs
desta capacidade de ajustar-se a diversos ecossistemas. Muitas espcies
desempenham um papel ecolgico
significativo, reciclando nutrientes
minerais no solo e participando na regenerao de ambientes devastados.
Porm, vrias outras espcies se destacam como os organismos mais daninhos cultura agrcola e florestal
(Berti-Filho, 1993). No Brasil, alm de
dificultarem seriamente os tratos culturais, os cupins de montculo so considerados importantes pragas de pastagens e culturas de arroz, milho, canade-acar, amendoim e eucalipto. As
principais espcies responsveis por
estes danos pertencem aos gneros
Cornitermes, Syntermes, Heterotermes,
Nasutitermes, entre outros.
O controle desses insetos vem sen-
do realizado basicamente com a aplicao de inseticidas qumicos, sendo

um mtodo alternativo as bactrias entomopatognicas que podem ser isoladas naturalmente do corpo desses
insetos, representando mais uma ferramenta de combate ao inseto-praga,
sem prejudicar o meio ambiente.
1.2 B. thuringiensis
isolados de insetos-sociais
Na anlise da patogenicidade de
B. thuringiensis sobre um determinado inseto, o primeiro passo a ser adotado a correlao da atividade das
protenas Cry no inseto-alvo j descrita. Caso este efeito ainda no tenha
sido avaliado, uma das alternativas
poder ser por meio do isolamento do
microrganismo de indivduos da espcie de inseto-alvo. Diversos trabalhos so publicados anualmente descrevendo o isolamento de novas cepas de B. thuringiensis de diferentes
substratos, inclusive dos prprios insetos (Borm et al., 2002). Nesse sentido, Azambuja et al. (2001) obtiveram,
a partir de 80 indivduos de Acromyrmex sp., 35 isolados do gnero Bacillus, entre os quais 14 foram identificados como B. thuringiesis. Atravs deste estudo pode-se constatar a elevada
ocorrncia de B. thuringiensis associado a formigas cortadeiras.
Para tanto, os insetos devem ser coletados com pina e acondicionados em
frascos esterilizados a -18C at o momento de sua utilizao. O isolamento
realizado atravs da macerao de
10 insetos em soluo salina, sendo que
1mL desta suspenso submetida a
pasteurizao, em seguida a inoculao em gar Nutriente e incubao
durante 24h a 30C.
As colnias obtidas devem ser ento inoculadas em meio seletivo (Penicilina G) e mantidas a 30C e 180rpm
durante 24 horas. As amostras positivas devem ser avaliadas em microscopia de contraste de fase para identificao das incluses paraesporais, caractersticas de B. thuringiensis.
Os isolados de B. thuringiensis,
oriundos de A. lundi, que causaram
mortalidade ao referido inseto foram
avaliados por PCR quanto a sua constituio de genes cry conforme descrito
por Pinto et al. (2003). Os autores identificaram que sete dos nove isolados
que apresentaram toxicidade a A. lundi amplificaram fragmentos de DNA
correspondentes a pelo menos uma das
classes de genes cry avaliadas, sendo
elas cry1 e/ou cry9. Os genes cry2,
cry3, cry7 e cry8, os quais tambm
foram avaliados na pesquisa, no foram detectados nas amostras testadas.
Alm disso, 22% dos isolados obtidos
de A. lundi no amplificaram com nenhum dos primers avaliados, podendo
Figura 3. Patogenicidade de Bacillus thuringiensis Nasutitermes ehrhardti, em ensaios de laboratrio; B. thuringiensis

sooncheos (Bts); B.thuringiensis roskildiensis (Btr); B. thuringiensis yunnanensis (Bty); B. thuringiensis huazhongensis (Bth);
B. thuringiensis braliliensis (Btb); B. thuringiensis colmeri (Btc) e B. thuringiensis kurstaki (Btk)
41
Figura 4. Isolados de Bacillus thuringiensis a partir da macerao de Nasutitermes ehrhardti infectados;

A- Bacillus thuringiensis soocheon; B- Bacillus thuringiensis roskildiensis
representar novos genes cry.

1.3 Bioensaios de B. thuringiensis
com insetos-sociais
Cupins e formigas sofrem ao de diversos tipos de patgenos como: vrus,
bactrias, fungos e nematides, sendo a
defesa contra os mesmos pouco conhecida. A complexidade do comportamento e
a biologia dificultam o controle destes insetos (Leonardo, 1989; Diehl-Fleig, 1993).
Portanto, tcnicas de bioensaios evidenciando o efeito desses entomopatgenos sobre os insetos sociais, considerados pragas, so escassos. Nessa linha de
pesquisa, Castilhos-Fortes et al. (2002)
avaliaram a patogenicidade de diferentes cepas de B. thuringiensis, sobre Nasutitermes ehrhardti, onde foram utilizadas suspenses contendo uma mistura
de clulas vegetativas, esporos e cristais.
Pores de celulose (1cm2), utilizadas
como substrato alimentar, foram mergulhadas nas suspenses de B. thuringiensis, as quais foram colocadas em placas
de acrlico com seis compartimentos de
5,5 cm de dimetro. Em cada compartimento, contendo 1cm2 de celulose tratada, foram colocados dez insetos (Figura
1).
O acondicionamento dos ensaios foi
feito em estufa incubadora tipo B.O.D., a
28O C, 70% de umidade relativa, no escuro. A mortalidade dos insetos foi avaliada
diariamente at o 7 dia aps a instalao
dos bioensaios, observando-se os cupins
mortos com sintomas caractersticos de
intoxicao por B. thuringiensis.
Em 2003, Pinto et al. testaram o efeito de B. thuringiensis em formigas cortadeiras, cujo mtodo de bioensaio foi
desenvolvido objetivando a sobrevivncia dos indivduos por no mnimo sete
dias, tempo suficiente para a avaliao
de bioensaios. Esse mtodo foi constitu42
do de uma dieta lquida composta de

peptona bacteriolgica, glicose e extrato de levedura, com substituio peridica de 48 horas, previamente acondicionada em pequenos frascos de polipropileno, acrescida de cinco indivduos de
Acromyrmex lundi (Figura 2).
Utilizando o referido mtodo de bioensaio de B. thuringiensis com
Acromyrmex lundi, pode-se obter 100%
de sobrevivncia das formigas por 180
horas (7,5 dias), tempo suficiente para a
avaliao dos bioensaios com o entomopatgeno.
1.4 Toxicidade de B. thuringiensis
aos cupins e formigas cortadeiras
As referncias de B. thuringiensis
contra ispteros so restritas, havendo
poucos dados disponveis, como os de
Cowie et al. (1989), que citam algumas
cepas de B. thuringiensis txicas a vrias espcies de trmitas em condies
laboratoriais. Khan et al. (1985), tambm
ressaltam a carncia de trabalhos desenvolvidos visando testar B. thuringiensis
em trmitas, embora tenham citado os
trabalhos de Smythe & Coppel (1965),
os quais constataram que a soluo com
B. thuringiensis mostrou-se txica a trs
espcies de Reticulitermes, bem como a
Zootermopsis angusticollis. Khan et al.
(1977) isolaram B. thuringiensis a partir
de ninfas do isoptero Bifiditermes beesoni infectadas, encontradas em campo.
Nos testes de toxicidade contra Microcerotermes champion, a suspenso de
bactrias testada causou alta mortalidade em condies laboratoriais.
Considerando a patogenicidade de
B. thuringiensis para N. ehrhardti, Castilhos-Fortes el al. (2002) testaram 57
cepas desta bactria, sendo que sete
mostraram-se mais efetivas: B. thuringiensis sooncheon (Bts) e B. thuringiensis
roskildiensis (Btr) com uma mortalidade

de 100%; seguidos dos isolados B. thuringiensis yunnanensis (Bty) com 71,4%;
B. thuringiensis huazhongensis (Bth)
com 57,1%; B. thuringiensis brasiliensis
(Btb) com 52,3%; B. thuringiensis colmeri (Btc) com 42,85% e B. thuringiensis kurstaki (Btk) com 28,57% de mortalidade ao 7o dia aps a aplicao dos tratamentos, conforme resultados apresentados na Figura 3.
Para a determinao da CL50 de B.
thuringiensis os referidos autores utilizaram os isolados B. thuringiensis sooncheon e B. thuringiensis roskildiensis os
quais causaram 100% de mortalidade nos
ensaios pr-seletivos. As CL50 de B. thuringiensis sooncheon observadas foram
46,98x108, 66,19x106 e 5,14x105 esporos/
ml, aos trs, cinco e sete dias aps os
tratamentos, respectivamente. Para B.
thuringiensis r oskildiensis foram
30,78x105, 48,40x106 e 16,80x104 esporos/ml aos trs, cinco e sete dias, respectivamente.
A toxicidade de B. thuringiensis para
N. ehrhardti foi confirmada pelos autores atravs de observaes microscpicas de cupins macerados aos trs, cinco
e sete dias aps a aplicao dos tratamentos. As estruturas de B. thuringiensis formadas por clulas em forma de
bastonete, cadeias, esporos e incluses
paraesporais podem ser observadas na
Figura 4A para B. thuringiensis sooncheon e na Figura 4B para B. thuringiensis roskildiensis.
A patogenicidade e o desenvolvimento de B. thuringiensis foram estudados
por Khan et al. (1985) nos ispteros Microtermes championi e Bifiditermes beesoni, que se mostraram suscetveis
infeco causada pela bactria aps a
aplicao do formulado Thuricide-HP.
De acordo com a anlise histopatolgica, foi constatado que a ao de B. thu-
ringiensis mais rpida em M. championi quando comparado a B. beesoni, sendo o intestino mdio do inseto invadido
pela bactria seis horas aps a ingesto,
a qual penetra a cavidade corporal, o tecido adiposo e clulas hipodrmicas 20 a
24 horas aps a infeco. Em B. beesoni,
a bactria instalou-se prximo membrana peritrfica depois de 24 horas, atacou
o epitlio e clulas regenerativas aps 48
horas e alcanou a membrana basal do
intestino mdio 72 horas aps a infeco.
Nos estudos do efeito patognico de
B. thuringiensis contra A. lundi foram
identificados isolados ativos contra esta
formiga cortadeira, sendo que o isolado
Bt HA48 atingiu 100% de mortalidade (Pinto et al., 2003).
1.5 Perspectivas
Em insetos sociais, aspectos como
hbitos comportamentais devem ser considerados, uma vez que a eliminao de
uma poro da colnia no suficiente
para a extino. Os fragmentos restantes
tm capacidade de recuperao e nova
infestao, portanto h necessidade de
eliminao da rainha das colnias (Martins, 1998).
O uso de organoclorados o mtodo
mais utilizado para controlar populaes
de cupins e formigas e embora, com
menos freqncia, outros mtodos podem
ser citados como o controle cultural, ao
de predadores e aplicao de extratos
vegetais (Wilcken e Raetano, 1995).
O controle biolgico uma alternativa ao controle qumico e vem ganhando
destaque em pesquisas de manejo de
populaes de pragas. Os principais organismos utilizados para o controle de
formigas e cupins so microrganismos
patognicos, em especial fungos e nematides, e at o momento poucas pesquisas foram realizadas em laboratrio com
B. thuringiensis.
As pesquisas tm publicado resultados satisfatrios no controle de formigas
utilizando os fungos Beauveria bassiana,
Metarhizium anisopliae e Paecilomyces
farinosus (Loureiro e Monteiro, 2005),
alm do microspordeo Thelohania solenopsae (Williams e Deshazo, 2004). O
mesmo ocorre com cupins avaliados frente a fungos entomopatognicos, como B.
bassiana (Bao & Yendol, 1971) e M. anisopliae (Kramm & West 1981; Hnel 1981 e
1982).
Diferentes estudos visam determinar
quais os organismos patognicos como fungos ou nematides, que poderiam ser utilizados contra os trmitas. Os resultados,
geralmente, tm sido discrepantes. Outras
linhagens ou espcies de patgenos deveriam ser testadas contra os trmitas subterrneos, mas os testes de campo devem ser
precedidos de estudos de laboratrio para
determinao da patogenicidade dos diferentes patgenos e linhagens. Isto pode ajudar a avaliar o potencial do agente patognico e fornecer a base para estimar as concentraes requeridas em campo.
Fernandes (1994) relatou que os principais problemas enfrentados na pesquisa
sobre controle biolgico de cupins so a
carncia de conhecimentos biolgicos, o
pequeno nmero de taxonomistas que trabalha com ispteros e a falta de outros grupos trabalhando em conjunto neste assunto.
Contudo, bactrias entomopatognicas
podem ser consideradas agentes de controle biolgico com potencial de patogenicidade e surgem como uma alternativa eficiente, ecolgica e econmica para a soluo
dos danos causados por cupins e formigas.
1.6 Referncias
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43
Pesquisa

S PRAGAS URBANAS E VETORES
Pesquisa
Gabriela Cristina Alles
Biloga (UNISINOS) e Mestre e
Doutoranda em Biologia: Diversidade e
Marcus Hbner
Bilogo (FURG) e Mestre em Biologia:
(UNISINOS).
utilizao de bactrias entomopatognicas do gnero Bacillus, como agente de

controle populacional de
pragas urbanas e vetores de
agentes patognicos, tem
relevncia nas pesquisas nacionais e internacionais. Sendo assim, esse trabalho trata
do controle desses insetos, utilizando as espcies B. thuringiensis e B. sphaericus,
onde se destacam as caractersticas das espcies do grupo Bacillus, sua ocorrncia e
alguns dados de autores que realizaram pesquisas na rea da sade pblica.
1.1 Bacillus spp. no controle de
vetores de doenas
1.1.1 Insetos vetores de doenas
Algumas espcies dos gneros Anopheles, Aedes, Culex e Mansonia podem ser
importantes vetores de patgenos humanos responsveis por enfermidades como
malria, febre amarela, encefalite, dengue
e filariose. Estas doenas atingem um nmero significativo de pessoas em diversos
Lidia Mariana Fiuza

Engenheira Agrnoma (UPF), Mestre em Fitotecnia Fitossanidade
(UFRGS), Doutora em Cincias Agronmicas (ENSAM-Montpellier) e
Ps-Doutora em biotecnologia Vegetal (CIRAD-Montpellier).
pases da sia, frica e Amricas. O Culex

quinquefasciatus responsvel pela transmisso da Wuchereria bancrofti, agente etiolgico da filariose bancroftiana no Brasil,
alm de ser um potencial vetor para o Vrus do Oeste do Nilo (VNO), originado na
frica, onde as aves so os hospedeiros e
reservatrios naturais, podendo acometer
o homem, cavalos e outras espcies, causando desde febre, dor de cabea e mialgias at encefalite severa e meningite. Desde
1999 ocorrem epidemias da doena nos
EUA e, at o momento, j foram registrados mais de 19 mil casos de infectados com
mais de 750 bitos (Centers for Disease
Control and Prevention, 2006). Recentemente, o vrus passou a circular no Caribe
e j foi isolado na Colmbia e em cavalos
mortos na Argentina (Berrocal, 2006; Morales, 2006). O Brasil tem um plano de vigilncia para detectar a introduo do VNO
no pas, visto que o Cx. quinquefasciatus,
potencial vetor, abundante, alm de um
contingente considervel de aves migratrias que ocorre no pas por ser originrio
de rotas das Amricas e de pases vizinhos,
onde ocorre a circulao do vrus (Luna et
al., 2003).
importante ressaltar que h uma grande dificuldade do controle populacional
destes mosquitos devido a suas caractersticas biolgicas como curto ciclo de vida,
alta capacidade reprodutiva e de adaptao ao ambiente. O controle, atravs do
uso de inseticidas qumicos tem apresentado problemas devido ao seu modo de ao
no especfico, alm da possibilidade de
rpida seleo de resistncia de insetos a
estes compostos. Por estas razes, a procura por agentes mais seletivos aumentou
e, com isso, a adoo de mtodos de controle biolgico cresceu (Centers for Disease Control and Prevention, 2006).
1.1.2 Bactrias entomopatognicas
A microflora bacteriana dos insetos,
confinada no intestino, rica, diversa e
compreende bactrias Gram-positivas e
negativas. Entre as bactrias Gram-positivas, algumas auxiliam na digesto dos alimentos, porm outras so patognicas e
recebem grande ateno dos pesquisado-
44
res devido ao seu potencial para o controle de pragas (Priest, 2000; Fiuza, 2001). Entre
estes patgenos destacam-se as bactrias
do gnero Bacillus, com potencial biopesticida que representam cerca de 90% do
mercado mundial (Schnepf et al., 1998), sendo amplamente utilizados como uma alternativa aos inseticidas qumicos em termos
de segurana a organismos no-alvo e
quando ocorre o desenvolvimento de resistncia a inseticidas qumicos (RodrigoSimn et al., 2006).
Duas espcies de bactrias entomopatognicas se destacam no controle biolgico dos insetos vetores: B. sphaericus e B.
thuringiensis israelensis. Estes microrganismos esto sendo comercializados h mais
de uma dcada, pois produzem protenas
inseticidas que, ao serem ingeridas, so letais para as larvas dos mosquitos devido a
sua ao no trato digestivo. O Bti tem atividade decrescente para os gneros Aedes,
Simulium, Culex e Mansonia, j o B. sphaericus particularmente eficiente para o
controle de larvas de Cx. quinquefasciatus
e produtos comerciais base desta bactria esto disponveis no Brasil.
O principal fator txico do B. sphaericus para larvas de Cx. quinquefasciatus a
toxina binria (Bin) contida em um cristal
protico produzido durante a fase de esporulao da bactria. Aps a ingesto deste
cristal pelas larvas, ocorre a sua solubilizao em pH intestinal alcalino e a protoxina
liberada no lmen clivada por serinoproteases para atingir a forma de toxina ativa.
A toxina Bin ativa interage com receptores
especficos presentes na membrana apical
das clulas do epitlio intestinal das larvas,
principalmente nas regies do ceco gstrico e intestino posterior.
O B. sphaericus apresenta uma grande
vantagem em relao ao Bti: a tima persistncia em criadouros ricos em matria
orgnica, tpicos de larvas de Culex, alm
de seus esporos sofrerem reciclagem nos
cadveres das larvas, o que pode ampliar
seu perodo de persistncia nos criadouros
(Nicolas et al., 1987; Skovmand & Bauduin, 1997).
Populaes de larvas de Culex podem
apresentar resistncia ao B. sphaericus aps
Tabela 1. Mortalidade corrigida de Blatella germanica e

Periplaneta americana, submetidas aos tratamentos com
sorovares de Bacillus thuringiensis
de B. sphaericus antes e durante o tratamento, alternando o uso de B. sphaericus

com Bt israelensis. Zahiri et al. (2004) demonstraram que utilizando suspenses de
misturas contendo formulaes comerciais
de Bt israelensis e B. sphaericus, no resultou em resistncia em colnias de Cx. quinquefasciatus, enquanto que somente suspenses de B. sphaericus gerou resistncia.
1.2 B. thuringiensis
no controle de baratas
Mortalidade Corrigida (%)

Tratamentos
B. germanica
B.t. sorovar colmeri

B.t. sorovar yunnanensis
B.t. sorovar huazhangiensis
B.t. sorovar roskildiensis
B.t. sorovar sooncheon
6,65
14,85
15,00
16,65
30,00
serem submetidas forte presso de seleo, sob condies de laboratrio (Amorim, 2007; Georghiou, 1992; Pei, 2002; Rodcharoen & Mulla, 1994) ou de campo
(Mulla, 2003). Estes resultados apontam
para a necessidade de racionalizar o uso
do B. sphaericus, a fim de evitar a seleo
de populaes resistentes.
A primeira populao resistente obtida
sob condies de laboratrio, foi submetida forte presso de seleo e atingiu um
nvel de resistncia da ordem de 100.000
vezes, em relao colnia susceptvel
(Georghiou, 1992). Em outro estudo realizado em laboratrio, foram selecionadas
duas colnias de Cx. quinquefasciatus, no
Brasil e na China, que atingiram um alto
nvel de resistncia (>100.000) (Pei, 2002).
Tambm foi demonstrado que possvel
selecionar a resistncia ao B. sphaericus
cepa IAB59, sob condies de laboratrio,
embora, esta seleo tenha ocorrido de
forma mais lenta em relao ao B. sphaericus 2362. O nvel de resistncia chegou a
mais de 40.000 vezes (Amorim, 2007). Em
campo, j foram detectadas populaes com
nveis de resistncia variveis na Frana
(Chevillon, 2001), ndia (Rao, 1995), China
(Yuan, 2000), Tunsia (Nielsen-Leroux,
2002) e na Tailndia (Mulla, 2003). O processo de seleo da resistncia em populaes de campo modulado por diversos
fatores que incluem o background gentico da populao, bem como fatores ecolgicos e ambientais.
1.1.3 Controle integrado de vetores
O conceito do Manejo Integrado de
Vetores (MIV) surgiu como resultado de
uma mudana de paradigma aps o uso
intensivo de inseticidas qumicos nas dcadas de 1940-60. Em outras palavras, o
MIV definido como uma combinao racional de diversos mtodos de controle
disponveis, objetivando manter a populao de vetores em nveis aceitveis e da
maneira mais efetiva, econmica e segura,
incluindo componentes biolgicos, qumicos, fsicos e ambientais, visando interferir
o mnimo possvel no ecossistema. No MIV,
vrias aes so empregadas na tentativa
P. americana
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
de englobar todas as causas do problema.

No mbito do controle de mosquitos, estas
aes podem incluir a melhoria da rede de
esgoto e distribuio de gua, eliminao
fsica de criadouros, uso de barreiras fsicas nas habitaes, medidas de proteo
individual, uso de larvicidas especficos em
criadouros que no podem ser eliminados,
alm da conscientizao e participao da
comunidade. Dentre estas aes, o uso de
biolarvicidas apresenta vantagens, como a
especificidade para o inseto alvo e segurana para o meio ambiente (Georghiou et
al., 1992).
O principal objetivo de estratgias de
controle integrado de vetores reduzir a
densidade populacional de mosquitos para
nveis em que a atividade minimizada ou
a transmisso de doenas reduzidas ou interrompida com o mnimo de efeitos ambientais.
Idealmente, programas de controle integrado devem incluir intervenes mais
eficazes e ambientalmente compatveis.
Devido sua eficcia e aparente especificidade, tanto Bt israelensis quanto B. sphaericus podem ser ideais para o programa
integrado de controle de pragas. (Lacey &
Orr, 1994). A combinao de Bt israelensis
com outros agentes de controle biolgico
resultou em um excelente controle e, em
alguns casos, a supresso prolongada de
larvas de mosquitos.
Mulligan & Schaefer (1982) relataram
um controle inicial de larvas de Cx. tarsalis em uma das zonas midas em que o
tratamento com Bt israelensis foi seguido
por abatimento em longo prazo com larvas de insetos predadores. Do mesmo
modo, Mulla et al. (1993) observaram que
as populaes de Cx. quinquefasciatus, Cx.
stigmatosoma e Cx. tarsalis no se recuperaram aps o tratamento com Bt israelensis
devido a subsequentes predaes de larvas por macroinvertebrados aquticos e
uma reduo na oviposio atrativa da pecuria local.
Regis & Nielsen-Leroux (2000) revisando estratgias de manejo de resistncia B.
sphaericus recomendaram o acompanhamento da susceptibilidade das espcies-alvo
Segundo Wilson (1972), estudos comparativos realizados entre famlias primitivas de trmitas e baratas revelaram a existncia de mltiplas caractersticas em comum que, segundo o autor, poderiam considerar os trmitas como baratas sociais,
cujos diagramas de filogenia, no s reforam este parentesco, como tambm, relacionam a evoluo da flora microbiana intestinal entre as ordens Isoptera e Blattodea.
Nesse contexto, a partir do trabalho de
Castilhos-Fortes et al. (2002), Hbner (2004)
testou cinco isolados de B. thuringiensis
em Blatella germanica e Periplaneta americana: B. thuringiensis yunnanensis, B.
thuringiensis colmeri, B. thuringiensis huazhangiensis, B. thuringiensis sooncheon e
B. thuringiensis roskildiensis, oriundos do
Instituto Pasteur, Paris.
Para o estudo, adultos e ootecas de B.
germanica e P. americana foram coletados em estabelecimentos comerciais e residenciais, no municpio de Gramado, Rio
Grande do Sul. Ambas as espcies permaneceram em caixas de plstico (564 x 385
x 371 mm e 400 x 270 x 362 mm), com as
bordas superiores preenchidas com uma
mistura de gua e talco neutro, para evitar
a fuga dos insetos. A umidade foi mantida
atravs de algodo umedecido, trocado a
cada 48 horas. Substratos de papelo corrugado foram utilizados para mimetizar seu
hbitat natural. Na alimentao foi utilizada 0,5 g de rao animal moda Whiskas,
sendo os insetos mantidos em condies
controladas (30C, 70% de U.R., 12h fotofase).
Nos bioensaios, baratas adultas de ambas as espcies foram agrupadas em caixas
plsticas (262 x 177 x 85 mm), contendo
placas de Petri com algodo umedecido em
gua destilada e outra contendo 0,5g de
rao animal moda e 1000L das suspenses bacterianas a 1.1010 clulas/mL. Nas
testemunhas, os isolados foram substitudos por gua destilada esterilizada. Para
cada isolado bacteriano e cada espcie foram utilizados 30 insetos. A mortalidade foi
analisada durante 7 dias aps a aplicao
dos tratamentos e corrigida pela frmula
de Abbott (Alves, 1998).
Os dados de patogenicidade, utilizando os cinco isolados de Bacillus thuringiensis, demonstraram uma baixa ao txica sobre B. germanica (6,65% a 30% de
mortalidade), e uma inatividade (0% de
45
mortalidade) P. americana, levando-se em

considerao que os ndices de mortalidade
corrigida apresentados na Tabela 1.
Apesar de Wilson (1972) ter descrito um
parentesco evolutivo entre as famlias primitivas de trmitas e baratas, inclusive quanto a
sua flora bacteriana, o presente estudo demonstra que no h uma correlao da ao
de B. thuringiensis sobre B. germanica e P.
americana, pertencentes s famlias mais evoludas.
Cavados (2003) cita que o controle biolgico com bactrias entomopatognicas tem
como principal vantagem a especificidade.
Dependendo da composio de protenas Cry
no cristal bacteriano, os isolados podem apresentar um espectro de ao limitado s ordens de insetos (Fiuza, 2001). Assim, os dados obtidos sugerem que as delta-endotoxinas produzidas pelos cinco isolados de B. thuringiensis testados no apresentam protenas
Cry com ao txica para a ordem Blattodea,
uma vez que causaram uma menor ao sobre os insetos-alvo do trabalho de Hbner
(2004).
Lambiase et al. (1996) mencionam uma
diferenciao na localizao dos stios bacterianos em B. germanica e P. americana, o
que poderia justificar o fato de ter-se obtido
uma ao inseticida para a primeira espcie e
uma ausncia de efeito para a segunda.
Tambm forma realizados ensaios de toxicidade in vivo para verificar a ao de B.
thuringiensis oswaldocruzi (H-38) e B. thuringiensis brasiliensis (H-39) contra Periplaneta americana e Blatella germanica. Porm,
nesses ensaios no houve ao patognica das
cepas avaliadas s duas espcies de baratas
utilizadas nos bioensaios (Hbner, 2004).
1.3 Referncias
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429.
Pesquisa
INTERAES DE BACILLUS THURINGIENSIS

E O CONTROLE DE FITOPATGENOS
Neiva Knaak
Biloga (UNISINOS) e Mestre e Doutoranda em
(UNISINOS).
(UNISINOS).
(UNISINOS).
(UNISINOS).
Lidia Mariana Fiuza
Fitotecnia Fitossanidade (UFRGS), Doutora em
Cincias Agronmicas (ENSAM-Montpellier) e
Ps-Doutora em biotecnologia Vegetal (CIRADMontpellier).
s tratamentos fitossanitrios
constituem uma rotina nos
cultivos agrcolas, os quais
visam o controle de plantas
daninhas, insetos e fitopatgenos. Como agentes do manejo integrado das culturas, os pesquisadores tm priorizado a aplicao de inimigos naturais (parasitides e predadores),
extratos vegetais e microrganismos. Nesse
contexto, dados referentes s interaes
desses agentes de controle so apresentados, com nfase nas bactrias entomopatognicas da espcie B. thuringiensis. Considerando o controle biolgico de fitopatgenos, a doena no s a interao entre
patgeno e hospedeiro, mas o resultado
da interao entre patgeno, hospedeiro e
uma srie de microrganismos no patognicos que tambm repousam no stio de
infeco. Esses agentes no patognicos podem limitar ou aumentar a atividade do pa-
tgeno, ou a resistncia do hospedeiro. O

sucesso do biocontrole depende das propriedades antagonistas e dos mecanismos
de ao do hiperparasita. Desse modo,
nesse trabalho so apresentadas vrias pesquisas que relatam o efeito antagnico de
B. thuringiensis aos fungos fitopatognicos.
48
1.1 Interaes de mtodos

de controle de insetos
O interesse por obter produtos agrcolas em sistemas sustentveis estimula o estudo e o uso de estratgias do Manejo Integrado de Pragas (MIP) e do Manejo Ecolgico de Pragas (MEP). Sendo assim, extratos vegetais apropriadamente selecionados e em concentraes adequadas podem
ser usados em associao com entomopatgenos obtendo-se efeitos aditivos ou sinergticos no controle (Saito & Luchini,
1998).
Segundo os autores, o efeito estressor
desses extratos sobre a praga pode determinar uma ao mais rpida do entomopatgeno e/ou um maior ndice de mortalidade. Assim essa associao pode ser positiva ou benfica quando o inseto-alvo tem
mecanismos comportamentais de defesa
contra entomopatgenos, quando as condies ambientais no so favorveis ou as
quantidades de inculo necessrias so elevadas.
Nesse sentido, Lucho (2004) estudou a
interao entre B. thuringiensis aizawai e
extrato de folhas de Melia azedarach (cinamomo) para o controle de lagartas de
Spodoptera frugiperda, em laboratrio. Na
pesquisa foram avaliados quatro tratamentos: extrato de folhas de M. azedarach; B.
thuringiensis aizawai; mistura de B. thuringiensis aizawai e extrato de M. azedarach; controle (gua destilada) sendo a
mortalidade das lagartas observada diariamente, at o stimo dia aps aplicao dos
tratamentos (DAT). O uso de B. thuringiensis, isoladamente ou em associao com
o extrato de M. azedarach mostrou-se letal
no 1 DAT. Nas lagartas submetidas somente
ao extrato, a mortalidade iniciou aos 2 DAT
e ao final do bioensaio, a mortalidade acumulada foi maior na associao do biopesticida e do inseticida botnico. Os percentuais de mortalidade de S. frugiperda observados aos 7 DAT foram de 55, 70 e 90%
para os tratamentos com extrato, B. thuringiensis aizawai e a associao de B. thuringiensis aizawai com extrato de M. aze-
Tabela 1. Aplicaes simultneas de entomopatgenos e extratos vegetias no controle de pragas de gros

armazenados (adaptada de Sabbour, 2003)
Reduo da CL50 (%)
Plantas
Folhas de T. distichum
leo voltil de T. distichum
leo voltil de B. carterri
darach, respectivamente. Assim, foi observado um efeito sinrgico dos ingredientes

ativos de B. thuringiensis aizawai e extrato de M. azedarach contra S. frugiperda,
pois o resultado da associao foi superior
ao uso dos bioinseticidas isoladamente.
Apesar disso, a interao de mtodos
de controle nem sempre apresenta o efeito
desejado sobre o inseto. Isso foi demonstrado por Berlitz (2006) que utilizou B. thuringiensis simultaneamente com o cinamomo, M. azedarach. As concentraes utilizadas nesse trabalho no demonstraram
eficincia, pois a mortalidade do lepidptero S. frugiperda foi de, apenas 6% e para
larvas do coleptero Oryzophagus oryzae
foi de 11%. Esse fato pode estar associado
a um possvel efeito inibitrio da bactria
sobre o extrato vegetal ou vice-versa.
Em relao ao uso simultneo de bioinseticidas, Sabbour (2003) realizou ensaios com extrato das folhas e leo voltil de
Taxodium distichum (L. Rich) e Boswella
carterri, em combinao com a bactria B.
thuringiensis e o fungo Beauveria bassiana (Vuillemin, 1912), em pragas de produtos armazenados. Em seus resultados a combinao dos entomopatgenos com as plantas, reduziu significativamente o valor da
Concentrao Letal Mdia (CL50), conforme
mostra a Tabela 1.
De acordo com Novan, (1992) a utilizao de extratos vegetais reduz a alimentao do inseto atravs de seus aleloqumicos, o que otimiza a atividade inseticida do
microrganismo, resultando em um maior
ndice de mortalidade.
J os autores Zhang et al. (2000) utilizaram B. thuringiensis kurstaki em diferentes concentraes e suplementado com tripsina de soja mostrando uma inibio no
crescimento larval de H. armigera (P<0,05).
Em ensaios in vitro e in vivo, os autores
comentam que a degradao das toxinas
de B. thuringiensis pode ser inibida pela
tripsina da soja. Os dados sugerem que o
tempo de reteno das toxinas no intestino mdio das larvas foi estendido, ocorrendo tambm um sinergismo entre os cristais inseticidas da bactria e os inibidores
de tripsina da soja.
No caso do uso interativo de B. thuringiensis com nematides entomopatognicos, Koppenhfer e Kaya (1997) utiliza-
Insetos
Plodia interpeculata
Ephesia cautella
Ephesia kehniella
Ephesia cautella
Ephesia kehniella
Ephesia cautella
Ephesia kehniella
B. thuringiensis
71
63
69
67
63
74
67
72
79
ram B. thuringiensis japonensis e nematides em larvas de Cyclocephala hirta e C.

pasadenae (Coleoptera: Scarabaeidae) mostrando que essa interao apresentou maior mortalidade que os tratamentos individuais, viabiliando assim o uso integrado
desses organismos.
B. thuringiensis tambm pode ser utilizado em combinao com outros microrganismos para o controle de insetos-praga.
Nesse sentido, Broderick et al. (2000), identificaram um aumento de 35% da mortalidade do lepidptero Lymantria dispar (L.)
quando usado B. thuringiensis e zitermicina A de B. cereus, sendo que a zitermicina
responsvel pelo efeito sinergtico dos
microrganismos. Primeiramente porque
essa substncia acumula-se em grandes
quantidades nas culturas de B. cereus, segundo porque quando utilizada individualmente no causa efeito sobre o inseto,
somente em combinao com B. thuringiensis, aumentando a mortalidade de L. dispar.
Os resultados de Wraight & Ramos
(2005) tambm demonstram sinergismo de
35,2; 33,8; e 21,1% quando utilizado simultaneamente um produto comercial a base
de B. thuringiensis e do fungo B. bassiana
em Leptinotarsa decemlineata. Esses autores revelam que a interao pode ter sido
ocasionada pela intoxicao causada pelo
entomopatgeno, inibindo a alimentao
do inseto, ocasionando uma situao de
estresse, e efeitos fisiolgicos, o que facilitou a penetrao do fungo no inseto. Efeitos semelhantes tambm foram observados
por Ma et al. (2008), quando utilizada a
protena Cry 1Ac de B. thuringiensis com
B. bassiana. Esses autores observaram efeitos deletrios na mortalidade das larvas de
Ostrinia furnacalis (Lepidoptera: Crambidae), alm de diminuio na formao de
pupas e na emergncia dos insetos adultos.
Os autores Brousseau et al., (1998) tambm encontraram efeitos sinergticos quando avaliada a combinao de B. thuringiensis kurstaki com destruxinas do fungo M.
anisopliae para combater larvas de Choristoneura fumiferana (Clemens, 1865) (Lepidoptera: Tortricidae).
Outra forma de controle integrado foi
avaliada por Petry et al. (2004) utilizando
B. bassiana
45
35
20
43
43
34
30
46
38
B. thuringiensis e controle mecnico de espcies de Simulium, revelando 88,83% de ndice reducional mdio de larvas dos mosquitos. J Andrade & Modolo (1991) testaram B. thuringiensis israelensis em mistura
com o pesticida temephos contra A. aegypti
causando 91 e 98% de mortalidade corrigida,
diminuindo o tempo letal mdio. O modo
de ao das protenas de B. thuringiensis israelensis foi avaliada por Gmez et al. (2007)
demonstrando que a presena da protena
Cyt1Aa aumenta a capacidade de ligao, na
membrana intestinal do inseto, da protena
Cry11A. Isso porque a protena Cyt depois
de solubilizada expe regies especficas na
membrana, promovendo a ligao da protena Cry e aumentando assim, sua atividade
inseticida.
Essas informaes indicam que se torna
cada vez mais importante as pesquisas nessa
rea, uma vez que a aplicao de inseticidas
qumicos resulta em grandes impactos nos
agroecossistemas, pois atingem no somente
os inimigos naturais dos insetos, mas tambm contaminam o solo e os lenis de gua
subterrneos.
1.2 Interaes tri-trficas
Para um melhor entendimento dos agroecossistemas, importante estudar as relaes existentes entre as espcies e suas teias
alimentares, que constituem um complexo de
interaes trficas onde h interesse em interaes tri-trficas visando a utilizao de
patgenos, parasitides e predadores, juntamente com a planta hospedeira/inseticida.
Essas relaes podem ser devidamente utilizadas nas prticas de manejo de insetos-praga, uma vez que se torna importante a preservao de inimigos naturais dos insetos, que
so tambm os controladores das populaes
da praga.
As interaes tri-trficas podem ser resultantes de dois efeitos: efeito direto da planta sobre a biologia e o comportamento do
inimigo natural, devido s substncias qumicas ou caracteres morfolgicos da planta;
ou efeito da planta sobre a praga alterando
seu comportamento, desenvolvimento, tamanho, o que afeta tambm seu inimigo natural. Essas interaes so mais complexas
quando h mais de uma espcie de inimigo
natural envolvida. Nesse tipo de interao,
49
as plantas so importantes meios de comunicao, pois ao serem atacadas por um

herbvoro, liberam substncias volteis pelas folhas, as quais orientam as fmeas dos
parasitides a encontrarem as lagartas e depositar seus ovos. Sendo assim, os odores
tm papel fundamental na organizao dos
indivduos nos agroecossistemas (Vendramin, 2002; Vilela &Palini, 2002).
As interaes tri-trficas podem ser
exemplificadas nas culturas da soja e do
milho. A cultura atacada pela largarta-dasoja, A. gemmatalis que combatida atravs da aplicao de vrus, o Baculovirus
anticarsia, e predada por Geocoris sp. No
caso do milho, as lagartas de S. frugiperda
podem ser parasitadas por Trichogramma
sp. e controladas atravs do entomopatgeno B. thuringiensis.
De acordo com Ferry et al. (2004), os
insetos so causadores de perdas mundiais
entre 10 e 20% da produo agrcola. Com
isso as pesquisas na rea biotecnolgica
estudam diferentes formas de induzir a resistncia de uma planta a seu predador.
Apesar disso as tcnicas convencionais de
controle qumico ainda so largamente utilizadas, sendo que o controle biolgico encontra algumas resistncias, principalmente devido aos elevados custos aos produtores agrcolas.
Agrawal (2000) relata que as plantas
podem ser atrativas ou benficas a alguns
inimigos naturais de herbvoros, mas tambm podem ser txicas ou prejudiciais a
esses. Assim, as interaes tri-trficas podem identificar esses mecanismos de modo
a poder manipul-los, o que ir ampliar o
controle e reduzir o uso de inseticidas.
Os autores Ferry et al. (2004) identificaram diferentes estratgias de defesa das
plantas a seus predadores. Dentre essas,
pode-se citar mecanismos de defesa endgenos e moleculares, sinalizao das plantas e a produo de substncias volteis.
Em resposta, os insetos tambm desenvolveram estratgias de defesa a esses compostos, principalmente atravs da produo de proteinases e de mecanismos especiais de desintoxicao utilizando, por
exemplo, citrocomo P450, monoxigenases
e glutatione S-transferases.
Entretanto, a complexidade qumica das
plantas pode manipular seus fentipos e,
conseqentemente de seus inimigos naturais (Wittstock e Gerhenzon, 2002). Venzon et al. (2001) relatam que, quando inserido uma quantidade de inimigos naturais
ou removendo-se determinadas espcies de
um agroecossistema, uma grande quantidade de interaes indiretas pode ser esperada. Essas interaes podem ser positivas ou negativas ao controle biolgico, devendo-se dar importncia aos nveis de interaes entre as espcies.
As interaes tri-trficas tambm podem
ser exemplificadas atravs do trabalho de
Dequech et al. (2005) que avaliaram lagartas de S. frugiperda parasitadas por Campoletis flavicincta e infectadas por B. thu50
ringiensis aizawai. Em seus resultados o

uso conjunto dos componentes biolgicos
citados, aumentou a mortalidade do inseto-praga e diminuiu seu consumo de alimento.
Resultados semelhantes foram encontrados por Moraes et al. (2004) que identificaram a influncia de silcio em plantas
de trigo, no pulgo-verde (Schizaphis graminum) e seus inimigos naturais. Os dados desses autores mostram que a aplicao de silcio na cultura aumentou a resistncia das plantas de trigo diminuindo a
preferncia alimentar do pulgo-verde, no
afetando seus inimigos naturais.
Atravs desses trabalhos nota-se a importncia de novas pesquisas visando identificar relaes tri-trficas benficas e eficientes que podem ser utilizadas junto s
prticas de Manejo Integrado de Pragas.
1.3 Compatibilidade de
produtos fitossanitrios com Bacillus
entomopatognicos
O controle biolgico ocorre naturalmente no ambiente atravs da ao de inimigos naturais, mantendo em nveis relativamente baixos as populaes de inmeras pragas (Lacey et al. 2001). As bactrias
Bacillus thuringiensis e B. sphaericus so
entomopatgenos que desempenham o
papel de agentes de controle microbiano
de pragas de importncia agrcola e vetores de agentes etiolgicos de doenas humanas (De Maagd et al., 2003). Diante disso, a utilizao e conservao desses microrganismos, dentro de agroecossistemas,
uma das estratgias utilizadas no Manejo
integrado de Pragas, j que so encontradas naturalmente nesses ambientes. Assim,
torna-se importante conhecer a ao dos
produtos fitossanitrios, determinando a sua
seletividade e compatibilidade sobre os entomopatgenos, com o objetivo de minimizar os impactos tanto no ambiente quanto
na microbiota residente (Batista-Filho et al.,
2001).
A excessiva aplicao de defensivos
agrcolas vem ocasionando uma srie de
desequilbrios ambientais, especialmente
nas populaes de entomopatognos, verificadas atrves da inibio do crescimento, esporulao, mutaes genticas, reduo da toxicidade a determinada praga,
influenciando diretamente no estabelecimento e sobrevivncia (Alves et al., 1998).
No entanto, a ao dos agroqumicos sobre os microrganismos pode variar em funo da espcie e linhagem do microrganismo, como tambm da formulao qumica
e dosagens dos produtos (Batista-Filho et
al., 2001). Contudo, alguns produtos apresentam seletividade aos entomopatgenos,
podendo potencializar o seu efeito e contribuir para o controle do inseto-alvo (Benz,
1971; Chen et al., 1974). Assim, a associao de inseticidas qumicos e biolgicos
contribuem para minimizar os efeitos negativos sobre os agroecossistemas (Chen
et al., 1974; Batista-Filho et al., 2001).

Grande parte das reaes dos pesticidas,
atualmente utilizadas no controle de pragas,
desconhecida devido carncia de informaes a respeito da compatibilidade desses
produtos sobre entomopatgenos (Morris,
1977). Para B. thuringiensis, majoritariamente os trabalhos realizados sobre interao so
proveniente da dcada de 70, como reflexo
da demasiada aplicao de inseticidas sintticos orgnicos como hidrocarbonetos clorinados, oganofosforados, metilcarbamatos e piretrides (Casida e Quistad, 1998). Para B.
sphaericus, quase a totalidade dos trabalhos
se referem toxicidade s larvas de dpteros,
ressaltando a importncia de estudos que visam proteo desse inimigo natural, atravs
da compatibilidade com os pesticidas qumicos.
Ainda na dcada de 70, Doughert et al.
(1971) obtiveram respostas variadas na sensibilidade de B. thuringiensis thuringiensis em
funo dos diversos solventes utilizados para
os mesmos pesticidas. A presena de emulsificantes e outros aditivos concentrados, utilizados nas preparaes, podem gerar problemas de compatibilidade com entomopatgenos devendo ser considerado na elaborao
de novas formulaes comerciais (Morris,
1977). O mesmo autor testou a compatibilidade de 27 pesticidas sobre a germinao e
replicao de B. thuringiensis kurstaki, concluindo que o grupo dos carbamatos foram
os mais compatveis, as piretrinas altamente
bacteriostticas e os produtos acefato, triclorfon, metomil, carbaril, mexacarbato e PH 6040 (derivado da uria) podem ser utilizados
em conjunto com a bactria.
Os trabalhos mais atuais nessa linha de
pesquisa avaliaram o efeito de diferentes concentraes de defensivos agrcolas sobre microrganismos entomopatognicos. Especialmente para B. thuringiensis, os dados mostram que tiametoxam, carbosulfan, diafentiuron, imidacloprid, acefato, utilizados nas concentraes mximas, no apresentaram diferena significativa nas unidades formadoras
da colnia - UFC (Batista-Filho et al., 2001;
Batista-Filho et al., 2003; Almeida et al., 2003).
Por outro lado, essas pesquisas revelam que
endosulfan, monocrotofs, deltametrina e ciproconazole + tiametoxam inibiram a formao das colnias. J, na concentrao mnima, o diafentiuron foi sinrgico e o tiametoxam e ciproconazole + tiametoxam no afetaram B. thuringiensis. Utilizando ambas as
concentraes, o endosulfan, deltametrina e
profenofs + lufenuron inibiram as colnias
da bactria e tiametoxam + cipermetrina foram compatveis.
H poucas pesquisas que avaliam a compatibilidade de bactrias entomopatognicas
com os pesticidas mais utilizados em diversas culturas, como por exemplo, o arroz irrigado. No caso, Azambuja (2006) testou seis
produtos fitossanitrios, comumente utilizados na orizicultura irrigada, sobre as bactrias B. thuringiensis e B. sphaericus, em condies laboratoriais e observou que os herbicidas glifosato e propanil foram significativa-
mente antagnicos ao desenvolvimento de B.

thuringiensis, e os mesmos produtos, incluindo o fungicida azoxistrobina, reduziram o
crescimento de B. sphaericus, afetando esse
microrganismo com mais intensidade. Entretanto, relatou uma provvel compatibilidade
dos herbicidas quincloraque e pirazosulfuronetil e o inseticida fipronil para ambos entomopatgenos naturais do solo, propondo a
sua utilizao em Programas de MIP.
Complementando os dados anteriores,
Batista-Filho et al. (2001) verificaram que o
inseticida fipronil apresentou um efeito sinrgico aumentando a UFC de B. thuringiensis
(Dipel) quando utilizado na concentrao mnima, mas no teve influncia quando utilizado na concentrao mxima. Entretanto,
Rohr (2005) mostrou que azoxistrobina, quincloraque e fipronil no apresentaram interaes significativas sobre os bioinseticida de
B. thuringiensis kurstaki (Dipel) e B. thuringiensis aizawai (Xentari).
Os dados dos ensaios realizados in vitro
expem ao mximo os microrganismos a ao
dos produtos fitossanitrios, podendo diferir
das condies de campo, onde outros fatores interferem, diminuindo a intensidade das
reaes. Nesse sentido, Alves et al. (1998) salientam que a seletividade de um produto
testado in vitro pode ser confirmado em campo, mas o antagonismo apresentado em laboratrio nem sempre pode ser verificado no
campo.
Os dados referentes s interaes entre
entomopatgenos e pesticidas em condies
de campo so ainda mais reduzidos (Alves et
al., 1998). Nesse enfoque, Azambuja (2006),
em laboratrio, concluiu que os agroqumicos: fipronil, azoxistrobina, quincloraque, glifosato, propanil e pirazosulfuron-etil no interferiram na abundncia de B. thuringiensis
nem de B. sphaericus. Ressaltando esse padro, Batista-Filho et al. (2001) estudaram a
compatibilidade do tiametoxam e B. thuringiensis (Dipel), aplicados em lavouras de
feijo, revelando que o inseticida no interferiu no potencial de inculo do entomopatgeno, assim como in vitro, recomendando
a utilizao do produto em conjunto com a
bactria. Conforme foi verificado, no ambiente natural, os diversos fatores biticos e
abiticos atuam minimizando os possveis
impactos sobre os Bacillus spp. da ao direta dos produtos fitossanitrios (Alves et al.,
1998).
Em outro trabalho, Das et al. (2003) verificaram a influncia de dois inseticidas em
diversos microrganismos presentes nos solos
de cultivo de arroz. Esses autores mencionam que forato e carborufam estimularam o
crescimento das populaes de bactrias e as
propores de Bacillus sp. No entanto, o efeito sinrgico de carbofuram foi mais pronunciado. Esse fato est relacionado capacidade de alguns microrganismos desse gnero
utilizarem o inseticida e degradarem seus produtos para o seu prprio desenvolvimento
no solo.
Como j mencionado, na literatura a respeito de interaes de microrganismos ento-
mopatognicos e agroqumicos, em condies de campo, muito restrita e quase a

totalidade dos trabalhos realizados dessa
natureza se referem aos fungos entomopatognicos avaliados in vitro. A falta de padronizao na realizao dos testes um
dos problemas desse tipo de estudo que,
em muitos casos, no permite uma comparao efetiva entre os produtos (Alves et
al., 1998).
Diante disso, os microrganismos entomopatognicos que habitam naturalmente
os agroecossistemas devem ser preservados atravs de tcnicas culturais e principalmente na utilizao de pesticidas compatveis no comprometendo o MIP (Almeida et al., 2003).
1.4 Controle microbiano
de Fitopatgenos
1.4.1 Fungos Fitopatognicos:
Os fungos constituem um grupo de
organismos que se caracteriza por nunca
apresentarem tecido verdadeiro, por serem
eucariticos e aclorofilados. A maioria das
espcies fngicas saproftica, mas algumas desenvolveram a capacidade de parasitar plantas, causando a morte ou um retardamento do desenvolvimento do hospedeiro. Devido aos sistemas intensivos de
produo agrcola, o ndice e a prevalncia de doenas tm aumentado significativamente, podendo, em alguns casos, causar perda total da produo. Esse aumento
de doenas em reas agrcolas se deve principalmente ao desequilbrio entre as diferentes populaes microbianas do solo, do
rizoplano, do fitoplano e endofticas que
interagem com plantas, permitindo o estabelecimento e o desenvolvimento dos fungos patognicos (Esposito & Azevedo,
2004).
Os autores relatam que para o fungo
patognico colonizar a planta hospedeira,
inicialmente ele precisa quebrar o seu sistema de defesa. Para isso, produz enzimas
hidrolticas (cutinases, celulases, ligninases
e outras) que quebram a cutcula e a parede da celular hospedeira; toxinas que reduzem ou inibem completamente a atividade das clulas da planta a ser parasitada
e/ou produzem substncias especficas de
plantas (hormnios) que quebram o equilbrio fisiolgico da clula vegetal, causando distrbios no crescimento e na diferenciao das clulas da planta (Esposito e Azevedo, 2004).
Em geral, os fungos patognicos apresentam trs estgios de colonizao da planta hospedeira. Esses estgios so caracterizados pela germinao do esporo na superfcie dos tecidos da planta hospedeira,
pelo reconhecimento da superfcie, pela
formao de apressrio e pela penetrao
nos tecidos vegetais. Estando no interior
da planta, o fungo pode colonizar os espaos intercelulares e/ou intracelulares de
forma parastica e, posteriormente, produzir estruturas reprodutivas que permitam a
sua disseminao (Esposito e Azevedo, 2004).

1.4.2 Efeitos de B. thuringiensis
em fitopatgenos:
Alguns microrganismos, como bactrias,
fungos e actinomicetos, produzem metablitos capazes de inibir o crescimento de outros microrganismos. Estas substncias so
diferentes na sua estrutura e distribuio, se
restringindo aos poucos compostos e estando presentes em apenas alguns microrganismos (Kennedy, 1999). Os produtos do metabolismo secundrio microbiano so alvos de
pesquisas cada vez mais intensas na busca
de substncias bioativas, para atuao em diversas reas como a agricultura, veterinria
e farmcia (Woodruff, 1980).
Grande parte dos microrganismos envolvidos no controle biolgico atua atravs de
antibiose, onde ocorre a interao entre organismos, um metablito produzido por um
deles tem um efeito prejudicial sobre o outro. A produo de metablitos pode resultar na completa lise e dissoluo da estrutura celular e independe do contato fsico entre os microrganismos (Bettiol & Ghini, 1995),
dessa forma, a busca por microrganismos
antagnicos a fungos fitopatognicos tem
aumentado (Benitez et al., 2004). Diversas
espcies de Bacillus so citadas como produtoras de antibiticos, podendo secretar metablitos comercialmente importantes, como
enzimas aminolticas e enzimas proteolticas
(Bettiol & Ghini, 1995).
Bettiol (1988), em trabalho de seleo
de microrganismo antagnico a Pyricularia
oryzae, verificou que B. subtilis foi o mais
eficiente em inibir o crescimento micelial do
patgeno, e constatando tambm que o antagonista apresenta boas caractersticas para
uso como agente de controle biolgico, pois,
alm de rpido desenvolvimento, tanto em
meio de cultura como na natureza, produzem endsporo e antibiticos, crescem em
larga faixa de temperatura e adaptam-se a
vrias condies ambientais.
O processo para que ocorra o antagonismo exige a degradao da parede celular
fngica por hidrolases secretada por microrganismos. Como quitina e beta-1,3-glucana
so os principais componentes estruturais da
parede celular fngica, quitinases e glucanases podem ser importantes no controle biolgico desses microrganismos (Kulminskaya
et al., 2001). Knaak et al. (2007) testaram as
cepas e protenas Cry1Ab e Cry1Ac sintetizadas por Bacillus thuringiensis thuringiensis
407 (pH 408) e B. thuringiensis kurstaki HD73, respectivamente, sobre os fungos fitopatognicos Pyricularia grisea, Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum e F. solani. Verificaram que as cepas B. thuringiensis, que
sintetizam as protenas Cry1Ab e Cry1Ac, reduziram o crescimento micelial dos fungos
R. solani, P. grisea, F. oxysporum e F. solani
durante o perodo avaliado, quando comparado aos controles. As duas cepas inibiram o
crescimento dos fitopatgenos testados at
sete dias aps a incubao, onde houve diferena significativa (P<0,05) entre os trata-
51
mentos bacterianos e os grupos controle.

Na avaliao da ao das protenas Cry1Ab
e Cry1Ac, sobre R. solani, P. grisea, F. oxysporum e F. solani, no foi observada a formao do halo de inibio de crescimento.
Nos resultados obtidos para germinao dos condios tambm no houve diferena significativa (P<0,05) entre o controle e os tratamentos com as protenas Cry1Ab
e Cry1Ac sobre os fungos citados anteriormente. Batista-Junior et al. (2002) testaram
duas cepas: B. thuringiensis kurstaki HD1,
produtor do cristal com atividade inseticida e B. thuringiensis 407, mutante no produtor do cristal protico, contra os fitopatgenos F. solani, F. oxysporum e Colletotrichum sp., concluindo que a ausncia dos
genes produtores do cristal protico no
interferiram no poder de degradao do
miclio pelos isolados de B. thuringiensis
estudados.
O efeito inibitrio das cepas de B. thuringiensis nas estirpes dos fungos fitopatognicos pode estar relacionado com a produo de enzimas que podem ter ao contra a parede celular fngica, j que algumas bactrias antagonistas de fungos fitopatognicos produzem quitinases (Asaka e
Shoda, 1996; Mavingui e Heulin, 1994).
Nesse contexto, Barboza-Corona et al.
(1999) selecionaram e caracterizaram enzimas (quitinases) de B. thuringiensis nativos do Mxico, concluindo que a ao sinrgica entre quitinases e protenas Cry
podem ser aplicadas no controle biolgico
de fitopatgenos.
Diferentes tipos de fungos e bactrias
produzem uma grande variedade de enzimas degradantes (Mauch et al., 1988). Sendo assim, B. thuringiensis uma bactria
que secreta quitinases em meios de cultura
quando cultivada em meio com sais e quitina (Barboza-Corona et al., 2003). Alguns
estudos sugerem que as quitinases de B.
thuringiensis possuem potencial biotecnolgico contra fungos fitopatognicos (Escudero-Abarca et al., 2001; Reyes-Ramrez
et al., 2004).
La Vega et al. (2006) testaram enzima
quitinase, purificada de B. thuringiensis
aizawai, a qual produz 66 kDa quitinase
extracelular, nos fungos Fusarium sp. e S.
rolfsii. Os fitopatgenos foram incubados
com a enzima purificada por 120h, demonstrando que os valores de inibio do crescimento de S. rolfsii e Fusarium sp. foram
superiores e estatisticamente diferentes do
controle (11 e 24%, respectivamente). Os
mesmos autores no encontraram diferenas significativas no crescimento com a
enzima purificada, em comparao com o
extrato bruto enzimtico. Melentev et al.
(2001) testaram o extrato bruto e purificado de quitinase de Bacillus sp. e descobriram que a enzima purificada perdeu a sua
capacidade de inibir o crescimento de Fusarium oxysporum e Helminthosporium
sativum. No entanto, h relatos de que algumas cepas bacterianas apresentam uma
relao direta entre as suas habilidades para
52
reprimir o crescimento de fungos fitopatognicos e para produzir quitinases (Inbar e

Chet, 1991).
Resmuska e Pria (2007) avaliaram o efeito dos agentes antagonistas B. thuringiensis e Trichoderma sp. no crescimento micelial, sobre os fungos fitopatognicos: Sclerotium rolfsii, Diaporthe phaseolorum,
Pythium aphanidermatum., Monilinia
fructicola, Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani. Verificaram que a bactria B.
thuringiensis mostrou-se eficiente no controle de M. fructicola, S. sclerotiorum, F.
solani. e S. rolfsii, impedindo que o fungo
S. sclerotiorum formasse esclerdios. O fungo Trichoderma sp., exerceu efeito no crescimento micelial do fungo S. rolfsii. B. thuringiensis mostrou-se mais eficiente que
Trichoderma sp. no controle biolgico dos
fitopatgenos D. phaseolorum, P. aphanidermatum, M. fructicola, S. sclerotiorum,
R. solani e F. solani.
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TOXICIDADE DE BACILLUS THURINGIENSIS

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Emerson Luiz Nunes Costa

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Fitotecnia Fitossanidade (UFRGS)
Lidia Mariana Fiuza
Fitossanidade (UFRGS), Doutora em Cincias
Agronmicas (ENSAM-Montpellier) e Ps-Doutora em
entomopatgeno B. thuringiensis tem elevada especificidade, porm para uma utilizao segura so necessrios
ensaios toxicolgicos com diferentes organismos no-alvo,
sendo nesse trabalho apresentados dados
referentes toxicidade aos inimigos naturais, especialmente aos parasitides e predadores de insetos, assim como s aves e
aos mamferos.
1.1 Efeitos de B. thuringiensis sobre
predadores e parasitides
Os inimigos naturais dos insetos so
de suma importncia, pois, alm de desenvolverem seu papel ecolgico de predao ou parasitismo, podem ser associados aos mtodos alternativos de controle
de pragas-alvo, atravs de criao massal
em laboratrios (Gallo et al., 2002). O uso
de inseticidas pode causar danos diretos e
indiretos ao controle biolgico natural, ao
causar a mortalidade de insetos benficos
ou reduzir sua fonte alimentar pela mortalidade de insetos-praga (Shepard et al.,
1987; Wick & Freier, 2000; Berti Filho &
Ciociola, 2002). Por isso, o uso de bioinseticidas que controlam as pragas com baixo
impacto sobre organismos benficos deve
ser incentivado (Fragoso et al., 2001; Degrande et al., 2002).
Nesse sentido, Dequech et al. (2005)
estudaram a interao entre o parasitide
Campoletis flavicincta e B. thuringiensis
aizawai em lagartas de Spodoptera frugiperda em condies de laboratrio. Os
autores avaliaram o consumo alimentar e
a mortalidade de lagartas parasitadas, infectadas pela bactria, e parasitadas e infectadas, alm da biologia dos parasitides emergidos a partir de lagartas infectadas e no infectadas pela bactria. O menor consumo foliar e a maior taxa de mortalidade foram observados em lagartas afetadas pelos dois agentes de controle bio54
lgico. No caso do parasitide, no foram

verificadas alteraes nas caractersticas biolgicas dos seus descendentes emergidos
de lagartas infectadas com B. thuringiensis.
Segundo Stevenson & Walters (1983),
embora a toxicidade de inseticidas possa
ser avaliada em condies de laboratrio,
s possvel medir o efeito real do pesticida em condies de campo, onde ocorrem
as situaes naturais de abrigo, proteo,
alternativas de escape, alimentao e sobrevivncia das espcies. Esses autores tambm destacam que as condies meteorolgicas, o comportamento e o ciclo de vida
de cada espcie e a dose aplicada so fatores que influenciam a toxicidade dos inseticidas.
Lucho (2004) avaliou a emergncia de
parasitides em lagartas de S. frugiperda
recapturadas em arroz irrigado com e sem
tratamento de B. thuringiensis aizawai em
condies de telado e a campo. A emergncia de parasitides das famlias Braco-
nidae, Ichneumonidae e Tachinidae ocorreu em lagartas recapturadas em plantas no

tratadas, mantidas em condies de telado.
Das lagartas coletadas em reas tratadas com
o bioinseticida, tanto em telado quanto a
campo, no foi observada emergncia de
parasitides.
J Costa (2007), durante dois anos agrcolas, avaliou o efeito de inseticidas sobre
os inimigos naturais de insetos-praga, por
meio da quantificao de grupos taxonmicos de inimigos naturais presentes antes
e aps a aplicao de produtos qumicos e
biolgicos em lavoura de arroz irrigado.
Nesse estudo foram avaliados seis tratamentos (quatro inseticidas qumicos sintticos,
um inseticida base de B. thuringiensis aizawai e testemunha sem inseticidas) e cinco pocas de amostragem realizadas com
rede de varredura do florescimento ao enchimento de gros (prvia e aos 2, 7, 14 e
21 dias aps a aplicao dos tratamentos DAT). Entre os inimigos naturais coletados
foram considerados oito subgrupos: aranhas, micro-himenpteros, colepteros,
odonatos, dermpteros, neurpteros, dpteros e hempteros. No primeiro ano do
estudo no foram observados efeitos significativos dos inseticidas sobre os inimigos
naturais. No segundo ano, o inseticida lambdacialotrina reduziu o total de inimigos naturais coletados aos 2DAT. O nmero de
Figura 1. Mortalidade de camundongos CF1 submetidos aos tratamentos

intraperitoneais com Bacillus thuringiensis, ( Susp. = suspenso contendo clulas
e esporos; Sob. = sobrenadante da cultura; Prot. = protena purificada; Test. =
testemunha tratada somente com gua; Nmero total de indivduos = 15 por
tratamento)
colepteros predadores, representados em
sua maioria por Coccinellidade (joaninhas), foi reduzido significativamente aos
2DAT por lambdacialotrina, carbaril, malationa e imidacloprido. Nos dois anos do
estudo no foi observado efeito significativo de B. thuringiensis sobre o nmero de
inimigos naturais coletados aps a aplicao do bioinseticida.
Em outra pesquisa, Nascimento et al.
(1998) avaliaram o efeito de B. thuringiensis kurstaki sobre o predador de lagartas de
lepidpteros, Podisus nigrispinus, em laboratrio. Em seus resultados, no foi observada a presena de esporos ou clulas vegetativas do entomopatgeno na hemolinfa do predador, apenas no intestino mdio
e nas fezes. Os autores relatam que, em laboratrio, so utilizadas altas dosagens de
biopesticida e oferecido apenas uma alternativa alimentar e que, em campo, o predador tem alternativas de alimentao, no
dependendo somente de uma presa infectada.
Alm dos produtos formulados a base
de B. thuringiensis, atualmente as pesquisas na rea biotecnolgica visam a transformao gentica de plantas com os genes
cry de B. thuringiensis para conferir a resistncia dessas plantas aos insetos-praga.
Plantas de milho, algodo e batata transgnicos tm sido comercializados (Shelton et
al. 2002), porm, os dados de OCallaghan
et al. (2005) revelam que no foram detectados efeitos dessas plantas em insetos benficos, como polinizadores e inimigos na-
turais.
Nesse contexto, Romeis et al. (2008)
relatam que dados como a descrio da
cultivar, as caractersticas moleculares dos
elementos genticos inseridos na planta, a
natureza e a estabilidade da expresso protica, o espectro de ao das protenas, a
composio de macro e micronutrientes e
as caractersticas morfolgicas e agronmicas da planta, so exigidos pelas autoridades para a regulamentao dessas plantas.
Os autores mostram que o milho modificado com o gene expressando a protena Cry
1Ab de B. thurigniensis, ativa a insetos da
ordem Lepidoptera, no afeta insetos de
outras ordens. Ou seja, as protenas de B.
thuringiensis so altamente especficas, no
atingindo artrpodes no alvos.
Na reviso de Fontes et al.(2002) so
discutidos princpios e questes ecolgicas,
impacto ambiental e efeitos de plantas geneticamente modificadas no ambiente. Em
relao aos inimigos naturais, os autores
relatam a existncia de fatores importantes
em relao s plantas, como o ciclo de vida
(anual ou perene) que difere na composio das comunidades de artrpodes associados a essas plantas. Dos 41 trabalhos avaliados pelos autores, 20 foram conduzidos
em laboratrio e desses, 14 no mostraram
efeito sobre inimigos naturais, quando utilizadas plantas modificadas e no modificadas. No restante (6 trabalhos) no foram
observados efeitos em alguns inimigos naturais. E em 14 de 21 trabalhos avaliados
em campo, os autores no mostraram dife-
rena na densidade de inimigos naturais

entre reas com plantas-Bt e plantas no
transgnicas. Porm, nos 7 casos restantes
ocorreu um decrscimo nessa densidade.
No trabalho de Chen et al. (2008) foram avaliados os efeitos diretos e indiretos da protena Cry1Ac de B. thuringiensis
que est presente em plantas transgnicas
de milho e algodo, sobre o parasitide
da lagarta Plutella xilostella, Diadegma
insulare. Os autores utilizaram a planta
transgnica e a protena proveniente de
uma formulao lquida comercial (MC),
em trs tratamentos: a protena purificada,
o produto comercial e a planta transgnica. Tambm avaliaram o efeito de inseticidas a base de spinosad, indoxacarb, lambda-cialotrina e cipermetrina. Em seus resultados, observaram que, mais de 90% das
lagartas foram parasitadas aps a ingesto
dos tratamentos, indicando que esses no
influenciam o parasitismo. Porm, o nmero de D. insulare emergidos das lagartas, diferiu entre o controle e o grupo tratado com a formulao comercial, mas no
diferiu entre o controle e as lagartas tratadas com a planta expressando a protena
Cry 1Ac ou somente com a protena purificada.
Os autores citados tambm demonstraram que o parasitide D. isulare foi altamente suscetvel aos inseticidas comumente utilizados para o controle das lagartas de P. xylostella, ocorrendo a morte
dos mesmos aps duas horas de contato.
Sendo assim, os inseticidas usados afetam
as populaes do parasitide e, conseqentemente aumentam as populaes do
inseto praga-alvo, no caso, P. xylostella.
Estudo semelhante foi realizado por
Torres & Ruberson (2008) com a mesma
protena expressa em plantas de algodo.
Os resultados desse estudo mostraram que
a protena foi detectada em trs nveis trficos avaliados, porm, os insetos predadores e parasitas das lagartas de S. exigua
no foram afetados quando as lagartas forma alimentadas com algodo transgnico.
Um caso bem polmico entre a comunidade cientfica, foi o trabalho de Losley
et al. (1999) que mostrou que o milho geneticamente modificado com a protena
Cry1Ab de B. thuringiensis, afetou severamente a populao da borboleta monarca, Danaus plexippus. Em seu trabalho foi
comparado a alimentao, o crescimento
e a mortalidade de lagartas que se alimentavam de plantas com plen Bt, com plen de milho no modificado e plantas sem
plen. O resultado apresentou sobrevivncia de 56% com milho-Bt e 100% de sobrevivncia com plen normal e sem plen.
Entretanto novas pesquisas foram realizadas posteriormente como Stanley-Horn,
et al. (2001) que avaliou 6 hbridos de B.
thuringiensis em quatro cidades diferentes (EUA) divididos em duas etapas (na
borda e na parte interna das lavouras) frente D. plexippus. As concluses dos auto-
55
res fornecem evidncias de que a quantidade de plen e a expresso de Cry1Ab no

plen predizem um impacto na alimentao das lagartas da monarca, porm isso
ocorre em lagartas do 1 instar, sendo que
no ocorrem diferenas significativas da sobrevivncia da monarca nas regies com
milho-Bt e milho no transgnico. Alm
disso, os autores identificaram a mortalidade de lagartas poucas horas aps a alimentao em reas com milho no transgnico
pulverizados com -cialotrina. A sobrevivncia e o crescimento foram afetados tambm
em reas prximas ao local. Entretanto pesquisas devem continuar sendo realizadas
para entender o impacto do milho no transgnico sendo que relativamente de baixa
toxicidade a borboletas monarca.
Apesar desses dados o conhecimento a
respeito da influncia de novas tecnologias
seja para a produo de biopesticidas ou
para a transgenia, ainda so carentes de
informao. Entretanto, os estudos realizados at ento indicam que efeitos nocivos
em organismos no-alvo verificados em laboratrio so raramente detectados no ambiente, provavelmente porque a quantidade de produto utilizada em laboratrio
superior quela utilizada e recomendada em
campo.
1.2 Efeitos de
B. thuringiensis sobre aves
Um grupo de predadores de lagartas,
os pssaros, tambm deve ser avaliado em
relao ao uso de biopesticidas ou plantas
geneticamente modificadas. Porm existem
poucos dados na literatura a respeito desse
assunto. Os autores Sopuck et al. (2002)
relatam a utilizao do produto comercial
Foray 48B a base de B. thuringiensis. kurstaki, para o controle de Lymantria dispar e
avaliaram a resposta de pssaros associados ao sul da Ilha de Vancouver, no Canad. Em seus resultados no observaram diferena na abundncia relativa de pssaros
nas reas tratadas e no tratadas com o biopesticida, entre os anos de 1999 e 2000,
indicando que o tratamento no influencia
na presena dos mesmos.
J Norton et al. (2001) avaliaram o efeito secundrio da mesma subespcie de B.
thuringiensis citada acima porm proveniente do produto Thuricide, em aves da espcie Dendragapus canadensis. Os autores citam essa ave como um herbvoro primrio, porm os pintos, em suas primeiras
duas semanas de vida, so essencialmente
insetvoros. Lattner (1982) descreve a alimentao dessa ave como sendo cerca de
64% de lagartas, seguido de gafanhotos
(10%), formigas (7%) e outras variedades
de invertebrados e partes de plantas. O trabalho de Norton et al. (2001) teve como
objetivo avaliar os itens da dieta e o crescimento de D. canadensis em reas tratadas
e no tratadas com B. thuringiensis kurstaki. Os resultados indicam que o crescimento dos pintos foi afetado em relao s
56
duas reas, ocorrendo uma reduo de 30%

no tamanho desses na rea tratada com a
bactria. Porm esses dados podem estar
relacionado ao fato de que, com a morte
das lagartas devido ingesto do patgeno, os pintos passaram a se alimentar principalmente de formigas e estas tem um baixo ndice de protenas em comparao com
s lagartas. Isso pode ser determinante para
o decrscimo no tamanho dos pintos, uma
vez que a dieta alimentar teve seu teor de
protenas tambm reduzido.
1.3 Efeitos de B. thuringiensis
sobre mamferos
Pequenos mamferos, como ratos e camundongos, tambm esto associados s
reas agrcolas uma vez que esses animais
podem se alimentar dos gros das culturas.
Ento tambm existem pesquisas que avaliam o possvel efeito do entomopatgeno
nesses mamferos, sendo que a bactria tambm pode produzir toxinas ativas a esses
animais.
Na rea da sade, os trabalhos de Prasad & Shethna (1975) sugerem que as protenas de B. thuringiensis tm atividade
antitumoral em sarcoma Yoshida em ratos,
alm de acentuarem a resposta imune de
ovelhas. Yamashita et al. (2000), tambm
demonstram efeito citocida em clulas de
leucemia, em ensaios in vitro.
Em relao a humanos, a reviso de Siegel (2001) apresenta dados em que o produto Thuricide (B. thuringiensis thuringiensis) foi ingerido (100mg) e inalado
(100mg) por 18 pessoas, durante 5 dias, e
esses no apresentaram nenhuma reao
decorrente do microrganismo. Alm dessa
reportagem, o trabalho apresenta alguns
dados sobre isolados de B. thuringiensis que
foram re-isolados de queimaduras ou feridas de pessoas, entretanto foi averiguado
que a gua utilizada para a limpeza desses
ferimentos estava contaminada. Alm disso, o autor relata que o isolado pode se
desenvolver nesses locais feridos quando o
sistema imune no est respondendo de
forma adequada ao ferimento, mas no causa nenhuma reao.
Betz et al. (2000) relatam que B. thuringiensis kurstaki foi administrado em humanos voluntrios durante 3 dias, na quantidade de 1000mg/pessoa ou 1x1010 esporos/mL, e no apresentaram sintomas de
toxicidade, nem culturas de clulas bacterianas nas amostras de sangue avaliadas. Os
autores relatam a presena das protenas Cry
1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac e Cry 2Aa no isolado
testado.
Diferentes autores relatam os resultados
de suas pesquisas com ratos tratados com
B. thuringiensis. No caso de Bishop et al.
(1999), a aplicao oral de 5.1010 esporos/
dia de B. thuringiensis thuringiensis e B.
thuringiensis israelensis, em ratos no mostrou diferena significativa no peso corporal dos animais tratados e no tratados. Nos
dados de Siegel (2001), ratos foram trata-
dos via oral com 109 esporos/dia, por 730

dias, tambm no apresentaram nenhuma
reao.
Tambm em ensaios toxicolgicos, Berlitz et al. (2006) avaliaram o efeito da suspenso de clulas e esporos de B. thuringiensis aizawai proveniente do produto comercial Xentari e B. thuringiensis thuringiensis (H1), em ratos Wistar. Os autores avaliaram o contedo estomacal e as fezes em
SDS-PAGE, onde os resultados sugerem que
as protenas so degradadas no estmago
dos animais. Os estmagos foram avaliados
em estereomicroscpio (40x) no apresentando modificaes superficiais, como pipocas vermelhas ou raias hemorrgicas, em
relao ao grupo controle. Os autores concluram que as protenas de B. thuringiensis no afetam os ratos quando administradas oralmente.
Em outra pesquisa, Berlitz (2006) avaliou a suspenso e as protenas purificadas
de dois novos isolados bacterianos, em camundongos CF1, via oral e intraperitoneal,
divididos em grupos de 5 animais e trs repeties. Os dados dos tratamentos, via oral,
no causaram mortalidade dos camundongos, porm nas administraes intraperitoneais os camundongos morreram a partir
de 6horas aps a aplicao dos tratamentos, quando aplicada a suspenso bacteriana contendo clulas e esporos (Figura 1).
Apesar desses resultados, deve-se salientar que injees intraperitoneais no so
uma via de acesso natural do entomopatgeno nos mamferos. Essa mortalidade tambm no deve estar associada thuringiensina, uma protena txica a vertebrados que
produzida pelo entomopatgeno, pois
essa toxina est presente no sobrenadante
da cultura, e esse tratamento no causou a
mortalidade dos animais.
O tratamento via oral, no causou reaes nos camundongos. Nesse sentido, Betz
et al. (2000) revelam que as protenas Cry1,
Cry2 e Cry3 so degradadas em 30 segundos aps a ingesto, em ensaios in vitro,
resultando em protenas de 2 kDa. Tambm,
os dados de Vasquez-Padrn et al. (2000) e
Moreno-Fierros et al. (2000) revelaram que
camundongos Balb/c apresentaram elevada produo de anticorpos IgA, seguidos
de IgG e IgM, aps a administrao oral,
retal e intraperitoneal da protena Cry1Ac,
mostrando uma eficiente resposta imune
desses animais.
Como j comentado anteriormente, as
preocupaes tm sido em torno dos efeitos das plantas geneticamente modificadas
com genes de B. thuringiensis em seus consumidores. Porm, Azevedo & Arajo (2003)
mostram a ausncia de efeitos txicos, mutagnicos, teratognicos ou clastognicos
dessas plantas. Betz et al. (2000) tambm
relatam que as protenas Cry de B. thuringiensis no so txicas em contato direto,
sendo que a exposio de animais no-alvo
extremamente baixa e a presena dessas
protenas nos tecidos vegetais tambm ocorre em baixas concentraes. Romeis et al.
(2008) tambm comentam que os testes laboratoriais utilizando essas plantas, so conduzidos com elevadas concentraes da
protena purificada, muito acima daquelas
concentraes encontradas nos tecidos das
plantas.
Apesar desses dados, periodicamente
esto sendo lanados produtos comerciais
base de B. thuringiensis e que, para chegarem ao mercado devem passar por diferentes anlises para confirmar a no toxicidade em organismos no-alvo. O mesmo
ocorre com as plantas geneticamente modificadas que so testadas em diferentes
organismos para garantir a sua segurana.
Nesse sentido, a Lei de Biossegurana n
11.105, estabelece as normas de segurana
e os mecanismos de fiscalizao de atividades que envolvam organismos geneticamente modificados e seus derivados.
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57
PRODUTOS DE BACILLUS THURINGIENSIS:

Pesquisa
REGISTRO E COMERCIALIZAO
Lidia Mariana Fiza

Engenheira Agrnoma (UPF), Mestre
em Fitotecnia Fitossanidade (UFRGS),
biotecnologia Vegetal (CIRADMontpellier).
Diounia Liziane Berlitz
Biloga (UNISINOS) e Mestre em
58
onsiderando os biopesticidas, aqui sero apresentados aspectos bsicos relacionados s avaliaes toxicolgicas dos produtos
formulados base de B. thuringiensis, assim como os procedimentos relacionados ao registro desses produtos comerciais, os quais seguem a lei
base dos agrotxicos.
Atualmente aproximadamente 98%
dos biopesticidas, utilizados na agricultura e na sade, correspondem s
formulaes de B. thuringiensis (Schnepf et al., 1998; Polanczyk, 2003).
No incio desse milnio as vendas
desses produtos foram de aproximadamente US$ 2 milhes. Em alguns
pases, como no Brasil, o acesso a esses produtos ainda limitado, pois os
custos das formulaes so elevados
e as multinacionais que os comercializam no mantm uma distribuio
regular nas diferentes regies do pas.
Alm desses problemas soma-se a
baixa persistncia de alguns produtos e a falta de informaes dos produtores sobre o potencial e as vantagens dos biopesticidas.
No Brasil, a prospeco de entomopatgenos bacterianos realizada
em laboratrios de pesquisa ligados
agricultura e sade pblica, como:
Embrapa, Fiocruz, Universidades Pblicas e Privadas. Essas mesmas instituies tm desenvolvido os produtos ou efetuado convnio com Empresas Particulares. Os registros dos
produtos base de B. thuringiensis
seguem basicamente as mesmas re-
gras dos qumicos sintticos, cujos

rgos federais responsveis pela avaliao e registro so Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
(MAPA), Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) e Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis (IBAMA),
os quais prometem no atual contexto
priorizar os biopesticidas em relao
aos agrotxicos convencionais, facilitando assim o registro dos produtos
comprovadamente menos agressivos
aos organismos no-alvo e ao ambiente.
1.1 Legislao e Registro
de produtos
A utilizao de biopesticidas, assim como dos demais agrotxicos baseia-se na relao riscos x benefcios que requer ensaios, os quais revelam a segurana ao homem e ao meio
ambiente. Sendo assim, a legislao
deve assegurar a sociedade que o biopesticida autorizado para comercializao e aplicao no controle biolgico foi adequadamente avaliado
quanto aos parmetros agronmicos,
sade pblica e meio ambiente (Meadows, 1993; Alves, 1998; Gallo et al.,
2002).
O registro de produtos base de
B. thuringiensis segue a Lei dos Agrotxicos, cuja legislao bsica a Lei
n. 7.802 de 11 de julho de 1989, onde
os produtos so avaliados pelo Ministrio da Agricultura e Ministrio da
Sade quanto aos seguintes aspectos:
Tabela 1. Produtos comerciais de Bacillus thuringiensis para controle de pragas agrcolas

Produtos
Dipel
Thuricide
Agree
Bactur
Ecotech Pro
Bactospeine
Javelin
Foray
Biobit
Foil/Condor
Delfin
Cutlass
Larvo Bt
Nubilacid
MVP
Bac-control
XenTari
M-One
Di-Terra
Trident
Novodor
M-One Plus
Foil
Empresas
Abbott
Sandoz
Mitsui
Milenia Agrocincias
Bayer
Solvay
Sandoz
Novo-Nordisk
Novo-Nodisk
Ecogen
Sandoz
Ecogen
Fermone
Radonja
Mycogen
Agricontrol
Abbott
Mycogen
Abbott
Sandoz
Novo Nordisk
Mycogen
Ecogen
pesquisas; experimentao; produo;

embalagem e rotulagem; transporte; armazenamento; comercializao; propaganda comercial; utilizao; importao;
exportao; destino final de resduos e
embalagens; registro; classificao; controle; inspeo e fiscalizao de produtos.
A Lei dos Agrotxicos foi regulamentada pelos Decretos n. 98.816, de
11 de janeiro de 1990 e Dec. 4.074 de
04 de janeiro de 2002, sendo que atualmente para registro de um biopesticida
no Brasil esto envolvidos os seguintes
ministrios:
MAPA: avaliao dos aspectos
agronmicos.
ANVISA: avaliao da toxicologia ao homem, incluindo as anlises de resduos em alimentos.
IBAMA: avaliao das interaes
dos agrotxicos com o meio ambiente e seus componentes biticos.
Ao Ministrio da Agricultura competem basicamente as determinaes
sobre as pragas a serem controladas,
assim como as dosagens e o nmero
de aplicaes dos produtos, cujos dados podem ser consultados no Compndio de Defensivos Agrcolas (Andrei,
B. thuringiensis (Bt)
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt aizawai
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt kurstaki
Bt aizawai
Bt san diego Bt tenebrionis
Bt san diego Bt tenebrionis (empacotadas)
Bt (recombinante)
1999) e o seu complemento editado em

2003.
O Ministrio da Sade baseia-se 26
ensaios de exposio aguda em animais
de laboratrio, cujos dados so extrapolados para o homem, estabelecendo
assim 4 Classes Toxicolgicas aos agrotxicos:
Classe I - Extremamente txicos - rotulagem vermelha
Classe II Altamente txico rotulagem amarela
Classe III Moderadamente txico rotulagem azul - Bt
Classe IV Pouco txico rotulagem verde - Bt
No caso das formulaes de B. thuringiensis, essas se encontram predominantemente distribudas entre as classes III e IV, as quais se classificam como
moderadamente ou pouco txicas. Essas classes toxicolgicas referem-se sempre a manipulao dos produtos pelos
fabricantes, transportadores, aplicadores e outros.
Tambm compete a ANVISA o estabelecimento de tolerncia que se refere aos limites mximos dos resduos,
os quais so avaliados em estudos de
exposio subcrnica e crnica e dados desses resduos nos produtos agr-
Insetos-alvo
lepidpteros
lepidpteros
lepidopteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
lepidpteros
colepteros
colepteros
colepteros
colepteros
colepteros
colepteros
colas. Junto ao MAPA so determinados os perodos de carncia dos produtos, que fazem referncia ao intervalo de segurana.
O Ministrio do Meio Ambiente requer 20 ensaios ecotoxicolgicos, 36
estudos de caractersticas fsico-qumicas, 4 testes de metabolismo e degradao. Em seguida o produto classificado quanto ao seu potencial de periculosidade no meio ambiente:
Classe I Produto altamente
perigoso
Classe II Produto muito perigoso
Classe III Produto perigoso Bt
Classe IV Produto pouco perigoso - Bt
Como anteriormente, nesse caso os
produtos de B. thuringiensis se enquadram como perigosos ou pouco perigosos ao meio ambiente. Os dados que
competem ao IBAMA envolvem os aspectos: fsico-qumicos que revelam a
identidade da molcula do biopesticida; ecotoxicolgicos que englobam estudos com organismos no alvos (abelhas, minhocas, microcrustceos, peixes,
aves, microrganismos do solo e outros);
comportamento no meio ambiente que
59
avalia a lixiviao, mobilidade no

solo e bioconcentrao nas cadeias
trficas, entre outros.
Nos estudos toxicolgicos dos biopesticidas podem ser avaliados somente o ingrediente ativo ou a formulao que se deseja registrar, podendo ambas as formas serem avaliadas simultaneamente. Aps as anlises requeridas pela ANVISA e IBAMA, o MAPA quem registra a formulao do produto, publicando a
deciso no Dirio Oficial da Unio,
com validade nacional e tempo indeterminado (Gallo et al.,2002).
o em escala mundial contra dpteros,

especialmente os vetores de doenas
humanas como Aedes aegypti, destacamse os seguintes produtos (Thomas e
Ellar, 1983; Armstrong et al., 1985; Thiery et al., 1996; Andrade, 2008):
Vectobac, Skeetal, Bactimos
(Abbot)
Teknar (Sandoz)
Aquabac (Becker Microbials)
LarvX SG (Meridian Precision
Realease Technologies)
Biotouch (Zohar Dalia)
Culinex (Culinex Gmbh)
Bacticide( Biotech International
Ltd)
Bactivec (Labiofam)
Bt Horus SC (Bthek) (http://
www.bthek.com.br)
1.2 Produtos comerciais

base de B. thuringiensis
Entre os biopesticidas, a base de
B. thuringiensis (Entwistle et al, 1993;
Schnepf et al., 1998), apresentados
na Tabela 1, alguns se destacam no
controle biolgico de pragas agrcolas por serem utilizados h vrias
dcadas, levando atualmente esse
entomopatgeno a quase totalidade
do mercado dos pesticidas microbianos.
B. thuringiensis um importante
agente de controle de insetos-praga,
principalmente para lepidpteros e
colepteros, porque seu ingrediente
ativo txico, representado por protenas Cry, pode ser considerado atxico aos vertebrados e aos insetos
no-alvo (Siegel, 2001). Por outro
lado, as formulaes comerciais de
B. thuringiensis apresentam uma estabilidade limitada a campo, alm de
apresentarem um perodo de aplicao crtico devido reduo da suscetibilidade com o desenvolvimento
larval dos insetos.
Para complementar e manter atualizadas essas informaes recomenda-se a reviso de alguns sites que
indicados a seguir:
- www.andef.com.br (Associao
Nacional de Defesa)
- www.epa.gov (EPA Environmental Protection Agency)
- www.anvisa.gov.br
- www.ibama.gov.br
- www.agricultura.gov.br
- http: www. pesticide.net
- http://pesticideinfo.org
- http://foodchemicalnews.com
- http://www.cnpma.embrapa.br
Quanto s formulaes de B. thuringiensis israelensis e comercializa60
Os mesmos autores tambm mencionam algumas formulaes comerciais

de B. sphaericus para o controle de larvas de Culex pipiens, como:
Spherimos e Vectolex (Abbot)
Sphericide (Biotech International Ltda)
Spicbiomoss (Turicorin Alkali
Chemicals and Fertilisers Ltda).
Apesar de haver um nmero significativo de produtos base de B. thuringiensis, ainda h um longo percurso
para que sejam atingidas a maioria das
ordens de insetos-praga de importncia agrcola e vetores de doenas humanas. Enquanto mais pesquisas vm
sendo desenvolvidas nessa rea, devem
ser priorizados os biopesticidas j registrados e comercializados para o controle de insetos a fim de reduzir a contaminao ambiental causada pelos inseticidas qumicos.
1.3 Referncias
ANDRADE, C.F.S. 2008. Controle Biolgico de Borrachudos Dosagens de
Produtos a Base de Bacillus thuringiensis var. israelensis Artigos Tcnicos - Unicamp, Instituto de Biologia, Dep. de Zoologia, Campinas,
2008. Site Ecologia Aplicada, 19p.
Disponvel
em:
http://
www.ib.unicamp.br/profs/
eco_aplicada/. Acesso em: 04.12.08
ANDREI, E. Compndio de defensivos
agrcolas. 6 ed. So Paulo, Organizaes Andrei. 1999. 672p.
ALVES, S.B. 1998. Controle microbiano
de insetos. 2 ed. Piracicaba, SP.
FEALQ, 1163 p.
ARMSTRONG, J.L.; ROHRMANN, G.F.
& BEAUDREAU, G.S. 1985. Delta-endotoxinas of Bacillus thuringiensis subspecies israelensis. Journal Bacteriology 161:
39-46.
ENTWISTLE P. F., CORY J.S., BAILEY
M.J. & HIGGS S. 1993. Bacillus
thuringiensis, an environmental
biopesticide : theory and practice. John Wiley & Sons, New
York, USA, 311p.
GALLO, D. (in memoriam); NAKANO, O.; NETO, S.S.; CARVALHO,
R.P.L.; BAPTISTA, G.C.; BERTI
FILHO, E.; PARRA, J.R.P.; ZUCCHI,
R.A. ; ALVES, S.B.; VENDRAMIM,
J.D.; MARCHINI, L.C.; LOPES,
J.R.S.; OMOTO, C. 2002. Entomologia Agrcola. Piracicaba, SP.
FEALQ, 920 p.
MEADOWS, M.P. 1993. Bacillus thuringiensis in the Environment:
Ecology and Risk Assessment. p.
193-213. In.: ENTWISTLE P. (ed.).
Bacillus thuringiensis, An Environmental Biopesticide : Theory
and Practice. John Wiley & Sons,
New York, USA.
POLANCZYK, R.A.; MARTINELLI, S.;
OMOTO, C.; ALVES, S.B. 2003.
Bacillus thuringiensis no manejo
integrado de pragas. Revista Biotecnologia Cincia e Desenvolvimento, 31: 18-27.
SCHNEPF, E.; CRICKMORE, N.; VANRIE, J; LERECLUS, D.; BAUM, J.;
FEITELSON, J.; ZEIGLER, D.R. &
DEAN, D.H. 1998. Bacillus thuringiensis and its Pesticidal Crystal Proteins. Microbiol. Mol. Biol.
Rev., v. 62, p. 775-806.
SIEGEL, J. P. 2001. The mammalian
safety of Bacillus thuringiensis
based insecticides. J. Invertebr.
Pathol. 77: 13-21.
THIERY, I., BACK, C.; BARBAZAN,
Ph.; SINGRE, G. 1996. Applications de Bacillus thuringiensis et
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Annales de lInstitut Pasteur
Les bactries pathognes
dinsectes et leurs applications,
7 (4) : 247-260.
THOMAS, W. & ELLAR, D. 1983. Bacillus thuringiensis var. israelensis crystal delta-endotoxin: effects
on insect and mammalian cells in
vitro and in vivo. Journal of Cell
Science 60:181-197.
61
PLANT
AS TRANSGNICAS QUE SINTETIZAM
PLANTAS
Pesquisa
TOXINAS DE BACILLUS THURINGIENSIS E OUTRAS

Lidia Mariana Fiza
Fitossanidade (UFRGS), Doutora em Cincias Agronmicas
(ENSAM-Montpellier) e Ps-Doutora em biotecnologia
o contexto das aplicaes

biotecnolgicas do entomopatgeno B. thuringiensis, aqui se encontram
dados bibliogrficos sobre
a transformao gentica
de plantas, com genes de
B. thuringiensis e outros, que conferem
resistncia ou tolerncia das plantas hospedeiras aos insetos-praga. As espcies vegetais apresentam naturalmente uma resistncia aos insetos fitfagos, diferenciando assim os grupos de pragas em funo das plantas hospedeiras. A resistncia vegetal est baseada em vrios mecanismos de defesa, incluindo uma gama
de metablitos secundrios nocivos produzidos pelas plantas. A biotecnologia vegetal, atravs do desenvolvimento de tcnicas de biologia celular e molecular de
vegetais superiores oferece novas possibilidades ao melhoramento de plantas cultivadas, facilitando a obteno de plantas
resistentes ao ataque dos insetos. A transformao gentica e a regenerao in vitro de plantas, somadas disponibilizao de genes de interesse agronmico,
destinados a introduo em plantas, tm
permitido a gerao de plantas transgnicas com caractersticas especficas, sem o
rompimento de combinaes genticas j
selecionadas pelos programas convencionais de melhoramento gentico de plantas cultivadas. A transformao de plantas com genes de origem microbiana, vegetal e animal, os quais codificam especificamente toxinas com efeito inseticida,
62
vem sendo considerada uma alternativa relevante junto aos mtodos de controle de
insetos-praga das plantas de interesse econmico, onde se destacam as plantas-Bt
resistentes a diversas ordens de insetos,
principalmente aos lepidpteros e colepteros.
1.1 Genes de
B. thuringiensis em plantas
B. thuringiensis apresenta um genoma de 2,4 a 5,7 milhes de pares de bases, com elementos extracromossmicos
lineares ou circulares (Carlson et al., 1994).
Os genes cry esto localizados em plasmdios, sendo esses responsveis pela sntese de diferentes protenas inseticidas,
cuja clonagem e caracterizao desses
genes em 1981 (Schnepf & Whiteley, 1981)
revelou novas perspectivas de aplicao
do entomopatgeno. Entre essas se encontra a transgenia que permite introduzir os
genes de B. thuringiensis codificadores das
toxinas nos genomas dos vegetais, permitindo a expresso contnua das protenas
em todos os tecidos da planta e atingindo, assim, apenas os insetos-praga que se
alimentam dos tecidos (de Maagd et al.,
1999). A primeira gerao de plantas transgnicas resistentes a insetos foi desenvolvida com o uso de genes codificadores de
protenas inseticidas de B. thuringiensis
(Fischhoff, 1987; Vaeck et al., 1987).
Os genes cry de B. thuringiensis so
talvez os exemplos mais conhecidos de
genes exgenos para os quais tem sido
difcil obter um nvel satisfatrio de expresso em
plantas transgnicas (Diehn
et al.,1996). A baixa expresso dos genes de B. thuringiensis em plantas tem sido
associada instabilidade
das molculas de mRNA,
uma caracterstica amplamente observada da expresso destes genes em plantas o pouco ou nenhum
acmulo de mRNA mesmo
quando sob controle de
promotores fortes. Para tan-

Biloga (PUCRS) e Mestre e Doutoranda em
(UNISINOS).
to vrias modificaes tm sido testadas

para aumentar a eficincia de expresso
destes genes, como adaptar os cdons preferenciais de bactrias para cdons preferenciais de plantas e/ou aumentar o contedo de G/C nas seqncias codificantes
(Perlak et al., 1991), retirada de stios de
splicing, modificaes dos sinais de poliadenilao dentro da regio codificante
(Koziel et al., 1993), insero de ntrons
na regio 5 da seqncia no traduzida
(Jouanin et al., 1998) bem como a insero de genes nativos em cloroplastos inicialmente restrita a tabaco (McBride et al.,
1995).
Genes parcialmente ou totalmente sintticos tm sido construdos, nestes genes
a seqncia de nucleotdeo modificada
sem a troca da seqncia de aminocido,
a expresso destes genes em plantas aumentou significativamente (de menos de
0,001% de protena solvel na folha para
at 1%), sendo os genes totalmente sintticos os mais eficientes em testes de campo (Jouanin et al., 1998).
Os estudos iniciais se basearam em
plantas como tabaco e tomate (Barton et
al., 1987; Fischhoff et al., 1987; Vaeck et
al., 1987) devido s facilidades de transformao, cultivo em casa de vegetao e
crescimento rpido. Vrios genes quimricos contendo um gene promotor de origem vegetal; a seqncia completa do gene
cry e uma regio de poliadenilao foram
introduzidos em tabaco e tomate, porm
nenhuma expresso foi detectada em tabaco e nveis muito baixos foram observados em tomate (Perlak et al., 2001).
A truncagem da seqncia codificadora
do gene cry por eliminao da metade 3
desta seqncia aumentou a expresso
para nveis detectveis de protena e mRNA
(Estruch et al., 1997). Os primeiros testes
de campo com verses truncadas do gene
cry foram eficientes no controle de Helicoverpa zea no caso do tomate (Perlak &
Fischhoff, 1993), porm no no controle
de Heliothis virescens no caso do algodo
(Jenkins et al., 1991). Os resultados mais
efetivos foram obtidos utilizando genes sintticos (Perlak et al., 1990; Perlak et al.,
1991; Van der Salm et al., 1994).
Tabela 1. Genes de B. thuringiensis utilizados na engenharia gentica de plantas

Plantas
lamo
Alfafa
Algodo
Amendoim
Arroz
Genes
Insetos-Alvo
Referncias
cry1Aa
cry3Aa
cry1Ca
cry1Ab
cry1Ac e cry2Ab
cry1F e cry1Ac
Lymantria dispar (L.)

Chrysomela tremulae F.
Spodoptera litoralis (Boiusduval)
Heliothis virescens, Helicoverpa zea
Spodoptera exigua, Pseudoplusia includens (Walker)
Helicoverpa zea, Heliothis virescens, Pectinophora gossypiella, Estigmene
acrea, Bucculatrix thurberiella, Pseudoplusia includens, Spodoptera
exigua, Spodoptera frugiperda, Spodoptera ornithogalli, Ostrinia
nubilalis
lepidpteros
Elasmopalpus lignosellus
Chilo suppressalis
Cnaphalocrocis medinalis, Chilo suppressalis, Scirpophaga
incertulas,Cnaphalocrocis medinalis, Herpitogramma licarisalis;
Sesamia inferens, Naranga anescens, Mycalesis gotama, Parnara
guttata.
Chilo suppressalis, Nilaparrata lugens, Scirpophaga incertulas
McCown et al. (1991)

Cornu et al. (1996)
Sthrizhov et al. (1996)
Perlak et al. (1990)
Adamczyk et al. (2001)
EPA (2008)
cry1Ab e Vip3Aa
cry1Ac
cry1Ac
cry1Aa
cry1Ab
cry1Ac
cry1Ab e cry1Ac
Batata
Berinjela
Brcolis
Canola
Fumo
Milho
cry1B
cry1C
cry2A
cry1Ab
cry1Ab
cry3Aa
cry1Ab
cry3A
cry3B
cry1C
cry1Ac
cry1Ac
cry1Aa
cry1Ab
cry1Ab e cpTI
cry1Ab
cry1Ac
cry1C
cry2A
cry1Ab
cry9c
cry1F
cry1Ac
cry3Bb1
cry34Ab1 e cry35Ab1
cry1Ab1 e cry3Bb1
cry1F + cry34Ab1 e
cry35Ab1
Repolho
Soja
Tomate
cry3A e cry1Ab
cry1A e cry2Ab2
cry1A + cry2Ab2 e
cry3Bb1
cry1Ac
cry3A
cry1Ab
cry1Ac
cry1Ab
cry1Ac
Chilo suppressalis, Scirpophaga incertulas, Ostrinia nubilialis,

Cnaphalocrocis medinalis
Chilo suppressalis
Scirpophaga incertulas, Cnaphalocrocis medinalis
Scirpophaga incertulas,Cnaphalocrocis medinalis
Phthorimaea operculella (Zeller)
Heliothis armigera (Hbner)
Leptinotarsa decemlineata
Leucinodes orbonalis Guene
Leptinotarsa decemlineata (Say)
Leptinotarsa decemlineata
Plutella xylostella (L.)
Thrichoplusia ni (Hbner), Spodoptera exigua (Hbner), Heliothis
virescens (Fabr.), Helicoverpa zea (Boddie)
Plutella xylostella
Manduca sexta (L.)
Manduca sexta
Manduca sexta
Manduca sexta
Heliothis virescens, Helicoverpa zea, Spodoptera littoralis
Spodoptera littoralis
Helicoverpa armigera, Heliothis virescens, Helicoverpa zea, Spodoptera
exigua
Ostrinia nubilalis (Hbner)
Ostrinia nubilalis
Diatraea grandilosella, Ostrinia nubilalis
Ostrinia nubilalis
Diabrotica virgifera, Diabrotica barberi
Diabrotica virgifera
Ostrinia nubilalis, Diatraea grandiosella, Diatraea crambidoides,
Diatraea saccharalis, Helicoverpa zea, Spodoptera frugiperda,
Elasmopalpus lignosellus, Diabrotica virgifera, Diabrotica barberi
Ostrinia nubilalis, Agrotis ipsilon, Helicoverpa zea, Spodoptera
frugiperda, Elasmopalpus lignosellus, Diabrotica virgifera, Diabrotica
barberi, Diatraea crambidoides, Diatraea grandiosella, Diatraea
saccharalis, Striacosta albicosta
Ostrinia nubilalis
Plutella xylostella
Heliothis virescens, Helicoverpa zea, Pseudoplusia includens
Heliothis virescens
Helicoverpa armigera
EPA (2008)
USDA (2008)
Singsit et al. (1997)
Breitler et al. (2004)
Shu et al. (2000), Ye et al. (2003), Wunn et al.
(1996), Datta et al. (1998), Ghareyazie et al.
(1997), Alam et al. (1998), Wu et al. (1997),
Husnain et al. (2002)
Loc et al. (2002), Khanna e Raina (2002),
Nayak et al. (1997), Han et al. (2007)
Cheng et al. (1998), Ahmad et
al. (2002), Tu et al. (2000)
Breitler et al. (2000 e 2001)
Tang et al. (2006)
Maqbool et al. (1998), Chen et al. (2005)
Peferoen et al. (1992), Rico et al. (1998)
Chakrabarti et al. (2000)
Adang et al. (1993), Perlak et al. (1993),
Coombs et al. (2002)
Kumar et al. (1998)
Jelenkovic et al. (1998)
Iannacone et al. (1997)
Zhao et al. (2001)
Stewart et al. (1996b)
Halfhill et al. (2001)
Barton et al. (1987)
Vaeck et al. (1987)
Perlak et al. (1991)
Williams et al. (1993)
McBride et al. (1995)
Strizhov et al. (1996)
Selvapandiyan et al. (1998);
Kota et al. (1999)
Koziel et al. (1993)
Jansem et al. (1997)
EPA (2008)
EPA (2008)
EPA (2008)
EPA (2008)
EPA (2008)
EPA (2008)
EPA (2008)
EPA (2008)
EPA (2008)
USDA (2008)
USDA (2008)
Bhattacharya et al. (2002)
Stewart et al. (1996a)
Fischolff et al. (1987)
Mandaokar et al. (2000)
63
Genes de B. thuringiensis codificadores de protenas Cry foram isolados e introduzidos em plantas agronomicamente
importantes utilizando diferentes mtodos
de transformao gentica como aqueles
que empregam Agrobacterium, transformao direta de protoplastos e bombardeamento de partculas ou biobalstica.
No incio dos anos 80, o primeiro gene
cry foi clonado e expresso em Escherichia coli (Schnepf & Whitley, 1981), sendo no final dessa dcada produzida a primeira planta de tomate com genes de B.
thuringiensis (Fischhoff, 1987). O milho
Maximizer da Novartis, o algodo Bollgard e a batata Newleaf da Monsanto
foram introduzidas no mercado norteamericano em 1995, sendo genericamente conhecidas como plantas-Bt (Jouanin
et al.,1998). Atualmente, o milho-Bt a
planta transgnica mais cultivada no mundo, ocupando 15% da rea global cultivada com transgnicos em pases como
EUA, Canad, Argentina, frica do Sul,
Espanha e Frana. O algodo-Bt ocupa o
segundo lugar em reas plantadas, representando aproximadamente 7% da rea
cultivada com transgnicos (James, 2000).
Alm do milho, da batata, do tomate e do
algodo, outras plantas cultivadas expressam uma ou vrias protenas Cry para o
controle de lepidpteros e colepteros
(Tabela 1) e outras plantas-Bt de espcies cultivadas esto em fase de desenvolvimento em laboratrios ou em testes de
campo (Oecd, 2001).
Atualmente esto registradas mais de
300 seqncias de genes cry, indicando
que a prxima gerao de plantas-Bt dever apresentar mltiplos genes cry, oferecendo aos produtores um maior espectro de proteo contra diferentes insetospraga e reduzindo a probabilidade dos
mesmos desenvolverem resistncia.
As pesquisas tambm esto voltadas
para o incremento da expresso dos genes de B. thuringiensis em plantas, na
seleo de novas variantes de B. thuringiensis mais ativas e/ou na modificao
das seqncias dos genes cry de maneira
a aumentar a produo de toxinas no interior das plantas. Nesse sentido, Schuler
et al. (1998) relata que uma estratgia para
a maior efetividade txica das plantas-Bt
contra insetos seria a introduo de genes nativos de B. thringiensis no genoma
dos cloroplastos, o que resulta num elevado nvel de expresso. A natureza procaritica dos plastdios vegetais permite
a transcrio dos genes de B. thringiensis
e a traduo e processamento dos mRNAs de forma mais eficiente. Nesse caso,
alguns autores mencionam que o entrave
estaria associado transformao de cloroplastos a qual se restringe apenas a algumas plantas-modelo, como por exemplo tabaco e tomate (Jouanin et al., 1998;
Kota et al., 1999).
64
1.2 Outros genes em plantas

Considerando outros genes de interesse engenharia gentica de plantas, os
inibidores de proteinases vegetais so polipeptdios ou protenas que se encontram
naturalmente nas plantas e fazem parte
do sistema de defesa das mesmas contra
herbvoros. Nos insetos as proteinases so
classificadas em diferentes grupos, variando conforme a ordem ou espcie, sendo estas responsveis pela digesto dos
alimentos de onde so assimilados nutrientes essenciais ao crescimento e ao desenvolvimento dos mesmos.
Os inibidores de proteinases sernicas
e cistenicas vm sendo mencionados
como inibidores do crescimento e do desenvolvimento de alguns insetos das ordens lepidptera e coleptera, respectivamente. A atividade antimetablica dos
inibidores no foi bem elucidada, podendo estes: inibirem as enzimas digestivas
diretamente; provocarem a hipersecreo
de enzimas no intestino provocando o esgotamento dos aminocidos essenciais;
afetarem o balano hdrico, as trocas e a
regulao enzimtica dos insetos (Schuler et al., 1998).
Inibidores de alfa-amilases podem ser
considerados um segundo inibidor de enzimas, tambm utilizados na transformao de plantas (Tabela 2). Ensaios realizados com Callosobruchus sp. e Bruchus
sp. mostram que esses inibidores, como
alfa-AI-Pv oriundo do feijo comum (Phaseolus vulgaris), so glicoprotenas termoestveis que inibem alfa-amilases no intestino mdio desses colepteros pragas
de gros armazenados, bloqueando assim
o seu desenvolvimento larval (Schuler et
al.,1998).
As lectinas so protenas naturalmente produzidas por plantas, principalmente pelas leguminosas, como Glycine max
e Canavalia ensiformes, respectivamente. O modo de ao destas protenas vegetais no foi bem elucidado, mas alguns
resultados de pesquisa sugerem que estas
se ligam s clulas epiteliais do intestino
dos insetos (Carlini & Grossi-de-S, 2002).
Dados de pesquisa mostram que vrias lectinas identificadas tm efeito inseticida contra diversas ordens de insetos,
principalmente colepteros, hempteros e
hompteros, porm algumas apresentam
efeito txico para mamferos, enfatizando
assim a necessidade de maiores investigaes nessa rea (Carlini & Grossi-deS, 2002).
Alguns genes de quitinases, peroxidases e triptofano-descarboxilases vm sendo introduzidos em plantas visando principalmente resistncia a insetos da ordem Homoptera (Schuler et al., 1998). Por
outro lado, os conhecimentos sobre os
mecanismos de ao desses produtos so
restritos devido elevada complexidade
do sistema.
No controle de pragas de importncia
agrcola, observa-se que, a possibilidade
de obteno de plantas que sintetizam toxinas letais aos insetos atravs da transformao vegetal com genes oriundos de
outras plantas, microrganismos e animais,
abriu novas perspectivas ao Manejo Integrado de Pragas. Outro aspecto importante
so as novas alternativas de controle de
insetos de difcil acesso atravs dos mtodos convencionais, seja pelo modo de vida
subterrneo ou endoftico da praga alvo.
A utilizao de plantas transgnicas
resistentes permite o acmulo do produto (toxina) entomotxico nos tecidos vegetais, afetando diretamente a espcie alvo
quando a mesma se alimenta do tecido
transgnico, sem causar danos s espcies no alvo, representando assim um mtodo alternativo para o controle de pragas das plantas cultivadas associado preservao do meio ambiente.
1.3 Segurana das
plantas transgnicas
A liberao comercial das plantas geneticamente modificadas com genes cry
de B. thuringiensis, relatada na publicao de Dunwell (1999), revela que os produtores norte-americanos tm adotado as
plantas transgnicas como um elemento
chave no aumento da produo vegetal.
Esse marco histrico s chegou ao Brasil
em 2005, atravs da regulamentao e liberao do cultivo e comercializao das
plantas transgnicas. Para maior detalhamento sobre esse assunto consultar os seguintes sites:
- www.ctnbio.gov.br (Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana)
- www.anbio.org.br (Associao Nacional de Biossegurana)
Os dados de reviso de Fontes et al.
(2002) relatam a segurana, riscos ambientais e eficincia no controle de pragas
atravs do emprego das plantas-Bt. Tambm os trabalhos de reviso de Bobrowski et al. (2003) e Polanczyk et al. (2003)
citam alguns benefcios do uso dessa tecnologia, como:
Diminuio dos efeitos ambientais
sobre as toxinas;
Segurana na utilizao;
Reduo do uso de inseticidas qumicos;
Eficincia no controle das pragas;
Proteo vegetal;
Preservao dos inimigos naturais;
Reduo de doenas fngicas.
1.4 Consideraes e perspectivas
Os dados de pesquisa tm revelado
que certas espcies de insetos, principal-
Tabela 2. Outros genes utilizados na obteno de plantas transgnicas resistentes aos insetos (adaptado de Schuler et al., 1998)
GENES / PRODUTOS
INSETOS-ALVO
PLANTAS TRANSFORMADAS / PRODUTOS
CMe (cevada); CMTI (abbora); MTI-2 (mostarda);

PI-IV (soja); KTi3 e SKTI (soja); inibidor de
proteinase I e II (tomate); SI (animal);
1AT(animal)
Pot PI-I e Pot PT-II (batata); BPTI (pncreas
bovino);
C-II (soja); CpTI (cowpea)
Lepidoptera
fumo, arabidopsis, batata, alfafa, beladona,

tomate
Lepidoptera, Orthoptera
OC-1 (arroz)
anti-quimiotripsina (Manduca sexta), anti-elastase
(M. sexta), anti-tripsina (M. sexta)
Inibidores de alfa-amilase
WMAI-1 (cereais)
AI-Pv (feijo)
Lectinas
GNA (anmona), p-lec (ervilha)
Coleoptera, Homoptera
Homoptera
petnia, fumo, btula, alface, arroz, batata,

trevo branco
colza, lamo, batata, fumo, ma, alface, arroz,
morango, girassol, batata-doce, tomate
colza, lamo, fumo
algodo, fumo, alfafa
Lepidoptera
Coleoptera
fumo
feijo, ervilha, fumo
Lepidoptera, Homoptera
WGA (trigo), lectina (arroz), jacalin

Outros
BCH quitinase (feijo)
Quitinase (Manduca sexta)
Quitinase(tomate), Peroxidase(fumo)
TDC (crisntemo)
14K-CL (bifuncional) *
Lepidoptera, Coleoptera
uva, colza, batata, arroz, batata-doce, canade-acar, girassol, fumo, tomate

milho
Lepidoptera, Homoptera
Lepidoptera
Lepidoptera, Homoptera, Coleoptera
Homoptera
Lepidoptera, Coleoptera
batata
fumo
colza, fumo, tomate
fumo
fumo
Coleoptera, Lepidoptera
* bifuncional: inibidor de proteinases sernicas e de alfa-amilases

mente lepidpteros, tm adquirido resistncia s protenas Cry de B. thuringiensis, reforando assim o compromisso das
futuras pesquisas na identificao de novas toxinas inseticidas. Tambm so considerados importantes os estudos sobre
expresso gnica, espectro de ao e especificidade das protenas inseticidas, permitindo a disponibilizao freqente de
novas verses gnicas mais eficazes, mais
especficas e com vantagens ainda maiores sobre as prticas convencionais de
controle de pragas. Ainda para evitar ou
retardar o surgimento de resistncia de
insetos s plantas transgnicas, recomenda-se a adoo de tcnicas de manejo adequadas, sendo algumas j relatadas por
Peferoen (1997) h mais de uma dcada.
A aplicao integrada das plantas
transgnicas na agricultura convencional,
j ultrapassou a aceitao pblica da tecnologia dos transgnicos e atualmente representa uma realidade no incremento da
produo de alimentos de origem vegetal, com baixo custo e impacto ambiental.
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67
Pesquisa
EVOLUO E MANEJO
DA RESISTNCIA DE INSETOS
O conhecimento nos permite contornar muitos problemas, mas muitas
vezes, apenas nos possibilita adiar o inevitvel, transferindo para algum ponto futuro
os acontecimentos que buscamos com todo empenho evitar Vilmar Machado
ste artigo apresenta alguns aspectos relacionados evoluo e ao

manejo da resistncia do ponto
de vista da biologia evolutiva.
Aqui so abordados os mecanismos biolgicos envolvidos no
processo de adaptao dos insetos-praga aos agentes de controle e, tambm,
como o conhecimento destes se reflete
nas estratgias utilizadas para reduzir a
velocidade de evoluo da resistncia
s plantas transgnicas.
1.1 Introduo
Vilmar Machado
Bilogo (UNISINOS) e Mestre e Doutor em
Gentica e Biologia Molecular (UFRGS)
Lidia Mariana Fiza
68
A resistncia aos inseticidas um

fenmeno mundial e as estimativas atuais indicam que mais de 500 espcies
de artrpodes desenvolveram resistncia a um ou mais pesticidas (Georghiou
& Lagunes-Tejeda, 1991). A resistncia
tambm foi observada para uma variedade de produtos naturais e reguladores do crescimento de insetos. Dentre
o que aprendemos com a utilizao de
inseticidas qumicos foi que a capacidade de resposta adaptativa dos insetos quase inevitvel e ocorre relativamente rpido. Para muitos esse fenmeno parece ser surpreendente, mas
no devemos esquecer que uma das caractersticas mais relevantes dos organismos vivos sua capacidade de evoluir continuamente.
O processo de evoluo ocorre de
forma automtica - sem a influncia
de foras externas ou de um agente direcionador para compreender como as
mudanas evolutivas acontecem, precisamos analisar aspectos bsicos da biologia dos seres vivos os quais influen-
ciam a evoluo da diversidade biolgica possibilitando a adaptao aos diferentes ambientes e tambm respostas
especficas a presses seletivas mais diretas, como a predadores, parasitas ou
a agentes de controle desenvolvidos
pela espcie humana, como antibiticos ou inseticidas qumicos.
Nossa relao com insetos-praga,
bactrias e vrus, mesmo que parea estranha para alguns, pode ser analisada
como um processo de co-evoluo.
Nossas respostas, nesse processo, so
frutos da aplicao do conhecimento cientfico enquanto o que observamos,
atravs da evoluo da resistncia, no
. Indiferentes aos nossos esforos, populaes de insetos se reproduzem passando de uma gerao para outra as
informaes genticas. Esse processo de
reproduo no aleatrio: em cada
gerao alguns indivduos deixaro mais
descendentes que outros; o sucesso na
passagem dos genes para as prximas
geraes est associado presena de
caractersticas genticas que contribuem para a reproduo e a sobrevivncia s condies ambientais vigentes.
A descrio acima pode ser simples,
mas nos possibilita ter uma idia geral
do processo de evoluo da resistncia
aos antibiticos e inseticidas qumicos.
Para uma compreenso mais apurada
do processo podemos fazer, no mnimo, duas perguntas relevantes. Quais
as caractersticas importantes do material gentico passado de uma gerao
para outra no processo de evoluo?
Porque a sobrevivncia e a reproduo
no so aleatrias?
As respostas para estas perguntas
nos permitiro compreender, em linhas

gerais, a evoluo da resistncia aos inseticidas e antibiticos, e tambm analisar as possibilidades de evoluo da
resistncia s plantas geneticamente modificadas com genes de B. thuringiensis, denominadas plantas-Bt. Alm disso, ajudaro a compreender os procedimentos utilizados nas estratgias de
manejo da evoluo da resistncia.
1.2 Diversidade gentica nas
populaes e evoluo da resistncia
A evoluo de respostas adaptativas ocorre pelo efeito de seleo natural sobre a variao gentica existente
nas populaes. A aplicao repetida
de inseticidas do mesmo grupo qumico e modelo de ao favoreceram variantes genticas especficas nas populaes alvos levando substituio dos
indivduos susceptveis pelos indivduos resistentes. O gene para resistncia
que aumenta em freqncia numa populao pode se espalhar para outras
populaes atravs do fluxo gnico.
As diferenas genticas entre os indivduos de uma populao so consideradas a matria prima da evoluo,
existindo uma relao entre valor adaptativo mdio de uma populao e os
nveis de variabilidade que ela apresenta. Segundo o teorema fundamental de
Fisher (1930), a taxa de mudana evolutiva proporcional diversidade gentica existente nas populaes.
A diversidade gentica a base para
respostas s mudanas ambientais. A
importncia do estudo da variabilidade
pode ser compreendida pela quantidade de trabalhos sobre o tema, em especial procurando identificar os fatores
envolvidos na sua manuteno. Nos trabalhos com populaes naturais, a preocupao com a existncia da diversidade gentica aparece de formas variadas. Para programas de conservao e
manejo da vida silvestre, um dos temas
centrais a manuteno da variabilidade gentica em ambientes fragmentados, pois consenso que a persistncia
futura das populaes pode depender
da preservao de componentes especficos da diversidade gentica (Gilpin
& Sule, 1986; Meffe & Carrol, 1997).
Em programas de manejo e controle de
pragas e vetores, essa preocupao est
associada, por um lado, busca por linhagens de agentes de controle que
sejam especficas a uma determinada
praga (Potting et al. 1997; Vink et al.,
2003) e por outro, identificao de
variantes resistentes aos agentes de controle nas espcies consideradas pragas

ou vetores de doenas (Ofuya & Credland, 1995; Winder et al. 1997; Guirao
et al. 1997; Nicol et al. 1998; Szalanski
et al. 1999; 2000; Oliveira et al. 2001;
Birungi & Munstermann, 2002). A importncia e as implicaes de existncia de variao gentica nas populaes
naturais de pragas e vetores foram salientadas por Diehl & Bush (1984) em
seu trabalho sobre biotypes. Segundo os autores, o no reconhecimento
desse fator pode frustrar ou dificultar
programas de manejo e controle biolgico de pragas. Para Newman et al.
(1998), a diversidade gentica nas populaes um dos elementos que contribuem para reduzir a eficincia de programas de controle qumico e/ou biolgico. Essa tambm uma preocupao considerada por programas envolvidos no desenvolvimento de variedades de plantas resistentes a insetos-praga (Sardesai, 2000; Heinrichs, 2001).
A importncia da variabilidade gentica para programas de manejo e controle de pragas tem sido discutida por
dcadas, mas seu estudo tornou-se possvel apenas com o desenvolvimento de
marcadores baseados na anlise de
DNA. A aplicao desses marcadores
tornou-se uma ferramenta importante
para o estudo da dinmica e dos fatores que influenciam populaes naturais (Edwards, 1993; Smith & Wayne,
1996; Schierwater & Desale, 1998). Estudos detalhados sobre a importncia
da variabilidade gentica em insetospraga ou vetores so recentes e entre
eles destacam-se: Winder et al. (1997);
Guirao et al. (1997); Nicol et al. (1998);
Szalanski et al. (1999); Downie (2000);
Geurgas et al. (2000; 2002); Appleby &
Credland (2003).
Estudos recentes tm registrado variao intra-especfica na susceptibilidade a agentes de controle qumico e/ou
biolgico em vrias espcies, como por
exemplo, Microctonus aethiopoides,
Schizaphis graminium e Spodoptera
frugiperda. Em Microctonus aethiopoides (Hymenoptera: Braconidae), um parasitide utilizado em programas de
controle de biolgico de pragas, foram
identificadas linhagens (biotipos) adaptadas a hospedeiros diferentes, analisando-se a variao intra-especfica no gene
para Citocromo Oxidase I (Vink et al.,
2003). Uma das dificuldades no controle de Schizaphis graminium (Hemiptera: Aphididae), uma das mais importantes pragas de cereais do mundo, a
existncia de linhagens diferentes ao

longo da sua rea de distribuio. Para
esse inseto esto sendo realizados estudos visando selecionar marcadores
moleculares especficos para identificar
as diferentes linhagens e, desta forma,
melhorar as condies de controle utilizando agentes especficos para cada
uma (Aikhionbare & Mayo, 2000; Lopes da Silva et al., 2004). Em Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuide),
uma praga de vrias culturas importantes, lagartas coletadas em hospedeiros
diferentes apresentaram diferenas significativas na susceptibilidade a determinados inseticidas e a endotoxinas de
B. thruringiensis (Adamczyk, et al.,
1997).
Exemplos mais interessantes da diversidade gentica em insetos-praga
ocorre em Bemisia tabaci, considerada
por muitos a principal praga agrcola
do mundo, tendo sido registrada sua
ocorrncia em mais de 600 espcies de
plantas e, at o momento, so conhecidos mais de 20 biotipos (Oliveira et al.,
2001; Omondi el al., 2005; Carabali et
al., 2005). No Brasil, esse inseto conhecido como mosca-branca e os prejuzos caudados decorrem da atividade
de suco de seiva, injeo de toxinas
e pela transmisso de vrus de plantas.
A variabilidade gentica intra-especfica e a diversidade de hospedeiros esto entre os grandes desafios para o
controle desse inseto (Perring, 2001).
Os pargrafos acima reforam a idia
de que preciso levar em conta a diversidade gentica existentes nas populaes dos insetos-alvo em programas de manejo e controle. Vrios estudos demonstram que essa variabilidade
tambm est presente nos mecanismos
biolgicos que possibilitam a ao das
toxinas de B. thuringiensis.
A resistncia s toxinas de B. thuringiensis pode envolver: a no ativao da toxina, a imobilizao da toxina
na membrana peritrfica, sua incapacidade de ligar-se aos receptores da membrana, sua incapacidade de criar poros
na membrana do epitlio e sua baixa
eficincia pelo rpido reparo dos danos causados por ela s clulas afetadas (Ferre & Van Rie, 2002; Griffitts &
Aroian, 2005; Baxter et al. 2008).
O mecanismo mais comum envolvendo a resistncia s toxinas de B. thuringiensis a reduo na capacidade
de ligao aos receptores nas microvilosidades do intestino mdio dos insetos (Ferre et al., 1991; 2003; Pigott &
Ellar, 2007; Wang et al., 2007; Rodrigo-
69
Simn et al., 2008). Modificaes nos

genes que codificam os receptores para
as protenas Cry foram encontradas em
vrias espcies. Mutaes nos receptores para protena Cry1A esto envolvidas na resistncia em Heliothis virescens
(Gahan et al., 2001), Pectinophora gossypiella (Morin et al., 2003), Helicoverpa armigera (Xu et al., 2005; Luo et al,
2006) e P. xylostella (Ballester et al.,
1999). Em C. elegans foram identificados quatro genes diferentes para resistncia toxina (Griffitts et al., 2005).
Alm disso, foram descritos mecanismos
de resistncia a B. thuringiensis envolvendo genes diferentes em H. virescens,
P. xylostella (Jurat-Fuentes & Adang,
2006) e P. interpunctella (Herrero et al.,
2001). Em H. virescens em cada 1000
insetos 1,5 portador do gene para resistncia a B. thuringiensis (Gould et
al., 1995; 1997).
As informaes acima demonstram
claramente a presena de genes para
resistncia s toxinas de B. thuringiensis em populaes de vrias espcies
mesmo que em baixa freqncia. preciso destacar que at o momento no
foi registrada nenhuma populao natural resistente a essas toxinas. O que
necessrio para que estes genes aumentem em freqncia nas populaes naturais? A resposta simples : que as aplicaes das toxinas B. thuringiensis tornem-se numa presso de seleo constante e intensa.
1.3 Fluxo gnico
Estudos sobre a estrutura gentica
de populaes tm demonstrado, ao
longo do tempo, que as espcies raramente so constitudas por populaes
nicas e panmticas; pelo contrrio, diferenas genticas so encontradas entre as populaes. Essas diferenas so
componentes importantes da diversidade gentica da espcie. Em geral, a troca de genes ocorre com maior probabilidade entre populaes prximas geograficamente do que entre populaes
mais distantes, sendo influenciada pela
estrutura geogrfica e espacial das populaes. Portanto, o estudo da estrutura gentica das populaes um componente importante de programas de
manejo e controle de pragas, pois podem fornecer informaes sobre nveis
de variabilidade gentica, graus de diferenciao entre as populaes e padres de fluxo gnico. Alm disso, pode
possibilitar o monitoramento das mu-
70
danas na freqncia de genes especficos.

A caracterizao gentica das espcies alvo, ao longo de sua rea de
distribuio, um dos fatores que
podem contribuir para o sucesso de
programas de controle biolgico
(Hoelmer & Kirk, 2005). O fluxo
gnico um componente importante para as estratgias de manejo da
evoluo da resistncia e seus efeitos podem ter reflexos em pequena
e grande escala.
Em pequena escala (populaes
locais) espera-se que ele contribua
para diluio da resistncia levando
ao cruzamento entre insetos resistentes e no resistentes. Sua intensidade tem efeitos na taxa de aumento da freqncia dos genes para resistncia. A capacidade de disperso
de um inseto praga relevante para
definio do tamanho e distribuio
das reas de refgio, uma vez que
estas so os locais para manuteno
de indivduos susceptveis possibilitando o fluxo de genes no-resistentes para grupos de indivduos resistentes nas reas de plantas-Bt (Vacher et al., 2006).
Em grande escala, o fluxo gnico pode determinar a possibilidade
dos genes para resistncia se espalharem ao longo da rea de distribuio geogrfica da espcie. Esse
fenmeno influencia a velocidade
em que uma adaptao que surge
numa populao local pode se espalhar.
Os possveis impactos do fluxo
gnico na evoluo da resistncia
torna fundamental dispor de estudos
precisos sobre a estrutura gentica
das populaes de insetos-praga visando estimar seu impacto em populaes locais e tambm em longas distncias. Especialmente no
caso de pragas com ampla rea de
distribuio que atacam culturas diferentes.
Estudos de estrutura gentica tm
potencial para responder questes
relevantes para o manejo destas espcies, como por exemplo: os insetos que atacam plantas diferentes formam linhagens distintas? Qual o grau
de diferenciao gentica entre as
linhagens? Quando as linhagens
ocorrem na mesma rea, os cruzamentos so aleatrios ou no? Qual
a capacidade de disperso a longas
distncias? A reproduo ocorre an-
tes ou depois da disperso dos insetos?

1.4 Efeito de seleo e
evoluo da resistncia
A seleo natural pode ser definida
como diferenas na taxa de reproduo e/ou sobrevivncia entre indivduos com caractersticas distintas. De uma
maneira mais simples, os indivduos
com as melhores respostas aos problemas de sobrevivncia e reproduo
deixam mais genes para as prximas
geraes. O efeito da seleo natural
sobre as populaes aumenta a freqncia dos alelos com resposta positiva,
gerando uma mudana adaptativa. De
acordo com a hiptese da rainha vermelha (Van Valen, 1973) preciso evoluir (adaptar-se) continuamente para
no ser superado pelos seus competidores.
A capacidade de evoluir uma caracterstica dos organismos vivos, mesmo que no processo ocorram extines
de muitas linhagens, mas a vida no
planeta Terra tem mantido sua capacidade de encontrar novos caminhos,
reinventando a si mesma de diferentes
maneiras.
Nossa relao com os insetos-praga
apenas parte do processo e, por maior que seja nosso empenho, no conseguimos super-las; at hoje apenas
nos esforamos para reduzir seu impacto sobre nossa existncia. Essa relao
iniciou quando inventamos a agricultura e desde ento estamos envolvidos
numa corrida ao armamento. Nossas
armas envolvem os diferentes mtodos
de controle, com destaque para a aplicao em massa de produtos qumicos
sintticos aps a segunda guerra mundial e, mais recentemente, o desenvolvimento das plantas-Bt.
A crescente utilizao de B. thuringiensis como biopesticidas e a ampliao das reas de plantio com plantasBt certamente aumentam a presso de
seleo desse agente sobre as populaes alvo.
O primeiro formulado comercial de
B. thuringiensis surgiu na Frana, em
1938 e sua introduo nos Estados Unidos ocorreu em 1950. Desde ento essa
bactria vem sendo utilizada amplamente para controle de pragas (Sayyed e
Wright, 2002). Em 1996, foram comercializados e plantados algodo-Bt e
milho-Bt em milhares de hectares nos
Estados Unidos (Gould, 1998). A partir
de ento, foram produzidas outras plan-
tas com genes B. thuringiensis, e a rea

plantada foi ampliada, estendendo-se
para outros continentes. Em 2002 foram plantados, no mundo, 14 milhes
de hectares apenas de algodo-Bt e milho-Bt (James, 2002; Bourguet et al.,
2005).
A expresso das toxinas de B. thuringiensis nas plantas transgnicas
considerada um dos maiores avanos
no uso de biopesticidas. Segundo James (2007), as lavouras de plantas-Bt
aumentaram anualmente, atingindo
114,3 milhes de hectares no mundo,
em 2007.
As informaes disponveis indicam
claramente que as condies para evoluo da resistncia contra as toxinas
de B. thuringiensis existem, ou seja, as
populaes apresentam genes para resistncia (mesmo que em freqncia
baixa) e a presso de seleo aumenta
anualmente.
Cientes desta situao os profissionais da rea de manejo e controle de
pragas colocaram em prtica o que chamamos de manejo da resistncia, isto
, um conjunto de procedimentos que
tem por objetivo retardar ao mximo o
surgimento de populaes resistentes
em campo.
1.5 Manejo da Evoluo
da Resistncia
Uma populao se torna resistente
quando a maioria dos insetos susceptveis ao mtodo de controle utilizado foi
removida. A maior taxa de cruzamentos entre insetos portadores do gene
para resistncia tornar o controle mais
difcil a cada gerao.
No intuito de eliminar ou retardar o
aumento na freqncia dos genes para
resistncia s toxinas de B. thuringiensis em populaes de insetos-alvo, foram desenvolvidas vrias estratgias de
manejo da evoluo da resistncia. A
finalidade destas estratgias reduzir a
presso de seleo, diminuindo a velocidade de crescimento da populao de
insetos resistentes.
A estratgia mais utilizada no manejo da resistncia denominada de
altas doses/refgio estruturado e fundamenta-se em modelos tericos e testes experimentais realizados em pequena escala (Georghiou & Taylor, 1977;
1999; Gould, 1998; Peck et al., 1999;
Caprio, 2001, Onstad et al., 2002; Liu &
Tabashnik, 1997; Shelton et al., 2000;
Wenes et al., 2006).
As premissas dessa estratgia so:

(i) o gene para resistncia ocorre em
freqncia baixa nas populaes;
(ii) as quantidades de toxinas de B.
thuringiensis produzidas pelas plantas
so altas o suficiente para eliminao
da populao os insetos homozigotos
no resistentes e os heterozigotos resistentes;
(iii) os indivduos resistentes (homozigotos) que nascem nas reas com
plantas-Bt cruzam aleatoriamente com
os indivduos no resistentes que nascem nas reas dos refgios.
No manejo da resistncia, o refgio
a rea na qual no so cultivadas plantas-Bt e sua finalidade manter na populao indivduos susceptveis s toxinas de B. thuringiensis, ou seja, aqueles que no possuem genes para a resistncia. Sua contribuio a produo de insetos adultos susceptveis s
toxinas de B. thuringiensis para cruzarem com insetos homozigotos resistentes, diluindo, dessa forma, a resistncia na populao. A disperso para fora
das reas dos refgios necessria para
que os cruzamentos aconteam.
As dimenses e a distribuio das
reas de refgio so definidas com base
em estudos tericos e experimentos de
campo podendo variar de acordo com
a cultura ou praga em questo. A rea
dos refgios para milho-Bt varia entre
20 e 50%; simulaes de computador
indicam que reas menores podem acelerar a evoluo da resistncia. Para algodo-Bt, por outro lado, recomendase que 5 a 20% da rea de plantio seja
destinada ao refgio (Technology Use
Guide, 2007-2008).
So fatores relevantes na definio
da rea de refgio: a capacidade de disperso da praga, sua biologia reprodutiva e seus hbitos alimentares. A distribuio dos refgios tambm procura
reduzir a possibilidade de cruzamentos
entre indivduos homozigotos para o
gene da resistncia (Peck et al., 1999;
Caprio, 2001; Ives & Andow, 2002; Vacher et al., 2006; Tyutyunov et al., 2007;
2008; Hanur, 2008).
A expresso doses altas significa
que as plantas vo produzir quantidades das toxinas de B. thuringiensis suficientes para eliminar da populao os
indivduos que possuem uma nica cpia do gene para resistncia, ou seja,
os heterozigotos. Por definio, dose
alta, aquela suficiente para matar mais
do que 95% dos insetos heterozigotos
(Georghious & Taylor, 1977; Roush,
1994; Gould, 1998).

Essa estratgia torna a resistncia uma caracterstica funcionalmente recessiva, uma vez que apenas os
portadores de duas cpias do gene
sobrevivem s doses de toxina produzida pelas plantas-Bt (Tabashnik
& Croft, 1982). Nas reas com plantas-Bt sobrevivero apenas os raros
portadores de duas cpias do gene
para resistncia, ou seja, os homozigotos recessivos. Os cruzamentos
aleatrios entre os raros indivduos
resistentes nas reas com plantasBt e os indivduos no resistentes
dos refgios, produziria indivduos
susceptveis que seriam eliminados
quando se alimentassem de plantasBt (Gould, 1998; Vacher et al., 2006).
Na teoria, a estratgia altas doses/refgios estruturados funciona
muito bem, ou seja, dentro das premissas ela realmente reduz a velocidade de aumento na freqncia do
gene para a resistncia nas populaes aumentando, com isso, o tempo de uso das plantas-Bt. O mundo
real, porm, tem diversas maneiras
de se desviar das aceitaes do modelo.
Estudos sobre o padro de herana da resistncia indicam que
outros mecanismos genticos podem
ocorrer, como por exemplo, dominncia e herana polignica (Heckel
et al., 2007). Alm disso, os cruzamentos podem no ocorrer aleatoriamente; para isso, basta que existam diferenas na velocidade de desenvolvimento entre indivduos resistentes e susceptveis. A assincronia no desenvolvimento pode determinar uma freqncia maior de
cruzamentos entre indivduos resistentes, o que pode acelerar a evoluo da resistncia (LIU et al., 2000;
Medvinsky et al., 2007).
1.6 Consideraes
A espcie humana, no tem muitas respostas para explicar como a
vida surgiu no planeta Terra, mas
ao longo do tempo fez muitas descobertas sobre as foras envolvidas
no processo de evoluo da biodiversidade e nas mudanas adaptativas nas diferentes linhagens de organismos.
A evoluo um processo complexo, influenciado pela mutao,
seleo natural, fluxo gnico, deri-
71
va gentica e sistema de cruzamentos. As interaes entre estes fatores

so complexas e de difcil compreenso. A construo de modelos para
simular o efeito destes fatores permite analisar parcialmente estas interaes. Atualmente em muitos casos
temos respostas relativamente precisas de como as coisas aconteceram,
por exemplo, sobre a evoluo da resistncia aos inseticidas e/ou antibiticos.
Podemos fazer muitas previses,
porm estas esto envolvidas num
mundo de incertezas, determinadas
pela presena do acaso ou das interaes que nossos modelos no podem estimar, pois so uma simplificao do mundo real.
Muitos pesquisadores acreditam
que o surgimento de linhagens resistentes a agentes de controle qumico
e/ou biolgico em populaes naturais no uma questo de se vai
acontecer, mas sim, quando ir
ocorrer. Estas preocupaes so vlidas tambm para as plantas-Bt (Wright et al., 1997; Gould, 1998; Tabashnik & Carrire, 2004, Tabashnik et al.,
2004 e 2008; Bourguet et al., 2005).
Quando analisamos um fenmeno biolgico do ponto de vista da teoria da evoluo, as unidades de tempo devem ser pensadas em perspectivas diferentes; estas envolvem geraes que se sucedem ao longo do
tempo. As unidades de tempo envolvem perodos maiores do que aqueles que usamos para datar a histria
da civilizao, ou seja, 50 ou mesmo
100 anos, podem ser pouco relevantes.
As constantes pesquisas por novas toxinas e/ou a produo de plantas com capacidade de expressar mais
do que uma toxina um indicativo
de nossa conscincia de que as plantas-Bt cultivadas atualmente podem
ser sucessos temporrios.
No momento, nossa melhor alternativa continuar aplicando as estratgias de manejo da evoluo da
resistncia e aprimorar as pesquisas
por novos mtodos para reduzir os
impactos das pragas sobre a produo de alimentos.
Devemos ter em mente, porm,
que essa relao evolutiva s poder
terminar com a extino de um dos
envolvidos, mas dada dinmica do
processo evolutivo, podemos afirmar
que novas relaes iro surgir.
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Nota: A Revista Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento,

Dr. Aluzio Borm - Gentica e Melhoramento Vegetal

TOXINAS DE BACILLUS THURINGIENSIS

TOXICOLOGIA DE BACILLUS THURINGIENSIS S PRAGAS AGRCOLAS

TOXICOLOGIA DE BACILLUS THURINGIENSIS S PRAGAS URBANAS E VETORES

TOXICIDADE DE BACILLUS THURINGIENSIS EM ORGANISMOS NO-ALVO

PLANTAS TRANSGNICAS QUE SINTETIZAM TOXINAS DE BACILLUS THURINGIENSIS E OUTRAS

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 38

Andresa Patrcia Regert Lucho

ntre os artrpodes, os insetos so a maioria das espcies animais e tm importncia

Leila Lucia Fritz

quitos, percevejos e outros insetos transmissores

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 38

Lidia Mariana Fiuza

Figura 1. Abundncia de insetos e inimigos naturais em lavouras de arroz

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 38

poros e a produo de toxinas e enzimas determinam as seguintes espcies como promissoras

Figura 2. Araneofauna em sistema de cultivo orgnico e convencional de

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 38

Figura 3. Bacillus thuringiensis

Tachinidae: parasitides (Ver Tabela 3)

ORDEM HEMIPTERA - percevejos, cigarras, cigarrinhas, pulges, cochonilhas, psildeos e moscas-brancas

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento - n 38

ORDEM HYMENOPTERA abelhas, formigas, vespas, vespinhas

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Tabela 1: Alguns insetos vetores de fitopatgenos

Acrogonia citrina (Hem.:

Bactria - Xylella fastidiosa

Clorose variegada dos citros (CVC)

Cucumber mosaic virus (CMV)

Bean golden mosaic virus (BGMV)

Mosaico dourado do feijoeiro

Bean rugose mosaic virus (BRMV)

Mosaico rugoso da soja

Enfezamento vermelho do milho

Bactria - Candidatus liberibacter spp.

Greening ou Huanglongbing (HLB)

Bactria - Xylella fastidiosa

Clorose variegada dos citros (CVC)

Fumo, tomate e outras solanceas

Fumo, tomate e outras solanceas

Fungo: Ceratocystis fimbriata

Papaya ringspot virus type P (PRSV-P)

Bactria - Xylella fastidiosa

Clorose variegada dos citros (CVC)

Grapevine leafroll-associated virus

Soybean mosaic virus (SMV)

Mosaico comum da soja

Fumo, tomate e outras solanceas

Bemisia tabaci (Hem.:

Kimati et al., 1997; Gallo et al., 2002; Oliveira et al., 2003.

Tabela 2: Alguns insetos predadores e suas presas

lagartas, ovos, tripes, pulges

pulges, cochonilhas, moscas-brancas

Tabela 3: Alguns insetos parasitides e seus respectivos hospedeiros

Vespa-de-uganda Prorops nasuta

Macieira e outras rosceas

Diversas culturas, como milho,