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galato etlico, um limpador de

perxido de hidrognio, que inibe a


sinalizao de perxido de hidrognio
induzida por lisozima in vitro, inverte
hipotenso no choque sptico canino
Steven N. Mink , Hans Jacobs , Jose Gotes , Krika Kasian , Zhao-Qin Cheng
Journal of Applied Physiology Publicado 01 de fevereiro de
2011 Vol.110 no.2,359-374 DOI:10,1152 / japplphysiol.00411.2010

artigo

Figuras & Dados

informaes

E-letras

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abstrato
Embora o perxido de hidrognio (H 2 O 2 ) uma espcie de oxignio reactivo
bem descritos que conhecida pelos seus efeitos citotxicos e de leses de
tecidos associada, H 2 O 2 foi recentemente estabelecido como uma molcula
de sinalizao importante. Ns anteriormente demonstrado que a lisozima
(LZM-S), um mediador da septicemia que libertado a partir de leuccitos,
poderia produzir vasodilatao numa preparao de artria cartida constrio
pela fenilefrina por H 2 O 2 a sinalizao. Descobrimos que LZM-S poderia gerar
intrinsecamente H 2O 2 e que esta gerao activada H 2 O 2 vias
dependentes. No presente estudo, utilizou-se esta preparao artria cartida
como um ensaio biolgico para definir os antioxidantes que podem inibir efeito
vasodilatador do LZM-S. Em seguida, determinar se este antioxidante poderia
reverter a hipotenso que se desenvolveu em uma Escherichia coli modelo de
bacteremia. Dos muitos antioxidantes testados, verificou-se que acetato de
galato (EG), um composto fenlico nonflavonoid, era favorvel na inibio da
vasodilatao induzida por LZM-S. No nosso E. colimodelo, descobrimos que EG
reverteu a hipotenso que se desenvolveu neste modelo e disfuno de rgosalvo atenuada. Por H fluoromtrico 2 O 2 de ensaio e tcnicas de sondas
electroqumicos, que mostrou que, por exemplo podia limpar H 2 O 2 , e que
pode reduzir o H 2 O2 a produo em sistemas modelo. Estes resultados
mostram que, por exemplo, um anti-oxidante que foi encontrada para eliminar
H 2 O 2 , in vitro, foi capaz de atenuar disfuno cardiovascular num canino na
preparao in vivo. Os antioxidantes tais como, por exemplo pode ser til no
tratamento de deteriorao hemodinmica no choque sptico.
, perxido de hidrognio (H 2 O 2 ) uma espcie de oxignio
reactivo bem descritos que conhecida pelos seus efeitos citotxicos
associados e leso de tecido ( 6 ). Nos ltimos anos, no entanto, H 2 O 2 foi
tambm estabelecida para ser um regulador importante da transduo de sinal
eucariota ( 2 , 6 , 41 ). Em organismos multicelulares, H 2 O 2 foi mostrado para
activar as vias de sinalizao para estimular a proliferao celular,
diferenciao, migrao, apoptose, e a funo vascular. H 2 O 2 gerado em
resposta a vrios estmulos, incluindo citocinas e factores de crescimento, a
partir de anio superxido, a qual produzida pela reduo parcial do oxignio
NO CHOQUE SPTICO

pelos cytochrome- c oxidase na mitocndria, e da NADPH-oxidases associada


membrana (entre outros mecanismos 6 ). Em um processo recentemente
descrito, Wentworth e colegas ( 35 , 43 - 46 ) mostraram que os anticorpos,
independentemente da origem ou especificidade antignica, pode
intrinsecamente geram H 2 O 2 a partir de oxignio singuleto
( 1 O 2 *). Demonstraram ainda que este processo cataltico e que os
anticorpos utilizar H 2 O como uma fonte de electres em reaces que,
eventualmente, levar formao de H 2 O 2 . Wentworth e colegas mostraram
tambm que outras protenas tais como ovalbumina de ovo do pintainho e lactoglobulina, foram capazes de produzir intrinsecamente H 2 O 2 ( 43 ).
Das muitas protenas nonimmunoglobulin que so libertados no choque sptico
e que poderia gerar H 2 O 2 , que anteriormente encontraram que a lisozima-C
(LZM-S) pode tambm gerar intrinsecamente H 2 O 2 ( 24 ). LZM-S libertado a
partir de leuccitos do bao e outros rgos em sepsis ( 29 ) e tem sido
demonstrado para produzir vasodilatao e depresso miocrdica em modelos
caninos de choque sptico ( 19 , 24 de - 30 de ). Para produzir a depresso do
miocrdio, LZM-S liga-se ao endotlio endocrdico (EE). Esta ligao resulta na
liberao do endocrdio de xido ntrico (NO) ea subsequente activao da via
guanilato ciclase do miocrdio.Demonstramos ainda que esta ligao por LZM-S
para o EE pode ser inibida tanto in vitro e em preparaes in vivo pelos
compostos que inibem a LZM-S local glico-hidrolase da ( 19 , 30 ), tais
como N , N ', N "- triacetylchitotriose e N , N '-diacetylchitobiose ( 39 ). Por outro
lado, a vasodilatao induzida LZM-S endotlio e NO independente
( 27 ). Embora LZM-S ainda activa a guanilil-ciclase suave muscular para
provocar vasodilatao, este efeito no pode ser impedido pelos inibidores
competitivos acima do local activo das LZM-S. A razo para as diferentes
propriedades de ligao de LZM-S nas duas condies ainda no est clara.
Uma vez que a vasodilatao sistmica um factor importante que leva
hipotenso que ocorre no choque sptico ( 1 ), seria importante para identificar
aqueles compostos que tambm possam bloquear a actividade vasodilatadora
das LZM-S em adio inibio da aco depressora do miocrdio do LZM-S. No
presente estudo, procurou-se identificar inibidores de LZM-S actividade
vasodilatadora das em nossa preparao artria cartida contraiufenilefrina. Especificamente, voltada para aqueles compostos que interferem
com a capacidade de LZM-S para gerar H 2 O 2 .Em seguida, determinar se esta
substncia poderia reverter a vasodilatao sistmica que ocorre em nosso
canino Escherichia coli modelo de choque sptico.
MTODOS
Os experimentos caninos foram aprovados pelo Comit Animal Care da
Universidade e em conformidade com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais
de Laboratrio publicado pelos Institutos Nacionais de Sade ( 33 ).
Preparao Anel Cartida
Em experincias iniciais, uma preparao de anel artria cartida foi utilizado
como um bioensaio para determinar aqueles compostos que possam inibir a
vasodilatao induzida LZM-S ( 27 ).Segmentos de artria cartida interna (4
cm de comprimento) foram removidos a partir de ces sem raa definida (15-25
kg) que foram previamente anestesiados com pentobarbital (45 mg / kg). As
artrias foram dissecados isentos de tecidos circundantes e cortado para obter
anis ~ 4 mm de comprimento e 4 mm de dimetro externo. Os anis foram
esticados ao comprimento ptima (~ 4 g) e colocada num banho de rgos de
10 ml cheio com uma soluo fisiolgica tamponada com HEPES (em mmol / L:
118 de NaCl, 2,5 de CaCl 2 , 1,2 MgCl 2 , 1,4 KH 2 PO 4 , 4,9 de KCl, 25 HEPES, 11
glucose e). O banho foi borbulhada com 100% de O 2 e ajustado a 37 C com
um pH de 7,35. Neste protocolo, os anis cartidas foram inicialmente
preconstricted com fenilefrina (10 -5 mol / l) ( 27 ), aps o qual medies foram
determinadas a ~ 20 min depois da instilao de fenilefrina quando um

patamar estvel foi alcanado. Neste estudo, as medies foram obtidas em 5


min, 15 min e 30 min aps a instilao LZM-S (ver abaixo).
LZM-S Preparao
O LZM-S humana que foi utilizada neste estudo foi obtida a partir de EMD
Biosciences (San Diego, CA). Esta preparao tem apenas tampo de NaCl e
acetato de sdio adicionado para a preparao liofilizada. Em experincias
anteriores, no havia nenhuma evidncia para sugerir que outros do que LZM-S
substncias estavam presentes no nosso preparaes LZM-S humanos e
caninos para causar vasodilatao na preparao do anel da artria cartida
( 24 , 27). A concentrao plasmtica de LZM-s, medida no nosso modelo in
vivo spsis ~ 10 -6 mole / L, e este valor aproximado de humanos LZM-S (1,2 x
10 -6 mol / L) foi utilizado nesta preparao banho de rgos. Desde que foi
encontrado anteriormente que LZM-S poderia vasodilatao muito pequenas
artrias mesentricas constrio (~ 1 mm de dimetro), bem como, os
resultados na preparao artria cartida seria representativo do que
encontrado nas artrias menores.
Preliminares rastreados compostos para inibir a vasodilatao LZM-SInduced
Os vrios compostos antioxidantes que foram inicialmente consideradas sem
efeito includo limoneno, di-quercetina, guaiacol, esqualeno, a curcumina, o
cido elgico, galato epicathechin do ch verde, galato de catequina,
epigalocatequina galato de ch verde, polifenis 60 do ch verde, crocin,
luteolina, ascorbato de sdio, N -acetylcysteine (NAC), glutationa reduzida,
cido glico, galato de propilo, benzoato de sdio, e vitamina E. Em contraste, o
composto fenlico nonflavonoid e compostos relacionados que incluem acetato
de galato de (EG), gaiato de metilo, e acetato 3,4-di-hidroxibenzoato todos
bloqueou o efeito de LZM-S na produo de vasodilatao nesta preparao da
artria cartida (todos da Sigma, Oakville, oN, Canad). Neste caso, uma
relao dose-resposta foi determinada para estes ltimos compostos na
preparao cartida banho de rgos. Porque EG (ver Fig. 9 em DISCUSSO )
parecia ter o melhor perfil em termos de preveno de efeitos induzidos LZM-S,
este composto foi utilizado em nosso trabecular do ventrculo direito (RVT) O
estudo in vitro e em nosso estudo in vivo.
Para determinar se Ethyl Galato pode tambm inibir Miocrdio
Depresso na Preparao RVT
Esta preparao banho de rgos RVT foi descrito anteriormente
( 14 , 24 ). Resumidamente, o corao foi removido a partir de ces sem raa
definida (15-25 kg), previamente anestesiados com pentobarbital. Trs ou
quatro trabculas ventricular direita fina (<1 mm de dimetro; comprimento de
3,5 mm) foram colocadas em respectivos banhos de rgos de 5 ml. Os banhos
foram mantidos a 37 C, foram borbulhado com 95% de O 2 e 5% de CO 2 , e
continham uma soluo de Krebs-Henseleit (em mmol / L: 118 de NaCl, 4,7 de
KCl, 2,5 de CaCl 2 , 1,2 MgSO 4 , 1,4 KH 2 PO 4 , 25 NaHCO 3 , e 11 de glucose).
A estimulao eltrica atravs de eletrodos bipolares pontuada de platina com
pulsos retangulares (durao de 1 ms) a uma intensidade de 50% acima do
limiar foi entregue em intervalos de 2,000 ms ( 14 ). O efeito de EG (gama 5 x
10 -5 -10 -8 mol / l) na inibio da LZM-S induzidas por (1 10 -6 mol / L)
depresso do miocrdio foi examinada a 10 min e 20 min aps a
instilao. Contraco isomtrica medido em gramas foi convertida em
unidades de tenso (mN / mm 2 ) no qual gramas por rea da seco
transversal foi multiplicada pela acelerao devida gravidade, 9,80 cm /
s 2 . rea transversal foi determinada como peso muscular / [gravidade
especfica (1,06 g / ml) / comprimento do msculo] ( 24 ).

No Estudo Vivo
modelo de E. coli e preparao animal.
A E. coli modelo utilizado nestes estudos era idntico ao que foi anteriormente
descrito ( 14 , 22 ,26 , 30 ). Sepse foi induzida pela infuso intravenosa de
10 10 unidades formadoras de colnias de viver E. coli (designao 0111:
B4). As bactrias foram suspensas em soluo salina normal e foram dadas ao
longo de 0,5 h. Uma infuso constante de ~ 5 x 10 9 unidades formadoras de
colnia / h de E. coli foi em seguida mantida durante a durao do estudo.
Aps induo com tiopental sdico (20 mg / kg iv), os animais (16-27 kg) foram
constantemente infundidos com citrato de sufentanilo (0,05-0,3 ug / min) e
midazolam (5 ug kg -1 min -1 ) ( 26 ).Taxas de drogas foram ajustados
conforme necessrio para abolir o reflexo palpebral. Aps a intubao traqueal,
os animais foram ventilados mecanicamente (volume corrente de 20 ml / kg) na
posio supina. A taxa de ventilao foi definido inicialmente para manter o pH
no sangue ~7.35 e foi aumentada conforme necessrio para inverter a acidose
metablica que se desenvolveu durante o curso do estudo. Aproximadamente
100% de oxignio foi inspirado, de modo que a hipoxemia no afetaria os
resultados do estudo.
Sob condies estreis, um cateter com ponta de termistor foi avanada
atravs de um introdutor inseridos percutaneamente (Arrow International,
Reading, PA) a partir da veia jugular direita para a artria pulmonar para medir
a presso arterial pulmonar mdia (PPA), a presso capilar pulmonar (Ppw ),
presso mdia do trio direito (PAD), e termodiluio dbito cardaco (CO)
(Edwards Lifesciences, Irvine, CA). Um introdutor semelhante e um cateter de
lmen triplo foram posicionados na veia jugular esquerda para a administrao
de soluo salina intravenosa, a E.coli infuso, e o tratamento com placebo ou
drogas (ver abaixo). A produo de urina foi determinada atravs de um cateter
colocado na bexiga atravs da uretra. Outro cateter de polietileno foi via
percutnea colocado na artria femoral para medir a presso arterial mdia
(PAM) e para obter amostras de sangue para arterial P O 2 , P CO 2 , pH,
hematcrito, eletrlitos e creatinina srica, testes de funo heptica, as
concentraes de lactato , e outras medies (ver abaixo). Os testes
laboratoriais clnicos foram realizados pelos laboratrios de qumica no Centro
de Cincias da Sade.
Todos os cateteres vasculares foram conectados a transdutores de presso
(Cobe, Argon dispositivos mdicos, Atenas, TX), foram referenciados em relao
ao trio esquerdo, e foram conectados a um gravador de grficos (Astro-Med,
West Warwick, RI). A frequncia cardaca (FC) foi medido a partir do
rastreamento gravador. volume sistlico (SV) foi calculada como CO /
HR. resistncia vascular sistmica (RVS) foi calculado a partir de [(MAP - RAP) /
CO] 80. MAP foi o nosso principal ndice do desempenho cardaco e o ponto
final hemodinmico primrio escolhido. Hemodinmica foram determinadas a
um Ppw constante durante o curso do estudo. A linha de base geralmente Ppw
mdia ~8-10 mmHg, e uma soluo salina normal foi dado como necessrio
para manter Ppw constante durante o perodo experimental. trabalho acidente
vascular cerebral (SW) foi calculado a partir SV (MAP - Ppw).
Protocolo experimental.
O principal objectivo era determinar se EG poderia reverter a queda da PAM,
uma vez que isso ocorreu neste modelo bacteremic sepse. EG foi iniciado aps
a presso MAP caiu ~ 40% do valor basal. Este declnio no MAP no foi sensvel
a infuso de volume (isto , soluo salina normal) para retornar Ppw ao valor
basal. Quatro grupos foram examinados, que incluiu dois grupos spticos e dois
grupos no sptico. Nos dois grupos spticos, os animais foram distribudos
aleatoriamente para receber EG e infuso de volume ou tratamento placebo e
infuso de volume.soro fisiolgico foi o diluente para EG e foi dado como o

tratamento placebo. Nos dois grupos no sptico, um recebeu EG enquanto o


outro recebeu tratamento com placebo. Nos grupos no sptico, apenas o
volume de manuteno da anestesia e para drogas com placebo foi dada ao
longo do curso do experimento.
EG foi infundida com o objetivo de reduzir as concentraes plasmticas no 10 5 mol gama / l com base em nosso trabalho anterior neste modelo bacteremia
( 30 ) (ver DISCUSSO ). EG foi administrado na forma de uma soluo em que 2 g
foram dissolvidos em 250 ml de soluo salina normal. No incio, 80 mg / kg EG
foi infundida durante um perodo aproximado de 1 h, aps o que a taxa foi
rejeitado a 40 mg kg -1 h -1 e pode ser subsequentemente titulada, no sentido
descendente, desde que o MAP permaneceu em valor basal. Medies
hemodinmicas foram obtidas na linha de base, uma vez que o choque sptico
foram obtidos, e a 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 5 h e depois do tratamento. Nos grupos no
sptico, o choque condio simulada representa o tempo mdio para o
desenvolvimento de choque encontrados nos grupos spticos (~ 5 h). Em
ambos os grupos, para alm das medies hemodinmicas, qumicas do sangue
e medies de gs no sangue arterial foram obtidas na linha de base, na
condio de choque sptico / simulada, e em 3 h e 5 h aps o tratamento. Os
animais foram mortos aps a concluso dos estudos.
As concentraes sricas de EG foram determinados por tcnicas de
espectroscopia (MS) cromatografia lquida (LC) -massa pela matriz bioanaltico
Laboratories (Woodbridge, CT). A substncia a analisar foi extrada a partir do
plasma por precipitao da protena. Cinquenta microlitros de padres de
calibrao de matriz em branco, controlos de qualidade e as amostras de
estudo foram pipetados para uma placa de 96 poos. Cento e cinquenta
microlitros de padro interno contendo acetonitrilo foi adicionada a todas as
amostras para facilitar a precipitao da protena. A placa foi vrtice-misturouse durante 3 minutos e depois deixou-se repousar durante pelo menos 30 min
no refrigerador (2-8 C). As amostras foram ento centrifugadas durante 10
min. O sobrenadante (130 ul) de cada amostra foi ento transferida para uma
nova placa de 96 poos, e 130 ul de fase mvel A (95% de H 2 O, 5% de
CH 3 CN, 0,1% de cido frmico) foi adicionado ao sobrenadante e vrticemisturado durante 3 min. Subsequentemente, as solues foram centrifugadas
durante 10 min, e 20 ul de cada sobrenadante foi injectado no sistema de MS
HPLC-tandem para quantificao (coluna analtica, SymmetryShield RP8 3,5 m,
2,1 x mm 50; bomba de HPLC Waters 1525 binrio a 0,35 ml / min; Quattro
UltimaTM Tandem MS / MS, Waters Micromass). As curvas padro foram
calculadas a partir das propores de analito / padro interno para EG dos
padres de calibrao e as suas concentraes nominais de analito.As amostras
desconhecidas foram calculadas a partir de regresso quadrtica onde uma
curva ponderada, 1 / x , foi usado. Os dados foram registados com MassLynx
verso 4.1, e todos integrao foi realizada com MassLynx verso 4.1. A gama
de concentraes detectadas no soro canino demonstrou uma funo de
resposta com um coeficiente de correlao ( r 2 ) ao longo de 0,99.
As amostras de soro a partir de cada um dos quatro grupos foram tambm
analisadas para a H 2O 2 concentraes na linha de base, na condio de
choque sptico / simulada, e aos 3 e 5 horas aps o tratamento por um ensaio
fluoromtrico, tal como descrito mais abaixo. Alm disso, desde EG pode ter
alterado o estresse oxidante relacionada formao de NO e metabolismo, as
medies de soro de nitrito no total (aps a converso de nitrato em nitrito por
nitrato redutase) foram comparadas por um ensaio colorimtrico entre os
grupos spticos EG-tratados e no tratados (Cayman Chemical , Ann Arbor, MI;.
kit nenhuma 78001). Alm disso, as concentraes sricas de 3-nitrotirosina,
uma pegada estvel da produo de peroxinitrito ( 38 ), tambm foram
comparadas por um ensaio ELISA entre estes dois grupos (Abnova; kit de ELISA
de nitrotirosina, catlogo n KA0445 V.01.). O peroxinitrito formado pela
reaco de NO e radicais superxido e tem sido demonstrado causar disfuno

celular em muitas preparaes ( 38 ). Nitrito e nitrotirosina determinaes


foram determinados na linha de base, na condio de choque, e depois de 5 h
de tratamento / placebo EG.
Para determinar se Ethyl Galato scavenges H 2 O 2
O ensaio de perxido de hidrognio Ultra Amplex Red fluoromtrico (Molecular
Probes, Eugene, OR) foi pela primeira vez utilizado para medir a
H 2 O 2 concentraes para determinar a capacidade de eliminao do EG em
sistemas modelo e a preparao in vivo ( 12 , 24 ). Numa experincia inicial, na
qual foi utilizado um sistema de modelo, 10 -5 mol / l de H 2 O 2 foi colocado em
solues que continham respectivos EG (intervalo de 10 -3 -10 -5 mol / l) durante
~ 20 min, aps os quais as amostras foram congeladas e subsequentemente
analisadas para a H 2 o 2para ver se por exemplo, reduo da
H 2 o 2 concentraes nesta preparao. Ento, numa experincia subsequente
realizada num sistema modelo, foi determinado se EG tambm poderia eliminar
a gerao de H 2 O 2 causada por LZM-S. Como descrito anteriormente, LZM-S
(2 x 10-5 mol / l) foi colocada num frasco de 2 mL, encheu-se at marca de ~
1 ml com soluo salina equilibrada de Hanks 'e estudada a 35 C e pH ~ 7,35
( 24 ). Aps -20 minutos de exposio luz visvel, a soluo foi congelada a
-20 C e foi posteriormente estudado por H 2 O 2 gerao por esta tcnica de
ensaio fluorescente.
Nas experincias in vivo, o ensaio de perxido de hidrognio fluoromtrico Ultra
Amplex Red tambm foi utilizado para detectar H 2 O 2 concentraes do
sangue em que as amostras de sangue foram obtidas na linha de base, em
sptico / choque simulada, e em 3 h e 5 condies ps-tratamento h . Para as
medies, aps a amostra de sangue foi elaborada a partir do cateter venoso
foi rapidamente centrifugadas e as clulas vermelhas do sangue separadas a
partir do soro. A amostra foi rapidamente armazenadas a -20 C, aps o que a
anlise foi realizada fluorescente. Em todas estas experincias de ensaio Ultra
Amplex Red, alm disso, qualquer actividade fluorescente fundo atribuvel a EG
foi subtrada da quantidade total na interpretao destes resultados.
Alm do H fluoromtrico 2 O 2 tcnica, foi adicionalmente determinado se EG
poderia eliminar H 2O 2 em sistemas de modelo em que a tcnica de sonda
electroqumica foi usado como anteriormente descrito (HPO-100 do sensor,
Apollo 400 radical Analyzer, Precision Instruments, Sarasota , FL) ( 24 ). Num
conjunto inicial de experincias, as solues concentradas de H 2 O 2(10 -5 mol /
l) foram colocadas nos respectivos frascos que continham EG (intervalo de 1 x
10 -4-1 x 10 -5 mol / l). Em seguida, aps a adio de H 2 O 2 , a mudana em
H 2 O 2 foi seguido ao longo de um intervalo de 20 minutos para determinar se
Por exemplo, poderia reduzir a quantidade de H 2 O 2 detectada pela
sonda. Depois, numa segunda experincia, determinou-se se Por exemplo,
poderia retardar a gerao de H 2 O 2 , quando um sistema glucose oxidase /
glucose foi usado para a H 2 O 2 a gerao, como determinado pela tcnica de
sonda electroqumica. A glucose oxidase (obtida a partir de Aspergillus niger , 1
e 2,5 L, respectivamente; Sigma) foi adicionado a um frasco de 10 ml de gua
destilada (pH ~7.00) que continha glicose (2,7 x 10 -3 mole / L). A gerao
resultante de H 2 O 2 foi monitorizada ao longo de um perodo de 10 min com e
sem pr-tratamento EG (5 x 10 -4 mol / L). O efeito de catalase de fgado de
bovino (1,3 x 10 -6 mol / L) na inibio da H 2 O 2 o sinal gerado pela glicose
oxidase preparao / glicose foi tambm determinada como parte deste
protocolo experimental.
Para determinar por tcnicas de espectroscopia Se Ethyl Galato
Preserva Native catalase na Degradao de H 2 O 2
A capacidade de por exemplo para prevenir a converso de catalase por cido
peroxoactico, um H 2 O 2 analgico, foi estudado por tcnicas de
espectroscopia ( 7 , 8 , 11 , 34 ). Os investigadores demonstraram que os acil-

hidroperxidos (peroxo cidos) fornecer pseudosubstrates catalase adequados,


e , por conseguinte, possvel para formar um composto estvel I pela reaco
de cido peroxoactico e catalase ( 7 , 8 , 20 ). O composto I um derivado da
catalase nativa e a forma oxidada da enzima nativa. Em experincias
anteriores, este composto foi demonstrado ser um importante contribuinte para
a vasodilatao induzida tanto-LZM-S e a depresso do miocrdio em
preparaes in vitro ( 24 , 27 ). Os fenis podem reduzir o composto I para o
composto II e, em seguida, reduzir o composto II de volta para a enzima nativa
em um passo de electres ( 34 ). Por tcnicas de espectroscopia, catalase tem
um pico caracterstico a absorvncia a 405 nm ( 11 , 34 ), e determinou-se se
Por exemplo, poderia prevenir a degradao desta enzima no presente
estudo. cido peroxoactico foi adicionado a uma soluo de catalase bovina
(1,3 x 10 -6 mol / L, pH 7,4; Sigma), e a subsequente alterao na absorvncia
foi seguida por um perodo de 15 min por meio de tcnicas de espectroscopia
de onda de varrimento (Pharmacia Biotech, Ultraspec 3000). As medies foram
obtidas no incio do estudo, imediatamente aps a adio de cido
peroxoactico (4,5 x 10 -5 mol / l), e aos 5, 10, e 15 min depois com e sem EG
(10 -3 mole / L) de tratamento.
Anlise estatstica
Nas nossas anlises, os resultados obtidos para uma dada concentrao de
inibidor na preparao banho de rgos ou de tratamento no estudo do co
foram comparados por ANOVA de duas vias em que existem diferentes grupos
(isto , um nvel de comparao) e diferentes perodos de tempo (segundo nvel
de comparao) (GB-Stat V8, Microsystems dinmicos, Silver Spring, MD). Alm
disso, um one-way randomizado ANOVA foi utilizado para a anlise estatstica
dos H 2 O 2 concentraes em sistemas modelo (ver Fig. 7 ). A partir dos
resultados das tabelas ANOVA, um teste de comparao de Student-NewmanKeuls foi usada para determinar onde se observaram diferenas entre os grupos
em um perodo de tempo especfico. Diferenas no volume de lquido
intravenoso entre os grupos spticos foram comparados por no pareado t test. Os resultados so relatados como mdias DP.
RESULTADOS
Dos compostos testados, os resultados mostraram que, por exemplo, gaiato de
metilo, etilo e 3,4-di-hidroxibenzoato impedido vasodilatao induzida LZM-S na
preparao da artria cartida constrio pela fenilefrina (ver Figs.
1 e 2 ). Na Fig. 1 A , mostrado que sozinho LZM-S causou uma reduo na
fora de ~ 50% do valor da linha de base. Em estudos anteriores, esta reduo
na fora no podia ser observada com desnaturado LZM-S ou com lactalbumina, uma substncia que est intimamente relacionado com LZM-S
( 24 , 27 ). Na Fig. 1 B , os resultados esto representados graficamente como
percentagem do valor da linha de base. No intervalo de 10 -4 -10 -5 mol / l, EG
impedido vasodilatao causada por LZM-S de uma forma dose-resposta.Por si
s, por exemplo, no teve um efeito significativo sobre a fora em comparao
com o grupo controle de tempo tratou-tampo.

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FIG. 1.
Galato etlico (EG) impede lisozima (LZM-S) vasodilatao induzida. Em uma ,
mostrado um exemplo em que o pr-tratamento EG evitou a diminuio da
fora causada por LZM-S. Nesta experincia, fenilefrina foi utilizado para a
constrio da artria cartida de tenso de repouso. Aps um perodo de
estabilidade, as medies foram obtidas a 5, 15, e 30 min aps a administrao
LZM-S. Na preparao no tratado, LZM-S causou uma diminuio na fora de ~
50% em comparao com o estado inicial. Na preparao EG-tratados, este
efeito foi atenuada. O veculo lisozima [tampo HEPES (HB)] produziu nenhum
efeito na fora. Em B , os valores mdios so mostrados. EG diminuiu o efeito
de LZM-S de uma forma dose-resposta at uma concentrao de 10

-5

mol / l. As

anlises estatsticas incluram 2-way de medidas repetidas ANOVA e StudentNewman-Keuls (SNK) mltipla teste de comparao: * P <0,05 vs linha de
base; P <0,05 versus todos os outros grupos; P <0,05 versus todos os outros
grupos, exceto para 1 10

-5

mol / l EG; ! P <0,05 vs. grupo controle tempo.

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FIG. 2.
Gaiato de metilo (MG) e acetato de 3,4-di-hidroxibenzoato (EDB) impedir que a
vasodilatao induzida pela lisozima. Em uma , mostra-se que MG evitou a
diminuio da fora por LZM-S na preparao da artria cartida constrio pela
fenilefrina (ver Fig. 1 ). Em B , mostra-se que EDB demonstrado um efeito
inibidor semelhante. No houve efeito do veculo LZM-S (Hb) em vigor artria
cartida. As anlises estatsticas incluram 2-way de medidas repetidas anlise
de varincia e teste de comparao mltipla SNK: * P <0,05 vs linha de
base; P <0,05 versus todos os outros grupos; P <grupo controle 0,05 vs.
tempo.
Na preparao trabecular ventricular, LZM-S causou uma diminuio da tenso
de -50% em comparao com os valores basais. EG concentraes to baixas
como 10 -7 mol / L eram capazes de diminuir esta depresso (ver Fig. 3 ).

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FIG. 3.
EG inibe a depresso miocrdica induzida por lisozima. Em uma , mostra-se
que, por exemplo evitou a diminuio da contraco isomtrica causada por
LZM-S na preparao trabecular do ventrculo direito. A tenso plotada noy axis contra o tempo na x -axis. O msculo foi estimulado a 30 batimentos /
min. As medies foram obtidas s 10 e 20 min aps a administrao LZMS. Topo : LZM-S causou uma diminuio na contraco no intervalo de 20 min a
~ 30% do valor da linha de base. Parte inferior : EG evitou a diminuio da
contraco de estado estacionrio causada por LZM-S. KH, soluo de KrebsHenseleit. Em B , os valores mdios so mostrados em diferentes concentraes
de EG. Na preparao tratada, efeito de LZM-S pode ser observada por to
pouco como 10

-7

mol / L EG. As anlises estatsticas incluram 2-way de

medidas repetidas anlise de varincia e teste de comparao mltipla SNK:


* P <0,05 vs linha de base; P <0,05 vs todos os outros grupos, excepto para
10

-8

mol / L e LZM-S; P <grupo controle 0,05 vs. tempo.

No Estudo Vivo
grupos sepse.
Nos dois grupos sepse, variveis hemodinmicas de referncia (ver abaixo) no
foram diferentes entre os grupos EG-tratados e no tratados com EG. Nenhum
dos animais morreram durante o curso do estudo. No grupo tratado por
exemplo, o tempo mdio para o incio do tratamento, apsE. coli perfuso foi de
251 140 minutos, enquanto que no grupo tratado com placebo ao tempo

mdio necessrio para a iniciao de soluo salina normal (placebo) era 313
68 min aps a linha de base. Em dois animais, culturas de sangue foram obtidos
no grupo tratado com EG em que E. coli foi cultivado a partir das respectivas
amostras.
Um exemplo obtidos no grupo tratado com sepse EG mostrado na Fig. 4 A ,
no qual MAP diminuiu ~ 50% do valor basal (presepsis). EG infuso causou um
aumento sustentado do MAP, que foi evidente em 20 min aps a infuso. Os
valores mdios de MAP so mostrados na Fig. 4C , onde pode ser visto que na
condio MAP sptico caiu ~ 40% do valor da linha de base e que, por exemplo
restaurado MAP para o valor da linha de base para a durao do estudo. Aps a
dose inicial de EG (isto , 80 mg / kg), por exemplo podia ser titulada para baixo
um pouco para manter MAP pelo valor da linha de base. A dose total mdia de
EG dada no grupo sptico ao longo do perodo de 5 horas era 0,186 0,02 g /
kg, com um intervalo entre 0,15 e 0,22 g / kg.Alm disso, no grupo tratado com
placebo, o MAP tambm diminuiu ~ 40% do valor da linha de base, onde
permaneceu durante o curso do estudo.

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FIG. 4.
EG inverte a presso arterial mdia (PAM) e aumenta a resistncia vascular
sistmica (SVR) em estado de choque sptico. Em A , para um co sptico
indivduo, MAP plotada no y -axis contra o tempo na x -axis para as diferentes
condies. MAPA na condio sptica ( 2 ) caiu para cerca de metade do que o
encontrado na condio de linha de base ( 1 ). EG infuso ( 3 ) causou um
aumento na presso arterial em ~18 min, onde permaneceu durante a durao
do estudo ( 4 ). Em B , em que o animal no sptico, EG causou um ligeiro
aumento na frequncia cardaca ( 2 ), mas pouca alterao na PAM, quando
comparada com o valor da linha de base ( 1 ). Em C , mostra-se que a mdia da
PAM caiu ~ 40% da linha de base em ambos os grupos sptico e que, por
exemplo a infuso causou um aumento na presso sangunea arterial a valores

de linha de base durante o perodo restante do estudo. No grupo no sptico,


EG infuso no afetou a presso arterial. Em D , por exemplo no grupo sptico
reverteu a queda da RVS que ocorre neste modelo, enquanto que no grupo no
sptico EG causou uma diminuio relativa na RVS em comparao com o
grupo de controlo de tempo, em que a RVS aumentou ao longo do tempo. As
anlises estatsticas incluram 2-way de medidas repetidas anlise de varincia
e teste de comparao mltipla SNK: * P<0,05 vs linha de base; P <0,05 entre
os respectivos grupos; P <0,05 vs. ps-tratamento no grupo tratado EGsptico; ! P <.05 comparada todas as outras medies em um grupo.
Em ambos os grupos spticos, SVR na condio de choque sptico (ie, 5 h
aps a E. coli foi infundida) diminuiu em comparao com o estado inicial. No
grupo tratado com EG, o efeito de EG em MAP estava a causar um aumento na
RVS (ver Fig. 4 D ). Neste grupo, SVR aumentou significativamente aps o
tratamento, tanto em comparao com a condio de choque e comparados
com os correspondentes valores encontrados no grupo no tratado
sptico. Apesar do aumento na RVS causadas, por exemplo, o que por sua vez,
seria de esperar que aumentar a ps-carga ventricular esquerda ( 31 ), o CO e
SV no cair relativamente no grupo tratado com EG. Com efeito, quando as
alteraes na SW desde o incio at os diferentes intervalos foram comparados
entre os grupos, SW foi maior no grupo GE enquanto Ppw manteve-se
inalterada entre os dois grupos ao longo do curso do estudo (ver Fig. 5 ).

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FIG. 5.
As medies de desempenho cardaco no sptico e grupos no sptico. No
grupo sptico, apesar do aumento da RVS mediada por infuso EG, o dbito
cardaco ( A ) e o volume sistlico ( B ) no diminuiu em relao com o grupo
no tratado. Para presses semelhantes pulmonares cunha entre os grupos

( D ), a queda no trabalho acidente vascular cerebral ( C ) a partir da linha de


base durante o curso do estudo foi menor no grupo tratado com EG. No grupo
no sptico, EG causou um aumento do dbito cardaco ( A ), o volume sistlico
( B ), e do trabalho acidente vascular cerebral ( C ) para presses semelhantes
pulmonares cunha ( D ) entre os grupos. As anlises estatsticas incluram 2way de medidas repetidas anlise de varincia e teste de comparao mltipla
SNK: * P <0,05 vs linha de base; ! P <0,05 vs. todas as outras medidas em um
grupo; P <0,05 entre os respectivos grupos; P <0,05 entre os grupos em que
a alterao no curso de trabalho da linha de base foi utilizada na anlise.
Os resultados para Ppa e RAP ao longo do estudo no foram diferentes entre os
dois grupos.RAP permaneceram no ~ 9 mmHg ao longo dos diferentes
intervalos de estudo. No grupo tratado, o PPA aumentou de 16 1,3 mmHg
para 23 7 mm Hg ( P <0,05 vs linha de base), no final do estudo, enquanto
que no grupo no tratado Ppa aumentou de 18 2,5 mmHg ao nivel de
referncia de 20 4 mmHg no final do estudo. Em ambos os grupos, HR
aumentou em graus semelhantes, durante o curso do estudo. No grupo tratado,
RH em mdia de 59 8 batimentos / min na linha de base, atingiu um pico a
144 33 batidas / min ( P <0,05 vs linha de base) na condio de choque
sptico, e, subsequentemente, diminuiu para 110 34 batidas / min a 5 h aps
o tratamento ( P <0,05 vs linha de base). No grupo no tratado, HR medido 56
6 batimentos / min na linha de base, atingiu um pico a 137 25 batidas / min
( P <0,05 vs linha de base) na condio de choque sptico, e,
subsequentemente, diminuiu para 128 28 batidas / min a 5 h aps o
tratamento ( P <0,05 vs linha de base). Alm disso, ao longo do perodo de
spsis, a taxa de ventilao foi aumentado, a fim de inverter a no-inica e de
io-lacuna acidose metablica que se desenvolve neste modelo. Em ambos os
grupos, pH e arterial P CO 2 caiu para extenses semelhantes a partir da linha
de base para os diferentes intervalos de medio. No grupo tratado respectivos
valores de pH e P CO 2 diminuiu de 7,38 0,03 e 29 4 mm Hg na linha de
base para 7,14 0,06 e 19 2 mmHg no final do estudo (tanto P <0,05 a partir
da linha de base), enquanto que na o grupo no tratado os valores
correspondentes foram de 7,41 0,03 e 31 5 mm Hg na linha de base para
7,11 0,07 e 22 4 mm Hg no final do estudo (tanto P<0,05 a partir da linha
de base). Lactato arterial foi significativamente aumentada em comparao
com a linha de base no grupo no tratado sptico EG, mas os resultados no
foram significativamente diferentes entre os dois grupos (ver Fig. 6 A ).

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FIG. 6.
Parmetros sanguneos seletivos para os grupos spticos e no sptico sobre o
estudo. No grupo tratado EG-sptico, hemoglobina soro ( C ) caiu para um
menor grau e a creatina-quinase (CK; D ) e lactato de ( A ) no fez aumentar
tanto quanto aqueles no grupo no tratado sptico. Em ambos os grupos e no
sptico sptico, creatinina ( B ) diminuiu nos 2 grupos tratados com EG em
comparao com os grupos no tratados. As anlises estatsticas incluram 2way de medidas repetidas anlise de varincia e teste de comparao mltipla
SNK: * P <0,05 vs linha de base; P <0,05 entre os respectivos grupos.
De acordo com a concepo geral do presente estudo, o volume intravenosa foi
administrada em ambos os grupos para manter Ppw ao valor da linha de base
durante todo o estudo.Significativamente menos de soluo salina normal foi
necessria no grupo tratado com EG para atingir este objectivo (3,38 0,8 l vs
4,7 0,8 L; P <0,05). No final do estudo, a concentrao de hemoglobina no
soro no grupo tratado EG-sptico foi mais elevada em comparao com o grupo
tratado com sptico no-EG (ver Fig. 6 C ). Alm disso, no grupo spticotratada EG, creatinina srica, o ndice primrio de funo renal, diminuiu ao
longo do curso do estudo, o que indicou melhora da funo renal, enquanto que
aumentou no grupo sptico no tratada (ver Fig. 6 B ) .A produo de urina no
grupo sptico tratados EG foi maior (~ 40 vs. 15 ml / h) durante a ltima 2 h do
que no grupo sptico no tratado, mas no alcanou significncia estatstica
entre os dois grupos. Devido rabdomilise, quinase de creatina no soro (CK)
aumenta neste modelo ( 26 ).Este efeito parecia maior no grupo no tratado
sptico (ver Fig. 6 D ). No havia nenhuma evidncia para sugerir que, por
exemplo afectada a funo heptica ou parmetros hematolgicos neste estudo
(ver Tabela 1 ).

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Tabela 1.
Selective bioqumica sangunea e parmetros hematolgicos em galato etlico e
grupos spticos infuso de volume
grupos no sptico.
No grupo tratado com EG, a dose mdia de EG dada foi de 0,26 0,02 g / kg
com um intervalo de 0,22-0,28 g / kg ( P <0,01 vs grupo sptico). A quantidade
total de EG dada no grupo no sptico foi mais elevada do que no grupo
sptico. O motivo foi porque a infuso EG no foi reduzida ao longo do estudo
no grupo no sptico, uma vez que no houve mudanas na hemodinmica que
se prestavam a titulao de uma alterao de taxa. EG foi assim mantida no ~
40 mg kg -1 h -1 taxa inicial aps a infuso de 80 mg / kg que foi administrada
durante a primeira hora.
Em contraste com o animal sptica, tratamento EG no causar uma alterao
na MAP ao longo deste perodo. Um exemplo mostrado na Fig. 4 B , enquanto
que os dados mdios so apresentados na Fig. 4 C . De facto, os resultados
indicam que, se alguma coisa, o tratamento EG causou uma diminuio na RVS
em comparao com pr-tratamento no grupo no sptico (Fig. 4 D ;
ver DISCUSSO ). Alm disso, no final do estudo, CO, SV, e SW foram aumentados
com infuso EG no animal no sptico (ver Fig. 5 ) em comparao com o
grupo controlo com infuso de tempo-volume. No grupo tratado com EG,
creatinina diminuiu significativamente durante o curso do estudo em
comparao com o grupo no tratado (ver Fig. 6 ). Alm disso, o FC aumentou
com o tratamento de por exemplo, no final do estudo (71 10 vs 45 6
batimentos / min, P <.05 entre grupos, ver DISCUSSO ), ao passo que AP, RAP,
P CO 2 , pH arterial, qumica do sangue e valores hematolgicos, e o volume de
urina no se alteram significativamente durante o curso do estudo e no foram
significativamente diferentes entre os dois grupos (dados no apresentados).
Concentraes sricas EG foram medidos no sptico grupos tratados e no
sptico por meio de tcnicas de LC-MS. Em um dos animais em cada grupo, no
havia uma quantidade muito pequena de EG detectado no soro antes da
administrao EG, embora no seja clara a forma como o sangue do animal
entrou em contacto com a substncia. No houve diferenas nas concentraes
por exemplo, entre o sptico e grupos no sptico. No grupo sptico, EG medido
1 2,4 x 10 -7 mol / l no incio do estudo (devido a um co), 1 2,4 x 10 7 mol / l (devido ao mesmo co) para o estado de choque sptico, 4,5 3,5 x
10 -6 mol / l em 3 h aps o tratamento, e de 1,8 0,54 x 10 -6 mol / l a 5 h aps
o tratamento. No grupo no sptico, os valores foram 2,7 1 x 10 -7 mol / l no
incio do estudo (devido a um co), 0 na condio de choque sham, 2,85 1,27
x 10 -6 mol / l em 3 h aps o tratamento, e 0,42 2,8 x 10 -6 mol / l a 5 h aps o
tratamento.
Acetato de Galato scavenges H 2 O 2
Como detectado pelo ensaio de ultra Amplex Red, EG marcadamente atenuada
a concentrao de H 2 O 2 , quando gerado pelo LZM-S, bem como quando
H 2 O 2 foi administrada exogenamente. Na experincia em que LZM-S foi
encontrada para gerar intrinsecamente 2,4 x 10 -6 mol / L de H 2 O 2 no
intervalo de 20 min num sistema de modelo, sem o H 2 O 2 pode ser detectado
quando, por exemplo (10 - 4 mol / L) foi adicionado. Num outro sistema de
modelo, por outro lado, quando 10 -5 mol / l de H 2 O 2 foi adicionado em
concentraes de, por exemplo (10-3 -10 -5 mol / L), a quantidade de
H 2 O 2 detectada caiu para ~10- 20% do valor no tratada (verFig. 7 a ).

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FIG. 7.
EG scavenges perxido de hidrognio (H
H

). Em um , solues de reserva de

foram colocados nos respectivos frascos que continham diferentes

concentraes de EG. Por ensaio de ultra Amplex Red, havia menos


H

detectados nas solues-tratados EG aps 20 min de incubao durante

um H idntica

concentrao instilados em cada condio. As anlises

estatsticas incluram um 1-way randomizado ANOVA e SNK teste de


comparao mltipla: * P <0,05 versus todos os outros grupos; P <0,05 vs.
H

sozinho e H

concentraes foram medidos pela tcnica da sonda electroqumica. Na

e por exemplo, 10

condio no tratada, a instilao de H

-3

mole / L de grupos. Em B ,

(10

-5

mol / l) produziu um sinal

constante ao longo da durao da experincia. No experimento tratamento eg,


para a mesma quantidade de H

o sinal de pico foi atenuada e diminuiu ao

longo do tempo. Isto foi particularmente evidente nos 2 maiores concentraes


EG. Em C , H

foi gerado por uma preparao de glicose-oxidase de glucose

/ (IR) em que as medidas foram obtidas pela sonda electroqumica. O y -axis


representa o sinal da sonda electroqumica, o qual proporcional quantidade
de H

gerado e que medida em picoamperes (PA). Como mostrado

na um e b , no havia um efeito dose-resposta de GO em H


retardou a gerao de H

a produo. EG

a cada concentrao de GO utilizado. O pr-

tratamento ( C ) ou no ps-tratamento ( d ) da soluo com catalase eliminou a


deteco de H

neste sistema modelo; veja o texto para discusso.

No experimento sonda electroqumica, a mesma sonda electroqumica foi usado


nas condies EG-tratados e no tratados, uma vez que a sensibilidade da
sonda ao H exogenamente administrado 2 O 2 diferia entre as vrias
sondas. Na Fig. 7 B , pode ser visto que a amplitude de pico da H 2 O 2 de sinal
foi muito menos na condio tratada EG. Alm disso, aos 10 -4 e 5 x 10 -5/ l por
exemplo, concentraes mol, particularmente foi observado que o sinal
diminuiu durante o perodo de medio de 20 minutos, como H 2 O 2 foi
continuamente degradados ao longo deste intervalo. Aos 10 -4 mol / L EG, o
sinal inicial e que medida a 20 min aps a H 2 O 2 a instilao eram de 49
12% e 15 18% ( n = 6), respectivamente, dos valores encontrados para a
amostra no tratada . Em 5 x 10 -5 mol / l EG, os valores correspondentes foram
de 58 18% e 49 13% ( n = 5). Aos 10 -5 mol / l EG, os valores
correspondentes foram de 78 14% e 67 14% ( n = 6, P <0,05 vs. tratados
preparaes no tratadas em todos os tratamentos EG). Alm disso, as
diferenas na percentagem diminui em H 2 O 2 observados entre o ensaio de
Amplex Red Ultra e as metodologias de sonda provavelmente reflectiu a
durao do tempo que o H 2 O 2permaneceram em contacto com, por exemplo,
uma vez que as determinaes para o ensaio de ultra Amplex Red as medies
s foram realizadas quando as amostras suficientes tinha sido obtido,
normalmente 2-3 dias aps a reaco foi iniciada.
O efeito de EG (5 x 10 -4 mol / L) em H 2 O 2 a gerao, tambm foi determinada
num sistema de modelo de glucose-oxidase / glucose, em que este sistema
enzimtico causou uma taxa constante de H 2 O 2 a produo. Conforme
determinado pela sonda (ver Fig. 7 C ), o Y -axis representa o sinal
proporcional quantidade de H 2 O 2 gerado, o qual dado na
picoamperes.Como mostrado na Fig. 7 C , no havia um efeito dose-resposta
da glucose oxidase em H 2 O 2de produo em que a dosagem de 2,5 U de
glucose-oxidase produziu cerca de duas vezes a taxa de H 2 O 2 a gerao,
como a encontrada com o valor de 1 L. Para a dosagem de 2,5 L, a taxa mdia
( DP) de H 2 O 2 gerao foi de 7,8 0,9 x 10 -5 mol H 2 O 2 L -1 min -1 na
amostra no tratado ( n = 6) e diminuiu para 5,7 1,9 x 10 -5 mol H 2 O 2 L -1
min -1 com tratamento EG ( P <0,05 vs no tratado). Para esta concentrao
oxidase de glucose elevada, EG causou uma reduo mdia na taxa de
H 2 O 2 gerado que uma diminuio mdia de ~ 30% da condio no
tratado. Para a concentrao de 1 U de glicose-oxidase, a mdia ( SD) de
H 2 O 2 a gerao, no estado no tratado foi de 3,2 1 x 10 -5 mol H 2 O 2 L -1
min -1 ( n = 6) e diminuiu para 1,4 0,6 x 10 -5 mol H 2 O 2 L -1 min -1 com o
tratamento ( P <0,05 vs no tratado). Para esta concentrao baixa de glucoseoxidase, EG causou um significativo H 2 O 2 de reduo que uma diminuio
mdia ~ 30% da condio no tratado. Na presena de fgado bovino de
catalase, a produo de H 2 O 2 por 1 L de glucose-oxidase foi completamente
extinta (-0,15 0,09 x 10 -5mol H 2 O 2 L -1 min -1 ; n = 4 ). Na presena de
EG (5 x 10 -4 mol / L), Alm disso, foi tambm mostrado que a instilao de
placebo (ou seja, gua destilada) no causou qualquer alterao no sinal (-0,25
0,4 x 10 -5 mol H 2 O 2 L -1 min -1 ; n = 4). Alm disso, no h produo de
H 2 O2 foi detectado quando a glucose-oxidase foi adicionada a gua destilada
que continha qualquer glicose.
Como parte do in vivo canine estudo sepse, soro de H 2 O 2 concentraes
foram medidas atravs de ensaio ultra Amplex Red na linha de base (presepsis),
na condio de choque de choque / simulada, e em 3 h e 5 h depois de a

condio de choque sptico. Os resultados mostraram que no grupo tratado


com choque sptico no-EG foram pequenos, mas significativos aumentos de
H 2 O 2 detectado durante o curso do estudo, em particular na ltima
medio.Neste grupo, os resultados medidos de 0,36 0,05 x 10 -7 mol / l no
incio do estudo, 0,36 0,05 x 10 -7 mol / L no estado de choque sptico, 0,49
0,03 x 10 -7 mol / l em 3 h depois a condio de choque sptico, e 0,78
0,45 x 10 -7 mol / l ( P <0,05 vs linha de base) a 5 h aps a condio de choque
sptico. No grupo de controlo no sptico tempo, no entanto, no houve
mudanas ao longo do tempo, e os resultados correspondentes foram de 0,47
0,08 x 10 -7 mol / L, 0,42 0,05 x 10 -7 mol / L, 0,40 0,39 x 10 -7 mol / L, e
0,46 0,14 x 10 -7 mol / l, respectivamente. O aumento relativo do H 2 O 2 a
partir da linha de base para a condio ps-tratamento 5 h foi
significativamente diferente entre os dois grupos ( P <0,05). Por outro lado, nos
grupos spticos e no sptico-tratados EG EG produziu alguns fluorescncia de
fundo na amostra, mas no houve nenhuma diferena nos sinais fluorescentes
entre estes dois grupos ao longo do curso do estudo.
Em termos de NO determinaes, EG infuso no pareceu modificar a formao
de NO / metabolismo no grupo sptico, tal como determinado pela
concentrao srica total e nitrito de 3-nitrotirosina. Para a anlise de nitrito, as
concentraes sricas aumentadas para extenses semelhantes em ambos os
grupos. No grupo no tratado sptico, os valores mdios de nitrito nas trs
condies (linha de base, choque sptico, e 5 horas aps o tratamento) foram
2,08 0,746, 2,64 0,52 e 3,34 1,3 ( P <0,05 vs linha de base) uM,
respectivamente , enquanto que no grupo tratado EG-sptico, os valores
correspondentes foram de 1,877 1,12, 2,64 0,8, e 3,81 1,16 ( P <0,05 vs
linha de base) ^ M, respectivamente. Para a anlise de 3-nitrotirosina, houve
uma grande variao nos valores da linha de base entre os animais que
variaram 10-131 nM nos dois grupos, de modo a que as alteraes individuais
nas concentraes sricas de nitrotirosina durante as trs condies foram
expressos como uma percentagem do respectivos valores basais. No grupo no
tratado sptico, a concentrao mdia de nitrotirosina aumentada para 4 10
vezes o valor da linha de base no estado de choque sptico e em seguida,
diminuiu para 2,2 3,4 vezes o valor da linha de base no final da
experincia. No grupo tratado EG-sptico, a concentrao mdia de nitrotirosina
aumentada para 5 11 vezes o valor da linha de base no estado de choque
sptico, e depois diminuiu para 3,9 8 vezes o valor da linha de base no final
da experincia. No entanto, no foram observadas alteraes significativas
entre os grupos ou entre as diferentes condies estudadas neste modelo. Alm
disso, no foram encontradas diferenas entre os dois grupos, quando os dados
foram analisados de um modo diferente, por exemplo, em termos de valores
absolutos.
Ethyl Galato Limites formao de derivados de catalase-relacionadas
Espectroscopia de onda-scan foi utilizado para avaliar se aps a administrao
de cido peroxoacico EG poderia preservar e limitar a converso de catalase
nativa a seus derivados.Na Fig. 8 , A e B , os exemplos so apresentados, sem
e com tratamento EG, respectivamente.Nesta figura, um pico de absoro a
405 nm pode ser observado, o que representa o pico Soret da catalase
( 10 ). Quando o cido peroxoactico (4,5 x 10 -5 mol / l) foi adicionado a
catalase, houve um declnio deste pico como a catalase foi convertido nos seus
derivados. As medies foram determinadas imediatamente aps e aos 5, 10, e
15 min depois da instilao de cido peroxoactico. Na presena de EG (10 3 mol / l), o declnio no pico catalase foi atenuada em comparao com a
preparao no tratado. Na mdia, a absorvncia a linha de base no foi
diferente entre o GE-tratados ( n = 6) e grupos no tratados ( n = 6; 0,48
0,057 vs. 0,48 0,039). No entanto, a variao de absorvncia aps a adio

de cido peroxoactico foi significativamente inferior durante as quatro


condies no grupo tratado com, por exemplo (verFig. 8 C ).

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FIG. 8.
EG limita formao de derivados relacionados com catalase. Tcnicas de
espectroscopia de onda-scan foram utilizados para examinar o efeito do cido
peroxoacico sobre a converso de catalase de seus derivados como
identificado pelo declnio no pico a 405 nm. Em uma , quando o cido
peroxoactico foi adicionado soluo, houve um declnio acentuado na
absorvncia a 405 nm como a catalase foi convertido nos seus compostos
derivados. Em B , EG atenuou a diminuio do pico de catalase e preservado
catalase nativa. Em C , os dados mdios so mostrados em que a mudana na
absorvncia a 405 nm foi determinada. A diminuio da catalase nativa no
grupo tratado com EG era menos do que a encontrada no grupo no tratado. As
anlises estatsticas incluram 2-way de medidas repetidas anlise de varincia
e teste de comparao mltipla SNK: * P <0,05 entre os grupos.

DISCUSSO
Com base na descoberta recente de que LZM-S poderia intrinsecamente geram
H 2 O 2 ( 24 ) por um mecanismo consistente com a descrita por Wentworth e
colegas ( 10 , 35 , 43 - 46 ), utilizou-se a preparao da artria cartida como
um bioensaio e olhou para os compostos que eram antioxidantes com
capacidade para inibir a vasodilatao induzida LZM-S. Conforme determinado
por experincias anteriores, a capacidade das LZM-S para causar disfuno
cardiovascular nas preparaes in vitro aparece unicamente devido gerao

de H 2 O 2 , uma vez que no foi possvel demonstrar que no sejam H espcies


reativas de oxignio 2 O 2participaram Lzm- vasodilatao ou a depresso do
miocrdio S-induzida nestas preparaes (24 , 27 ). No presente estudo,
verificou-se que os antioxidantes examinou EG foi o mais favorvel na inibio
dos efeitos induzidos LZM-S nas preparaes in vitro. EG adicionado aos
alimentos como antioxidante ( 17 , 32 , 47 ) e o ster etlico de cido
glico. EG encontrado que ocorre naturalmente numa variedade de fontes
vegetais, incluindo o vinho tinto e nozes. No laboratrio, EG pode ser produzido
a partir de cido glico e etanol ( 42 ). A estrutura qumica do EG mostrado
na Fig. 9 Uma .

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FIG. 9.
A : estrutura do EG molcula. B : mecanismo da vasodilatao induzida por
lisozima. A lisozima gera H

, que metabolizado pela catalase para formar

os seus derivados, como composto I. O composto I conduz a um aumento em


monofosfato de guanosina cclico (cGMP) para produzir
vasodilatao. Aspergillus niger catalase (que metabolizam H

) e etanol

(um inibidor da formao do composto I; Ref. 27 ) pode prevenir os efeitos da


lisozima. cido peroxoactico pode gerar o composto I ( 20 , 24 ). EG podem
eliminar H

com catalase.

e tambm pode atenuar a formao de derivados relacionados

Uma vez que descobrimos que EG poderia inibir efeito vasodilatador das LZM-S
na preparao banho de rgos cartida, ns ento testaram se este
tratamento seria benfico na reverso da hipotenso que se desenvolve em
nosso modelo canino. Descobrimos que havia muitos efeitos benficos do
tratamento EG na funo de rgos-alvo e hemodinmica neste modelo. No
grupo sptico tratados, os resultados mostraram no s que, por exemplo foi
muito eficaz na reverso da hipotenso que se desenvolve, neste modelo, mas
tambm que este ocorreu dentro de 20 min de administrao e que a MAP
podia ser mantido comparvel ao valor da linha de base ao longo de todo o
curso da experincia. O mecanismo que explica este aumento da PAM foi devido
a um aumento na RVS. Como mostrado na Fig. 4 D , SVR diminuio na
condio de choque sptico em comparao com a linha de base e aumentada
com o tratamento EG. Estes resultados seriam consistentes com aqueles
encontrados na preparao de banho de rgos artria cartida, onde EG
tambm impediu a vasodilatao causada pela LZM-S. No grupo sptico, apesar
do aumento da ps-carga ventricular esquerda que, de outra forma levar a uma
diminuio na SV neste modelo ( 31 ), o desempenho cardaco, adicionalmente,
apareceu melhor no grupo tratado com EG em comparao com o grupo no
tratado, tambm consistente com os resultados obtido na preparao RVT
isolado. Alm disso, na entrega do grupo de oxignio tratados EG tenderam a
ser maiores em comparao com o grupo no tratado (154 67 vs 123 56 ml
de oxignio / min), mas nosso estudo no foi desenhado para analisar esta
questo.
Tambm digno de nota que descobrimos que os efeitos benficos da EG sobre
a funo miocrdica no grupo sptico foram um pouco menos do que a
encontrada para as medies de RVS. Existem algumas explicaes para essa
observao. Em primeiro lugar, com excepo LZM-S mediadores poderia ter
sido lanado neste modelo que no eram passveis de tratamento EG
( 1 , 36 ). Em segundo lugar, no foram de electrlitos e de base de soro cido
perturbaes que se desenvolveram no decurso do estudo que pode ter,
adicionalmente, contribuiu para a disfuno do miocrdio observada. Devido a
dificuldades na obteno de resultados laboratoriais imediatos, ns no incluem
a substituio de eletrlitos ou correo de distrbios cido / base como parte
do protocolo. E todas as razes acima mencionadas pode ter limitado a
capacidade do EG para melhorar a funo do miocrdio no estudo in vivo.
Alm de seu efeito benfico sobre a hemodinmica, EG tambm apareceu para
melhorar a funo de rgos-alvo em estado de choque sptico. Na concluso
do estudo in vivo, creatinina srica foi menor no grupo tratado com EG em que
o grupo no tratado sptico, um achado que indica que a funo renal era
melhor preservada no grupo tratado. Hsieh et ai. ( 18 ) mostrou que gaiato de
metilo protegido contra H 2 O 2 induzida por estresse oxidativo e danos no DNA
de clulas de rim canino, e EG pode desempenhar uma funo semelhante em
spsis. No grupo tratado, tambm foi necessrio menos fluido intravenoso para
manter Ppw ao valor da linha de base, de modo que a hemoglobina no
diminuiu tanto neste grupo. Ns anteriormente utilizado CK como um marcador
de rabdomilise neste modelo ( 26 ). No presente estudo, verificou-se que a CK
foi significativamente reduzida no final do estudo no grupo GE comparado com
o grupo no tratado, de modo que parecia que a leso do msculo ocorreu a um
menor grau, no grupo tratado. Todos esses fatores apontam para um melhor
funcionamento de rgos-alvo, alm de melhor desempenho hemodinmico
com o tratamento EG neste modelo de choque sptico.
No grupo no sptico, por exemplo tambm tiveram efeitos significativos sobre
a hemodinmica, mas estes efeitos foram um pouco diferentes das observadas
no grupo sptico. No grupo no sptico, MAP e RVS no aumentou com o
tratamento EG, de modo que, por exemplo no actua como um vasoconstritor
no especfica e no aumenta SVR sob condies no sptico.Anteriormente
mostrou ( 25 ) que LZM-S provoca uma reduo da resposta simptico cardaco

numa preparao RVT in vitro e que isto ocorre por NO sinalizao. Sabemos
tambm que h alguma LZM-S que pode ser detectado no sangue de ces no
sptico ( 29 ). Pensamos, portanto, que pode haver alguns H
cardaca 2 O 2 sinalizao acontecendo, mesmo no animal no sptico e que,
por exemplo causado uma inibio desta sinalizao que conduz a um aumento
da AR e de CO e, por conseguinte, a reflex vasodilatao neste grupo no
sptico.Alm disso, verificou-se que, por exemplo, tambm melhorou a funo
renal, tal como indicado pelo facto de creatinina diminuiu durante o decurso da
experincia neste grupo. Isto significa que h tambm pode ser H 2 O 2 vias
dependentes presentes que modulam a funo renal em condies no sptico.
No grupo controle no tratado, ns tambm observou que houve um aumento
no SVR ao longo do tempo em comparao com a medio da linha de base
(ver Fig. 4 D ). Este achado no foi relacionada a qualquer mudana no status
do volume, uma vez que mantivemos a nossa medio da pr-carga
relativamente constante ao longo da durao do experimento. Em vez disso,
ns pensamos que este aumento do SVR foi devido ao fato de que os animais
desenvolvem uma bradicardia significativa aps muitas horas de anestesia
sufentanilo-midazolam nesta preparao. Como resultado, houve uma
tendncia para o CO cair aos intervalos de medio posteriores (ver Fig.
5 A ). Por sua vez, esta queda resultou em uma vasoconstrio reflexa e,
consequentemente, um aumento na RVS no grupo de controlo no tratado
tempo. Por outro lado, nos grupos spticos no tratados e EG-tratados, apesar
de CO tambm diminuiu ao longo do tempo este efeito era mais provvel
essencialmente relacionada com a depresso do miocrdio e os distrbios
metablicos que ocorreram (como mencionado acima), em vez de para a
anestesia utilizada . Nesses grupos, tais redues de CO tambm levaria a
aumentos relativos em SVR por vasoconstrio reflexa, como foi detectado nos
intervalos de medio posteriores. No grupo no tratado sptico, descobrimos
que SVR diminuiu para o menor extenso, na condio de choque sptico
(ver Fig. 4 D ) e, em seguida, que a RVS relativamente aumentada por esta
vasoconstrio reflexo nos perodos de medio posteriores.Devido a estes
ligeiros aumentos na RVS que ocorreram ao longo do tempo no grupo no
tratado sptico, encontramos que as diminuies estatisticamente significativas
na RVS, em comparao com a linha de base, foram j observadas aps a
condio de choque sptico neste grupo. Vasodilatao sistmica, portanto,
devido sepse foi menos aparente durante os intervalos de medio
posteriores. No geral, podemos concluir que o tratamento EG levou a uma
melhora na hemodinmica e funo de rgos-alvo em nosso modelo
sptico. Alm disso, no encontramos quaisquer efeitos deletrios sobre a
funo de rgos-alvo. Como mostrado naTabela 1 , medimos testes de funo
heptica e parmetros hematolgicos e encontrou-los comparveis entre os
grupos spticos tratados e no tratados.
A via pela qual LZM-S provoca vasodilatao in vitro mostrado
na Fig. 9 B . Como discutido anteriormente, acreditamos que o H 2 O 2
gerada pelo mecanismo descrito por Wentworth e colegas (43-46), aps o que
se difunde atravs da membrana para ser metabolizado pela catalase. Ns no
tm sido capazes de identificar um receptor ao qual H 2 O 2 se liga
( 27 ). NaFig. 9 , que tambm tm as substncias delineadas anteriormente
descrito para inibir e / ou potenciar a via da vasodilatao-S-LZM induzida
( 27 ). Como mostrado, o etanol, o qual inibe a formao do composto I,
tambm est includo nesta figura, desde a sua descoberta foi essencial para a
compreenso de que H 2 O 2 a degradao para o composto I foi um
componente importante mecanismo de aco das LZM-S ( 27 ). No presente
estudo, ns ainda mostrar que um mecanismo pelo qual pode inibir EG efeito
vasodilatador da LZM-S por varrimento H 2 O 2 , como foi demonstrado por
meio de tcnicas electroqumicas e de sonda
fluoromtricos. Na Fig. 7C , um e b , mostra-se que EG pode reduzir a formao

de H 2 O 2 num sistema de oxidase de glucose, quando comparada com a


preparao no tratado. Na Fig. 7 Cd , que tambm mostram que aps a
catalase foi adicionado ao sistema, houve uma queda precipitada em H 2 O2 ,
uma vez que a catalase como um captador de eficaz de H 2 O 2 que ocorre a
uma taxa de ~ 5 mmol / s ( 34 ). Hall et ai. ( 17 ) demonstrou similarmente que,
por exemplo podia limpar H 2 O 2. Na presena de H 2 O 2 , estes investigadores
verificaram que os hidroxibenzoatos de etilo decompor com a formao final de
dihydroxybenzenes.
Alm disso a limpeza H 2 O 2 , os nossos resultados espectroscpicos indicam
tambm que, durante a reaco com hidroperxidos, EG pode limitar a
formao de derivados relacionados com a catalase, uma aco que iria reduzir
a disponibilidade do composto I, em que contribui para LZM-S-induzida
efeitos. Outros investigadores demonstraram que os fenis podem reduzir o
composto I para o composto II e, em seguida, o composto II para a catalase
nativa ( 34 ). Por espectroscopia de onda de varrimento, uma vez que a
catalase mais nativa foi identificada no final do intervalo de medio, na
presena de EG, os nossos resultados demonstram que, por exemplo, tambm
pode executar esta aco. O composto I um poderoso oxidante, tal como
exemplificado pela sua capacidade para oxidar mesmo H 2 O 2 em si
( 11 ). Desde EG iria atenuar a formao destes derivados activos, isto
proporcionaria um outro mecanismo pelo qual Por exemplo, poderia prevenir a
disfuno cardiovascular em choque sptico.
importante reconhecer, no entanto, que, enquanto ns mostramos que EG
poderia inibir H 2 O2 a sinalizao na preparao in vitro, isto no significa
necessariamente que este era o mecanismo pelo qual a GE foi operative in vivo
ou que este era o nico mecanismo envolvido.Compostos fenlicos so capazes
de actuar como antioxidantes em um nmero de maneiras ( 37). Grupos
hidroxilo fenlicos so bons doadores de hidrognio: antioxidantes dadores de
hidrognio pode reagir com o oxignio reativo e espcies reativas de nitrognio
em uma reao de terminao. A capacidade antioxidante dos compostos
fenlicos tambm atribudo sua capacidade de quelar ies de metais
envolvidos na produo de radicais livres. Estruturas fenlicos muitas vezes tm
o potencial para interagir fortemente com protenas devido aos seus anis
benznicos hidrofbicos e potencial de ligao de hidrognio dos grupos
hidroxilo fenlicos.Ns j mostrou ( 27 ) que o azul de metileno poderia inibir
efeito vasodilatador das LZM-S na preparao da artria cartida, e isso pode
ocorrer por efeito de azul de metileno em diminuir cGMP, possivelmente atravs
de alteraes no estado redox do ferro. possvel que, por exemplo podia
trabalhar atravs de um mecanismo semelhante.
Ns reconhecemos, alm disso, que o carcter de H 2 O 2 de sinalizao
muitas vezes dependente da preparao utilizada. Na nossa preparao da
artria cartida, que mostrou que quando H 2 O 2 concentraes> 10 -4 mol / L
foram administradas foi observado um efeito vasoconstritor, enquanto em
concentraes mais baixas H 2 O 2 causada vasodilatao ( 27 ).Por outro lado,
em outras preparaes, foi principalmente um efeito vasoconstritor que ocorreu
(40 ). Alm disso o trabalho deve ser feito para compreender completamente
mecanismo de ao na preparao in vivo do EG, uma vez que pode haver
outros que no os considerou que pode ter desempenhado um papel no efeitos
da EG na preparao animal inteiro mecanismos.
Parece tambm que EG deve englobar alguns exclusivos geomtrica, qumicas e
/ ou propriedades estruturais que lhe permitiram evitar LZM-S de efeitos in
vitro, uma vez que fenis semelhante relacionados no poderia impedi-los. EG
relativamente no txico, e no ratinho a dose letal mdia (DL 50 foi relatado)
para ser de 6.000 mg / kg (folha de dados de segurana material, Sigma). Como
parte deste trabalho, que, adicionalmente, tentaram determinar a extenso na
qual o tipo de ster ligado estrutura galato era um dos principais
determinantes de EG na inibio da vasodilatao LZM-S-induzida na

preparao in vitro (ver preliminar rastreados compostos para inibir LZM-SInduced vasodilatao ). Ns descobrimos que o cido glico produziu nenhum
efeito inibitrio sobre a vasodilatao induzida LZM-S; galato de propilo que
causou um efeito inibitrio possvel; e galato de metilo que produziu um efeito
inibidor significativo. Assim, o ster metlico de cido glico, bem como o ster
etlico pode produzir efeitos inibidores potentes na preparao in vitro. Desse
modo, pensamos que tanto o tipo de ster a estrutura e galato so importantes
para a inibio de efeitos in vitro de LZM-S.
No estudo in vivo, demos uma alta concentrao de EG com base no trabalho
de Gao et al. ( 13). Gao et ai. ( 13 ) estudaram o metabolismo de EG quando
alimentados intragastricamente a ratos. Por exemplo, quando foi dado a uma
concentrao de 20 mg / kg a ratos, eles descobriram que a concentrao de
pico no plasma estava na 10 -6 mol / L gama e que esta diminuio da
concentrao ao 10 -9 mol / intervalo de l a 1 h aps a administrao. Ns
pensamos que uma concentrao ligeiramente superior de EG (isto , entre a
10 -5 mole / L e 10-6 mol / L gama) seria necessrio para bloquear o efeito
cardiovascular das LZM-S nesta preparao in vivo, de modo que deu 40 mg
kg -1 h -1 no presente estudo. Isto iria manter as concentraes sricas EG na
gama desejada, uma vez que reconhecido que, por exemplo deve ser
rapidamente metabolizado ou excretado. Alm disso, uma vez que a quantidade
de EG contidos em substncias alimentares muito menos [por exemplo, no
vinho tinto, a concentrao ~ 5 mg / l ( 32 )], parece pouco provvel que se
poderia conseguir o 10 -6 concentrao no soro / L mol por ingesto de EG
contendo nutrientes.
Neste estudo, foi utilizado um bacteremic E. coli modelo para examinar o efeito
de EG em efeitos cardiovasculares no choque sptico ( 26 , 30 ), uma vez que
este modelo canino foi o modelo original que levou descoberta de que LZM-S
era importante para o desenvolvimento de colapso cardiovascular nesta
condio. Por isso, pensei que este modelo foi o mais adequado para primeiro
teste desta hiptese. Significativamente, o objetivo principal deste estudo foi
determinar se a EG poderia reverter hemodinmica quando o animal foi
esmagadoramente doente e quando MAP foi realmente baixo. Nossos resultados
mostram que EG capaz de realizar esse feito numa preparao animal
inteiro. Os trabalhos iro ser necessrios para determinar se EG benfica em
outros modelos de choque sptico.
Ns de reconhecer claro que este canino E. coli modelo no pode ser tomado
como um representante da condio humana. Em choque sptico humana,
hemodinmica na sepse pode deteriorar-se de forma mais gradual, e ns no
reivindicamos que este o caso do presente modelo, embora este modelo
bacteremic poderia ser comparvel ao que ocorre em seres humanos que tm
uma infeco implantado cateter, endocardite, ou infeco grave com um alto
grau de bacteremia-( 1 ). interessante notar que a homologia entre o ser
humano e canino LZM-S muito alta em ~ 80%, e ambas as espcies de LZM-S
pode gerar intrinsecamente H 2 O2 conduzindo a disfuno cardiovascular em
preparaes in vitro ( 24 , 27 ), enquanto outras lisozimas, tais como frango,
que a partir de ter apenas 60% de homologia e no pode produzir estes
efeitos. Sero necessrios estudos futuros para correlacionar hemodinmica
com concentraes LZM-S em pacientes com choque sptico.
Em contraste com o efeito benfico da GE na nossa preparao da artria
cartida, que previamente mostrou que outros antioxidantes, tais como NAC,
glutationa reduzida (GSH), e ascorbato de sdio (NaAc) no pode impedir a
vasodilatao LZM-S-induzida nesta in vitro preparao (ver Tabela 2 no
Exemplo de Ref. 27 ). Esses agentes causam uma diminuio em H2 O 2 por
uma forma diferente da que causada por EG. Eles servem como substratos
essenciais para o metabolismo enzimtico de H 2 O 2 por peroxidases. Embora
estes antioxidantes reduziria a concentrao de H 2 O 2 , eles no impedem o
metabolismo de H 2 O 2 por catalase da maneira descrita para o GE. O facto de

que os antioxidantes podem diferir na sua capacidade de metabolizar o


H 2 O 2 de uma maneira ligeiramente diferente foi inicialmente considerada por
Wolin e colegas ( 4 , 5 ). Embora os mecanismos no so totalmente claros,
estes investigadores encontraram o metabolismo de H 2 O 2 por diferentes tipos
de enzimas para variar na capacidade para estimular a formao de cGMP (ver
Tabela 2 no Exemplo de Ref. 4 ). Por sua vez, esta diferena pode estar
relacionada com a sua capacidade para gerar o composto I. No presente estudo,
mostrou que, por exemplo, tambm podem inibir a produo do composto I.
Uma vez que este atributo parece ser muito importante em termos de o
mecanismo pelo qual H 2 o 2causa disfuno cardiovascular, acreditamos que
este o mecanismo pelo qual EG mais favorvel na preveno de efeitos
induzidos LZM-S.
Em ensaios clnicos, que tambm reconhecem que um inibidor de sintase de
xido ntrico, N- G -metil- L cloridrato de arginina, no melhorou a sobrevivncia
em pacientes com choque sptico, embora ele causou um aumento na presso
sangunea em comparao com pr-tratamento ( 16). A diferena entre EG
e N G -metil- L cloridrato de arginina, no entanto, que enquanto o ltimo seria
inibir a formao de NO entre todos os rgos, independentemente do seu
envolvimento em choque sptico, EG s seria direcionada para a vasculatura
que estava envolvido em H 2 O 2a sinalizao por LZM-S. Assim EG podem ter
um efeito benfico em comparao com os outros tratamentos. Alm disso, no
encontramos que EG modificado NO formao / metabolismo como
determinado pelos ensaios utilizados no presente estudo, embora
reconheamos a necessidade de prosseguir os trabalhos sobre este tema.
Significativamente, embora encontramos que a liberao de LZM-S
importante para a disfuno cardiovascular que se desenvolve neste modelo,
ns no fazemos nenhuma afirmao de que LZM-S o nico mediador que
importante na nossa E. coli modelo ou que EG inibe todos os efeitos da
sepse. LZM-S um produto de lise de leuccitos no choque sptico, e leuccitos
so de outro modo til para assegurar a sobrevivncia, como mostrado por
Danner e colegas ( 9 ) num modelo canino spsis. No nosso modelo, apesar do
facto de que, por exemplo restaurada a presso arterial, a evidncia de sepsia
grave ainda estava bastante evidente como indicado pelos testes elevados da
funo heptica, as concentraes de lactato elevadas, diarreia com sangue,
etc. Assim LZM-S no pareceu ser um mediador destes efeitos, e outras terapias
teriam que ser administrados para tratar esses distrbios na condio clnica.
Choque sptico ainda carrega uma mortalidade muito elevada que se aproxima
de 40% em medicina clnica, apesar do tratamento apropriado
( 1 , 36 ). Tratamentos mais recentes so desesperadamente
necessrios. Embora antioxidantes tm sido apontado como um possvel
tratamento de choque sptico ( 3 ), em contraste com outros investigadores, foi
utilizada a capacidade das LZM-S para gerar H 2 O 2 na preparao da artria
cartida como um bioensaio para determinar que, por exemplo podia inibir Lzmefeitos da S em sistemas in vitro. Em seguida, mostrou que EG poderia reverter
a disfuno cardiovascular em nosso modelo in vivo sptico. Apesar de
H 2 O 2 foi predominantemente identificado como uma substncia que provoca
leso do tecido devido peroxidao, informao recente indica que tambm
um potente mediador de sinalizao de inflamao, bem como
( 2 , 6 , 41 ). Embora a relao de modelos animais para a doena humana
devem ser consideradas com cautela, e, embora mais trabalho precisa ser
realizado, estes resultados sugerem que os compostos tais como, por exemplo
pode ser til no tratamento de colapso cardiovascular no choque sptico.
SUBVENES
Compatvel com o Centro Foundation Cincias da Sade e Biologia do Respirar
Group, Instituto Manitoba de Sade da Criana.

DIVULGAO
No h conflitos de interesse, financeiro ou outro, so declarados pelo autor
(es).

Copyright 2011, a American Physiological Society


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