UNIDAD

I:
PRINCIPIOS
MICROBIOLOGA.

BSICOS

DE

LA

La ciencia de la microbiologa: La microbiologa es la ciencia que estudia los

organismos que son normalmente demasiado pequeos para ser vistos a
simple vista por el ojo humano.

Principios bsicos de microbiologa.

La microbiologa gira en torno a dos temas fundamentales. Uno bsico y otro
aplicado:
1. Como ciencia biolgica bsica, la microbiologa proporciona algunas
de las herramientas de investigacin ms adecuadas para estudiar la
naturaleza de los procesos vitales.
2. Como ciencia biolgica aplicada, la microbiologa trata de muchos
problemas prcticos importantes en la medicina, la agricultura y la
industria.
De qu trata la microbiologa?
Trata de las clulas vivas y de cmo trabajan.
Trata de microorganismos como una clase importante de clulas que son
capaces de tener una existencia y una vida libre (independiente).
Trata de la diversidad y la evolucin microbiana de como surgen las
diferentes clases de microbios.
Trata de lo que hacen los microbios en todo el mundo en la sociedad
humana, en nuestros organismos, anmales y plantas.
Trata sobre el papel central que la microbiologa desempea como una
ciencia biolgica bsica y como la comprensin de la microbiologa nos
ayuda a entender la biologa de organismos superiores, incluyendo los
humanos.
Races histricas de la microbiologa
En 1664 Robert Hooke describi los cuerpos fructferos de mohos pero la
primera persona que vi microorganismos con detalle fue el holands
Antonie van Leeuwenhoek, aficionado a construir microscopios, quien en
1684 utiliz microscopios simples fabricados por l mismo.
No fue hasta el siglo XIX cuando los microscopios fueron mejorados
generalizndose su uso, lo que permiti poner de manifiesto el alcance y
la naturaleza de las formas microbianas de vida.
Se saba que las enfermedades infecciosas se transmitan de un
individuo a otro pero los mecanismos de la transmisin eran
desconocidos. Aunque las respuestas a estas preguntas se suelen
asociar con las figuras de Louis Pasteur y Robert Koch, respectivamente,
fue el botnico alemn Ferdinand Cohn (1828- l898), un contemporneo
de aqullos, quien fund la bacteriologa.

Cohn se interes especialmente por las bacterias resistentes al calor, lo

que le llev a descubrir el gnero Bacillus y el proceso de formacin de
esporas.

Pasteur y el fin de la generacin espontnea

El adversario ms ferviente de la generacin espontnea fue el qumico francs
Louis Pasteur (1822-1895), cuyo trabajo sobre este problema fue el ms
riguroso y convincente.
En primer lugar, Pasteur demostr que en el aire haba estructuras que se
parecan mucho a los microorganismos encontrados en el material putrefacto.
Describi que el aire normal contiene continuamente una diversidad de clulas
microbianas que son indistinguibles de las que se encuentran en mucha mayor
cantidad en los materiales en putrefaccin.
Por tanto, concluy que los organismos encontrados en tales materiales se
originaban a partir de microorganismos presentes en el aire. Adems postul
que dichas clulas en suspensin se depositan constantemente sobre todos los
objetos.
Pasteur emple el calor para eliminar los contaminantes, pues ya se saba que
el calor destruye con efectividad los organismos vivos.

Descripcin del material y equipo.

En general, el microscopio ptico se usa para observar clulas intactas,
mientras que los microscopios electrnicos se usan para observar estructuras
internas o detalles de las superficies celulares.
Estos objetivos que pueden ir desde 10 hasta de 100 aumentos, y con otros
objetivos de apertura numrica muy elevada, se emplea aceite de inmersin

para que no exista aire entre la preparacin y el objetivo. Las lentes con las
que se usa aceite de inmersin se denominan objetivos de inmersin.
Tinciones.
Normalmente los microorganismos carecen de contraste y cuesta obsrvalos
por lo que se suelen usar colorantes para teirlos y facilitar su observacin.
Los colorantes son compuestos orgnicos y cada tipo de colorante tiene
afinidad por determinados componentes celulares. Muchos de los colorantes
utilizados con frecuencia en microbiologa estn cargados positivamente
(catinicos) y se combinan fuertemente con constituyentes celulares cargados
negativamente.
Sobre un portaobjeto con una suspensin de microorganismos previamente
secada y fijada, se derrama una pequea cantidad de una solucin diluida del
colorante y se mantiene en contacto durante una o dos minutos; a
continuacin, se lava varias veces con agua y se seca.
Tinciones diferenciales.
Las tinciones diferenciales son aquellas que no tien del mismo modo todos los
tipos de clulas. Una tincin diferencial muy importante y ampliamente usada
en bacteriologa es la denominada tincin de Gram. Dependiendo del resultado
de esta tincin, las bacterias pueden dividirse en dos grandes grupos: Gram
positivas y Gram negativas. Una vez terminada la tincin de Gram, las
bacterias Gram positivas aparecen de color morado mientras que las Gram
negativas presentan color rojo.
A la suspensin de microorganismos se le agrega cristal de violeta, despus de
lavar se agrega lugol como fijador, se lava con alcohol cetona por 2 segundos y
se agrega finalmente safranina para lavar y fijar.
Bao Mara.
Instrumentos usados en incubaciones cortas, estas poseen agitadores
elctricos, calefactor, el termostato y el agitador forman una unidad, que se
separa fcilmente del bao para utilizarla en otro lugar o para su cuidado. Los
baos deben estar aislados, para impedir que pierda calor a travs de las
paredes.
Autoclaves
nicamente deben usarse autoclaves diseadas para trabajar en laboratorio.
Los tipos de autoclaves son:
El tipo de olla de presin: El tipo ms comn es un aparato para agua
hirviendo a presin. Tiene una cmara vertical de metal provisto de una
tapa metlica fuerte que se aprieta y cierra hermticamente mediante
un aro de goma. Se dispone en la tapa una espita para la salida de aire y
del vapor.

Los modelos de desplazamiento de

automtica de aire y vapor condensado.

la

gravedad

con

descarga

Equipo de vidrio, de plstico y material pequeo

En el trabajo microbiolgico ordinario son satisfactorios los tubos y matraces de
vidrio sdico. En algunas circunstancias, puede ser ms econmico comprar
material de vidrio del ms barato, a granel, y usar placas de petri de plstico,
que emplear mano de obra para la limpieza.
El material de plstico se agrupa en dos categoras:
(1)
Artculos de un solo uso, como placas de petri, recipientes para
muestras y asas de plstico, que pueden destruirse si se esterilizan en el
autoclave y no pueden esterilizarse por mtodos laboratoriales
ordinarios, y
(2)
Material recuperable, que puede esterilizarse al autoclave
Asas.
Asa micolgica: punta en L, utilizada para hongos.
Asa recta: punta recta, utilizada para punciones.
Asa bacteriolgica: punta en Q, usada para bacterias.

Medios de Cultivo.
Los medios se emplean para tres fines principales:
a) Para desarrollar y conservar cultivos bacterianos.
b) Para facilitar la produccin de microorganismos en algn producto
determinado o combinacin de productos.
c) Para estudiar la accin de los microorganismos sobre algunas
sustancias del medio
Elementos necesarios para el desarrollo de los microorganismos:
Agua (adecuada presin osmtica)
Concentracin de iones hidrogeno.
Tensin superficial,
No tener sustancias que puedan inhibir el crecimiento
microorganismos.
Carcter xido reduccin.

de

los

Medios para pruebas bioqumicas: Se utilizan para detectar enzimas o

sustancias existentes en los microorganismos que sirven para diferenciar
organismos que tienen caractersticas morfolgicas y de tincin similares.
Sustancias inhibidoras
Pueden hallarse presentes en peptonas, agar, hidratos de carbono y otras
sustancias qumicas, no preparadas especialmente para medio de cultivo,
metales como zinc y cobre y otras sustancias inhibidoras tales como cidos
grasos.

Los Microorganismos como clula.

La clula es la unidad de vida fundamental. Una clula es una entidad aislada
de otras clulas por una membrana celular (y tal vez por una pared celular)
que contiene en su interior diversos compuestos y estructuras subcelulares.
La membrana celular es la barrera que separa el interior de la clula del
exterior. Son estructuras clave el ncleo o nuclolo, donde se guarda la
informacin gentica, el cido desoxirribonucleico (DNA] necesario para hacer
nuevas clulas, y el citoplasma, donde se encuentra la maquinara para el
crecimiento y otras funciones celulares.
Todas las clulas estn formadas por cuatro tipos de componentes qumicos:
protenas, cidos nucleicos, lpidos y polisacridos. En conjunto, se denominan
macromolculas. Todas las clulas poseen: metabolismo, reproduccin,
diferenciacin, movimiento, evolucin, comunicacin.

Caractersticas
microbiologa.

de

los

grupos

principales

que

estudia

la

GRUPOS PRINCIPALES QUE ESTUDIA LA MICROBIOLOGA

A quines estudia la microbiologa? la microbiologa estudia cinco grupos
principales, estos son:

Hongos
Protozoarios
Bacterias
evolucionado.
Algas

Eucariontes: poseen ncleo definido ms

Procariontes: no tienen ncleo y su ADN se encuentra

Bacterias
disperso
en el citoplasma
Entre
las principales
caractersticas de las bacterias figuran su tamao, su
forma, su estructura y su tipo de agrupacin. Estas caractersticas constituyen
la morfologa de la clula.
El tamao de una bacteria no es exacta.
Segn su especie, las bacterias son esfricas, en forma de bastn o de
espiral.
En algunas especies, las bacterias se organizan en grupos, siendo los
ms comunes de ellos pares, racimos, cadenas y filamentos, conviene
conocer estas formas de agrupacin porque con frecuencia son
caractersticas de un grupo taxonmico, por ejemplo un gnero.
Algunas especies de bacterias poseen tambin apndices que se ponen
de manifiesto gracias a las tcnicas especiales de tincin o por el
microscopio electrnico
Las estructuras de las bacterias pueden ser:
Externas como: flagelo, capsula, fibrillas o pilli y pared celular.

Algunas bacterias estn rodeadas por una sustancia viscosa que forma
una cubierta o envoltura alrededor de la clula. Esta estructura se
denomina cpsula, o capa mucosa.
Muchas bacterias G (-) poseen apndices rgidos en la superficie
denominados pili (pelo) o fibrias (flecos).
Los apndices capilares sumamente finos que salen a travs de la pared
celular y que se originan en una estructura granular (cuerpo basal) en el
citoplasma inmediatamente por debajo de la membrana celular, se
llaman flagelos.

Los protoplastos son cuerpos redondos que toman la forma esfrica desde el
momento en que carecen de la pared celular externa rgida.
La membrana citoplsmica es una estructura de extrema importancia
funcional. Es una membrana semipermeable selectiva que regula el paso de
nutrientes y productos de desecho dentro y fuera de la clula, en la membrana

citoplsmica se localizan varias enzimas que intervienen en el transporte de

electrones y en la fosforilacin oxidativa.
Citoplasma: El material celular contenido dentro de la membrana citoplsmica
se divide en el rea citoplsmica de aspecto granular, rica en RNA; el rea
cromosmica o nuclear rica en DNA; y la parte lquida que disuelve las
sustancias nutritivas.
ENDOSPORA: Algunas bacterias tienen la facultad de producir cuerpos ovales
de pared gruesa (uno por clula) que es una clula de alta resistencia. Estas
formas resistentes se llaman endosporas o ms comnmente esporas. Todos
los organismos de los gneros Bacillus y Clostridium se caracterizan en parte
por la capacidad para producir endosporas. Las bacterias que forman esporas
se desarrollan y reproducen durante muchas generaciones como clulas
vegetativas.
El termino desarrollo que suele aplicarse a bacterias y otros microorganismos,
se refiere a los cambios que sufren cada organismo.
Reproduccin Asexual
El procedimiento ms importante en el ciclo de desarrollo de las poblaciones
bacterianas, es la fisin binaria transversal en la cual una clula se divide en
dos despus de desarrollar una pared transversa, es un procedimiento de
reproduccin asexual.

El crecimiento se define como un aumento en el nmero de clulas

microbianas en una poblacin que tambin se puede medir como aumento en
la masa microbiana.
La tasa de crecimiento es el cambio en la cantidad de clulas o de masa por
unidad de tiempo.

La reproduccin sexual consiste en la transferencia de material gentico

(nuclear) de una bacteria a otra. Este intercambio requiere de DNA y puede
realizarse por:
a) Conjugacin: Es un proceso de apareamiento en el que dos bacterias se
funden temporalmente.
b) Transformacin: Es el intercambio de DNA qumicamente puro.
c) Transduccin: Es el intercambio de DNA por medio de un virus
bacteriano

CURVA DE CRECIMIENTO

Fases de la curva de crecimiento:

Fase de latencia: este periodo consiste en la adaptacin de las clulas
microbianas a su nuevo ambiente.
Fase Exponencial: como el nombre lo indica, en esta fase las clulas se
encuentran en un estado de crecimiento sostenido.
Fase Estacionaria Mxima: ante el agotamiento de nutrimentos en el
medio o la acumulacin de metabolitos txicos el crecimiento cesa.
Fase de Declinacin: esta fase, tambin conocida como fase de muerte,
representa el decremento de clulas debido al aumento progresivo de la
tasa de mortalidad.
Un medio de cultivo adecuado debe contener todos los nutrimentos requeridos
por el microorganismo que va ser cultivado y factores tales como:

pH,

temperatura,

presin osmtica,
Nutrientes
Los virus
Los virus son los agentes infecciosos ms pequeos (20 a 300 nm de
dimetro), que contienen como genoma slo una clase de cido nucleico (RNA
o DNA). El cido nucleico se encuentra encerrado en una cubierta protenica, la
cual puede estar rodeada por una membrana que contiene lpidos. Toda la
unidad infecciosa se denomina virin. (Bacterifagos: virus que atacan a las
bacterias.)
Los virus son inertes en el medio extracelular; se replican slo en clulas vivas
y su parasitismo es a nivel gentico.
Los hongos
Tienen muchas manifestaciones morfolgicas. En general, en los hongos se
incluyen los hongos y las levaduras. El trmino moho, se usa con poca

precisin pues comprende lo mismo al tejn, la roya, el aublo, las setas, el

bejn y los mohos limosos.
Aunque los hongos son un grupo grande y muy variado de microorganismos
eucarioticos, tres grupos de hongos tienen una gran importancia prctica:
1. los mohos.
2. las levaduras.
3. las setas.
Sin embargo la mayor parte de los, hongos tienen hbitat terrestres, sea en la
tierra o en materia vegetal muerta, estos dos tipos desempean una funcin
crucial en la mineralizacin del carbono orgnico de la naturaleza.
Los hongos son hetertrofos pues como saprfitos obtienen su alimento de la
materia orgnica muerta o como parsitos se alimentan de huspedes vivos.
Como saprfitos destruyen plantas y restos de animales degradndolos a
formas qumicas simples que pasan a formar parte del suelo y, finalmente, son
absorbidas por otras generaciones de plantas. Esta actividad de los hongos es
en gran parte, la causa de la mayor o menor fertilidad de la tierra. El
crecimiento saproftico de los hongos tambin puede ser daino.
Los hongos son microorganismos eucarioticos quimioorganotrficos. Se
reproducen de manera natural por medio de esporas, aunque hay algunas
excepciones (adems, casi todas las partes de un hongo son, en potencia,
capaces de desarrollarse; un pequeo fragmento es suficiente para iniciar un
individuo nuevo). No tienen clorofila. Sus cuerpos son usualmente alargados o
filamentosos (5 a 10 um de grosor y por lo general, ramificados). Los
filamentos poseen pared celular que contiene quitina o celulosa, o las dos. La
mayor parte de los hongos son inmviles, si bien pueden tener clulas
reproductoras mviles.
El talo de los hongos se compone caractersticamente de filamentos tubulares
microscpicos llamados hifas. El conjunto de hifas se denomina micelio.
La mayor parte de los hongos son filamentosos, aunque algunos, como las
levaduras comunes, son unicelulares. La pared de las hifas es semirrgida.
Los protozoos
Los protozoos son microorganismos sin clorofila, clasificados como formas
inferiores de vida en el reino animal, estos pueden existir como clulas aisladas
que pueden distinguirse de otros protistas eucariticos por su capacidad de
desplazarse durante algn perodo de su ciclo biolgico.
Los protozoos ocupan un lugar importante en la cadena alimentara de las
comunidades naturales en donde hay agua libre. Como regla general, los
protozoos que se nutren de una gran variedad de organismos estn muy
difundidos; aquellos que se alimentan de unas cuantas especies, tienen
limitada su distribucin.
Los nemtodos

Infectan casi todas las especies vegetales y abundan en toda clase de

huspedes.
Los nemtodos verdaderos son gusanos cilndricos o fusiformes cubiertos por
una cutcula muy resistente, posee un aparato digestivo sencillo con boca y
ano, una cavidad corporal llena de lquidos, que no esta revestida de epitelios
como en otros animales y usualmente con separacin de sexo, estando sus
glndulas sexuales en continuidad con sus conductos, en forma de finos
tbulos.

Eucariontes: Tienen un ncleo verdadero, una estructura membranosa

de separacin dentro de la cual se encuentran los cromosomas que
contienen el material de herencia.
Procariontes: No tienen ncleo verdadero y su material de herencia
esta contenido dentro de una molcula de cido desoxirribonucleico
(ADN), nico y desnuda.

Clasificacin de los organismos microbianos genero y

especie.
Los microorganismos son tan diversos que es til darles nombres y para
hacerlo debe haber formas que nos permitan diferenciarlos.
Los microorganismos emplean el sistema binominal de nomenclatura. El
nombre genrico se aplica a varios organismos emparentado, mientras que
cada tipo, diferente de organismo del genero tiene un nombre especificos.
Ecologa: En la naturaleza, las poblaciones de clulas raramente viven
solas. Ms bien, las poblaciones de clulas viven en asociacin con otras
poblaciones de clulas, en conjunto llamadas comunidades.
Una comunidad es un conjunto de poblaciones que viven juntas en el
mismo hbitat.

Los microorganismos funcionan como poblaciones (conjunto de

organismos similares), y como comunidades (mezcla de poblaciones
microbianas diferentes).

Ambientes acuticos y microorganismos

Un factor importante en los medios acuticos es el flujo de materiales, ya sean
en forma de gas, slido o en disolucin, que provoca cambios en sus
concentraciones.
La comunidad microbiana
La diversidad microbiana depende de diferentes factores, como la
disponibilidad y concentracin de nutrientes (desde extremadamente bajas a
muy altas), las transiciones de zonas aerbicas a anaerbicas, y la mezcla de
oxidantes y reductores en este ambiente dinmico.
Anlisis sanitario del agua: prueba de fermentacin de tubos seriados.
Los microorganismos del suelo

Los suelos son sistemas dinmicos y tardan un tiempo en formarse, dcadas o

incluso siglos; la materia orgnica del suelo puede tener miles de aos de
antigedad.
En la mayora de los suelos, los mayores productores de materia orgnica son
las plantas vasculares, aunque las algas, cianobacterias y otras bacterias
fotosintticas tambin contribuyen a estos procesos, especialmente en los
ambientes desrticos.
El suelo es el hbitat de una gran variedad de organismos, incluyendo
bacterias, hongos, protozoos, insectos, nematodos, lombrices y muchos otros
animales. Los virus tambin se encuentran en el suelo.

Nmero y distribucin de microorganismos

El componente microbiano de las esporas del aire del exterior es dominado por
hongos excepto en lugares cercanos a concentraciones de animales y edificios,
donde las bacterias son ms importantes.
El nmero de microorganismos vara, pero hay varios cientos de bacterias por
m3 en el campo y en ocasiones hasta varios millares por m3 en las ciudades.
Las esporas de los hongos son ms comunes, y puede haber decenas de
millares por m3 durante el verano sobre suelo agrcola.
SEGURIDAD EN MICROBIOLOGIA
Las personas que trabajan en laboratorios de microbiologa no se deben sentir
en peligro de infectarse por los microorganismos con los que trabajan, siempre
que tengan en cuenta:
Los riesgos potenciales de los microorganismos en estudio.
Las vas por las que estos grmenes pueden penetrar en el organismo y
causar infecciones.
Los mtodos correctos de contencin de estos grmenes para que no
lleguen a acceder a dichas vas.
Grupo de Riesgo I (bajo riesgo individual y comunitario).
Un microorganismo que es improbable produzca enfermedad humana o
enfermedad animal de importancia veterinaria.
Grupo de Riesgo II (riesgo individual moderado, riesgo comunitario
limitado)
Un patgeno que puede causar enfermedad humana o animal pero que es
improbable que sea un riesgo grave para el personal de laboratorio, la
comunidad, la ganadera o el medio ambiente.
Grupo de Riesgo III (riesgo individual alto, riesgo comunitario bajo).
Un patgeno que produce generalmente enfermedad humana grave, pero que
no se difunde de ordinario de un individuo infectado a otro.
Grupo de Riesgo IV (elevado riesgo individual y comunitario).
Un patgeno que produce generalmente enfermedad humana o animal grave y
puede trasmitirse fcilmente de un individuo a otro, directa o indirecta.

Prevencin de las infecciones adquiridas en el laboratorio

Los principios de contencin suponen la creacin de:
a- Barreras primarias alrededor de los microorganismos para impedir su
dispersin en el laboratorio.
b-Barreras secundarias alrededor del operador para que acte como una
red de seguridad si se rompieran las barreras primarias.
c-Barreras terciarias que impidan, alcance a la comunidad, cualquier
germen que no sea contenido por las barreras primarias y secundarias.