SPATIAL DISTRIBUTION OF THE TRACE ELEMENTS ZINC,

STRONTIUM AND LEAD IN HUMAN BONE TISSUE

Oleh
Febri Ardhiyansyah 1317011023
Indah Tri Yulianti 1347011004
Ismi Ambalika 1317011030

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS LAMPUNG
2016

ABSTRAK

Trace elemen adalah elemen kimia dalam jumlah yang dikenal banyak di tulang.
Tulang kortikal dan trabekuler terdiri dari unit struktural tulang (BSUs) seperti
osteons dan paket tulang kandungan mineral yang berbeda dan dipisahkan oleh
garis semen. Penelitian sebelumnya menyelidiki elemen di tulang kekurangan
resolusi dan oleh karena itu sangat sedikit yang diketahui tentang konsentrasi
lokal seng (Zn), strontium (Sr) dan timbal (Pb) di BSU dari tulang manusia. Kami
menggunakan sinkrotron radiasi melalui analisis mikro X-ray fluorescence (SR XRF) dalam kombinasi dengan kuantitatif hamburan elektron (qBEI) untuk
menentukan distribusi dan akumulasi Zn, Sr, dan Pb dalam jaringan tulang
manusia.
Empat belas sampel manusia tulang (10 leher femoralis dan 4 kepala femoral) dari
individu dengan patah tulang leher femur osteoporosis serta dari individu yang
sehat juga dianalisis. Intensitas fluoresensi dicocokkan dengan BE gambar dan
berkorelasi dengan kalsium (Ca) konten. Kami menemukan bahwa Zn dan Pb
memiliki secara signifikan meningkatkan kadar dalam garis semen dari semua
sampel dibandingkan dengan matriks tulang mineralisasi sekitarnya. Tingkat Pb
dan Sr ditemukan berkorelasi dengan tingkat mineralisasi. Menariknya, Zn
memiliki intensitas korelasi dengan tingkat Ca. Kami telah menunjukkan untuk
pertama kalinya bahwa ada akumulasi diferensial dari elemen Zn, Pb dan Sr di
BSU dari tulang manusia yang menunjukkan mekanisme yang berbeda dari setiap
akumulasinya.

I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Ketika jaringan organisme hidup dianalisis dengan metode analisis kimia yang
sangat sensitif, unsur kimia yang spesifik dalam jumlah yang sangat sedikit (<
ppm) dapat ditemukan. Elemen ini disebut senyawa essensial atau non-esensial
bagi organisme hidup. Namun, peran dari unsur ini dalam jaringan tulang manusia
kurang dipahami. Upaya besar telah dilakukan untuk menentukan jumlah asupan
yang dibutuhkan dari berbagai elemen di tulang. Karena pada umumnya analisis
kimia didasarkan pada metode destruktif, informasi tentang distribusi spasial dari
elemen dalam jaringan biasanya hilang. Studi sebelumnya tidak memiliki
distribusi spasial dan hanya dibedakan antara kortikal dan tulang trabekular.
Perkembangan teknologi baru radiasi sinkrotron sekarang memungkinkan unutk
menganalisis dengan cara non-destruktif, spasial trace elemen seperti seng (Zn),
strontium (Sr) dan timbal (Pb) dalam jaringan tulang. Misalnya menggunakan
radiasi sinkrotron diinduksi analisis confocal mikro X-ray fluorescence (SR XRF) kami menemukan akumulasi yang sangat spesifik dari Pb dan Zn didaerah
transisi antara mineralisasi dan nonmineralisasi tulang rawan artikular
dibandingkan dengan tulang subchondral. Selain itu metode ini juga mampu
mendeteksi dan memetakan unsur yang berbeda secara bersamaan.
Zn, Sr dan Pb adalah elemen, hadir dalam konsentrasi yang cukup pada tulang
sehingga mereka dapat dengan mudah dipetakan dengan metode multi-elemental
SR -XRF. Zn merupakan elemen jejak penting penting dalam beberapa proses
biologis dan kurangnya asupan dari element ini dapat menyebabkan penyakit
kronis. Zn juga hadir dalam jaringan tulang dan telah dilaporkan bahwa
memainkan peran penting dalam metabolisme tulang. Studi pada tingkat Zn dalam
jaringan yang berbeda mengungkapkan bahwa sebagian besar hadir dalam tulang
dan untuk alasan ini Zn dapat dianggap sebagai komponen penting dari matriks
klasifikasi. Sr kemungkinan merupakan trace elemen yang bersifat non-esensial,
tetapi dalam beberapa tahun ini, penelitian telah menunjukkan bahwa Sr mampu
mempengaruhi regenerasi tulang dan telah diterapkan bentuk hubungan strontium
pada terapi pengobatan osteoporosis. Sr secara kimia sangat mirip dengan kalsium
(Ca), dan dapat menggantikan Ca, tapi masih sedikit yang diketahui tentang peran
Sr dalam metabolisme tulang normal maupun pada gangguan tulang. Pb

merupakan trace elemen yang bersifat non-esensial dan merupakan logam berat
yang sangat beracun. Salah satu ancaman utama dari logam berat pada kesehatan
manusia dikaitkan dengan paparan Pb. Paparan Pb dikaitkan dengan penyakit
kronis di saraf, hematopoietik, tulang, ginjal dan sistem endokrin. Pb telah
dinyatakan juga sebagai faktor risiko yang potensial untuk osteoporosis dan
osteoarthritis. Sekitar 95% dari total Pb dalam tubuh disimpan dalam kerangka
jaringan tulang memiliki kapasitas yang tinggi untuk mengumpulkan dan
menyimpan Pb. Dalam konteks ini jaringan tulang tampaknya juga memiliki
fungsi untuk menekan level serum yang sangat beracun tersebut.
Tulang manusia pada dasarnya terdiri dari susunan nonhomogen dan nonisotropik
dari mineral serat kolagen. Tulang kortikal dan trabekular dibentuk oleh osteons
dan paket tulang (unit struktural tulang yang disebut BSUs). Mereka diproduksi
pada waktu yang berbeda siklus (re) modeling oleh aktivitas terkoordinasi sel-sel
tulang, dimana osteoblas mensintesis, mengeluarkan dan menyimpan matriks
kolagen, yang kemudian secara bertahap mineral tercampur. Dengan demikian,
masing-masing BSU memiliki kandungan mineral tertentu tergantung pada waktu
deposisi. Secara umum BSUs ini dihubungkan oleh lapisan tipis mineral protein
non-kolagen, yang disebut garis/ lapisan semen yang diproduksi selama siklus
remodeling. Sangat sedikit data yang tersedia mengenai distribusi spasial dari
trace elemen dalam suatu jaringan tulang.

B. Tujuan penelitian
Adapun tujuan dari penelitian ini adalah untuk memetakan trace elemen seperti
Zn, Sr dan Pb dalam jaringan tulang dan untuk menjelaskan pertanyaanpertanyaan berikut:
i) apakah ada pola akumulasi yang berbeda dari Zn, Sr dan Pb tergantung pada isi
matriks tulang mineralisasi Ca dalam paket tulang, osteons, dan berkaitan
dengan tulang dan
ii) merupakan akumulasi Zn, Sr dan Pb dalam garis semen yang berbeda dari matriks
mineral tulang. Dengan mempertimbangkan bahwa ukuran tempat dari
pengaturan confocal SR -XRF adalah sekitar 5 kali lebih lebar dari lebar
intensitas garis semen diukur sebenarnya meremehkan besar dari tingkat nyata
dari trace elemen didaerah ini.
Untuk tujuan ini kami menganalisis trabekuler dan tulang kortikal dari leher
femoralis manusia dan kepala menggunakan SR -XRF dalam kombinasi dengan
kuantitatif electron backscattered imaging (qBEI). qBEI, metode yang telah
mapan dan divalidasi, digunakan untuk memvisualisasikan mineralisasi jaringan
dengan resolusi spasial 1 m per pixel, untuk mengukur mineral tulang konten /Ca

lokal dan memilih daerah yang menarik untuk pengukuran -XRF SR dalam
jaringan tulang.

II. METODOLOGI PERCOBAAN

A. Sampel Tulang
Untuk penelitian ini, sampel tulang dari 14 wanita menopause telah dianalisis: a)
sampel leher femoralis (n = 10) yang telah menjadi bagian dari studi sebelumnya
[29,30] dan disediakan oleh N. Loveridge (Departemen Kedokteran, Universitas
dari Cambridge, Cambridge). Lima dari sampel ini berasal dari pasien yang
menderita patah tulang leher femur osteoporosis dan 5 sampel dari otopsi forensic
individu tanpa metabolik usia penyakit tulang cocok dengan yang patah tulang
osteoporosis. Rata-rata usia orang-orang ini adalah 81,5 tahun mulai dari usia 7492 tahun. b) sampel kepala femoralis (n = 4), yang diperoleh selama operasi
penggantian pinggul. Individu menderita patah tulang leher femur osteoporosis
dan berusia 60 sampai 80 tahun dengan usia rata-rata 77,5 tahun.
Pengukuran dilakukan di kedua wilayah tulang trabekuler dan kortikal untuk
sampel leher femoralis dan hanya di wilayah trabecular untuk sampel kepala
femoral menghasilkan total 35 daerah dari sekitar 500 m 650 m. Istilah matriks
mineral dalam tulang akan dijelaskan di daerah tulang osteons dan interstitial di
wilayah tulang osteonal dan tulang paket di wilayah tulang cancellous. Hasil
terbaik dari penelitian yang telah dilakukan, tidak ada pasien yang memiliki
konsentrasi Pb dibandingkan dari tingkat alam di ruang tamu mereka. Penelitian
ini adalah sesuai dengan dan disetujui oleh komite etika lokal (Institutional
Review Board of Medical University of Vienna).
B. Persiapan sampel
Seperti yang sudah dijelaskan dalam penelitian sebelumnya, sampel disusun
sebagai blok undecalcified di polymethylmethacrylate (PMMA) tertanam di
jaringan tulang. Sampel leher femoralis dipotong pada bidang transversal dan
sampel kepala femoral tegak lurus terhadap permukaan artikular (bidang frontal).
Bagian permukaan yang diproduksi digiling dengan kertas pasir dan kemudian
digosok dengan suspensi berlian (3 dan 1 m ukuran butir) pada bagian yang akan
digosok (PM5: Logitech Ltd, Glasgow, UK) atau oleh penggilingan dengan
berlian yang ultra miller (SP2600: Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Jerman).
Seluruh proses dan persiapan permukaan prosedur diuji untuk bebas dari Zn, Sr
dan kontaminasi Pb.

C. qBEI
banyak hamburan elektron (qBEI) adalah teknik validasi untuk memvisualisasikan
dan mengukur distribusi konsentrasi kalsium (Ca) dalam tulang berdasarkan pada
hamburan balik elektron dari permukaan sampel dalam mikroskop elektron
scanning (SEM). Daerah dengan tingkat abu-abu terang menunjukkan matriks
dengan konten Ca tinggi, sedangkan daerah dengan tingkat abu-abu gelap
menunjukkan konten Ca rendah. Garis semen, zona transisi antara paket tulang
yang berbeda dan osteons biasanya menunjukkan kandungan mineral yang lebih
tinggi dari mineralisasi matriks tulang yang berdekatan. Rincian lebih lanjut
tentang metode qBEI dapat ditemukan di tempat lain.
Sebuah SEM (DSM 962, Zeiss, Oberkochen, Jerman) yang digunakan untuk
memperoleh gambar qBEI menggunakan 20 keV elektron mengarah ke informasi
sekitar 1,5 m. Gambar pada perbesaran yang berbeda 12 kali lipat untuk
peninjauan luas dan 200 kali lipat (resolusi pixel dari sekitar 1 1 m) dimana
diperoleh untuk memilih dan mendefinisikan daerah penting (ROI) dalam tulang
untuk analisis SR--XRF mirip dengan penelitian yang dilakukan sebelumnya.
Terutama daerah (paket tulang, osteons) yang mengandung matriks tulang
mineralisasi dengan derajat yang berbeda dari mineralisasi yang telah dipilih.
D. SR--XRF
Sifat radiasi sinkrotron (SR) termasuk perubahan foton yang tinggi, penjajaran
alami, polarisasi dan kemungkinan untuk memilih energi dari foton primer
diaktifkan kepekaan hingga kisaran femtogram dan resolusi spasial tinggi dalam
kisaran mikrometer. Dalam penelitian sebelumnya, kombinasi geometri confocal
dan SR memungkinkan analisis elemen di tulang dan tulang rawan artikular di
kisaran mikrometer dengan sensitivitas tinggi dan distribusi spasial tinggi. Rincian
lebih lanjut tentang confocal SR--XRF dapat ditemukan di tempat lain.
Pengukuran ini telah dilakukan di FLUO dengan garis cahaya dari ANKA
fasilitas sinkrotron di Karlsruhe Institute of Technology Campus North
menerapkan pengaturan confocal sama seperti yang sudah dijelaskan sebelumnya.
Energi eksitasi yang sebenarnya adalah 17 keV dan ukuran balok adalah 17 m
12m ( horisontal vertikal) dengan resolusi kedalaman 19 m di 9.71 keV (AuL). Scan daerah di permukaan sampel dilakukan di kisaran 500 m 500m
sampai 500 pm 650m dengan ukuran langkah 15 m horizontal dan 10 m
vertikal. Waktu akuisisi lebih panjang dari 12 s per pixel dimana tidak
menunjukkan perbaikan dalam sinyal untuk rasio kebisingan dari peta elemental
yang diperoleh. Terutama, rendahnya tingkat konten Pb diperlukan waktu akuisisi

yang relatif lama ini. Spektrum yang diperoleh, ditunjukkan pada Gambar. 1,
diproses sesuai dengan protokol yang dijelaskan dalam gambar tersebut.
E. Evaluasi Data
Informasi tentang struktur jaringan tulang dan mineral seperti yang diperoleh
dengan qBEI dikombinasikan dan berkorelasi dengan intensitas X-ray sesuai peta
elementali. Data 2D software evaluasi ImageJ (v1.44, National Institutes of
Health, USA) dan pembuatan data biasanya dilakukan setiap sebelum proses
mengahsilkan data sebelumnya untuk evaluasi statistic dengan menggunakan
software GraphPad Prism (v4.0c, GraphPad Software, Inc. , USA).
F. Daerah tujuan
Gambar pertama qBEI resolusi spasial tinggi (1 mper pixel) telah sesuai dengan
-XRF peta yang sesuai SR. Kedua, ROI mewakili mineralisasi matriks tulang
dan garis semen yang ditunjukkan dalam gambar qBEI. ROI dari matriks tulang
mineralisasi ditandai dalam unit tunggal struktural (osteon, paket tulang)
mengurus bahwa setidaknya jarak dari fewmicrons (5 sampai 10 pM) untuk retak,
garis semen, ruang kosong osteosit, kanal haversian atau permukaan trabekular
disimpan. Garis semen sendiri diberi label oleh 10 pm garis tebal yang sesuai
diameter sinar X-ray. Akhirnya, tanda ini / masker pada gambar qBEI dipindahkan
/ overlay langsung ke peta elemental (Gbr. 2).
G. Normalisasi SR -XRF-peta
Sebuah normalisasi umum dari perhitungan XRF untuk waktu akuisisi dan saat
sinkrotron-ring 100 mA dilakukan. Intensitas XRF Pb, Zn, dan Sr yang lebih
dikoreksi untuk variasi dalam intensitas XRF disebabkan oleh perubahan kecil
dalam setup pengukuran antara peta yang berbeda, sampel dan sesi sinkrotron,
sehingga Pb, Zn, dan Sr XRF-intensitas antara semua peta dapat langsung
dibandingkan dan diperlakukan sebagai ukuran kandungan unsur. Untuk tujuan ini
faktor rata-rata K (lihat rumus (1) dievaluasi untuk setiap peta, mengungkapkan
rasio rata-rata antara Ca yang diukur dengan qBEI (wt.% Ca) dan Ca yang diukur
dengan SR -XRF (cpsCa). Dengan demikian, perbanyakan SR -XRF nilai cps
Pb, Zn, dan Sr dari peta individu dengan faktor K yang sesuai mengarah ke
koreksi / normalisasi semua peta berdasarkan nilai-nilai Ca mutlak seperti yang
diperoleh dengan metode qBEI.

Formula 1: K = berarti faktor normalisasi satu SR peta -XRF,

wt.% Ca i = konsentrasi Ca rata-rata dari matriks ROI mineralisasi tulang
diukur dengan qBEI, cpsCa = berarti Ca-K fluorescence intensitas mineral
matriks tulang ROIi, n = jumlah ROIs matriks tulang termineralisasi dari peta
masing-masing.
H. Evaluasi statistik
Untuk setiap sampel median dari tingkat normal hitungan Ca, Zn, Pb dan Sr untuk
matriks tulang mineralisasi dan ROIs garis semen dihitung. Tingkat signifikansi
dari perbedaan antara mineralisasi matriks tulang dan semen garis diuji dengan uji
Mann-Whitney non-parametrik untuk setiap sampel secara terpisah. Untuk tujuan
ini semua dievaluasi mineralisasi matriks tulang dan garis semen ROIs dari
masing-masing sampel yang digunakan. Jumlah mineral matriks tulang dan garis
semen ROIs berbeda untuk semua sampel. Jumlah garis semen ROIs lebih besar
untuk semua sampel. Untuk mengevaluasi perubahan rasio tingkat hitungan antara
garis semen dan matriks mineralisasi tulang uji Wilcoxon dengan nilai hipotetis
median 1 (= sama distribusi unsur) yang digunakan.
Yang terpenting dari korelasi antara konten Ca dan elemen jejak tingkat semua
ROIs matriks tulang termineralisasi dievaluasi dari semua sampel (n = 402) diuji
dengan tes Spearman non-parametrik ini. Perbedaan atau korelasi dengan p < 0,05
dianggap penting.

III.

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil
Ditekankan bahwa ukuran spot dari pengaturan confocal SR -XRF yaitu sekitar 5
kali lebih lebar dari lebar garis semen. Dengan demikian tingkat elemen di garis
semen dijelaskan dalam berikut ini benar-benar meremehkan besar dari tingkat
nyata dari elemen (lihat detail di bagian "Keterbatasan").

Daerah Zn, Pb dan Sr di jaringan tulang

Pada Gambar. 3 contoh distribusi spasial/daerah dari unsur-unsur Ca, Zn,
Pb dan Sr di jaringan tulang yang ditunjukkan: i) gambar qBEI yang
sesuai, a) osteonal dan b) ditunjukkan daerah tulang trabecular dengan
kandungan mineral yang berbeda (abu-abu gelap, rendah dan abu-abu
terang, kandungan mineral yang tinggi). ii) Tak satu pun dari daerah XRF
menunjukkan distribusi homogen dalam jaringan tulang. iii) Zn
menunjukkan peningkatan yang luar biasa dalam garis semen dan di
perbatasan dengan saluran haversian (daerah ini tidak dievaluasi).
Intensitas Zn tampak agak konstan dalam matriks tulang termineralisasi.
Akumulasi Zn dalam garis semen ditunjukkan pada Gambar. 3b. Banyak
garis semen paralel dilihat di gambar qBEI sesuai dengan pita-pita dari
tinggi intensitas Zn-K Peta -XRF. iv) Pb juga terakumulasi dalam garis
semen dan di perbatasan dengan saluran haversian (daerah ini tidak
dievaluasi). Selain itu Pb menunjukkan korelasi yang kuat dengan Cakonten di matriks tulang termineralisasi. Dengan demikian, osteon muda
pusat dengan rendah mineral dan konten Ca karena rendah memiliki
kandungan Pb yang sangat rendah yang bahkan batas deteksi metode SR-XRF tercapai. Pada Gambar. 3b tingkat Pb dari sampel tulang begitu
rendah sehingga daerah Pb hanya sinyal suara. v) Hasil distribusi Sr
berbeda dari Zn dan Pb. Tidak ada akumulasi di garis semen dan
perbatasan saluran haversian. Namun ada perbedaan jelas terlihat antara
matriks tulang mineralisasi dari berbagai osteons.

Perbandingan Zn, Pb dan tingkat Sr antara matriks tulang mineral dan

garis semen

Dalam semua sampel yang diteliti kami menemukan secara signifikan

lebih tinggi intensitas Zn dan Pb dalam garis semen dibandingkan dengan
matriks tulang mineral (Gambar. 4) (p < 0,05 untuk setiap sampel
individu). Bahkan dalam sampel, yang memiliki tingkat Pb terendah
(ditunjukkan pada Gambar. 3b), secara signifikan lebih tinggi konten Pb
dapat ditemukan dalam garis semen. Ada variasi di Zn dan Pb XRF
intensitas matriks tulang mineral dan semen garis (Gambar. 4).
Ketika menganalisis garis semen untuk rasio matriks tulang mineralisasi
untuk Zn dan Pb (Gambar 5) dari semua sampel kami menemukan: i)
konten Zn berada di median 1,3 kali lebih tinggi (kuartil bawah: 1,2;
kuartil atas: 1,4; pb 0,05 ) sejalan semen dari dalam matriks tulang
mineral; ii) tingkat Pb berada di median 2,0 kali lebih tinggi (kuartil
bawah: 1,5; kuartil atas: 2,5; p b 0,05) di garis semen dari dalam matriks
tulang mineral; dalam satu sampel Pb adalah 3,8 kali meningkat
dibandingkan dengan matriks tulang mineralisasi (Gambar. 5). Dengan
demikian, kami menemukan perbedaan yang lebih besar pada Pb daripada
Zn.
Sebaliknya, intensitas Sr tidak secara signifikan berubah di antara matriks
tulang mineral dan semen baris.

Hubungan mineralisasi pada Zn, Pb dan tingkat Sr di matriks tulang

mineral
Korelasi konten Ca dan tingkat trace elemen dievaluasi menggunakan data
yang diperoleh dari semua ROIs matriks tulang mineral (kuning daerah
berlabel pada Gambar. 2) dari semua sampel. Diagram yang menunjukkan
hubungan Zn, Pb dan Sr dengan isi Ca disajikan pada Gambar.6. Tidak ada
korelasi antara Zn dan tingkat Ca ditemukan, sementara Pb dan Sr
menunjukkan peningkatan non-linear dengan tingkat mineralisasi, yang
signifikan (p < 0,001; tingkat uji korelasi Spearman).

Perbandingan antara retak dan tidak retak leher femoralis

Analisis data dari dua subkelompok, femoralis tulang leher dengan fraktur
leher osteoporosis dan usia cocok tanpa fraktur, menunjukkan tidak ada
perbedaan yang signifikan dalam trace elemen dan pola distribusi.

B. Pembahasan
Radiasi Synchrotron diinduksi confocal analisis mikro X-ray fluorescence (SR XRF) bersama-sama dengan Kuantitatif Backscattered Elektron Imaging (qBEI)
telah digunakan untuk pertama kalinya untuk mengevaluasi distribusi spasial dari

unsur Zn, Sr dan Pb dalam jaringan tulang. Hasil analisis menunjukkan tingkat
yang lebih tinggi dari Zn dan Pb dalam garis semen dibandingkan dengan matriks
tulang termineralisasi berdekatan. Dalam paket tulang / osteons tingkat Pb dan Sr
yang secara signifikan tergantung pada konten Ca mereka. Sebaliknya, ini tidak
ditemukan untuk Zn.
Mineralisasi matriks tulang lawan garis semen
Garis semen diidentifikasi dan ditelusuri dalam gambar qBEI menunjukkan nilai
Zn secara konsisten lebih tinggi dan nilai Pb dibandingkan dengan matriks tulang
mineralisasi yang berdekatan menunjukkan mekanisme yang berbeda dari Zn dan
Pb penggabungan / akumulasi antara dua wilayah dari jaringan tulang. Berbeda
dengan matriks tulang mineralisasi, garis semen (lebih tepat permukaan semen)
kaya dengan protein non-kolagen seperti osteocalcin dan osteopontin. Selama fase
pembalikan tulang garis semen terbentuk, yang mendapat mineralisasi pada
umumnya sampai batas yang lebih tinggi dari matriks tulang mineralisasi yang
berdekatan sebagai visualisasi dari hamburan elektron. Lapisan permukaan semen
ini terkena cairan sampai matriks tulang baru (osteoid) diendapkan oleh osteoblas.
Selama periode ini ion Zn dan Pb hadir dalam cairan atom sehingga dapat
diakumulasikan dalam semen materi garis disimpan (protein dan mineral) melalui
dua cara: a) oleh penyerapan ion langsung dalam hidroksiapatit dan tambahan b)
oleh keterikatan protein, yang memiliki afinitas tinggi. Dengan demikian,
peningkatan konsentrasi Pb dalam garis semen mungkin karena osteocalcin, yang
memiliki afinitas lebih tinggi untuk Pb daripada Ca bahkan pada tingkat rendah
Pb. Sebaliknya, Zn merupakan bagian / kofaktor dari enzim seperti matrik
metaloproteinase ( MMPs) yang memainkan peran penting dalam degradasi
kolagen selama proses perbaikan tulang serta tulang alkali fosfatase [b-ALP].
Semua osteoblas yang disintesis juga terlibat dalam mineralisasi matriks tulang.
Peningkatan kadar Zn dari garis semen ini menunjukkan bahwa enzim ini / protein
disimpan dalam garis semen selama proses perbaikan. Hal ini dapat
dispekulasikan bahwa dalam fase resorpsi tulang ion Zn dilepaskan dan kembali
digunakan sebagai kofaktor dari enzim untuk tahap pembentukan tulang
berikutnya dan atau segera dimasukkan kembali ke dalam tulang bentuk baru. Hal
ini didukung oleh fakta bahwa selama remodeling tulang Zn tidak meningkatkan
kadar serum.
Menariknya, variasi antar-individu tingkat Zn yang jauh lebih kecil dibandingkan
dengan Pb (Gambar. 4a), yang menunjukkan bahwa Zn merupakan komponen
yang melekat pada garis semen daripada tergantung dari variasi periode di mana
garis semen terkena cairan atom selama siklus renovasi Pb jelas tidak. Dalam
konteks ini harus disebutkan bahwa dalam studi terbaru mengenai tingkat Zn
diamati di zona transisi antara mineralisasi dan nonmineralisasi tulang rawan
(tanda air pasang), perilaku diferensial yang sama Zn dan akumulasi Pb

ditemukan. Zn jelas meningkat tanpa variasi utama, sementara peningkatan Pb

lebih tinggi seiring semakin lama tanda air pasang itu terkena cairan interstitial
dari nonmineralisasi tulang rawan artikular.
Berbeda dengan Zn dan Pb, Sr tidak memiliki akumulasi dalam garis semen yang
dapat diamati, meskipun diketahui bahwa ion Sr mampu menggantikan ion Ca2+.
Penelitian pada hewan menunjukkan bahwa Sr dapat menggantikan Ca di hampir
semua proses fisiologis dan hampir secara eksklusif disimpan di tulang. Protein
mengikat afinitas dari Sr yang mirip dengan Ca. Jumlah diet Sr dapat bervariasi
tanpa terjadinya gejala keracunan dan tidak di bawah kendali homeostatis
sehingga darah dan serum kadar tidak dijaga secara konstan. Ini berarti dalam
keterbatasan bawah, mungkin ada peningkatan Sr dengan Ca di garis semen,
tetapi peningkatan Ca dan Sr mungkin relatif terlalu kecil untuk dibedakan dalam
volume matriks 12 pmn (Ukuran voxel) dengan ketebalan garis semen hanya 1
sampai 2 pm.
Trace elemen vs mineralisasi matriks tulang konten Ca
Dalam BSU, trace elemen adalah unsur yang hampir mirip dengan unsur Ca. Oleh
karena itu hipotesis kami mekanisme dari penggabungan trace elemen adalah
bahwa Zn, Sr dan Pb dimasukkan ke dalam mineral tulang (berkarbonasi kalsium
hidroksiapatit) selama pembentukan tulang, ketika osteoid mendapat mineralisasi
oleh perkembangan mineralisasi depan (fase mineralisasi primer). Jumlah elemen
yang dimasukkan tergantung pada tingkat serum ini. Asumsi ini sangat didukung
oleh penelitian yang kami buat pada penggabungan Sr di tulang selama perawatan
Sr-ranelate (manusia dan hewan). Hal ini dapat menunjukkan bahwa Sr
digabungkan terutama dalam matriks tulang mineralisasi, yang dibentuk selama
pengobatan Sr-ranelate. Selanjutnya, isi Sr adalah sebanding dengan tingkat serum
Sr. Selain itu, analisis karakteristik kisi kristal mineral membuktikan bahwa ion Sr
dimasukkan ke dalam kisi apatit kristal.
Pb hadir dalam matriks tulang mineralisasi kemungkinan besar terakumulasi
selama fase mineralisasi mirip dengan ion Sr. Ion Pb2+ dalam serum kimia mirip
dengan ion Ca2+. Ia bahkan telah menunjukkan bahwa Pb2+ secara langsung
bersaing dengan Ca2+ pada tegangan yang diaktifkan channel Ca2+. Demikian
menunjukkan bahwa Pb mampu menempati situs kedua Ca2+ di kristal
hidroksiapatit (HA). Perilaku serupa disarankan untuk ion Sr2+. Kami berasumsi
bahwa untuk Sr, jumlah Pb yang dimasukkan selama mineralisasi tergantung pada
tingkat serum Pb. Semakin banyak ion Pb2+ hadir di serum makan lebih banyak
ion Pb yang dimasukkan ke dalam tulang.
Selain itu, studi in-vitro menggunakan sintetis HA serta tepung tulang sapi
menemukan bahwa HA memiliki kemampuan untuk mengakumulasi

(melumpuhkan) Pb2+, Zn2+, Sr2+ dan ion logam bervalensi dua lainnya [69-76].
Saat ini empat jalur yang berbeda disarankan untuk mekanisme imobilisasi HA:
i)
ii)
iii)

proses pertukaran ion,

permukaan kompleksasi,
pemutusan dan pengendapan dan co-presipitasi.

Mekanisme ini dapat diharapkan untuk menjadi sangat mirip untuk ion divalen
lainnya. Dalam studi ini konsentrasi lebih tinggi dari logam berat telah digunakan.
Namun menurut Bigi et al. dan Buckner et al. kemungkinan bahwa mekanisme
akumulasi HA untuk Pb2+ juga berlaku pada konsentrasi rendah, karena hadir Pb2+
pada manusia. Untuk Pb dalam tulang kami telah menunjukkan bahwa hampir
secara eksklusif obligasi untuk berkarbonasi kalsium hidroksiapatit , yang
dikonfirmasikan tentang asumsi di atas, bagaimana Pb dimasukkan ke dalam
matriks tulang termineralisasi.
Menariknya, meskipun variasi intra dan inter-individu yang tinggi dalam Pb
(Gambar. 4b) dan tingkat Sr, peningkatan non-linear dengan Ca dari matriks
tulang mineralisasi ditemukan (Gambar. 6b dan c). Peningkatan Pb dan Sr di
kisaran mineralisasi tinggi dapat dijelaskan oleh fakta bahwa BSU dengan waktu
lama mineralisasi (fase mineralisasi sekunder) mencapai puncak mineralisasi
tinggi (sekitar 26 wt.% Ca). Namun, proses akumulasi, sebagaimana telah
disebutkan di atas, ion Pb2+ dan Sr2+ dalam kristal apatit mungkin masih
berlangsung dengan waktu, setelah kristal telah berhenti tumbuh ion substitusi.
Sr2 +, Pb2 + dan mungkin semua ion logam divalen lainnya mencapai bagian
dalam tulang melalui sistem saluran vaskular haversian dan sumsum tulang ruang,
masing-masing. Sebuah studi hewan menggunakan radiostrontium (85Sr)
menunjukkan bahwa ion Sr melewati dinding kapiler pembuluh darah oleh difusi
untuk mencapai fluida interstitial. Cara yang sama dapat diasumsikan untuk ion
Pb. Dari ruang sumsum tulang osteosit kekosongan jaringan canaliculi dapat
digunakan sebagai jalur untuk Pb2+ dan Sr2+ ke dalam matriks tulang mineral,
mengakibatkan peningkatan yang lebih jika diamati dibandingkan dengan Ca.
Meskipun telah melaporkan bahwa Zn digabungkan secara bersamaan dengan Ca
selama mineralisasi, tidak ada korelasi antara Zn dan tingkat mineralisasi seperti
untuk Sr dan Pb terdeteksi oleh pengukuran kami (Gambar. 6a). Hal ini sesuai
dengan penyelidikan sebelumnya Lappalainen et al., yang menunjukkan bahwa Ca
bukan merupakan faktor yang signifikan untuk menjelaskan konsentrasi Zn dalam
tulang. Oleh karena itu Zn disarankan untuk berada di bawah kendali homeostatis.
Obligasi Zn untuk hidroksiapatit (HA) sangat mungkin dimasukkan selama proses
kristalisasi seperti yang telah ditunjukkan pada percobaan Tang et al. pada tahun
2009. Namun koordinasi preferensi Zn, tempat Ca2 dari kristal HA, akan
memungkinkan penyerapan dan pelepasan Zn sebagai kerangka struktur Ca2 tidak

terganggu. Zn tidak hanya dimasukkan oleh proses pertukaran ion, tetapi Ca dapat
bertindak sebagai jalur masuk akal untuk substitusi Zn2+. Seperti dikatakan di atas,
Zn sangat penting untuk metabolisme tulang, karena itu adalah bagian dari enzim
yang penting bagi mekanisme renovasi tulang dan Zn dilepaskan selama
remodeling tulang dan dimasukkan kembali ke dalam tulang.
Implikasi
Ion Pb, Zn, dan Sr yang dimasukkan di HA kemungkinan besar akan mendistorsi
kisi kristal mineral karena ukuran atom yang berbeda dibandingkan dengan Ca.
Ini mungkin memiliki efek negatif pada stabilitas dan kekuatan mineral. Efek ini
mungkin bisa menjadi relevan di tingkat penggabungan tinggi. Namun, pengganti
5% dari ion Ca oleh ion Sr terjadi pada pengobatan ranelate Sr pada usia
menopause osteoporosis dimana perubahan sifat mekanik dari material tulang
yang diukur dengan nanoindentation tidak dapat diamati.
Efek sangat beracun dari Pb pada sel-sel tulang dan tulang metabolisme sehingga
dijelaskan secara rinci paparan terhadap tubuh untuk tingkat Pb yang tinggi.
Misalnya, Pb telah terbukti mengubah homeostasis Ca dan mengganggu aktivitas
metabolisme selular osteoklas dan osteoblas. Seperti telah dinyatakan Pb memiliki
afinitas yang jauh lebih tinggi untuk osteocalcin dari Ca. dan sebagai
konsekuensinya Pb2+ memengaruhi sifat mengikat dari osteocalcin ke mineral
tulang negatif. Kita bisa berspekulasi bahwa, pada prinsipnya mekanisme yang
sama berlaku secara lokal, meskipun pada tingkat yang jauh lebih rendah, ketika
ion Pb yang dikeluarkan di cairan interstitial selama remodeling tulang dengan
tingkat tulang normal. Namun, pengeluaran Pb yang disimpan di tulang dapat
sangat ditingkatkan pada penyakit dengan peningkatan pergantian tulang.
kondisi medis atau penyakit, seperti osteoporosis, hipertiroidisme,
hyperparathyroidism dan kehamilan menyebabkan pergantian tulang meningkat
dan sesuai terkait dengan peningkatan pengeluaran pergerakan Pb dan disimpan
dalam tulang. Remobilisasi Pb tulang kembali ke dalam sirkulasi merupakan
sumber potensial yang relevan dari paparan jaringan lunak Pb dan toksisitas lama
setelah paparan Pb eksternal berhenti. Pb dalam serum dapat meningkat ke tingkat
yang mungkin beracun untuk organ dalam (misalnya saraf dan sistem
hematopoietik) yang lebih sensitif terhadap Pb dan logam berat lainnya. Bahkan
proses metabolisme di tulang yang terpengaruh oleh Pb. Sehingga Pb telah
dinyatakan sebagai faktor risiko potensial untuk osteoporosis, memiliki pengaruhpengaruh negatif pada mekanisme penyembuhan tulang dan mungkin
mempengaruhi jaringan tulang rawan artikular. Dalam penelitian ini tidak
signifikan perbedaan dalam isi trace elemen dan distribusi pola antara tulang dari
individu dengan patah tulang leher osteoporosis dan orang-orang dari usia cocok

individu yang sehat tanpa patah tulang dapat dideteksi. Namun, ukuran sampel
hanya n = 5.
Sumber utama dari paparan Pb di negara-negara industri terdahulu berasal dari
pipa air dan bensin yang bertimbal. Banyak upaya telah dilakukan untuk
menghilangkan hampir semua sumber-sumber ini. Namun, secara biologis waktu
paruh Pb di tulang manusia adalah sekitar 20 tahun. Sehingga tulang dianalisis
dari individu dalam rentang usia 60 sampai 80 tahun masih memiliki sejumlah Pb
yang hadir. Akan menarik untuk mengetahui berapa banyak penyerapan Pb
lingkungan berkurang sekarang pada orang muda.

IV.

KESIMPULAN

Kami telah menunjukkan untuk kali pertamanya bahwa distribusi elemen Zn, Pb
dan Sr tidak seragam antara unit-unit struktural jaringan tulang manusia,
menerapkan kombinasi SR -XRF dan qBEI. Garis semen lanjut terakumulasi Zn
dan Pb ke tingkat yang lebih tinggi daripada yang berdekatan dengan matriks
mineralisasi tulang menunjukkan mekanisme yang mungkin berbeda dari serapan
Zn, Sr, dan Pb. Selain itu, terungkap bahwa dalam unit struktural tulang
konsentrasi Pb dan Sr tergantung pada derajat mineralisasi dan tidak terjadi untuk
Zn.

DAFTAR PUSTAKA
Aaseth J, Boivin G, Andersen O. Osteoporosis and trace elements-an overview. J
Trace Elem Med Biol 2012;26:14952.
Carvalho ML, Marques AF, Lima MT, Reus U. Trace elements distribution and
post-mortem intake in human bones from middle age by total reflection Xray fluorescence. Spectrochim Acta B At Spectrosc 2004;59:12517.
Chettle DR, Scott MC, Somervaille LJ. Lead in bone: sampling and quantitation
using K X-rays excited by 109Cd. Environ Health Perspect 1991;91:4955.
Rosen JF, Crocetti AF, Balbi K, Balbi J, Bailey C, Clemente I, et al. Bone lead
content assessed by L-line X-ray fluorescence in lead-exposed and nonlead-exposed subur-ban populations in the United States. Proc Natl Acad
Sci U S A 1993;90:278992.
Samudralwar D, Robertson J. Determination of major and trace elements inbones
by simultaneous PIXE/PIGE analysis. J Radioanal Nucl Chem
1993;169:25967.
Sky-Peck HH, Joseph BJ. Determination of trace elements in human serum by
energy dispersive X-ray fluorescence. Clin Biochem 1981;14:12631.
Takata MK, Saiki M, Sumita NM, Saldiva PHN, Pasqualucci CA. Activation
analysis methods and applications: trace element determinations in
human cortical and trabecular bones. J Radioanal Nucl Chem
2005;264:58.
Zhang Y, Cheng F, Li D, Wang Y, Zhang G, Liao W, et al. Investigation of
elemental content distribution in femoral head slice with osteoporosis by
SRXRF microprobe. Biol Trace Elem Res 2005;103:17785.