INSTITUTO POLITCNICONACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA

PRCTICA 4
POTENCIAL DE DIFUSION Y POTENCIAL DE LESIN

INTEGRANTES:

EQUIPO 5

GRUPO 4FM2

PROFESORES:

FECHA DE ENTREGA 6 DE NOVIEMBRE DE 2012

INTRODUCCIN
La tendencia que tienen dos soluciones separadas por una membrana para llegar al equilibrio
expresa la tendencia general de los sistemas qumicos para llegar a un equilibrio de sus
potenciales qumicos y energticos, fluyendo de regiones de mayor potencial a las de menor.
Por lo tanto, el potencial de difusin se denomina como la diferencia de potencial generada a
travs de una membrana cuando un soluto con carga (ion) difunde debido al gradiente de
concentracin, es decir, se debe a la difusin de los iones y solo puede generarse si la
membrana es permeable a ese ion (Martin, 2006)
Cuando el flujo del ion, dado por la diferencia de concentraciones llega a ser compensado por el
flujo de repulsin, dado por la diferencia de potencial elctrico, se dice entonces que el ion esta
en equilibrio electroqumico a travs de la membrana (Alva et al., 2010). Este potencial esta
definido por la ecuacin de Nerst:

Donde
E(ion)= potencial de equilibrio (volts)
R= constante de los gases
T= temperatura absoluta
F= constante de Faraday
z= valencia del ion
[ION]i = concentracin del ion en el interior de la clula
[ION]o = concentracin del ion en el exterior de la clula
Es decir, que el potencial de equilibrio de Nerst relaciona la diferencia de potencial a ambos
lados de una membrana biolgica en el equilibrio con las caractersticas relacionadas con los
iones del medio externo e interno y de la propia membrana semipermeable.
La ecuacin de Nerst se emplea para predecir la direccin del flujo inico en los siguientes casos:
1.- Cuando la diferencia de potencial medida a travs de la membrana es igual a la calculada
mediante la ecuacin de Nerst determinando para un ion determinado. En esta situacin el ion
se encuentra en equilibrio electroqumico y no habr flujo neto del mismo a travs de la
membrana.
2.- Cuando el potencial de elctrico medido es del mismo signo que el calculado por la ecuacin
de Nerst para un ion determinado, pero de mayor valor, la fuerza elctrica es superior causada
por el gradiente de concentracin, por lo que habr movimiento neto de dicho ion en la direccin
determinada por la fuerza elctrica.
3.- Cuando la diferencia de potencial elctrico medida es del mismo signo, pero de menor
cuantidad, que la calculada por la ecuacin de Nerst , la fuerza debida al gradiente de

concentracin es superior a la elctrica, y el movimiento neto de ion tiende a producirse en la

direccin determinada por la diferencia de concentracin.
4.- Cuando la diferencia de potencial elctrico medida es de signo opuesto al predicho por la
ecuacin de Nerst, tanto la fuerza elctrica como el gradiente de concentracin se encuentran
orientados en el mismo sentido y consiguiente el ion no se encuentra en equilibrio, por lo que
tendra a fluir en direccin determinada por ambas fuerzas.
Julius Bernstein fue el primero, en 1902, en proponer una hiptesis satisfactoria para explicar el
origen del potencial de membrana en reposo en el nervio y en las fibras musculares. Mediante
anlisis qumico determino que el interior es rico en K + y contiene poco Na+ y Cl-. Adems
comprob que en el interior de la clula hay aniones a los que la membrana en reposo no es
permeable; basndose en esos datos, Bernstein postulo la siguiente hiptesis: El voltaje de
transmembrana es consecuencia de una desigual distribucin de iones K +, como puede
predecirse mediante la ecuacin de Nerst (Martin, 2006)
Bernstein cort fibras musculares de un msculo de rana e insert un electrodo en el rea
cortada, haciendo contacto eficaz con el liquido interno de las fibras musculares, pudiendo
adems modificar el liquido externo del musculo (Alva et al., 2010). Al registro que obtuvo se le
llamo potencial de lesin. El potencial de lesin es el potencial desarrollado entre las partes
lesionada y no lesionada de un nervio, debido a la exposicin de la superficie interna con carga
negativa de la membrana polarizada en el lugar de la lesin. En los tejidos excitables, la lesin
produce despolarizacin en la zona lesionada (potencial de lesin), lo que origina un flujo de
corriente elctrica entre ambas zonas (corriente de lesin). En la fibra muscular esqueltica, la
despolarizacin causada por una lesin es un proceso irreversible que se propaga gradualmente
y despolariza finalmente a toda la clula. Asimismo, el potencial de lesin se aproxima al
potencial transmembranal debido a que la superficie lesionada esta casi en el potencial del
interior de la clula (Rothstein et al., 2005).
La ecuacin de Goldman-Hodkin-Katz predice el potencial de membrana para mltiples iones.
Esta se utiliza para calcular el potencial de membrana en reposo resultante de la contribucin de
todos los iones que pueden atravesar la membrana: Esta ecuacin incluye los valores de
permeabilidad de la membrana porque la permeabilidad de un ion influye en su contribucin al
potencial de membrana. Si la membrana en impermeable a un ion, ese ion no afectara el
potencial de membrana.
La contribucin de cada ion al potencial de membrana es proporcional a su capacidad para
atravesar la membrana. La ecuacin de Goldman-Hodking-Katz:

Em= Potencial de membrana en reposo.

R= Constante de los gases
T=Temperatura absoluta
F=Constante de Faraday
P= Permeabilidad relativa de la membrana al ion indicado con el subndice.
[ion in], [ion out] = Concentraciones del ion dentro y fuera de la clula.
Aunque esta ecuacin parece muy complicada, se puede simplificar en estas palabras: el
potencial de membrana en reposo esta determinado por las contribuciones combinadas del

producto (gradiente de concentracin) x (permeabilidad de la membrana) para cada ion. Si la

membrana no es permeable aun ion el trmino de permeabilidad de este ion ser cero y el ion
abandonara
la
ecuacin.
La ecuacin de Goldman predice los potenciales de membrana sobre la base de concentraciones
inicas y permeabilidades de membrana dadas y explica porque la ligera permeabilidad de la
clula al Na+ hace que el potencial de membrana en reposo sea ms positivo que el E
determinado con la ecuacin de Nerst. La ecuacin de Goldman tambin se puede utilizar para
predecir lo que sucede con el potencial de membrana cuando cambian las concentraciones
inicas o las permeabilidades de las membranas. (Silverthorn, 2009)
Para obtener el potencial de difusin se utiliza un huevo que se encuentra constituido as, en la
parte externa existe en primer lugar una cutcula o pelcula, de aproximado 10m de grosor
acta como revestimiento, disminuyendo la porosidad, la cascara propiamente dicha tiene una
matriz esponjosa que emite hacia el interior prolongaciones denominadas protuberancias
mamilares. En la parte interna de la cascara existen dos membranas testceas llamadas capa
testcea externa (48 m) e interna (22 m) formadas por un entramado de fibras constituidas
por un ncleo proteico (4.2%), as como de compuestos inorgnicos (94.3%) como el calcio,
fosforo, magnesio, sodio, selenio y en gran proporcin el potasio (2000mg) Estas dos lminas o
subcapas estn fuertemente adheridas entre si en la mayor parte de la superficie interior de la
cscara salvo en la porcin obtusa del huevo en la cual se encuentran separadas por la cmara
de aire. La lmina interna presenta fibras ms finas que la capa externa y muestra una superficie
lisa y homognea debido a la presencia de un material no fibrilar conocido como manto. (Gil,
2010).
Para la determinacin del potencial de lesin, se utiliza musculo gastrocnemio de rana, el cual
por su funcin en la transmisin de impulsos nerviosos para la contraccin del mismo.
Los potenciales de electrodo se definen como potenciales de celda para una celda que consiste
en el electrodo en cuestin que acta como ctodo y el electrodo estndar de hidrogeno que lo
hace como nodo, el potencial de electrodo es de hecho el potencial de una celda electroqumica
que implica un electrodo de referencia cuidadosamente definido. (Wilches, 2007).
HIPOTESIS
Al cambiar el gradiente de concentracin iones potasio ([k+]) en la membrana del huevo,
esperamos un cambio en el potencial intramembranal acorde con los resultados obtenidos
mediante la ecuacin de Nerst.
Esperamos que en la membrana de musculo de la rana exista permeabilidad selectiva al ion
[k+], al cambiar el gradiente de ese ion se espera un cambio del potencial de lesin de acuerdo
con los resultados obtenidos mediante la ecuacin de Goldman.
OBJETIVOS GENERALES
-

Determinar el efecto del cambio de gradiente de concentracin del ion [K+] sobre el
potencial de difusin.
Determinar el efecto del cambio del gradiente de concentracin el ion [K+] sobre el
potencial de lesin.

OBJETIVOS PARTICULARES
-

Determinar la diferencia de potencial generada a diferentes concentraciones de KCl 1, 2.5,

5, 10, 20, 50 y 100mM extracelulares respecto a la de KCl 400 mM contenida en un huevo
de gallina y compararlos con los resultados obtenidos mediante la ecuacin de Nerst

Determinar la diferencia de potencial generada por las soluciones de Ringer y K2SO4 10,
20, 50, 100, 200mM extracelulares respecto a la solucin de LIC asociada a la parte
lesionada del msculo gastrocnemio de rana y compararlos con los resultados obtenidos
mediante la ecuacin de Goldman.

FUNDAMENTOS
Se utilizo la membrana testcea interna de huevo ya que es permeable al ion potasio. Donde se
lleva a cabo un potencial de difusin generado a travs de la membrana cuando un soluto con
carga (ion) difunde debido al gradiente de concentracin, es decir se debe a la difusin de los
iones y slo puede generarse por que la membrana testcea de huevo es permeable a ese ion.
Se utilizo el nervio citico de rana debido a que los en estos mtodos se suelen hacer estudios
en clulas musculares o nerviosas, debido a que estas clulas muestran una notable
especializacin para este tipo de actividades. La rana suele utilizarse como modelo en este
estudio tanto por la facilidad de disponer de estos animales, como por el hecho de presentar
muchos aspectos de su anatoma interna claramente visibles.
Utilizamos el potencial de lesin donde se mide el de varias clulas (paralelos) si se afecta la
diferencia de permeabilidad afecta a la pendiente.
Se utilizo KCl y KSO ya que tanto el ion Cl- como el SO-- son impermeables a las membranas
del huevo y del musculo gastrocnemio respectivamente.

METODOLOGIA

PRACTICA 4
POTENCIAL DE DIFUSIN Y
POTENCIAL DE LESIN

Potencial de difusin

En la cmara de aire del huevo romper

el cascaron 3 cm, retirar membrana,
desechar membrana y enjuagar con
HO destilada.

Con pinzas de diseccin golpear

levemente el cascaron en el extremo
opuesto de la cmara, desprender
cascaron.
Colocar dentro una solucin de 400
mM de KCl y un electrodo.

En 1 vaso de pp. colocar 50 ml de

KCl 1 mM y colocar el cascaron en
la abertura de 0.5 cm, donde este
en contacto con el liquido y el otro
electrn, medir potencial.

Repetir lo anterior con

concentraciones 5, 10, 20, 50 y 100
Probar que sucede con la lectura del
mM.
multimetro si se levanta el cascaron
de la solucin.

Potencial de lesin.

Descerebrar y desmedular una

rana, cortar la piel de una pata,
exponer el musculo gastrocnemio,
separndolo cortando los tendones
del hueso.
Pasar el musculo por el anillo de
goma hasta la mitad, cortar la
mitad restante y jalarlo, para que la
parte seleccionada quede dentro
del anillo.
Introducir el tubo de vidrio en el
anillo de goma, llenarlo con la
solucin de LIC, sujetarlo a un
soporte, introducir el musculo en un
vaso de pp. Con una solucin de
Riger.
Medir el potencial de lesin del
musculo, colocando un electrodo de
Calomel en solucin LIC. Y el otro
Repetir elsolucin
paso
anterior
con KSO
electrodo
en
solucin
Ringer
Sustituir
por solucin
solucinyde
KSO
en ordende
0.025M
leer
la diferencia
creciente de concentraciones.
potencial.

POTENCIAL DE DIFUSIN
CON LA CMARA DE USSING
Y MEMBRANA ARTIFICIAL

Vaciar 1 compartimiento, enjuagarlo

con solucin de Na2HPO4 0.1 M y
llenarlo con esta.
Medir la diferencia de potencial

Repetir usando soluciones

sucesivamente ms concentradas,
enjuagar y reponer la solucin
(0.05 M) del compartimiento de
referencia.

Recortar la membrana de dilisis al

dimetro de la cmara de Ussing,
aplicar vaselina al compartimiento de
la cmara, colocar en 1 la membrana,
centrada, y unir los compartimientos.

Sujetar la cmara, llenar los 2

compartimientos con solucin de
Na2HPO4 0.05 M, medir diferencia de
potencial, con un electrodo de calomel
en los compartimiento conectando los
electrodos al multmetro

Resultados
Concentra
cin
extacelula
r de KCl
(mM).

Concentra
cin
intracelul
ar de KCl
(mM).

Relaci
n

Log
de
C
ext/C
int

E
Terico
(mV)
(Ecuaci
n
de
Nerst).

E
Experime
ntal
(mV).

400

2.5x10-3

2.602

-150.91

-145.7

2.5

400

6.25x10

-2.204

-127.83

-142.7

C ext/C
int

-3

400

0.0125

-1.903

-110.37

-126.60

10

400

0.025

-1.602

-92.91

-118

20

400

0.050

-1.301

-75.45

-112.1

50

400

0.125

-0.903

-52.37

-95.3

100

400

0.250

-0.602

-34.91

-86.3

400

400

-62.6

Tabla 1.-Efecto de las concentraciones milimolares (mM) del cloruro de

potasio (KCl) sobre la diferencia de potencial generada (potencial de
difusin) en un huevo de gallina, se observan valores tericos y
experimentales de la diferencia de potencial (E) en milivolts (mV).

Comparacin de E teorico y E experimental

Terico
-3

-2.5

-2

-1.5

-1

E (Mv)

0
-0.5 -20 0
-40
-60
-80
-100
-120
-140
-160

Teoricos

y= 58x + 0
r= 1
Practico
y= 32.76x
65.62

Linear (Teoricos)
0.986

r=

Experimentales
Linear (Experimentales)

log C ext/ C int

Figura 2. Efecto de las concentraciones milimolares (mM) del cloruro de potasio (KCl) sobre la diferencia de potencial generada
(potencial de difusin) en un huevo de gallina. En el eje X se tiene al logaritmo natural del cociente de las concentraciones intra y
extracelualres del ion.(log C ext / C int ), en el eje Y la diferencia de potenciales en milivolts de color naranja datos tericos y en color
rojo datos experimentales.

Concentra
cion de K+
de
la
solucion
LIC (Mm).

Concentra
cion de la
K+ de la
solucion
del
recipiente
(Mm).

Relacin

140

Ringer

140

0.035

-1.455

140

10

0.071

-1.148

140

25

0.178

-0.749

140

50

0.357

-0.447

140

100

0.714

-0.146

C ext/C int

Log
C
int

de
ext/C

E Terico
(mV)
(Goldman)
.

E
Experimen
tal (mV).

-40
-88.27
-69.91
-45.63

-27.27
-8.91

-31.5
-25
-12.7
-0.53
+3

Tabla 2. - Efecto de las concentraciones milimolares (mM) de sulfato de potasio (KSO) sobre la
diferencia de potencial generada (potencial de lesin) en musculo gastrocnemio de rana.

COMPARACIN DEL E TEORICO Y EL E EXPERIMENTAL POTENCIAL DE LESION

20
0
f(x) = 28.24x + 8.94
-1.6 -1.4
-1.2
-1
-0.8
-0.6
-0.4
-0.2
0
R
f(x)==0.98
60.67x - 0.13
-20
R = 1
E (mv)

-40
-60

Teorico
Linear (Teorico)
Linear (Teorico)
Practico
Linear (Practico)

-80
-100
log Ce/Ci

Figura 3. Efecto de las concentraciones milimolares (mM) del sulfato de potasio (K2SO4) sobre la diferencia de potencial generada (potencial de lesin)
en musculo gastrocnemio de rana. (E) representa la diferencia de potencial de membrana en milivolts, (log Ce/Ci) al logaritmo natural del cociente de
las concentraciones intra y extracelualres de los iones.

DISCUSIN
El potencial de difusin en el huevo, debido a su composicin, su membrana es sumamente
permeable al K+ de esta forma, como los iones de K+ estn presentes en gran concentracin
dentro de la clula, stos tienden a difundirse de dentro hacia fuera de la membrana a favor de
su gradiente de concentracin, y esto se observa tericamente como experimentalmente, la
concentracin extracelular se vuelve menos negativa se debe al ligero exceso de K+ y la
intracelular se vuelve mas negativa por la ligera deficiencia del K+.
La difusin de los iones K+ fuera de la membrana del huevo origina una diferencia de potencial
elctrico, positiva afuera y negativa dentro. Tanto mas K+ se difunda a favor de su gradiente de
concentracin mayor ser la diferencia de potencial, a concentraciones milimolares pequeas de
KCl extraceluar se genera mayor diferencia de potencial ya que se alcanzara mas rpido el
equilibrio disminuyendo la diferencia de potencial.
Sin embargo llegara un punto cuando la diferencia de potencial ser 0 la fuerza elctrica que
arrastra al K+ al interior de la clula es igual a la fuerza qumica que arrastra los iones de K+
fuera de la clula y este potencial recibe el nombre de potencial de equilibrio y este equilibrio se
calcula mediante la ecuacin de Nerst. En la figura 2 se observa el efecto de las concentraciones
extracelular e intracelular sobre la diferencia de potencial, al comparar los resultados tericos
con los prcticos se observa que difieren mayormente en el dato 5, y al observar la ecuacin de
la recta difieren mucho, esto lo podemos a atribuir que al hacer el experimento no se contaba
con la misma temperatura ya que nos encontrbamos aproximadamente a 21 C este factor
afectara directamente a la pendiente de la recta, tambin otro factor influye a la pendiente es
que la permeabilidad del huevo no es infinita. En la ordenada tambin se observa una gran
diferencia los factores que pueden influir en esta son que el huevo a pesar de enjuagarlo muy
bien quedan protenas cargadas en la membrana, estas cargas afectan directamente la
diferencia de potencial, otro factor influyente es el potencial de electrodo.

En el potencial de lesin al musculo gastrocnemio de rana, contiene iones K+, Na+ y Cl- en su
interior por la solucin de LIC estos contribuirn al potencial de membrana pero en cuanto mayor
es la concentracin de una clase de ion en particular y mayor la permeabilidad de la membrana
a este ion tanto mayor es su importancia en la determinacin del potencial en este caso es al ion
K+.
Utilizamos soluciones extracelulares de K 2SO4 y el ion SO42- es un anin prcticamente
impermeable, solo se considera la concentracin del K+ extracelular, sin embargo, al utilizar la
solucin de Ringer extracelular la cual contiene iones K+, Na+ y Cl-el potencial no puede
considerarse solo al ion K+ y esto se obtiene por la ecuacin de Goldman. Sin embargo, al tener
solo concentraciones del ion K+ extracelulares, y la membrana es mas permeable a este que a
los otros iones podra decirse que bajo estas condiciones se espera obtener el potencial de
membrana en reposo.
En la grafica podemos observar que los valores experimentales y los valores tericos difieren
esto se puede atribuir a la temperatura ya que no se trabajo a la temperatura absoluta, que el
musculo gastrocnemio contiene clulas de tejido conectivo, vasos sanguneos y nervios, si al
manipular el musculo lo rompemos puede quedar expuesto el LIC y el LEC combinndose ambos
estos factores afectaran directamente el potencial de lesin y con esto la pendiente de nuestra
grafica.

Conclusiones
-

Determinamos el efecto del cambio de gradiente de concentracin del ion [K+] sobre el
potencial de difusin de la membrana testcea de huevo de gallina.
Comprobamos que la membrana testcea tiene una permeabilidad selectiva al ion K+.
Observamos que entre mayor sea la concentracin extracelular del ion K+ de la
membrana testcea, la diferencia de potencial se har menos negativa hasta que el ion
K+ llegue a su potencial de equilibrio.
Determinamos el efecto del cambio del gradiente de concentracin el ion [K+] sobre el
potencial de lesin del musculo gastrocnemio de rana.
Comprobamos que la membrana del musculo gastrocnemio de rana permeabilidad al los
iones K+.
La diferencia de potencial de la membrana interna y externa del musculo gastrocnemio de
rana por su potencial de lesin predice el potencial de membrana para mltiples iones que
atraviesan la membrana.

Bibliografa

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Strand, L. F., 1982. Fisiologia humana: un enfoque hacia los mecanismos reguladores. Ed.
Mdica Panamericana
Fisiologa humana 4 edicion editoria medica panamericana Espaa 2009 Silverthorn Dee
unglaub
Tratado de nutricin composicin y calidad de los alimenos angel gil 2010 2 edicion
editorial panamericana espaa