TCNICAS DE ESTERILIZACIN DE

MATERIALES Y MEDIOS DE CULTIVO

En

el laboratorio de Microbiologa es imprescindible trabajar con material y

soluciones estriles con el objetivo de que los resultados que obtengamos correspondan
a los microorganismos que estn presentes en la muestra en estudio y no a
contaminantes procedentes del medio o los materiales. Por eso antes de comenzar el
trabajo prctico del laboratorio debemos esterilizar junto con los medios de cultivo, el
material que posteriormente utilizaremos.
Existen diversos mtodos de esterilizacin. La seleccin del mtodo a aplicar en cada
caso est determinada por el tipo de producto a esterilizar. Los mtodos trmicos de
esterilizacin son comnmente los ms utilizados para eliminar los microorganismos.
Esterilizacin por:
1) AGENTES FSICOS
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el
cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor
seco que destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares.
El calor es considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y
cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao.
La radiacin, o emisin y propagacin de la energa a travs de un medio, puede ser
utilizada como agente para la eliminacin de microorganismos.
a. Calor hmedo: Autoclave
Ventajas del calor hmedo:
-Rpido calentamiento y penetracin.
-Destruccin microorganismos en corto tiempo.
-No deja residuos txicos.
-Hay un bajo deterioro del material expuesto.
-Econmico
Desventajas:

Esquema de Autoclave

-No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua.

-Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.
b. Calor seco: Estufas
Ventajas del calor seco:
-No es corrosivo para metales e instrumentos.

-Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias

viscosas no voltiles.
Desventajas:
-Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la
baja penetracin del calor.
c. Radiaciones
2) AGENTES MECNICOS
La filtracin permite la remocin de todos los microorganismos presentes en un lquido
o un gas retenindolos sobre la superficie de un material.
3) AGENTES QUMICOS
Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque
tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces de daar los
componentes celulares de los microorganismos (protenas, membranas, etc.).

ESTERILIZACIN POR:

4) DESARROLLO DE LA PRACTICA DE LABORATORIO:

Proceso de limpieza y esterilizacin de materiales de vidrio:

Lavar las cajas de Petri y pipetas, enjuagarlas y dejar escurrir el exceso de agua en papel
toalla. Una vez secos los materiales, procederemos a envolverlos con papel kraft. Luego
se colocaran en horno a 150C durante 2 horas. Para los tubos de ensayo elaboramos
tapones de algodn.

Placas de Petri y pipetas sin esterilizar

Lavado de placas de Petri

Proceso de envoltura de las cajas de Petri con papel Kraft

Proceso de envoltura de las pipetas con papel Kraft.

Tubos de ensayo envueltos con papel Kraft,

para luego ser esterilizados.

Proceso de esterilizacin de medios de cultivo:

Preparamos 100 ml de Agar nutritivo (AN), lo calentamos en un bao con agua hasta
ebullicin; y utilizando una pipeta vaciamos 10 ml de medio en tres tubos con tapn de
rosca. Se esteriliza en la autoclave.