10/22/2013

Latar belakang

FIKSASI
NITROGEN

Pembuatan pupuk N pada Industri (Haber Bosch) membutuhkan

tekanan dan suhu tinggi

CH4
`

200 atm ; 450 oC

N2 + 3H2

H2
2 NH3

Untuk menciptakan kondisi tekanan dan suhu yang tinggi diperlukan

bahan bakar sehingga menyebabkan pupuk buatan pabrik menjadi
mahal harganya

Pemanfaatan potensi alami :

Fiksasi N2 secara Biologi

~ adalah reduksi nitrogen bebas (N2) bebas menjadi
amonia (NH3) oleh kegiatan jasad prokariotik , baik
yang bersimbiotik maupun yang non simbiotik dengan
fungi tertentu seperti lumut, gymnospermae, atau
tumbuhan tingkat tinggi.

Jasad prokariotik= jasad yang tidak mempunyai

membran inti sel (bakteri)

Sejarah pemanfaatan :
Roma Legum
China Azolla
Rhizobium Simbiotik aerob (M. Beijerinck)
Clostridium nonsimbiotik ; anaerob (S. Winogradsky)

Kandungan gas N2 di atmosfer kurang lebih 78%.

Pemanfaatan mikroorganisme pemfiksasi (penambat) Nitrogen (N2)

dari udara secara biologi sebagai alternatif permasalahan tsb.

Bakteri pemfiksasi nitrogen

Penambat Nitrogen non-simbiotik:
Azotobacter, hidup di rhizosfer tanaman di lahan kering
Clostridium, hidup di tanah tergenang/ tanah sawah
Azospirillum, hidup di permukaan / dalam akar
Cyanobacteria, BGA, hidup di tanah tergenang /tanah
sawah

Penambat Nitrogen simbiotik:

Rhizobium- hidup dalam bintil akar leguminosae
Anabaena azollae-hidup dalam daun Azolla pinnata

10/22/2013

Fisiologi penambatan N
Pembentukan
ATP

Mg
ATP

Free living
Sumber
energi

Asosiatif

Pembawa
elektron
(Reduktan)

Simbiotik
karbohidrat

enzim nitrogenase

Na2S2O4
Donor non
fisiologis

Mg ADP
Pi
ATP

N2

Kompleks enzim

Nitrogenase

C2H2
H3O+
N3
CN
N2O

C2H4
H
NH3 + H2
CH4 + NH3
N2 + H2O

Substrat

Produk

NH3

Mekanisme Fiksasi N

Proses reduksi N2 menjadi NH3 melibatkan enzim

nitrogenase yang dihasilkan oleh jasad prokariotik.

Sifat enzim nitrogenase :

Sensitif terhadap O2

Komponen enzim terdiri dari 2 protein :

Sub-unit protein yang mengandung Mo, Fe, S yang
bersifat labil terhadap asam
Sub-unit protein yang mengandung Fe (sensitif
terhadap O2) (Fe-protein)

10/22/2013

Syarat yang harus dipenuhi agar aktivitas

nitrogenase berjalan

Ada substrat : N2, N2O, C2H2, HCN,

Ada sumber energi : ATP, Mg
Ada Reduktan :

Ferredoxin (Clostridium, Azotobacter)

Flavoprotein (Azotobacter)
Fe-S (bakteriod)

kondisi yang harus dipenuhi agar

terjadi fiksasi N

Penambatan Non Simbiotik

Azotobacter

aerobik

Clostridium

anaerobic

Azosprillium

Berasosiasi dengan
rumput.Paspalum notatum

Derxia dan Beijerinckia

Tanah asam

Klebsiella danBacillus

Phyllosphere

Azotobacter

Adanya populasi jasad penambat yang besar yang

berkaitan dengan kecepatan fiksasi N
Pembentukan selnya cepat yang menunjukkan bahwa
fiksasi N berkaitan dengan pertumbuhan
N atmosfer , dan bukan organik maupun anorganik.

10/22/2013

Azospirillium sp

Mekanisme penciptaan microsite anaerob

pada penambat N
Terdapat beberapa mekanisme yang digunakan untuk
membatasi O2 untuk menciptakan kondisi anaerob sebagai
syarat berlangsungnya proses penambatan N pada

Azotobacter

membatasi difusi dengan menghasilkan

kotoran/lumpur yang berlebihan

Mempercepat respirasi dan konsumsi O2

Melakukan perubahan reversible enzim
nitrogenase yang fungsional menjadi bentuk yang
tidak sensitif terhadap O2.

Faktor yang mempengaruhi

fiksasi N non simbiotik
1.

2.
3.
4.
5.
6.

Reaksi tanah (pH)

Azotobacter sensitif pada pH rendah
Beijerinkia & Derxia mempunyai kisaran pH 3-9
Fosfor dan bahan organik (status nutrien)
Sumber energi tersedia
efisiensi
sekresi (eksudat) Azospirilium lipoferum
Inokulasi sengaja dengan kultur bakteri panambat
nitrogen non simbiotik

Bakteri Tanah dan Nitrogen tersedia

N2

N2

Atmosphere
Atmosphere
Soil

N2

Nitrogen-fixing
bacteria
Denitrifying
bacteria

H+
(From soil)

Soil

NH4

NH3
(ammonia)
NH4
(ammonium)

Organic
material (humus)

Nitrate and
nitrogenous
organic
compounds
exported in
xylem to
shoot system

Nitrifying
bacteria

NO3
(nitrate)

Ammonifying
bacteria

Root

10/22/2013

Cross inoculation group

Cross inoculation
Rhizobium Cross
sp inoculation group Rhizobium
group
R. leguminosorum
R. phaseoli
R. trifolii
R. meliloti
R. lupini

Tipe Legum

Pea group

Pisum, Vicia

Bean group

Phaseolus

Clover group
Alfa-alfa group
Lupini group

Rhizobium-Legum

Trifolium
Medicago, melilotus
Lupinus lotus

R. japonicum

Soybean group

Glycine

R. sp

Cowpea Group

Vigns (cowpea)

10/22/2013

Cyanobacteria

Cyanobacter merupakan jasad bebas diazotrof yang

memfiksasi hanya beberapa kg N/ha/tahun. Jasad ini
peranannya tidak sebesar jasad yang dlm keadaan
bersimbiotik pada daerah terestrial.

Cyanobacter kebanyakan hadir pada lingkungan akutik

dan air tawar Cyanobacter di ketemukan di
dipermukaan tanah, kadang di bawah permukaan tanah.
Secara morfologi bentuknya dibagi menjadi 3 yaitu:

Simbiosis Tanaman Azolla dan Anabaena azolae

Uniseluler (Chroococcus, Gleocapsa dan Microcystis)

Nonfilamentous (Plectonema)
Filamen (Anabaena, Nostoc)

Simbiosis Tanaman Azolla dan Anabaena azolae

Sel Heterosis

BGA
:Anabaena

Sel Vegetatif

10/22/2013

Fiksasi N pada Cyanobacter

Nostoc

N2
Glutamat

NH4+

Glutamin

NH4+

Enzim
nitrogenase

Heterosis

Sel vegetatif

Bakteri Penambat Nitrogen

Tipe/Sifat
10% acetylene

0,5 ml gas disuntikan ke dalm GC

Potong akar
Jumlah elektron
6 e-

pemisahan nodul

6 eN2

NH3
2 e-

C2H2
C2H4
Pengukuran fiksasi N pada nodul legum pada tanaman dan potongan
akar dg
akar N dan C H adalah 3 : 1
Nisbah elektron yang diperlukan untuk
mereduksi
2

Asimbiotik/Asosiasi:
Bakteri Aerobik
Bakteri Mikroaerofilik
Bakteri Fakultatif
Bakteri Anaerobik
Blue Green
Algae/fotosintetik
Simbiotik:
Bakteri
Blue Green Algae

Jenis Mikroorganisme

Azotobacter, Beijerinckia
Azospirillum, Thiobacillus, Spirillum
Bacillus, Escherichia, Pseudomonas
Clostridium, Desulfovibrio
Nostoc, Anabaena, Rhodospirillum

Rhizobium-Legum
Anabaena azollae-Azolla

Cara pengukuran aktivitas Nitrogenase

10/22/2013

Penghambat balik Fiksasi N

(feedback inhibition)

Fiksasi nitrogen tidak terjadi jika terdapat NH4+,

NO3- dan Bahan organik tersedia.
Karena menurut hipotesis:
Adanya N tersedia mengalir langsung hilang dari
nitrogenase (tidak ada elektron) sehingga tidak
mereduksi.

Nodul

Pada sistem simbiotik bahwa reduksi nitrat pada

nodul yang menyebabkan NO2- berikatan dengan
senyawa yang melindungi nitrogenase dari O2.

1. Pemilihan karbohidrat
2. Penghambatan nitrogenase
3. Penghambatan leghaemoglobin
Akar

4. Amonium feed back

Bisakah saya
menjelaskan
gambar di
samping ini??