Anda di halaman 1dari 2

METODE

Mikroorganisme. Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB 12 strain komersial probiotik


(Ch Hansen, Hrsholm, Denmark.); Bifidobacterium bifidum CCDM 9 (Mikroorganisme hasil
kultur; Laktoflora, Praha, Republik Ceko); bisksn Yogurt YC-381 biakan komersial (. Ch
Hansen, Hrsholm, Denmark).
Persiapan model produk fermentasi. Media budidaya, susu sapi UHT yang mengandung
lemak (Madeta, Plan nad Lunic, Republik Ceko) dan susu kedelai Sunfood Klasik (Sunfood,
Dobruska, Republik Ceko) yang telah disterilisasi pada suhu 100 C selama 20 menit. Jumlah
(0,5 g) dari kultur lyophilised (B. animalis subsp. Lactis BB 12 dan biakan yoghurt YC-381)
yang dilarutkan dalam 100 ml susu kedelai atau susu sapi yang kemudian disimpan pada suhu 4
C selama 12 jam untuk mengaktifkan starter atau biakan dengan tujuan untuk mempersingkat
fase lag mereka. mikroorganisme yang diaktifkan atau kultur cair (B. bifidum CCDM 94)
dipindahkan dalam jumlah 1% ke susu kedelai atau susu sapi steril. Media diinokulasi pada 37
C selama 16 jam dengan tujuan untuk meningkatkan pertumbuhan bifidobacteria. Jumlah sel
pada awal fermentasi adalah sebagai berikut: S. thermophilus 106 CFU / ml, L. delbrueckii
subsp. bulgaricus 104 CFU / ml, dan Bifidobacterium spp. 106 CFU / ml. Semua percobaan
diulang sebnyak dua kali dan semua hasilnya rata-rata dari tiga pengukuran independen (n = 6).
Penentuan jumlah sel. Jumlah L. delbrueckii subsp. bulgaricus dalam sampel ditentukan setelah
72 jam inkubasi pada 37 C di 4% CO2 atmosfer pada MRS agar (Oxoid, Hampshire, UK), pH
5,2; jumlah S. thermophilus setelah 48 jam inkubasi pada 37 C pada M17 agar (Oxoid,
Hampshire, UK), pH 6,8 dan jumlah Bifidobacterium sp p. setelah 4 hari pada suhu 37 C dalam
anaerobik dengan pembentuk AnaeroGen anaerobik pada MRS agar (baik Oxoid, Hampshire,
Inggris) dengan 0,5 g / l l-sistein (Merck, Darmstadt, Jerman) dan 2 mg / l dicloxacilin (Sigma,
St Louis, USA), pH 6,8.
analisis fisika-kimia. Total padatan ditentukan oleh Halogen Moisture Analyzer HR 73 (Mettler
Toledo, Greifensee, Swiss). Kandungan lemak diukur menurut EN ISO 1211: 2010 (Milk Penentuan kadar lemak - Metode Gravimetric (metode Referensi) Kandungan total nitrogen
dievaluasi menggunakan analisa Kjeltec (Kjeltec 8400 Analyzer; FOSS Analytical AB, Hgans,
Swedia); kandungan protein dihitung sebagai nitrogen total dikalikan dengan 6,38 untuk susu
sapi dan 5.80 untuk susu kedelai. konten Ash ditentukan dengan sampel insinerasi dalam tungku
Ht40P (Lac, Rajhrad, Republik Ceko) pada 525 C.
pH dan keasaman titrable. Nilai-nilai pH ditentukan dengan pH meter (Jenway, Staffordshir
UK) dilengkapi dengan elektroda gabungan. Keasaman titratable dievaluasi dengan titrasi dari 25
g produk dengan 0,1 mol larutan NaOH / l untuk pH 8,3 dengan indikator phenolphthalein dan
dinyatakan sebagai mmol H + / kg. Semua eksperimen diulang sebanyak dua kali.
Pengukuran produk metabolik. enzim (Megazyme, Bray, Co, Wicklow, Irlandia) yang
digunakan untuk penentuan kandungan isomer asam laktat (dalam uji asam l-laktat), asam asetat
dan asetaldehida sesuai dengan instruksi produsen. Semua eksperimen diulang sebanyak dua
kali.

Ekstraksi isoflavon dari susu kedelai. Susu kedelai atau produk fermentasi kedelai (1 ml)
dengan chrysin 10 ng / ml (Sigma-Aldrich, Seelze, Jerman) sebagai standar ekstraksi dilakukan
dua kali dengan 6 ml etil asetat. larutan disentrifugasi pada 11 000 RCF (Rotina 35 R; Hettich
Zentrifugen, Tuttlingen, Jerman) selama 5 menit dan kemudian supernatan dikeringkan dalam
evaporator (BUCHI Rotavapor R-114; Bchi, Flawil, Swiss) di bawah nitrogen. Pelet
dikeringkan disuspensi dalam 10 ml methanol 50% dan kemudian diencerkan 10 kali dengan
methanol 50%. Ekstrak disaring melalui mikrofilter dan dipindahkan ke botol untuk analisis
UPLC-MS / MS.
analisis HPLC isoflavon. Pemisahan dilakukan menggunakan ACQUITY Ultra-Kinerja sistem
LC (UPLC) (Waters, Milford, USA) dengan kolom ACQUITY UPLC BEH C18 yang terhubung
ke spektrometer massa 5500 QTRAP tandem (AB SCIEX, Toronto, Kanada), dilengkapi dengan
sumber ion TurboIonTM electrospray (ESI) yang beroperasi pada katoda positif dan negatif.
Larutan asam asetat dan metanol (0,1% ) digunakan sebagai fase gerak dengan gradient elusi;
temperaturnya adalah 35 C. Daidzein, glycitein, dan genistein (Sigma-Aldrich, Seelze, Jerman).
Metanol digunakan untuk mengidentifikasi produk di Buchi (Flawil, Swiss) sebagai sampel yang
diuji. Konsentrasi isoflavon dihitung dengan interpolasi dari kurva kalibrasi yang disiapkan oleh
fungsi rasio area standar dan dalam daerah standar (chrysin) dan rasio isoflavon dan daerah
standar batin dalam sampel. Semua eksperimen diulang dua kali.