ESTUDIO DE MICROPREPARADOS PERMANENTES DE TEJIDOS

VEGETALES
ESCALLONIA PENDULA
Emanuel Steven Estrada Avellaneda
Universidad Pedaggica Y Tecnolgica De Colombia
Escuela De Ciencias Biolgicas
Biologa Celular

INTRODUCCION
Uno de los campos de accin del bilogo es la investigacin cientfica,
donde la generacin de conocimientos es el propsito amplio de esta. Un
aspecto bsico lo constituye la anatoma e histologa vegetal, campo de
estudio de gran importancia para el reconocimiento preciso de las
especies vegetales, desde el punto de vista del proceso de desarrollo de
sus tejidos y rganos.
La histologa vegetal adquiere relevancia en el estudio de ciertas
especies, y en la investigacin y aplicacin biotecnolgica, apoyando
cientficamente las relacionadas con la conservacin y uso de los
recursos vegetales. Para la caracterizacin anatmica de los distintos
tejidos y rganos vegetales, se requiere de conocimiento y uso de
tcnicas especializadas de microtecnia, lo que involucra la aplicacin de
procedimientos apropiados de colecta, fijacin, corte, tincin y montaje
para la obtencin de preparaciones permanentes, de valioso apoyo en la
investigacin botnica. Existen procedimientos rpidos y simples para la
obtencin de tejidos y clulas vivas que reciben el nombre de vitales,
otra forma de observar clulas o tejidos vivos en mediante tcnicas
histolgicas supravitales, en donde las clulas y los tejidos se mantienen
o se hacen crecer fuera del organismo, y finalmente las tcnicas
histolgicas postvitales son aquellas en las que las clulas mueren
mediante el proceso, pero las caractersticas morfolgicas y moleculares
que posean en estado vivo se conservan mejor o peor dependiendo del
tipo de tcnica, esta es la tcnica que ha sido utilizada en esta ocasin
para el reconocimiento de los tejidos que conforman cada uno de los
rganos vitales de la planta escallonia pendula.

OBJETIVOS

Relacionarse con las diversas tcnicas histolgicas que se utilizan

para el estudio de tejidos animales y vegetales.
Identificar cada una de las microfotografas tomadas en el
laboratorio.
Afianzar el conocimiento que se posee acerca de las numerosas
estructuras que posee un tejido vegetal.

MARCO TEORICO
Dicotilednea
Las dicotiledneas son una clase de plantas fanergamas angiospermas,
cuyos embriones de las semillas presentan dos cotiledones u hojitas
iniciales, opuestos por lo comn.

Las races son de tipo axonomorfo, con una raz principal o eje
persistente de la cual brotan races secundarias.
El tallo tiene hacecillos liberoleosos abiertos, con zona de
cmbium.
Las hojas son generalmente laminares, angulosas, presentando
una gran variedad de forma. la nerviacin suele ser de tipo
penninervia o reticular generalmente.
En las flores se diferencian el cliz y la corola; segn el nmero de
ptalos, son tetrmeras o con cuatro ptalos, o pentmetas o con
5 ptalos.
Comprende las subclases de las arquiclamdeas o coriptalas y las
simptalas.

ESCALLONIACEAE

Hbito: rboles o arbustos, usualmente terrestres, raramente

plantas
epfitas;
tallos
con
corteza
frecuentemente
exfoliante. Estpulas: usualmente ausentes.
Hojas: alternas, simples, lminas a veces glandulares o resinosas,
margen frecuentemente aserrado o con glndulas caducas.
Inflorescencias: terminales o axilares, racimos, panculas o menos
frecuentemente flores solitarias.

Flores: actinomorfas, bisexuales; spalos 5, frecuentemente

fusionados en las bases para formar un tubo corto; ptalos 5,
libres, lineares, espatulados u obovados, erectos o extendidos;
androceo de 5 estambres, estambres alterniptalos, anteras
dehiscentes longitudinalmente; disco epgino rodeando la base del
estilo; gineceo gamocarpelar, ovario nfero, carpelos 2-3, lculos 23, estilo bien desarrollado, simple o raramente bfido en el pice,
estigma capitado o peltado; placentacin axilar, vulos numerosos
por lculo.
Frutos: cpsulas. Semillas: numerosas, pequeas; endosperma
presente.
Caracteres diagnsticos:
rboles o arbustos, comnmente de altas elevaciones
Hojas alternas, simples, margen frecuentemente aserrados o
glandulares
Flores con discos nectarferos; ovario nfero, estilo erecto,
conspicuo,
estigmas
capitados
o
peltados
Frutos cpsulas

ESCALLONIA PENDULA
TAXONOMIA:
Nombre Cientfico
Reino
Phylum
Clase
Orden
Familia
Gnero
Epteto Especfico
Autor Epteto Especfico
Determinador
Fecha determinacin
Tabla 1 Taxonomia..

Escallonia pendula
Plantae
Magnoliophyta
Magnoliopsida
Rosales
Escalloniaceae
Escallonia
Pendula
(Ruiz & Pav.) Pers.
Beltrn Cuartas, Ana Mara
2009

Etimologa: El epteto especfico procede del vocablo latino pendulus, =

pendiente, colgante; en alusin a sus inflorescencias, colgantes; Escalln =
viajero espaol.
Descripcin: Esta especie tiene la particularidad de que crece rpido, opcin
muy interesante para su distribucin en diferentes espacios; adems, tiene una
buena madera. Tiene la corteza con un aspecto fisurado muy bonito, de color
amarillento; ramas gruesas y curvadas; ramas pequeas de color verdosomarrn; hojas angostas y largas, simples, alternas, sin estpulas ni exudado,

que maduran en rojizo y son aserradas, con yemas pegajosas; flores en largos
racimos pendulares de color verde-rojizo con el cliz en corona; frutos
pequeos con varias semillas. Se usa para lea y carbn, cabos para
herramientas, artesana y otros menesteres.
Porte: rbol mediano, entre 10 y 15 m en estado adulto.
Origen: nativo.
Tasa de crecimiento: rpida.
Longevidad: entre 20 y 40 aos.
Forma del rbol:
Fuste: varios.
Copa: aparasolada.
Densidad de copa: abierta.
Caractersticas ornamentales: maduracin de las hojas en colores vivos y
produccin de frutos.
Raz: secundarias muy ramificadas.
Hbitat y distribucin geogrfica. Se establece en las regiones de vida
andina y subandina, especialmente en vertientes secas y laderas de caones
ridos como el Chicamocha; tambin en bosques secundarios y en suelos
pobres y pedregosos, en donde su crecimiento es rpido.
Nombres comunes: La planta es conocida con los vulgarismos de manguel
y mangle.
Usos: La madera de estas plantas es usada para confeccionar herramientas de
mano. Con las hojas molidas se prepara un emplasto til para remediar los
esguinces. Tambin se utiliza como especie ornamental.

MATERIALES Y METODOS

Tejido apical, (Escallonia pendula); joven, sano y en crecimiento.

Frascos de muestras.
Cinta de enmascarar.
Bistur.
Cuchillas.
Placas, portaobjetos y cubreobjetos.
Pincel plano angular.
Aguja de diseccin recta.
Gotero de vidrio.
Paos absorbentes.

Frasco compota.
Parafina, esencial para la fase de imbibicin.
Fijador Carnoy, ideal para la conservacin del tejido a estudio sin
alterar su estructura morfolgica.
Xilol 1 y Xilol 2, su uso es bsicamente para transparentar el
tejido.
Alcoholes de diferentes gradientes de concentracin (50%-60%70%-80%-90%-95%-98%- Isopropanol-Acetona), uso primordial
para la deshidratacin del tejido a estudio.
Colorantes ideales para uso en tejidos vegetales. Safranina, Fast
Green, alcoholes de distintos gradientes y xilol. La utilizacin de
estos es esencial para resaltar diferentes estructuras que
conforman el tejido.

PROCEDIMIENTO
Tcnicas histolgicas para la obtencin de micropreparados
permanentes por medio de procesos mediatos o postvitales. En esta
ocasin para un tejido vegetal obtenido a partir de (Escallonia pendula).
En los procesos mediatos o postvitales se tiene por finalidad preparar
clulas, tejidos y rganos procedentes de seres en los que los procesos
vitales se han detenido y es necesario, conservar la estructura que
tenan en vida. De manera general, para alcanzar este objetivo es
necesario realizar los siguientes pasos:
1. Obtencin del tejido:
Es necesario seleccionar un tejido apical, puesto que este se
caracteriza por ser un tejido joven, sano y que se encuentra en
crecimiento.
Los tejidos se seccionan empleando bisturs o navajas de afeitar
nuevos, sin hacer presin sobre ellos. No es recomendable el uso de
tijeras para cortar los tejidos pues en estas ocasionan compresiones y
jabonamientos de los tejidos que distorsionan su estructura
microscpica. El tamao de las muestras no debe exceder de 10mm
por lado con un grosor de 5mm.
2. Fijacin:
En esta ocasin el fijador seleccionado es el Carnoy, es un fijador que
contiene cloroformo. Penetra en tejidos extremadamente rpido y
pude fijar piezas de tejido de pequeo tamao en minutos en vez de
las horas requeridas con otros fijadores. Se encarga de conservar las
estructuras del tejido, y protegerlo gracias a su poder antisptico. Al
concluir la fijacin el fijador debe ser eliminado de las muestras. Para
tal fin se procede al lavado de los tejidos mediante agua o alcohol. Se
evita as, que los tejidos se endurezcan demasiado o que ciertos
componentes del fijador introduzcan modificaciones en los tejidos e

impidan una adecuada obtencin de secciones delgadas o la

coloracin correcta de sus componentes celulares.
3. Deshidratacin:
Significa extraer o remover el agua de los tejidos fijados. La
deshidratacin debe ser completa porque, de lo contrario, el solvente
no acta de forma adecuada y el bloque de inclusin no alcanza la
dureza requerida. Para tal fin se utilizan lquidos deshidratadores en
los cuales se sumergen los tejidos. Los deshidratadores ms usados
son el alcohol etlico, el alcohol isopropilico, el dioxano y el
cloroformo. En el caso de la inclusin en parafina, las muestras se
deshidratan en baos sucesivos de soluciones de concentracin
crecientes de alcohol etlico. El procedimiento de rutina es el
siguiente:
GRADIENTE DE
CONCENTRACIN

50%
60%
70%
80%
90%
95%
98%
Isopropanol
Acetona

TIEMPO EN EL QUE LA
MUESTRA SE
ENCUENTRA
SUMERGIDA
3 Horas
3 Horas
3 Horas
3 Horas
3 Horas
3 Horas
3 Horas
3 Horas
1 Hora

Tabla 2 Proceso de deshidratacin para inclusin

en parafina.

4. Transparentacin o diafanizacin:
Las muestras deshidratadas se encuentran totalmente embebidas en
alcohol absoluto, pero la parafina tampoco es soluble en alcohol
como en agua, por lo que es necesario reemplazarlo por sustancias
que sean capaces, simultneamente, de mezclarse con el alcohol y
disolver la parafina. Estas se denominan lquidos diafanizadores o
intermediarios (el xilol, el tolueno, el benceno y el cloroformo). El de
uso ms frecuente es el xilol. La diafanizacion de los tejidos se debe a
que estas sustancias poseen un alto ndice de refraccin y al
interactuar con los tejidos los vuelven transparentes. Es
procedimiento que llevaremos a cabo bsicamente es:
LIQUIDO
DIAFANIZADOR
Xilol 1

TIEMPO DE
DURACION
2 Horas

Xilol 2

2 Horas

Tabla 3 Proceso de diafanizacion con xilol

5. Imbibicin:
Las parafinas son hidrocarburos saturados provenientes de la
destilacin del petrleo. Generalmente son sustancias solidas a
temperaturas ambiente. Existen diferentes tipos de paradina que se
caracterizan por sus puntos de fusin. La penetracin de la parafina
al interior de los tejidos se efecta cuando esta se encuentre en
estado lquido.
6. Inclusin:
La formacin del bloque de parafina se efecta empleando moldes de
diversos materiales y diferentes reas y profundidades. Pueden ser
de papel, metal o plstico. El bloque de parafina debe contener la
muestra correctamente orientada para facilitar la obtencin de las
secciones o cortes.
El molde elegido se llena con parafina caliente; con una pinza
calentada en un mechero se toma una pieza de tejido y se orienta
una de sus superficies (aquella que se pondr en contacto con el filo
de la navaja) se sumerge al interior del molde, en el que la parafina
ha empezado a solidificarse y se le aplica una leve presin. Despus
los moldes se enfran de inmediato, para que la parafina se solidifique
de manera homognea.
7. Microtomia (obtencin de los cortes):
En esta etapa, los tejidos y la parafina integran un solo bloque que,
posee la dureza y la consistencia suficientes para obtener secciones
delgadas y transparentes.
Las secciones delgadas o cortes se obtienen utilizando
instrumentos mecnicos diseados para que en forma ms o menos
automtica, seccionen el bloque de parafina en cortes delgados y de
grosor uniforme. Los instrumentos se denominan microtomos. Los
cortes obtenidos, aislados o en forma de cintas, generalmente se
presentan arrugados y muestran un rea menor que la que poseen en
la inclusin, por lo que es necesario extenderlos y luego adherirlos a
las lminas portaobjetos (esto facilita su manipulacin posterior).
Los cortes se extienden al depositarlos sobre una superficie del
lquido extendedor contenido en un recipiente denominado bao de
flotacin (temperatura entre 40C-45C).
Las secciones se extienden aisladas formando cintas que deben
separarse utilizando la aguja de diseccin, estas se recogen y se
adhieren al portaobjetos de la misma forma.
8. Coloracin:

El procedimiento de coloracin o tincin consiste en que una

estructura celular o tisular adquiere especficamente un color bajo la
accin de una sustancia colorante, existen dos teoras que explican el
procedimiento de la coloracin, el primero se trata de un proceso
fsico de adsorcin, en donde las partculas de las sustancias
colorantes disueltas penetran en los espacios intra e intercelulares en
los que se mantienen adheridos en razn de la cohesin molecular. La
segunda hace referencia a un proceso qumico en el cual el colorante
se une a la sustancia coloreable combinndose con ella ntimamente
debido a la presencia de agrupaciones moleculares acidas o bsicas
en los componentes celulares que se unen respectivamente a los
cromgenos bsicos y cidos de los colorantes. Formando sales
insolubles imposibilitando completamente la separacin del tejido, De
acuerdo con esta teora los colorantes se unen a los tejidos por
enlaces inicos, covalentes o de hidrogeno.
Se considera que una estructura se ha coloreado o teido cuando al
ser lavada con el lquido que disuelve al colorante no se decolora. Se
denomina colorante a aquella que puede transferir su color a otro
cuerpo.
El proporcionar color a las estructuras que constituyen un tejido se
hace con la finalidad de distinguirlas entre si y facilitar su
observacin.
Se utilizaron dos colorantes principales safranina y fast Green,
adems alcoholes de distintos gradientes y xilol.
9. Montaje:
Concluido el proceso de tincin en los cortes, estos se deben colocar
en condiciones de proteccin y de poderlos utilizar infinidad de veces
sin que se deterioren, para alcanzar tal propsito de recurre al ltimo
procedimiento que es el montaje. Consiste en colocar encima del
corte coloreado y diafanizado una gota de sustancia adherente,
diluida generalmente en xilol y encima de ellos, una laminilla
cubreobjetos , cuidando que no queden burbujas de aire entre la
resina. Posteriormente se deja que el xilol se evapore, y la resina
adquiera solidez suficiente; para ello las lminas se colocan en una
platina caliente (45C-50C) durante 24 a 48 horas y estarn listas
para ser observadas.
10.

Toma de microfotografas e informe final

RESULTADOS Y ANALISIS

Parnquima Esponjoso

Nervio central
Epidermis superior

Parnquima Empalizada

Epidermis inferior

Ilustracin 1
Escallonia
transversal hoja 10x (4x)

pendula.

Corte

Las
hojas
son
con
Nervaduras
retinervadas, o sea que tienen nervadura
principal y de ella salen las nervaduras
secundarias formando como una especie
de
red.
Al
contrario
de
las
monocotiledneas que tienen nervaduras
Paralelas.

Corte transversal de hoja de olmo (Ulmus pumila)

(50x) con parte del nervio central. (4x)

otra inferior ( o si se quiere una adaxial y

otra abaxial ) entre las cuales se
encuentran parnquimas asimiladores
(verdes)
atravesados
por haces
vasculares, lo que en conjunto se
llama mesfilo.

Colnquima

Floema

Xilema

Epidermis adaxial

Epidermis abaxial

En las hojas amplias de las dicotiledneas los

estomas estn esparcidos. En plantas
mesfitas los estomas generalmente estn al
mismo nivel que las dems clulas. En plantas
higrfitas los estomas estn elevados sobre
las dems clulas. Los vegetales de
ambientes
secos
(xerfitos),
tienen
dispositivos que evitan la prdida de agua y al
mismo tiempo protegen contra la radiacin
luminosa y calor demasiado intensos.

Corte transversal de una hoja de lila (Syringa

Vulgaris) 40x

Epidermis

Xilema

Cortex

Endodermis

Floema
Parnquima medular
Ilustracin
Aces vasculares

2
Escallonia pendula. Corte
transversal hoja 40x (4x)
Ilustracin 3
Escallonia pendula. Corte
transversal tallo 10x (4x)

En
corte
transversal
de
tallo
de
Gimnospermas y Dicotiledneas, los haces
vasculares aparecen formando un crculo que
delimita una regin externa y una interna de
tejido
fundamental: crtex y mdula
respectivamente. Los haces vasculares estn
separados entre s por paneles de parnquima
interfascicular.
Los haces vasculares pueden estar muy
prximos unos de otros semejando un anillo
continuo.

Corte transversal de tallo de tilio.

CONCLUSIONES
1. Para observar y extraer todos los detalles posibles de las
estructuras que queremos observar en el microscopio es
Primordio foliar
imprescindible preparar bien las muestras. La tcnica de
Protoderme
microtoma nos ayuda a que la muestra sea lo suficientemente
fina para que la luz del microscopio pueda atravesarla; con tincin
podemos resaltar las zonas que nos permitirn reconocer las
estructuras de la muestra.
Procambio
2. La diferenciacin celular hace que cada clula dentro de un
mismo organismo adopte una forma especfica segn la funcin
para la que est determinada.
3. La zona de epidermis o la zona externa de los organismos
Clulas jvenes
vegetales presenta clulas alargadas que forman una capa
compacta y unificada, su funcin es de proteccin.
4. La zona del parnquima presenta clulas con forma poligonal, en
el interior de las cuales se acumulan las sustancias u orgnulos
Tejido meristematico
que ms necesita el organismo; como almidn (reserva
Meristema Fundamental
energtica) o cloroplastos (reserva cloroflica).
Ilustracin 4 Escallonia pendula. Corte longitudinal meristema
Apical 10x REFERENCIAS

Ilustracin 4 Escallonia pendula. Corte longitudinal meristema

Apical 10x

http://mmegias.webs.uvigo.es/1-vegetal/guiada_v_meristemos.php
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/3er/Vegetales/6666/Monoc
otiledoneasyDicotiledoneas.html
Los meristemos son los responsables
http://facultad.bayamon.inter.edu/yserrano/capbot14.html
del crecimiento permanente de las
http://www.biologia.edu.ar/botanica/tema15/15-6fibras.htm
plantas debido a que tienen una alta
http://www.dbbe.fcen.uba.ar/contenido/objetos/Anatomaderaztallo
capacidad de divisin celular y estn
yhoja_1379513198180054.pdf
presentes durante toda la vida de
http://es.calameo.com/books/00332009036e68c772b0c
stas. No todas las clulas que se
estn dividiendo se diferencian en
clulas funcionales, sino que algunas
permanecen en estado indiferenciado.

Corte longitudinal Meristema apical

Observamos en la gran mayora del

corte meristematico apical, tejido
meristematico
o
meristema
fundamental, como en la comparacin
de la imagen de referencia.