Punto de
Ebullicin del
analito
Temperatura
Presin de
Vapor
Caractersticas de la fase
Estacionaria (interacciones
FE- Analito)
Caractersticas de la
Fase Mvil
(Densidad y velocidad
de Flujo)
Eficiencia de la
columna.
Separacin de los
Picos (resolucin)
(Ensanchamiento
de los picos W)
Eficiencia de la
fase estacionaria
(Posicin relativa
de los picos tr)
Diseo de la columna
Condiciones de corrida
HETP
Interacciones Analito FE
Efecto de la Temperatura
Mezclas complejas separadas
ISOTERMICAMENTE:
TCOL BAJA:
- Componentes mas voltiles son
separados. Los menos voltiles tienen
tiempos de retencin altos y eluyen
picos ensanchados.
TCOL ALTA:
- Componentes mas voltiles no son
separados. Los menos voltiles
disminuyen su tiempo de retencin.
Efecto de la Temperatura
La Temperatura del horno puede ser variada linealmente para la separacin
Se consiguen buenas
separaciones de los
componentes en menor
tiempo
TEMPERAT
URA
Programa de temperatura:
TFIM
R
TINI
tFIM
tINI
TIEMPO
Efecto de la Temperatura
Corrida isotrmica
a 220C
Programa de T Inicial 50 C
a 20C/m hasta 220 C 2 min luego a 30C/m hasta 240 C 8 min.
Resolucin
Representa la separacin de los picos y es el resultado de la
eficiencia de la columna y de la fase estacionaria
R=
2d
W1 + W2
Efecto de la Polaridad
24:1
24:0
22:0
22:1
20:0
20:1
19:0
18:0
17:0
16:1
16:0
12:0
14:0
23:0
Tiempo de retencin
tR
Interaccin analito / FE
Presin de vapor del analito
Condiciones operacionales
estandar
Mejora el
trmino C
Velocidad de flujo
Mejora el
trmino B
IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE
LOS PICOS DE LAS MUESTRAS
IDENTIFICACIN
Usando FID:
Con los datos de los estndares
(condiciones isotrmicas),
graficar log Tr en funcin del N
de t. C.
Identificar los picos del
cromatograma correspondiente
a corridas programadas, por
comparacin con los Tr de los
estndares con los tr de los
picos de las muestras.
Usando MS: se identifica con
espectros de librera.
CUANTIFICACIN
El rea% del compuesto i como
metilster, se expresa:
Ai
x 100
(Ai)
Con uso de estndar interno en
concentracin conocida.
Clculo de reas, comparando con
corridas de estndares de
concentracin conocida
Identificacin y confirmacin
ESPECTRO
DESCONOCIDO
comparacin
BIBLIOTECA DE
ESPECTROS
#
1
NOME
1-dodeceno
1-dodecanol
ciclododecano
2-dodeceno
5
6
FRM. %
C12H24 99
C12H26O 91
C12H24 91
C12H24 66
C11H22 35
8-metil-3-undeceno C12H24 32
1-undeceno
Muestra
TP 3
Tejido
animal
Tejido
vegetal
Hgado
Plasma
Folch
Bligh dyer
modificado
Germen
Prensado
Semilla
u hoja
Molienda
Metanolisis
Alcalina
Clarificacin
GLC
MODERADOS/SUAVES
Prensado
Molienda
Ultrasonido
Homogenizacin con cuchillas
Homogenizacin mecnica
manual
Lisis por smosis
Tratamiento enzimtico
Solventes orgnicos
Extraccin por
solventes
La extraccin, que se
puede definir como la
transferencia de una
sustancia X desde una
"fase lquida A" a otra
"fase lquida B",
inmiscible con la anterior.
TP 4
Ventajas:
Concentracin del analito en un
volumen menor de solvente
Manejo de condiciones de
separacin: pH, temperatura
Desventajas:
Consumo de mucha cantidad de
solventes
Semiemulsin
Extraccin incompleta
Proceso lento
Mtodo QuEChERS
(Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe)
Desarrollado por el USDA y las Ag. Regul. Aliment. Europeas
El procedimiento consiste en
2 simples etapas:
Extraccin
Clean up
Diagrama de la combinacin
cromatgrafo gaseoso - espectrmetro de masas