Gua de prcticas
BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR
2016-II
Responsable
Profesores
APELLIDOS, NOMBRES:_________________________________________
GRUPO:___________ DIA:____________ PROFESOR:______________
1
INTRODUCCIN
La biologa es la ciencia de la vida que estudia la estructura y funcin de los organismos vivos y sus
componentes. Las aplicaciones de la investigacin bsica en biologa molecular son numerosas, desde la
tecnologa para trasplantar corazones, manipular genes, disear frmacos contra microorganismos
patgenos hasta actividades como incrementar la produccin mundial de alimentos.
La gua de prcticas del curso de Biologa Celular y Molecular tiene como objetivo entrenar al
estudiante en los procedimientos de laboratorio y desarrollar su pensamiento cientfico, de manera que lo
lleve a comprender los trminos bsicos de la Biologa Molecular.
El estudiante debe emplear esta gua en cada prctica de laboratorio y estar informado sobre la
prctica que se llevar a cabo en cada sesin, anticipadamente.
La gua se ha dividido en tres partes de acuerdo a cada captulo. La primera parte comprende la
clula y componentes celulares. La segunda parte incluye procesos celulares como respiracin,
permeabilidad, divisin celular y la visualizacin de organelas. En la tercera parte se analizara el proceso
de divisin celular, comprensin del cdigo gentico y tcnicas de manipulacin de cidos nucleicos.
El alumno debe cumplir con los objetivos planteados al final de cada prctica. As mismo debe
presentar su gua de prctica terminada la misma, con las actividades requeridas en la sesin de prctica,
debidamente desarrolladas.
EVALUACIN CONTINUA
ASPECTO ACTITUDINAL
1. Asistencia y puntualidad
2. Indumentaria adecuada
3. Material requerido para prctica
4. Participacin
0 5 puntos
0 5 puntos
0 5 puntos
0 a 7 puntos
ASPECTO CONCEPTUAL
1. Evaluacin escrita
0-20 puntos
ASPECTO PROCEDIMENTAL
1. Manipula adecuadamente el material de laboratorio
2. Sigue el protocolo establecido en la gua
3. Elaboracin de Informe Practico (COMPLETO):
0 a 4 puntos
0 a 4 puntos
0 a 12 puntos
PROGRAMACIN DE CONTENIDO
SEMANA
CONTENIDO
EXAMENES PARCIALES
II-2 Fermentacin
10
REPASO
11
II-3 Mitosis
12
II-4 Fecundacin
13
14
15
16
EXAMENES FINALES
NORMAS PERSONALES
1. Lea con atencin, antes de cada prctica, las indicaciones de su gua. Siga todas las instrucciones a
menos que el profesor realice alguna modificacin.
2. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. Se trabajar con
cuidado y de manera organizada. As mismo se mantendr cada mesa de trabajo limpia, seca y
ordenada.
3. Es obligatorio la utilizacin de mandil que le cubra brazos, piernas y torso. Est prohibido el uso de
sandalias, pantalones y faldas cortos en el laboratorio. La persona inapropiadamente vestida para
trabajar en el laboratorio no podr ingresar.
4. No se debe llevar las manos a la boca ni a la cara pues pueden estar contaminadas.
5. Toda persona con cabello largo, deber sujetarlo y recogerlo, nunca debe de estar libre.
6. Est terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas y comer en el laboratorio.
7. En caso de derrame, accidente o dao avise inmediatamente al profesor.
8. Al trmino de cada prctica limpiar el rea de trabajo y lavar los materiales utilizados con agua de
cao. Lavarse las manos meticulosamente con agua y jabn. Finalmente cerciorarse que las llaves
de gas y agua estn cerradas.
REACTIVOS QUIMICOS
1. Usar lentes de seguridad cuando trabaje con reactivos qumicos peligrosos que puedan salpicar o
derramarse.
2. Antes de utilizar un compuesto, asegurarse bien de su necesidad, fijarse bien en el rtulo.
3. Como regla general, no coger ningn producto qumico. El profesor o profesora te lo proporcionar.
4. Nunca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin consultar con el profesor.
5. Es muy importante que cuando los productos qumicos de desecho se viertan en la pila de desage,
estn debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua.
6. No tocar con las manos y menos con la boca, los productos qumicos.
7. No pipetear con la boca. Utilizar una bombilla de succin.
8. Los cidos requieren un cuidado especial. Cuando queramos diluirlos, siempre echaremos el cido
sobre agua.
9. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben estar lejos de fuentes de calor. Si hay
que calentar tubos con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama.
10. Manipule con precaucin los solventes voltiles e inflamables como el ter, acetona y metanol.
Nunca evapore estos solventes en una hornilla al abierto. Utilice siempre un sistema de
condensacin eficiente.
11. Si por accidente cae o se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo, lvate inmediatamente
con mucha agua y avisa al profesor.
12. Al preparar cualquier disolucin se colocar en un frasco limpio y rotulado convenientemente.
13. Si fuera necesario durante la practica encender un mechero, encienda el fuego en el laboratorio solo
si no existen solventes inflamables en la vecindad. La persona que encienda el fuego debe primero
verificar que no exista otra persona que este trabajando con solventes inflamables en el laboratorio.
MATERIAL DE VIDRIO
EQUIPOS ELCTRICOS
1 Manipule cualquier equipo elctrico con las manos secas y asegrese que el rea de trabajo tambin
este seca.
2 Ningn cordn elctrico debe colgar fuera de la mesa de trabajo.
3 Cuando desconecte algn equipo del tomacorriente, jlelo por el enchufe y no por el cordn.
UTILIZACION DE BALANZAS
1 Cuando se determinan masas de productos qumicos con balanza, se colocar papel sobre los platos
de la misma y si el producto fuera corrosivo, se utilizar una luna de reloj.
2 Se debe evitar cualquier perturbacin que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes,
aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.
MANIPULACIN DE ESPECMENES
1 Manipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo con cuidado extremo.
Siempre utilice tcnicas de esterilidad (a la llama del mechero, guantes, palillos estriles, etc.).
2 Nunca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y hojas.
BARRERAS DE CONTENCION
Los laboratorios presentan diversas barreras de contencin que previenen el escape y dispersin
de agentes biolgicos de riesgo.
Barrera primaria: Es aquella que protege al personal y al ambiente inmediato del agente de riesgo
(vestimenta de uso exclusivo, cabina de bioseguridad y equipos provistos de dispositivos de seguridad).
Barrera secundaria: Es aquella que protege el ambiente externo contra los agentes de riesgo (diseo del
laboratorio e implementacin de equipos de seguridad de acuerdo al nivel de Bioseguridad).
Barrera microbiolgica: Es un dispositivo o sistema que evita o limita la migracin de microorganismos
entre los espacios situados a ambos lados del mismo y permite controlar la concentracin de
microorganismos en el ambiente, dentro de lmites prefijados. Tiene como objetivo proteger al operador o
al operador y al proceso.
Barrera microbiolgica parcial: Es un dispositivo o sistema que limita la migracin de microorganismos
entre los ambientes situados a ambos lados del mismo. En este tipo de barrera se recomiendan Prefiltros,
Filtros HEPA (Filtros de alta eficiencia para el control de partculas en suspensin) as como cabinas de
bioseguridad clase I o II, lo cual depender del tipo de trabajo que se efecta en un determinado
laboratorio.
Barrera microbiolgica absoluta: Es un dispositivo o sistema hermtico, a prueba de filtraciones de aire
o gas, que evita en forma total la migracin de microorganismos entre el ambiente confinado por la
barrera y el ambiente exterior de la misma. La barrera microbiolgica absoluta puede confinar al producto
o proceso, dejando al operador fuera de la misma o viceversa. En este caso se recomienda una cabina
de bioseguridad de tipo III.
Barrera qumica: Son dispositivos o sistemas que protegen al operador del contacto con substancias
irritantes, nocivas, txicas, corrosivas, lquidos inflamables, sustancias productoras de fuego, agentes
oxidantes y sustancias explosivas. En este caso se recomiendan una cabina de seguridad qumica.
Barrera fsica: Son dispositivos o sistemas de proteccin individual o colectiva que protegen contra las
radiaciones ionizantes, no ionizantes, ruidos, carga calrica, quemaduras y vibraciones excesivas.
NIVELES DE BIOSEGURIDAD
De acuerdo con el nivel de riesgo, el tipo de laboratorio, la barrera de contencin requerida, los
procedimientos y tcnicas a usar, se han establecido los siguientes niveles de Bioseguridad.
Nivel de Bioseguridad I: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio
bsico, por personal adiestrado en los procedimientos que se ejecutan en l. En este nivel se trabaja con
agentes clasificados en el Grupo de riesgo I por presentar un peligro mnimo para el personal del
laboratorio y para el ambiente. En el nivel de Bioseguridad I no se requiere equipo especial ni un diseo
especfico de las instalaciones. El personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un
cientfico con entrenamiento en microbiologa.
Nivel de Bioseguridad II: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio
bsico, por personal adiestrado en el manejo de agentes de riesgo del grupo II. Es similar al nivel I y en l
se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel I en las
siguientes caractersticas:
1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el manejo de agentes patgenos.
2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se est realizando algn trabajo.
3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzo cortantes contaminados.
4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en
cabinas de trabajo microbiolgico.
Nivel de Bioseguridad III: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de
contencin. El personal debe contar con adiestramiento especfico para el manejo de agentes de alto
riesgo clasificados en el grupo de riesgo III. En el laboratorio se realiza trabajo con agentes que pueden
causar un dao serio y potencialmente mortal como resultado de la inhalacin o exposicin a los mismos.
El laboratorio cuenta con un diseo y caractersticas especiales tendientes a proteger al operador y al
ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de proteccin siguiendo
protocolos rigurosos. Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a
impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente.
Nivel de Bioseguridad IV: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de
contencin mxima. Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biolgicos clasificados en el
grupo de riesgo IV por representar un alto riesgo individual de contagio y que adems son un riesgo para
la vida. Los agentes nuevos que presentan caractersticas antignicas, patognicas u otras similares a
agentes de nivel III y IV son confinados a nivel IV hasta que exista suficiente informacin cientfica para
establecer a cual grupo de riesgo pertenecen.
El personal que trabaja en los laboratorios de nivel IV tiene entrenamiento especfico y extensivo en el
manejo de agentes infecciosos, y cuenta con entrenamiento para trabajar en el ambiente estril y
controlado. El laboratorio cuenta con un diseo y caractersticas especiales tendientes a proteger al
operador y al ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de
proteccin de caractersticas superiores a las exigidas para el trabajo en un laboratorio de nivel III. Los
trajes estn diseados para cubrir la totalidad del cuerpo, presentan un sistema de respiracin individual
asociado y una leve sobrepresin interna para evitar as la entrada accidental de partculas infecciosas.
Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa , lo cual ayuda a impedir que los
trabajar con agentes patgenos de los distintos grupos de riesgo. De esta manera los laboratorios se
clasifican en 3 categoras:
Laboratorio bsico: Dividido en dos grupos, el de nivel de bioseguridad 1;y el de nivel de bioseguridad 2;
Laboratorio de contencin: con nivel de bioseguridad 3, y
Laboratorio de contencin mxima: con nivel de bioseguridad 4.
TRABAJO GUIADO
1.-Complete los nombres de los distintos smbolos que se presentan a continuacin.
SEALES DE ADVERTENCIA
SEALES DE PROHIBICION
SEALES DE OBLIGATORIEDAD
FECHA
ACTITUDINAL
CARACTERISTICAS
MATERIAL
TIPO
DELABORATORIO
PARTICIPACIN
10
EJEMPLOS DE
PATOGENOS
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
SEGUNDA PARTE:
MICROSCOPA Y ENFOQUE DE MUESTRAS
I.
FUNDAMENTO
= constante = 0.61
A.N
= longitud de onda de luz AN = apertura numrica de cada lente
objetivo es su capacidad para captar la mxima cantidad de la luz
difractada por el objeto. Depende del ndice de refraccin del medio.
Recuerda: A menor lmite de resolucin mayor ser el poder de resolucin
Resolucin y magnificacin Mximas
Instrumento ptico
Resolucin
Magnificacin
Ojo humano
0,1 mm
Microscopio ptico
0,2 u
2500
Microscopio electrnico
0,1 nm
1000 000
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II. OBJETIVOS
IV. PROCEDIMIENTO.
Se reconocern las partes de un microscopio ptico. Sealar las partes del mismo en el dibujo adjunto.
1. SISTEMA OPTICO. El sistema ptico est constituido por:
Objetivos: sistema de lentes convergentes que acta como una lente que se encuentran montados en el
revolver. Lo usual es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos ( 4x,
10x, 40x, 100x) los que se clasifican en:
Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la preparacin.
Objetivos de inmersin: en el cual un lquido (aceite) se interpone entre la lente y la preparacin.
Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y
forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto nmero de veces (X veces,
segn se indica en el propio ocular). Los aumentos ms comunes son 10X y 16X.
2.-SISTEMA DE ILUMINACIN.
Condensador: Sistemas de lentes convergentes que concentra el haz de luz sobre la preparacin.
Diafragma: Sirve para regular la cantidad de luz que llega a la preparacin.
Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (ampolleta).
Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para mejorar el contraste.
3.-SISTEMA MECANICO
Tubo ptico: Cilndrico ahuecado destinado a llevar el ocular en su extremo superior y los objetivos
montados en el revlver en su extremo inferior. La longitud del tubo debe ser siempre precisa.
Revlver: Pieza metlica situada en la parte inferior del tubo que por rotacin sita los diferentes
objetivos en posicin de trabajo.
Platina: Superficie plana con una perforacin central para permitir el paso de la luz hacia preparacin.
Posee un carro que sostiene la preparacin y que puede desplazarla hacia delante y hacia el
lado izquierdo o hacia el lado derecho.
Tornillo Macromtrico: Mecanismo de enfoque de avance rpido.
12
NOTA IMPORTANTE. Presta mucha atencin al manejo del microscopio que tienes a tu cargo. Debes
hacerlo cuidadosamente porque son aparatos muy delicados y dejars a consigna tu documento de
identificacin.
13
TRABAJO GUIADO
1.- Indique todas las partes del microscopio
14
3.- PRCTICA:
Use una hoja de papel milimetrado y escriba la letra e en un mximo de tamao de 1 a 2 mm2
a. Corte aproximadamente 1 cm 2 que incluya la letra que anoto, coloque el trozo de papel sobre la lmina
y humedezca el papel con una gota de agua y cbrala con una laminilla.
b. Coloque la lmina sobre el microscopio con la letra y enfquela con el objetivo de 4x.
c. Luego enfoque la lmina con los objetivos 10X y 40 X
LENTE OBJETIVO
CARACTERISTICA DE
LA IMAGEN
OBSERVADA
DIAMETRO DEL
CAMPO DE VISION
EN MILIMETROS
AUMENTO TOTAL
4X
10X
40X
FECHA
ACTITUDINAL
MATERIAL
PARTICIPACIN
15
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
- Pipetas pasteur
- Agua destilada
- Azul de metileno
Material de estudio:
- Agua estancada o agua de florero de al menos una semana de conservada
- Muestra de epitelio bucal extradas con hisopos
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IV. PROCEDIMIENTO
PREPARADOS EN FRESCO
1. Colocar una gota de agua estancada o agua de florero en un portaobletos
2. colocar una laminilla cubreobjetos
3. Observa al microscopio
PREPARADOS EN SECO
1. Colocar la muestra de epitelio bucal extrada con los hisopos en un portaobjetos
2. Fijar por desecacin o suavemente a la flama del mechero
3. Realizar la coloracin con azul de metileno por 3 minutos
4. Retirar el exceso de colorante y secar al medio ambiente
5. Observa al microscopio
1.- Dibuje lo observado en las muestras preparadas en la prctica.
2.- Diferencie entre el preparado en fresco de un preparado en seco
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
17
de lugol como mordiente. Esto forma un compuesto yodado que se fija fuertemente en determinadas
bacterias. Segn la coloracin que adquieran, las bacterias se clasifican en:
GRAM POSITIVAS: se tien fuertemente con violeta de genciana y adquieren una coloracin violeta.
GRAM NEGATIVAS: se tien muy superficialmente por lo que fcilmente se decoloran con solventes
orgnicos. Se utiliza adicionalmente la safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste,
adquiriendo una coloracin rosada.
La diferente tincin de bacterias se debe a la composicin diferencial de sus paredes bacterianas. Las
bacterias Gram positivas poseen una pared celular con mureina y cido teitoico. En cambio, las Gram
negativas tienen una pared mucho ms compleja que contiene, adems del peptidoglucano, una
asociacin de protenas lpidos y lipopolisacridos
Adems de la coloracin esta tcnica nos permite distinguir en las bacterias: a) morfologa: cocos,
bacilos, espirilos, cocobacilos, vibrios, etc) b) agrupacin: pares, cadenas ttradas, racimos, sarcina
A: forma de caa o bacilos
B: Redondos en lneas: estreptococos
C: redondos en cmulos: estafilococos
D: Redondos en pares: diplococos
E: Forma de espirales: espirilos
F: En forma de coma: vibrios
II. OBJETIVOS
Reconocer los distintos tipos de bacterias segn se tian o no con la Tincin Gram.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio:
Microscopio ptico - Alcohol acetona
Soluciones para la tincin: - Fucsina o safranina
- Violeta de genciana
- Aceite de inmersin
- Lugol
- Mechero de alcohol
Material de estudio:
- Yogurt
- Vinagre casero (NO comercial)
- Muestra de sarro dental extrada con mondadientes
IV. PROCEDIMIENTO
La tincin Gram se realizar sobre las muestras de yogur, sarro dentario y vinagre (no industrial) que los
alumnos traern.
Bacterias del yogurt
El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A escala industrial se
realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas:
el Streptococcus termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus,
muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas
distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas).
Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga
mucha prctica con el enfoque del microscopio.
18
PARTE PRACTICA
1.- completar el grafico
19
BACTERIAS DE YOGURT
Coloracin:_______
Aumento:________
Coloracin:_______
Aumento:________
Coloracin:_______
Aumento:________
FECHA
ACTITUDINAL
Coloracin:_______
Aumento:________
MATERIAL
PARTICIPACIN
20
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
I. FUNDAMENTO
En 1939, en base a observaciones realizadas por los cientficos alemanes Schleiden y Schwan,
se plasm la teora celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biolgicas. Esta teora
postula que los cuerpos de todos los animales y vegetales estn formados de clulas y que solo pueden
aparecer nuevas clulas por divisin de las clulas preexistentes. De ah que los organismos por muy
sencillos que sean estn constituidos por unidades vivas denominadas clulas.
La clula eucariota es ms compleja que la clula procariota y contiene, a diferencia de esta
ltima, ncleo celular. Los organismos ms simples (protozoarios) estn constituidos de una sola clula
eucariota mientras que los ms complejos o multicelulares estn formados por un gran nmero de clulas
eucariota que se hallan organizadas en tejidos, rganos y sistemas.
II. OBJETIVOS
Observar y caracterizar clulas eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla ).
Observar y caracterizar clulas eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre).
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
Microscopio ptico
Lugol
Mechero de Alcohol
Lanceta estril
Formol
Wright
Lminas portaobjeto y cubreobjeto
Cubeta de tincin
Frasco lavador
Alcohol absoluto
Hematoxilina
Eosina
Sudan III
Gotero
Material de estudio:
Catafilo de Cebolla
Hisopos
Tocino
Agua estancada de 15 das guardada en frasco oscuro con trocitos de lechuga
Levadura de pan
Gotas de sangre obtenidas por puncin con lanceta hematolgica en un dedo
Materiales de diseccin: tijera, pinza, estilete. Bistur u hoja de afeitar
IV. PROCEDIMIENTO
4.1. Observacin de clulas vegetales (Clulas epiteliales de Allium cepa)
Las clulas de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla, son de forma alargada y
bastante grande. La pared celular celulsica se destaca muy clara teida por el colorante. Los ncleos
son grandes y muy visibles. En el citoplasma se distinguen algunas vacuolas grandes dbilmente
coloreadas.
1 Separe una de las capas del bulbo de la cebolla. Con ayuda de una pinza desprenda la membrana
epidrmica que cubre la parte interna de la cebolla (catafilo) y extindala en el portaobjetos.
2 Utilizando una hoja de afeitar obtenga una porcin de medio centmetro cuadrado, cbrala con una
gota de lugol, coloque cuidadosamente el cubreobjeto y observe en el microscopio.
3 Reconozca las partes de la clula vegetal.
21
Coloque una gota de agua estancada sobre un porta objeto y cubran con una laminilla.
Observe con el objetivo de menor aumento.
Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
Observe la forma, tamao y movimiento de los organismos unicelulares (ver figura adjunta).
22
Con ayuda de una lanceta desechable, realice una puncin del pulpejo del dedo anular de la mano
izquierda, previa desinfeccin con algodn y alcohol.
Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto
Colocar el frotis extendido ya seco, sobre una base plana en posicin totalmente horizontal.
DESARROLLO
1.- Por qu los eritrocitos se tien con Eosina?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________
23
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
FECHA
ACTITUDINAL
MATERIAL
PARTICIPACIN
24
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
El volumen celular cambia cuando el agua penetra o sale de la clula por un proceso denominado
osmosis.
En trminos osmticos las soluciones o medios separados por una membrana se pueden clasificar
como hipertnicas, isotnicas e hipotnicas; se dice que un medio es hipertnico, cuando la concentracin
del soluto en la solucin es mayor en relacin con otro medio de solucin. Por ejemplo, si tenemos dos
soluciones, la solucin 1 con agua destilada y la solucin 2 con una solucin de azcar al 10%, se dice
que la solucin 2 de azcar es hipertnica en relacin a la solucin 1. Por el contrario, la solucin 1 es
hipotnica en relacin a la solucin 2 azucarada, es decir que la concentracin del soluto es menor en
relacin con el otro medio. Y una solucin isotnica, se cuando la concentracin de soluto es igual a la
concentracin de soluto de la otra solucin.
II. OBJETIVO.
2.1 Observar y describir los fenmenos de difusin y smosis y su importancia en el intercambio de
sustancias en la clula.
25
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio.
- Microscopio ptico
- Agua destilada
- Tubos de ensayo
- Algodn
- Gradillas
- Marcador de vidrio
- Solucin hipotnica NaCl 0.065 M
- Ligadura
- Solucin hipertnica NaCl al 2 %
- Alcohol corriente
- Solucin isotnica de NaCl al 0.9% (suero fisiolgico)
- Azul de metileno
- Tres Beaker y tres placas petri
Material de estudio:
- Tres huevos que han permanecido totalmente sumergidos por 5 das en vinagre
- Gotas de sangre obtenidas por puncin con lanceta hematolgica en un dedo
IV. PROCEDIMIENTO
Parte A
1 En tres tubos de ensayo numerados coloque:
-1 ml. de solucin hipotnica NaCl 0.01 %
-1 ml. de solucin isotnica de NaCl al 0.9% (suero fisiolgico)
-1 ml. de solucin de hipertnica NaCl al 2%.
2 Realizar una puncin con la lanceta hematolgica en un dedo previamente desinfectado con alcohol.
3 Dejar caer 1 a 2 gotas de sangre en cada uno de los tubos.
4 Agite los tubos y dejar en reposo durante 2 3 minutos.
5 Con un gotero coloque en una lmina portaobjeto una gota de cada uno de los tres tubos.
6 Luego examine en el microscopio su aspecto. Observar qu efecto ha tenido las distintas soluciones
sobre la morfologa del eritrocito y explicar por qu.
Parte B
1. Colocar los tres huevos en un vaso de precipitacin de 1 litro y verter el vinagre hasta cubrir
completamente los huevos. Debe realizarse este proceso 5 das antes de la prctica.
2. Al momento de la prctica lavar con mucho cuidado con agua de cao.
3. Frotar cuidadosamente con los dedos para sacar la cscara. Realizar este proceso hasta tener casi un
tercio del huevo libre de cscara.
4. Coloquen agua de cao en uno de los vasos de precipitacin de 100ml y ubiquen all uno de los
huevos. El agua debe cubrir al huevo.
5. En otro vaso de precipitacin colocar un huevo en la mezcla muy concentrada de sal en agua y colocar
all otro de los huevos.
6. Llenar el tercer vaso con agua destilada y poner all el tercer huevo.
7. en cada frasco se adicion unas gotas de azul de metileno
8. Dejar por una hora y observar membrana y el contenido interno del huevo.
NOTA: En todos los vasos de precipitacin, los huevos deben quedar sumergidos en el lquido.
26
DESARROLLO
1. Mencione y dibuje las diferencias encontradas en cada uno de los huevos sometidos a cada proceso.
TABLA: Observacin de resultados
Solucin de Sal
Agua de cao
Agua destilada
Esquema o
dibujo
Descripcin
Conclusin:
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
CONCLUSIONES:
FECHA
ACTITUDINAL
MATERIAL
PARTICIPACIN
27
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
II. OBJETIVOS
2.1. Explicar los movimientos citoplasmticos
III. MATERIALES
Encontraras en el laboratorio
- Microscopio compuesto
Material de estudio:
- Hoja de Elodea
IV. PROCEDIMIENTO
4.1. Movimientos Citoplasmticos: Ciclosis
1. Colocar una hoja de Elodea sobre una lamina portaobjetos
2. Agregar una gota de agua y colocar la laminilla
3. A menor y mayor aumento observar las clulas e identificar los cloroplastos
4. Con abundante luz observar el desplazamiento del citoplasma conjuntamente con los
Cloroplastos
Observaciones:
28
SEGUNDA PARTE:
CITOPLASMATICA
OBSERVACIN
DE
ORGANELAS
INCLUSIONES
I. FUNDAMENTO
Todas las funciones intracelulares (sntesis de protenas, replicacin de DNA y rutas metablicas
en general) son realizadas gracias una compleja organizacin de las organelas. Una clula eucariota
tpica contiene organelas membranosas (retculo endoplasmtico, aparato de golgi, peroxisomas,
mitocondrias, etc.) y organelas no membranosas (ribosomas, proteosomas, etc.). Todas ellas efectan
una funcin puntual en la clula que le permite su supervivencia y replicacin.
La supervivencia de la clula depende, entre otros factores, de la obtencin de energa neta.
Dicho proceso est a cargo de las mitocondrias y/o de los cloroplastos. Las mitocondrias se encuentran
en mayor nmero en clulas animales pero tambin pueden presentarse en clulas vegetales, mientras
que los cloroplastos son exclusivos de clulas vegetales y algunas bacterias fotosintticas. Las
mitocondrias oxidan molculas orgnicas utilizando oxgeno del aire como aceptor de electrones y forman
ATP. Los cloroplastos capturan energa de la luz y la transforman en ATP mediante el proceso
denominado fotosntesis.
II. OBJETIVOS
2.1Observar y diferenciar orgnulos de clulas vegetales: cromoplastos y cloroplastos. Reconocer y diferenciar mitocondrias.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio:
- Microscopio ptico
- Verde de Janus
- Agua destilada
- Lugol
- Gotero
Materiales de estudio:
- Pulpa de Tomate
- Hojas de Elodea
- Muestra de clulas epiteliales humanas tomadas con un hisopo
IV. PROCEDIMIENTO
4.1. Observacin de cromoplastos en clulas de pulpa de tomate
La pulpa del tomate nos muestra las clulas generalmente bastante sueltas unas de otras. En el
citoplasma se percibe una serie de grnulos rojizos-anaranjados que son los cromoplastos. El ncleo
puede llegar a observarse por su tpico aspecto y tamao. Es frecuente la presencia de grnulos de
almidn de forma arrionada. En las clulas menos alteradas por la compresin se ven grandes
vacuolas incoloras.
1 Cortar con el bistur un pequeo trozo de uno o dos milmetros de grosor, de la parte pulposa del
tomate.
2 Llevarlo sobre un portaobjeto, sin poner agua.
3 Poner el cubre-objeto y comprimir suavemente la preparacin.
4 Observar al microscopio
29
En un portaobjetos coloque una porcin pequea de hoja de Elodea y agregue una gota de agua.
Cubrir la muestra con una lmina portaobjetos.
Aprecie la forma de los cloroplastos y el movimiento de estos.
PARTE PRACTICA
1. Dibuje y coloree las distintas muestras observadas en la prctica. Mencionando el aumento total.
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Aumento:________
DESARROLLO:
Diferencie una organela de una inclusin citoplasmtica:
FECHA
ACTITUDINAL
MATERIAL
PARTICIPACIN
30
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales. La
funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una
molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo
descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el problema. La reaccin de la catalasa sobre el
H2O2, es la siguiente:
II. OBJETIVO.
2.1 Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
- Gradillas
- Pipetas-tubos de ensayo
Material de estudio
- Hgado de pollo
- Agua oxigenada
IV. MTODOS
1
2
3
4
FUNDAMENTO
Mediante esta experiencia vamos a ver la actividad de otra enzima, la amilasa o ptialina, presente
en la saliva. Esta enzima acta sobre el polisacrido almidn, hidrolizando el enlace O-glicosdico, por lo
que el almidn se terminar por transformar en unidades de glucosa. Es importante que recuerdes las
reacciones caractersticas de glcidos para comprender esta experiencia.
II.
OBJETIVOS. Comprobar que slo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan
ptimamente catalizando una reaccin enzimtica con su sustrato.
III.
MATERIALES
Encontrars en el laboratorio.
- tubos de ensayo
-gradillas
-solucin diluida de almidn y sacarosa
- Bao mara
- Vaso de precipitados
- Lugol
IV. MTODOS
1.
2.
3.
4.
Nota: Para ayudarte y formar ms saliva, piensa en un limn o en algo que te apetezca mucho comer...
As favoreces que se forme ms saliva.
DESARROLLO
1.-En qu parte de las clulas encontramos la enzima catalasa y cul es la funcin de dicha enzima?.
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
2.- Qu factores, adems de la temperatura, podran afectar la actividad de una enzima?.
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
3.- Cmo se clasifican las enzimas?.
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
32
ACTIVIDAD DE CATALASA
Anote sus observaciones y Relacione la actividad con la
concentracin de la enzima
________________________
________________________
________________________
ACTIVIDAD DE AMILASA
Anote sus observaciones y Defina control de reaccin y temperatura ptima
________________________
__________________________
__________________________
__________________________
__________________________
FECHA
ACTITUDINAL
MATERIAL
PARTICIPACIN
33
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
I. FUNDAMENTO
La respiracin celular es el proceso mediante el cual se oxidan molculas energticas (glucosa,
principalmente), empleando al oxgeno como aceptor final de electrones, y obteniendo gran cantidad de
energa para la realizacin de las funciones celulares bsicas.
La fermentacin, por el contrario, es un proceso anaerbio que implica la ruptura de alimentos por
un proceso de degradacin qumica que no requiere oxgeno. Los alimentos no son degradados
completamente hasta CO2 y H2O (como ocurre en la respiracin), sino hasta compuestos intermedios
tales como cido lctico (fermentacin lctica) o alcohol (fermentacin alcohlica). Esta ruptura
incompleta de los alimentos significa que menos energa es disponible durante la fermentacin que el
liberado durante la respiracin.
Ambos procesos pueden tomar lugar en las clulas a la vez. Adems, los primeros pasos en la
ruptura de la glucosa en la respiracin, son anaerbicos.
Anaerbica
Glucosa
cido lctico
Aerbica
Glucosa
CO2 + H2O
Ciertas bacterias y hongos derivan todo sino parte de su energa de la fermentacin y los
productos finales son frecuentemente el alcohol y CO 2, el proceso en este caso es denominado
fermentacin alcohlica. Las levaduras y bacterias, las cuales conducen a la fermentacin son capaces
de emplear sus sistemas enzimticos para liberar energa anaerbicamente a partir de carbohidratos,
particularmente almidn y azcar.
34
II. OBJETIVOS
2.1
2.2
2.3
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
-Tubos de ensayos
-Reactivo de Fehling A y B
- Gradillas
- Bao Maria
- Probetas -Algodn
-Tiras de medidas de pH -Dicromato de potasio
-Soluciones al 2% de fructosa, glucosa, almidn y sacarosa
-Acido sulfrico diluido
Material de estudio:
- Levadura
- Globos No. 5 para generar la aneerobiosis
IV. MTODOS
Fermentacin alcohlica
1. Preparar los tubos como lo indica la tabla:
REACTIVO
Agua Destilada
....
....
....
.....
Sol. de levadura
5mL
5mL
5mL
Solucin de Glucosa
5mL
5
....
6
....
5mL
5mL
Sol. Sacarosa
5mL
Sol. Almidn
5mL
Sol. Fructosa
5mL
Sol. Glucosa
5mL
2. La muestra con glucosa sola nos servir para realizar la reaccin de Fehling y comprobar que es
glucosa por su poder reductor.
3. Para colocar la levadura en el tubo, previamente se tiene que disolver la levadura
(Sacharomyces cerevisae) en un poco de agua.
4. Llenar los tubos cuidando que no queden burbujas de aire, para conseguir un ambiente de
anaerobiosis. Colocar un globo en la boca de los tubos para que el sistema quede cerrado
hermticamente.
5. Llevar todos los tubos a 37C por 30 min.
6. Anotar la formacin de CO 2 para cada tubo (La fermentacin se evidenciar por la presencia de
burbujas en el tubo y el globo hinchando, debido a la produccin de CO2.
7. Detectar la presencia de glucosa aplicando reactivo de Fehling A y B, llevando a Bao Maria por
8 minutos
8. Medir el pH del medio.
9. Opcionalmente, el profesor del grupo detectar cuidadosamente la presencia de etanol en las
muestras. Hay que tener mucho cuidado porque hay que manipular cido sulfrico y puede ser
peligroso el manejarlo. Se tomarn 2 ml. de la solucin del tubo hermticamente cerrado y la
ponemos en otro tubo de ensayo. Aadimos unos cristalitos de dicromato potsico y a
continuacin 2 ml. de acido sulfrico diluido. Al calentar al bao Mara debe formarse un
compuesto aromtico caracterstico, y se pone de manifiesto porque cambia de color de
amarillento a verdoso. Es una reaccin que nos indica que existe etanol.
10. Observar, comparar y discutir los resultados de los experimentos planteados.
35
DESARROLLO
1.- Complete el dibujo y la tabla.
CO2
glucosa
pH
etanol
Observaciones y/o Conclusiones:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
FECHA
ACTITUDINAL
MATERIAL
PARTICIPACIN
36
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
II. OBJETIVOS
Reconocer las distintas fases del ciclo celular en clulas somticas de raz de cebolla.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
- Placa Petri
- Pinza de madera
- Mechero de alcohol
- Etanol
- Orcena actica
- Microscopio
- Acido Actico
Material de estudio:
pices frescos de races de cebolla
37
IV. PROCEDIMIENTO
Con 8 das de anticipacin a la prctica preparar el cultivo de cebolla de la siguiente manera: En
un vaso con agua, de preferencia de borde oscuro, colocar una cebolla mediana de tal manera que haga
contacto la parte terminal de la cebolla con el agua y dejar en lugar semioscuro.
Preparacin de la Muestra
1
2
3
4
5
6
Interfase
Profase Temprana
Anafase Tarda
Profase Tarda
Telofase Temprana
Metafase
Telofase Tarda
38
Anafase Temprana
Citocinesis
DESARROLLO
1.- Dibuje las muestras observadas.
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
FECHA
ACTITUDINAL
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
MATERIAL
PARTICIPACIN
39
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
FECUNDACIN
I. FUNDAMENTO
La fecundacin es el proceso de unin del vulo y el espermatozoide, y en virtud de la cual se
origina el cigoto o clula huevo. La fecundacin en la especie humana es interna, pues se lleva a cabo
en el interior del aparato reproductor de la hembra, concretamente en las trompas de Falopio.
40
amarillo grisceo. En ambos casos se encuentran en las zonas interambulacrales (celoma) ubicado
en el interior del hemisferio superior. A travs de las glndulas genitales (5), las gnadas se
comunican al exterior mediante el poro genital, por donde son derramados los huevos. La
fecundacin es externa porque los gametos se encuentran fuera de la cavidad genital y el vulo se
fecunda externamente.
II. OBJETIVOS
- Identificar gametos masculinos y femeninos en erizo de mar.
- Evidenciar el proceso de la fecundacin.
III. MATERIALES
Encontrars en el laboratorio
- Microscopio
- Pipeta
Traer el alumno
- Cubreobjetos
- Materiales de diseccin: tijera, pinza,estilete.
- Placa Petri
- Bagueta
- Portaobjetos
- Goteros
Material de estudio:
- Erizos de mar VIVOS en baldes con tapa y con agua de mar
IV. PROCEDIMIENTO
4.1. Obtencin de vulos y Espermatozoides
1. Usando el material de diseccin, cortar las pas del erizo a nivel del ecuador todo el contorno radial e
introducir la punta de la tijera para perforar y cortar transversalmente el caparazn por la zona
cortical, obteniendo 2 mitades: el aboral y el ventral; en el aboral (lado superior) en las placas
interradiales (5) del celoma es donde se encuentra las gnadas en sus respectivas masas genitales
de color crema para los MACHOS y rojo vinoso para las HEMBRAS.
2. Luego echar las gnadas en un petri con agua de mar y con la ayuda de una bagueta se trozan los
ovarios para liberar los vulos. En otro cristalizador, se hacen exactamente lo mismo con los
testculos
41
4.2.
1. Colocar en un portaobjeto, una gota de la muestra con vulos y observar su forma y color
2. Colocar en un portaobjeto, una gota de la muestra con espermatozoides y observar su forma, tamao,
flagelo, etc.
3. Despus de observar esta preparacin coloque una gota del colorante cristal violeta sobre los
gametos masculinos y observe nuevamente
4. Observar a mayor aumento ambos gametos.
4.3 Fecundacin
1. De las muestras obtenidas, coloque en un portaobjeto una gota con vulos y otra con
espermatozoides y mezclar.
2. Observar a mayor y menor aumento
3. Observar con detenimiento los cambios que sufre el vulo una vez fecundado.
DESARROLLO
1. Dibuje y coloree las distintas muestras observadas en la prctica. Mencionando el aumento total.
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
Muestra:_________
Coloracin:_______
Muestra:_________
Coloracin:_______
Aumento:________
FECHA
ACTITUDINAL
Aumento:________
MATERIAL
PARTICIPACIN
42
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
I. FUNDAMENTO
El ADN es un polmero de desoxiribonucletidos, que en eucariotes es el componente de la
cromatina o material gentico. En la cromatina el ADN se encuentra asociado a protenas conocidas
como nucleoprotenas de tipo histonas, protaminas y en menor proporcin con protenas de tipo cidas.
Para extraer el ADN sin arrastrar sus protenas asociadas se podra emplear soluciones cidas. Sin
embargo, stas soluciones podran daar la estructura de la hebra, de modo que se prefiere emplear
solventes orgnicos como cloroformo, el cual extrae protenas dejando insoluble al ADN.
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son
atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la
clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un detergente, vacindose su contenido
molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene
ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor
proporcin.
Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms
pequeas y separadas de l por accin del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa
mezcla de tampn y detergente.
La secuencia general de extraccin es la siguiente:
1 Liberacin del ADN en forma soluble por medio de la destruccin de los sistemas membranosos de
los tejidos (membrana celular y nuclear).
2 Separacin de los complejos de nucleoprotena por denaturacin de la parte proteica.
3 Separacin del ADN de las otras macromolculas por solubilidad diferencial.
4 Precipitacin del ADN por insolubilidad en alcohol y bajas temperaturas.
II. OBJETIVOS
1 El objetivo fundamental de esta prctica es utilizar unas sencillas tcnicas para poder extraer el ADN
43
- Medio de homogenizacin:
- Lauril Sulfato de Sodio (SDS) 50 g
- Cloruro de Sodio 8. 770 g
- Citrato de Sodio 4.110 g
- EDTA 0.292 g
Material de estudio:
Choros frescos o Hgado fresco de pollo
IV. PROCEDIMIENTO
Para la extraccin DE ADN del manto de choro, con etanol, seguiremos los siguientes pasos.
4.1. Homogenizacin del Tejido
El mtodo para desintegrar el tejido debe estar adaptado a las caractersticas de ste. Para
grandes volmenes de tejidos blandos, suelen usarse licuadoras esencialmente iguales a las licuadoras
domsticas. Para volmenes menores, en general es suficiente un MORTERO y un piln.
Tejidos ms resistentes, como por ejemplo hueso o diente, necesitan tratamientos mecnicos
especiales. Aquellos tejidos con clulas cuya pared celular es resistente, como por ejemplo vegetales,
hongos o bacterias, requieren tambin condiciones drsticas. Uno de los mtodos ms utilizados
consiste en congelar la muestra en nitrgeno lquido y, mantenindola congelada, pulverizarla con un
mortero. As, adems de desintegrar la muestra, se logra que sta se mantenga a muy baja temperatura
durante el tratamiento, con lo cual se evita la accin de enzimas endgenas que pudieran degradar el
material de inters.
En esta prctica se emplear un mtodo de ruptura con mortero (sin congelamiento). La principal
ventaja de este mtodo es que se adapta bastante bien a tejidos muy diversos. Asimismo, dado que se
opera a temperatura ambiente, las ribonucleasas celulares pueden degradar parcialmente las molculas
de ARN. Para ayudar a la solubilizacin de los componentes celulares, a la ruptura de membranas y de
complejos proticos, la solucin de lisis contendr un detergente inico (dodecilsulfato de sodio, SDS).
Este detergente dispersa los componentes de las membranas y desnaturaliza las protenas.
La solucin de lisis contiene adems el agente quelante de cationes divalentes, EDTA. Esto
impide la accin de las ADNasas (dependientes de Mg 2+ ), aunque no tiene efectos sobre la mayor parte
de las ribonucleasas.
Seguir los siguientes pasos:
1 Las clulas se homogenizarn en un mortero empleando el medio de homogenizacin. ES
OBLIGATORIO el uso de guantes en todo momento para evitar la contaminacin de la muestra con
DNAasa proveniente del sudor de las manos que pueda degradar nuestras muestras de ADN.
2 Se lisarn las clulas agregando 10 ml de la solucin de homogenizacin por cada gramo de tejido
con que se inici el proceso. Los componentes como el SDS, permitir por una parte la separacin de
las protenas asociadas a la cromatina y por otra parte la ruptura de membranas. El NaCl produce el
44
estallido de los ncleos para liberar as las fibras de cromatina. El EDTA es un agente quelante que
inactiva a las DNAasas.
3 Incubar la mezcla en un Bao Mara a 60C por 15 minutos exactos. El calor ablandar el tejido
permitiendo que los componentes de la solucin homogenizadora ingrese a la clula. Adems, esta
temperatura denatura muchas enzimas que interfieren con el procedimiento.
4 Filtrar el homogenizado empleando la gasa esteril
5 Enfriar rpidamente la preparacin filtrada en una cubeta con hielo, por 10 minutos a fin de detener
cualquier proceso degradativo del ADN.
4.2. Precipitacin del ADN
La precipitacin de los cidos nucleicos permite su purificacin y concentracin. Se basa en la
simultnea neutralizacin de las cargas negativas y deshidratacin de la molcula, lo cual posibilita su
agregacin y precipitacin.
La precipitacin es un fenmeno reversible (mediante la resuspensin en soluciones acuosas) y
no debe ser confundido ni con la desnaturalizacin (potencialmente reversible) ni con la degradacin
(irreversible) de los mismos.
Efectuar los siguientes pasos:
1 Lentamente, agregar etanol helado por el borde interno del recipiente hasta que comience a aparecer
una consistencia blanca que significa que el ADN ha precipitado.
2 Suavemente, a medida que se agrega el etanol helado, girar enrollando a la vez con una bagueta de
vidrio.
3 Reconoce 3 fases en tu solucin: la del alcohol (que flota en agua), la de tu tejido triturado (abajo del
todo) y la interfase entre los 2 que contiene ADN precipitado.
4 Poco a poco haciendo estos movimientos en una sola direccin, se lograr apreciar el ADN en la
bagueta, asemejando una madeja de un hilo sumamente fino o como copos de algodn.
Nota importante. El producto filamentoso obtenido de esta extraccin no es ADN puro ya que,
entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin especifica se realiza aadiendo enzimas
que fragmentan las molculas de ARN (protocolos de PURIFICACIN de ADN).
%, y esta concentracin depende de los tamaos de los cidos nucleicos a separar. Aunque los geles de
agarosa carecen de fuerza mecnica (especialmente los ms diluidos), la manipulacin se facilita por el
uso de geles horizontales, los cuales pueden ser soportados por lmina de vidrio o de plstico
El gel resultante es fotografiado en un aparato llamado transiluminador, presencia de bromuro de
etidio, para poner en evidencia los fragmentos de ADN en el gel. En la presente prctica analizaremos la
fotografa de un gel de agarosa y observaremos las distintas bandas de ADN que en l aparecen,
discutiendo la razn por las que unas aparecen ms arriba que otras. Realizaremos un anlisis como el
que se hace en ensayos de diagnstico molecular y de clonacin.
II. OBJETIVOS
-Comprobar la movilidad del ADN en un gel de agarosa
-Analizar la utilidad de esta tcnica en ensayos de biologa molecular aplicada
DESARROLLO
1.- Dibuje sus resultados
46
En el gel aparecen 3 carriles o calles, cada uno con una muestra distinta (M, 1 y 2). Los pocillos son
hechos en el gel para introducir ah la muestra de ADN.
1 qu hay en el primer carril?
____________________________________________________________________________________
2 en la muestra 1, qu tamao aproximado tienen las bandas de ADN?
_______________________________________________________________________________
3 por qu aparece RNA en algunas nuestras y por qu aparece tan abajo, comparado al ADN?
_______________________________________________________________________________
4 qu significado tiene que algunas bandas sean ms gruesas que otras?
_______________________________________________________________________________
5 qu hubiera esperado encontrar si corra un gel con su ADN recin extrado? Dibujelo.
______________________________________________________
______________________________________________________
______________________________________________________
______________________________________________________
FECHA
ACTITUDINAL
MATERIAL
PARTICIPACIN
47
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
I. FUNDAMENTO
El proceso de traduccin, es decir, sntesis de novo de protenas, ocurre en el citoplasma y en el
retculo endoplasmatico realizada por los ribosomas (en humanos). La sntesis de una protena requiere
que previamente el ARNm de ese gen haya sido transcrito en el ncleo y exportado al citoplasma. Aqu
el ARNm, que contiene la informacin gentica necesaria para codificar la protena, se asociar a los
ribosomas del RER y con la intervencin de una compleja maquinaria proteica as como de los ARNt
especficos para cada aminocido, se llevar a cabo la traduccin.
El ARNm porta los codones, tripletes de nucletidos, que codifican para un aminocido. Mientras
que los ARNt portan los anticodones, que le indican qu aminocido van a portar y llevar hasta el
complejo ARNm-ribosomas-enzimas. El cdigo gentico es la combinacin de tripletes que tienen la
informacin necesaria para codificar un aminocido. Existen 64 codones en el cdigo gentico, que
codifican para los 20 aminocidos que forman las protenas y que adems contiene 1 codn de inicio de
la traduccin y 3 codones de finalizacin de la misma.
En esta prctica analizaremos la degeneracin del cdigo gentico, discutiremos por qu no es
realmente universal y realizaremos la traduccin de algunos genes en sus respectivas secuencias de
aminocidos.
II. OBJETIVOS
- Reconocer los codones y anticodones posibles para los aminocidos que forman las protenas.
- Analizar posibles mutaciones en los codones que alteren la secuencia de una protena y con ello su
funcin.
48
III. MATERIALES
- Lmina de la tabla del Cdigo Gentico
- Lmina de la tabla de las alteraciones del Cdigo Gentico en mitocondrias y otros organismos.
49
IV. MTODOS
4.1. Antes de solucionar los problemas planteados, determine:
a. nmero de codones de inicio ____________________________
b. nmero de codones de finalizacin _______________________
c. aminocidos codificados por 1 slo codn __________________
d. aminocidos codificados por 2 codones ____________________
e. aminocidos codificados por ms de 3 codones ____________________________
f. qu cambios se han producido en el cdigo gentico de mitocondrias en humanos?
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
g. Lista de aminocidos esenciales y no esenciales
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
4.3. Los siguientes problemas debern ser solucionados en clase con ayuda del profesor:
Primer problema: Transcripcin y traduccin
Se tiene la siguiente secuencia de ADN (cadena codante) que es parte del gen de
transferrina.
5 ATGGCATCCTACGATCAGTATCCTATACGC 3 (EL GEN CONTINA)
Determine:
1. la secuencia no codante del respectivo trozo del gen
___________________________________________________________________________________
2. la secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen
___________________________________________________________________________________
50
3. Utilizando la tabla del cdigo gentico, deduzca la secuencia de aminocidos que codificar dicha
cadena (considerando que se incub el ADN en un extracto crudo de clulas de reticulocitos de
conejo que contena los respectivo ARNt, enzimas, ATP, GTP, etc.)
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
Segundo problema. Mutaciones en la secuencia de nucletidos
La secuencia de ADN del gen de transferrina, del problema 1, ha sufrido mutaciones por el efecto
de radiaciones UV. Se secuenci el gen mutado y la secuencia obtenida fue la siguiente:
5 ATGGCATCGTACGAACAGTAGCCTATACGC 3 ..(EL GEN CONTINA)
Determine:
1. la secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen
____________________________________________________________________________________
2. la secuencia de aminocidos que, tras esas mutaciones, se codifica
____________________________________________________________________________________
3. qu mutaciones han sido conservativas y cuales no.
____________________________________________________________________________________
Tercer problema. Traduccin en mitocondrias
Se cuenta con parte de la secuencia del gen de la protena de Fe-S, que participa en la cadena
transportadora de electrones en la mitocondria, y que es codificada dentro de la misma. La secuencia es
de la cadena de ADN codante:
. 5 CCGTGAGAACTCGAAGCTCCGGACATAGCT 3
Determine:
1. la secuencia de aminocidos codificada en la mitocondria, a partir de dicha cadena nucleotdica
__________________________________________________________________
2. cul seran los aminocidos cambiados si dicho gen se codificara en el citoplasma?
__________________________________________________________________
51
I. FUNDAMENTO
Las caractersticas de un organismo son el resultado de la herencia y de la interaccin de los
genes. Los principios de la gentica establecidos por Mendel y Morgan y otros investigadores se aplican
a todos los organismos vivientes, incluido el hombre.
De la misma manera que en otros, algunos rasgos humanos son determinados por genes
dominantes y otros por genes recesivos. Lo rasgos dominantes generalmente se encuentran con mayor
frecuencia que los que se deben a genes recesivos. En la transmisin de la mayora de los caracteres
hereditarios, estn involucrados varios genes, pero a menudo la variacin de un solo gen, produce la
variacin de una sola caracterstica lo que da lugar a dos formas distintas de expresin.
Algunos genes (y su manifestacin) estn ligados al sexo, es decir que la caracterstica respectiva
slo se expresa en uno de los sexos. Frecuentemente el masculino (hemofilia por ejemplo). En este caso
el gen en cuestin se encuentra localizado en el cromosoma X (el cromosoma Y se considera
genticamente vaco). En otros casos la manifestacin genotpica es influenciada por el otro sexo (p.e.
calvicie, es dominante en el varn y recesivo en la mujer).
En este caso los genes respectivos estn localizados en un cromosoma autosmico, pero su
expresin esta condicionada a la accin secundaria de genes ubicados en el cromosoma X.
II. OBJETIVOS
1. Determinar el fenotipo (expresin de las caractersticas) y su probable genotipo (Informacin gentica
en el cromosoma respectivo) tanto como sea posible.
2. Estimar la distribucin de los genes dominantes y recesivos para cada rasgo gentico observado en el
grupo.
III. MATERIAL
Debers traer de casa.
-Espejo
-Lupa
IV. PROCEDIMIENTO
1. Con la ayuda de un espejo o de un compaero determine un fenotipo para cada uno de los rasgos
genticos descritos a continuacin. Haga sus anotaciones en su cuaderno de trabajo.
2. Cuando se trata de una caracterstica dominante, no es posible determinar con certeza el genotipo,
pues pueden estar presentes dos genes dominantes para esta caracterstica (homocigosis) o un gen
dominante y uno recesivo (heterocigosis). En consecuencia utilizaremos un guin (-) para representar
el alelo desconocido. En cuanto al carcter recesivo, no hay dificultad en establecer el genotipo, los
dos genes alelomrficos son recesivos. Anote su genotipo en la hoja de trabajo.
52
3. Tabule en la hoja de trabajo el nmero de alumnos con cada rasgo gentico estudiado DONDE SE
INCLUYA: rasgo estudiado, genes involucrados, dominancia o recesin, estado del gen expresado
(homocigoto o heterocigoto), etc.
53
es dominante sobre ligamentos firmes. Esta circunstancia permite retirar el dedo pulgar hacia atrs
sacndolo de su articulacin. Ensaye la posibilidad de desarticular el pulgar de cualquiera de sus
manos SIN ayuda de la otra mano e identifique su genotipo respectivo as: JJ o Jj = pulgar
desarticulable jj = pulgar no desarticulable.
10. Color del cabello: el color del cabello es determinado por la interaccin de un gran nmero de
factores; sin embargo, si consideramos solo las mayores categoras de color capilar, estas pueden
explicarse por la interaccin de dos pares de genes (herencia dihibrida): (D_) pigmento pardo
presente, (dd) pigmento pardo ausente, (rr) pigmento rojo presente. De acuerdo con la ley de la
distribucin independiente, un individuo cualquiera puede tener alguna de las siguientes
combinaciones de genes y color:
DDRR, DDRr, DdRR : cabello oscuro (negro)
DdRr, Ddrr, DDrr : cabello castao u oscuro con tintes rojizos
ddRr : cabello rubio
Dr. : cabello claro (color arena)
Fenotipos
Varn
VV
Vv
vv
Mujer
Bajo
Bartono
Tenor
Contraalto
Meso soprano
Soprano
13. Calvicie: esta es otra caracterstica influenciada por el sexo y es controlada tambin por un par de
alelos. Aunque esta caracterstica no suele manifestarse antes de los 30 aos, sus posibilidades
personales de calvicie pueden presumirse por la presencia o ausencia de esta caracterstica entre los
miembros mayores de su familia tanto por la lnea materna o paterna. Establezca su probable
genotipo guindose por el siguiente cuadro:
Genotipos
HH
Hh
hh
Fenotipos
Varn
Mujer
calvo
calvo
normal
calva
normal
normal
54
LIGADOS AL SEXO
14. Ceguera para el color (daltonismo): tipo ms comn de daltonismo es heredado como carcter
recesivo ligado al sexo. Puesto que el gen es portado solamente por el cromosoma X es necesario
indicar el cromosoma al especificar el genotipo. Son posible genotipos y fenotipos:
Fenotipos
Normal
Genotipos
Mujer
X NX n
Daltnico
XnXn
DESARROLLO
NOMBRE:______________________________
GRUPO:___________ MESA:___________ FECHA:_________
PROFESOR:_____________________________
55
Varn
X NY
XnY