CONTAMINACIN MICROBIANA EN EL CULTIVO IN VITRO DE PLANTAS.
1. Qu problemas puede traer la contaminacin microbiana en los trabajos de cultivo de tejidos vegetales? Qu problemas principales causa a los tejidos en desarrollo? En los cultivos vegetales ocasiona prdidas frecuentes de material vegetal, en las zonas tropicales alcanza proporciones dado que el clima y ambiente son propicios para el desarrollo y multiplicacin de microrganismos. En los tejidos de desarrollo compiten los microrganismos por nutrientes del medio, daos directos o indirectos por la colonizacin de sus tejidos o la expulsin al medio de cultivo de metabolitos txicos. Reduciendo la multiplicacin, inhibe el enraizamiento y muerte de la planta (cassells, 19911993). 2. Realice un cuadro comparativo entre microorganismo fitopatgeno y un vitropatgeno. fitopatgeno Son bacterias
vitropatgeno Hongos filamentosos
3. Qu se entiende por contaminacin endgena o latente? Cules son los
grupos y gneros de microorganismos ms asociados a este tipo de contaminacin? Cul es la fuente de este tipo de contaminacin? Cmo se controla en los trabajos de cultivo "in vitro"? Contaminacin endgena es aquella en la que bacterias patgenas o no, organismos fastidiosos, en la que los contaminantes fungosos no deben encontrarse latentes en cultivos in vitro. Los gneros asociados a esta contaminacin se encuentran: Micrococos, Bacillus, Staphylococcus, Mycobacterium, Psuedomonas, Enterobacter, Acinotobacter, Xanthomonas, Lactobacillus, Erwinia, Agrobacterium, Corynebacterium. Especies Enterobacter aggomerans. (george, leifert, & richard, 1988, 1994, 1995, 1996) La fuente de esta contaminacin proviene de la zona basal y apical, amplia distribucin en la naturaleza y algunas son patgenas del hombre y animales Se controla con la aplicacin de mtodo turbidimetro, este es unas tcnicas pticas tradicionales de medicin, con uso de detectores de luz que vara de acuerdo con la configuracin del diseo en el instrumento. (MJ., 1996)
4. Cul es la contaminacin exgena? Cules son las diversas fuentes de
contaminantes exgenos? Relacione los tipos y gneros de microorganismos con la fuente de contaminacin probable y con la forma y momento en que aparecen. Explique cmo se controlan cada uno de los casos. Contaminacin exgena es la que se introduce al laboratorio, fuentes de los microorganismos que se encuentran en el ambiente, saprofitos o patgenos de las plantas, microbiota del cuerpo humano, instrumentos de trabajo. Encontrndose hongos filamentosos, gneros como Aspergillus, Cladosporium, Penicillum, Fusarium, Alternaria y Neurospora. (enjalric y col, 1988, 1994, 1997) Estas crecen superficialmente en el medio de cultivo de planta, alrededor explante y dentro del medio, crecimiento sobre el tejido cuando esta necrosado. Toman forma de pliegues, halos o rosetas. Se controla en el caso de las bacterias con altas presiones osmticas, el PH, hormonas como citoquininas que ejerce efecto bacteriosttico sobre ellas. (tersi & col, 1988) 5. Qu importancia considera usted tiene detectar a tiempo un contaminante en un proceso de propagacin masiva? Como puede ser detectado en etapas tempranas del cultivo "in vitro"? Cul es la importancia de poder identificar al menos el gnero del contaminante? Es de gran relevancia detectar ya que nos permite trazar estrategias adecuadas para el control de la contaminacin. Detectndose al aplicar el mtodo de transferencia de fragmentos de material vegetal a medios de cultivo bacteriolgicos que permite crecimiento de bacterias. Al igual el uso de fragmentos de tejidos de savia o extractos de planta dado que taninos inhiben el crecimiento de bacterias contaminantes. La identificacin del gnero contaminante nos ayuda a determinar el modo en que actan, el mtodo para la deteccin y control. (cassell, 1991) 6. Una vez que el material vegetal "in vitro" se encuentra contaminado, que acciones se deben tomar? Cmo puede usted tratar el material vegetal contaminado y que se requiera obligatoriamente "salvar" de la contaminacin? Al contaminarse el material in vitro se emplean mtodos tradicionales auxiliados segn el grupo microbiano, caso de las bacterias las claves taxonmicas, sistemas automatizados, kit de diagnstico. En el caso de microorganismos especficos se emplean anlisis de acidos grasos, PCE, RFLP, AFLP. Es indispensable al tratar el material contaminado estudiar las caractersticas de la microbiota bajo condiciones especficas del pas, biofabrica o laboratorio para disear mtodos de deteccin y control en funcin.
7. Disee un esquema o diagrama de flujo con los pasos bsicos que se deben tener en cuenta para prevenir la aparicin de contaminantes en un laboratorio de micropropagacin de bananos.
8. Todos los microorganismos que pueden desarrollarse en un frasco de cultivo
"in vitro" de tejidos vegetales se consideran contaminantes? Explique su respuesta. Son contaminantes estos microorganismos, pero estos microorganismos al reducir su expresin en los medios de cultivos junto con el conocimiento e identificacin pueden mejorar el enraizamiento. Las bacterias del gnero Pseudomonas al usarc en vitroplantas de papa logran estimular crecimiento de la planta y proteccin hacia otras contaminantes. Algunos plsmidos de bacterias se pueden insertar en genes de plantas (alvarado, 1997) 9. Si en un lote de vitroplantas en fase de multiplicacin, usted encuentra gran cantidad de frascos de cultivo contaminados por Staphylococcus sp. a) A qu atribuira usted la contaminacin? b) Cmo comprobara su suposicin? c) Qu plan de accin desarrollara para disminuir esta contaminacin? Explquelo.