UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

PROFESOR:
HERRERA SANCHEZ, Sonia
INTEGRANTES:

ARONI LOZADA, Katherine

NUEZ CASIO, Carlos
REYES MANRIQUE, Cynthia
SABID MORALES, Yesenia
TINEO CHAN, Brenda

I.

OBJETIVOS

Clasificar lo grupos bacterianos en gram positiva y gram

negativa gracias a la tincin de la gram.
Familiarizarnos con la tcnica de tincin de la gram.

II.

MARCO TERICO

Bacteria Gram Positiva

En microbiologa, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas
bacterias que se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram: de
aqu el nombre de "Gram-positivas" o tambin "gram positivas". Esta
caracterstica Qumica est ntimamente ligada a la estructura de
la envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organizacin
bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, y cuando se
tratan como taxn se utiliza tambin el nombre de Posibacteria. Las
restantes son las bacterias Gram negativas.
La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la
membrana citoplasmtica y una pared celular compuesta por una gruesa
capa de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la
membrana citoplasmtica mediante molculas de cido lipoteicoico. La
capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es
la responsable de retener el tinte durante la tincin de Gram. A diferencia
de las Gram-positivas, las Gram-negativas presentan una segunda
membrana lipdica externa a la pared celular.
Incluyen especies tanto mviles (va flagelos) como inmviles con forma de
bacilo (Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco
(Staphylococcus, Streptococcus); con gruesas paredes celulares o sin ellas
(Mycoplasma). Algunas especies sonfotosintticas, pero la mayora son
hetertrofas. Muchas de estas bacterias forman endosporas en condiciones
desfavorables. Realmente, no todas las bacterias del grupo son Grampositivas (no se tien por la aplicacin de ese mtodo), pero se incluyen
aqu por su similitud molecular con otras bacterias Gram-positivas.

Comparacin de las envolturas

celulares
bacterianas. Arriba: Bacteria
Gram-positiva. 1-membrana
citoplasmtica,
2peptidoglicano, 3-fosfolpidos,
4-protenas,
5-cido
lipoteicoico. Abajo:Bacteria
Gram-negativa.-membrana
citoplasmtica (membrana
interna),
2-espacio
periplasmtico,
3-membrana
externa,
4-fosfolpidos,
5peptidoglicano, 6-lipoprotena,

7-protenas,
8lipopolisacridos, 9-porinas.

Estructura:
La clula bacteriana est rodeada por una envoltura que, observada al microscopio
electrnico, se presenta como una capa gruesa y homognea, denominada pared celular.
Luego en seccin (corte) se observa una estructura semejante a dos lneas paralelas
separando una capa menos densa; esto corresponde a la membrana plasmtica. Entre
la membrana plasmtica y la pared celular se encuentra el periplasma o espacio
periplasmtico. En el interior de la membrana plasmtica se encuentra el citoplasma que
est constituido por una disolucin acuosa, el citosol, en el cual se
encuentran ribosomas y otros agregados de macromolculas, y en el centro se ubica la
zona menos densa llamada nucleoide, que contiene una madeja de hebras difcil de
resolver (distinguir) y cuyo principal componente es el ADN.
La pared externa de la envoltura celular de una bacteria Gram positiva tiene como base
qumica fundamental el peptidoglicano, que es un polmero de N-acetil-2-Dglucosamina, unido en orientacin -1,4 con N-acetil murmico, a ste se agregan por el
grupo lactilo cuatro o ms aminocidos. Esta molcula se polimeriza gran cantidad de
veces, de modo que se forma una malla especial, llamada sculo de murena. Dicho
compuesto es de vital importancia para conservar la forma del chimbo y darle rigidez a
la clula bacteriana (si este compuesto no existiese, la clula reventara debido a su
gran potencial osmtico).
Las siguientes caractersticas estn presentes generalmente en una bacteria Grampositiva:

Membrana citoplasmtica.
Capa gruesa de peptidoglicano.
cidos teicoicos y lipoteicoicos, que sirven como agentes quelantes y en ciertos
tipos de adherencia.
Polisacridos de la cpsula.
Si algn flagelo est presente, este contiene dos anillos como soporte en
oposicin a los cuatro que existen en bacterias Gram-negativas porque las
bacterias Gram-positivas tienen solamente una capa membranal.

Tanto las bacterias Gram-positivas como las Gram-negativas pueden presentar una capa
superficial cristalina denominada capa S. En las bacterias Gram-negativas, la capa S
est unida directamente a la membrana externa. En las bacterias Gram-positivas, la capa
S est unida a la capa de pptidoglicano. Es nica a las bacterias Gram-positivas la
presencia de cidos teicoicos en la pared celular. Algunos cidos teicoicos particulares,
los cidos lipoteicoicos, tienen un componente lipdico y pueden asistir en el anclaje del
pptidoglicano, en tanto el componente lipdico sea integrado en la membrana

Bacterias
Gram-positivasBacillus
anthracis (bastones prpuras) en una
muestra de fluido cerebroespinal.
Las otras clulas son leucocitos.

Filogenias de las bacterias gram positivas

Se reconoce dos filos principales de bacterias Gram-positivas. Uno de ellos es
Firmicutes, que incluye muchos gneros bien conocidos tales como Bacillus,Listeria,
Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, y Clostridium. Este filo se ha expandido
con la introduccin de los Mollicutes, bacterias similares a Mycoplasma que pierden las
paredes celulares y no pueden ser teidas por el mtodo de Gram, pero son derivadas de
tales formas. El otro filo es Actinobacteria, que incluye algunas de las bacterias ms
tpicas de vida terrestre, desempeando un importante papel en la descomposicin de
materia orgnica. stas y los Firmicutes son referidos, respectivamente, como grupos de
G+C alto y bajo, basndose en el contenido de guanosina y la citosina en su ADN. Las
bacteriasDeinococcus-Thermus tambin presentan bandas Gram-positivas, sin embargo
se clasifican con las bacterias Gram-negativas, pues son similares estructuralmente a
estas.
No est claro si las bacterias Gram positivas derivan de las Gram negativas o viceversa.
Si la segunda membrana (la membrana externa) es una condicin derivada, los filos
Firmicutes y Actinobacteria podran ser basales entre las bacterias; de lo contrario seran
probablemente grupos monofilticos recientes. Cavalier-Smith considera que son filos
recientes y adems los considera como posibles ancestros de las arqueas y eucariontes,
debido a que estos grupos carecen de la segunda membrana y a varias similitudes
bioqumicas tales como la presencia de esteroles.

rbol filogentico de los seres vivos considerando que lasbacterias Gram-positivas

(Posibacteria) se han originado a partir de las Gram-negativas (Negibacteria), de
acuerdo con las ideas deCavalier-Smith.

Baterias Gram Negativa

En microbiologa, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que NO
se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram, y lo hacen de un color rosado
tenue: de ah el nombre de "Gram-negativas" o tambin "gramnegativas". Esta
caracterstica est ntimamente ligada a la estructura didrmica dada por la envoltura
celular, pues presenta doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmtica), lo
que refleja un tipo natural de organizacin bacteriana. Son uno de los principales super
grupos de bacterias y cuando se tratan como taxn se utiliza tambin el nombre
de Negibacteria o Didermata. Las restantes son las bacterias Gram positivas.
Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipdicas entre las que se
localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Grampositivas presentan slo una membrana lipdica y la pared de peptidoglicano es mucho
ms gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tincin de Gram.
Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. Los cocos Gramnegativos causan la gonorrea, (Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria
meningitidis) y sntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. Los bacilos
Gram-negativos incluyen un gran nmero de especies. Algunos de ellos causan
principalmente enfermedades respiratorias (Haemophilus influenzae, Klebsiella
pneumoniae, Legionella pneumophila,Pseudomonas aeruginosa), enfermedades
urinarias (Escherichia coli,Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens)
y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis,
Salmonella typhi). Otros estn asociadas a infecciones nosocomiales (Acinetobacter
baumanii).
Comparacin
de
las
envolturas
celulares bacterianas. Arriba: Bacteria
Gram-positiva.
1-membrana
citoplasmtica, 2-peptidoglicano, 3fosfolpidos,
4-protenas,
5-cido
lipoteicoico. Abajo: Bacteria Gramnegativa.
1-membrana
citoplasmtica (membrana interna), 2espacio periplasmtico, 3-membrana
externa,
4-fosfolpidos,
5peptidoglicano,
6-lipoprotena,
7-

protenas,
porinas.

8-lipopolisacridos,

9-

Estructura
La envoltura celular de las bacterias Gram-negativas est compuesta por una membrana
citoplasmtica (membrana interna), una pared celular delgada de peptidoglicano, que
rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la pared celular de estas
bacterias.4 Entre la membrana citoplasmtica interna y la membrana externa se localiza
el espacio periplsmico relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual
contiene enzimas importantes para la nutricin en estas bacterias. Retienen la safranina.
La membrana externa contiene diversas protenas, siendo una de ellas las porinas o
canales protecos que permiten el paso de ciertas sustancias. Tambin presenta unas
estructuras llamadas lipopolisacridos (LPS), formadas por tres regiones: el polisacrido
O (antgeno O), una estructura polisacrida central (KDO) y el lpido A (endotoxina).
Las bacterias Gram-negativas pueden presentar una capa S que se apoya directamente
sobre la membrana externa, en lugar de sobre la pared de peptidoglicano como sucede
en las Gram-positivas. Si presentan flagelos, estos tienen cuatro anillos de apoyo en
lugar de los dos de las bacterias Gram-positivas porque tienen dos membranas. No
presentan cidos teicoicos ni cidos lipoteicoicos, tpicos de las bacterias Grampositivas. Las lipoprotenas se unen al ncleo de polisacridos, mientras que en las
bacterias Gram-positivas estos no presentan lipoprotenas. La mayora no forma
endosporas (Coxiella burnetti, que produce estructuras similares a las endosporas, es
una notable excepcin).

Imagen microscpica de una

bacteria
Gram
Negativa[[Pseudopulmonale
s aeruginosa]] (los puntos
rosas-rojos).

Filogenias de las bacterias Gram negativas

Dentro del grupo de las bacterias Gram-negativas podemos distinguir dos subgrupos:
Eobacteria y Glycobacteria que se distinguen por la composicin de la membrana
externa. En los primeros, la membrana externa presenta solo simples fosfolpidos,
mientras que en los segundos adems presenta la insercin de molculas complejas de
lipopolisacridos (la estructura tpica descrita anteriormente). Por ello se considera que
Eobacteria son las bacterias ms primitivas. Incluye a Chlorobi (bacterias fotosintticas
anoxignicas) y a Deinococcus-Thermus(quimiorganotrofos extremfilos); estos
ltimos, aunque dan positivo en la tincin de Gram son estructuralmente similares a las
bacterias Gram-negativas.
El resto de las bacterias Gram-negativas se clasifican en Glycobacteria. Las
proteobacterias son uno de los grupos principales, incluyendo a Escherichia
coli,Salmonella y otras enterobacterias, Pseudomonas,Moraxella, Helicobacter,
Stenotrophomonas,Bdellovibrio, bacterias del cido actico, Legionella y las
proteobacterias alfa como Wolbachia y muchas otras. Otros grupos notables son las
cianobacterias, espiroquetas y las bacterias verdes del azufre y no del azufre.
No est claro que la segunda membrana sea una caracterstica primitiva o derivada. Si
fuese primitiva, las bacterias Gram-negativas seran las primeras bacterias en originarse
con las Gram-positivas derivndose a partir de ellas. Cavalier-Smith considera que la
doble membrana es una caracterstica primitiva y que la segunda membrana se perdi al
crecer la pared de peptidoglicano que impide la transferencia de lpidos para formar la
membrana externa. La hiptesis del citoplasma fuera describe un posible modelo para la
aparicin de la doble membrana de las bacterias Gram negativas.

rbol filogentico de
los
seres
vivos
considerando que las
bacterias
Grampositivas (Posibacteria)
se han originado a
partir de las Gramnegativas (Negibacteri
a), de acuerdo con las

ideas
Smith.

III.

de Cavalier-

MATERIALES Y REACTIVOS

Asas de cultivo

Cristal violeta

Mechero de Bunsen

Lugol

Porta objetos

Cultivo de bacterias

Procedimiento experimental:
Haremos una identificacin por coloracin

Lavar el haz de siembra

Lavar las placas y secar con el mechero
En un portaobjetos se coloca una gota de agua destilada a la que con el asa de
siembra, previamente esterilizada a la llama, se lleva una pequea cantidad de
suspensin de bacteria
Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el porta y se fija la extensin
por el calor, calentando suavemente a la llama del mechero hasta que se seque
con cuidado ya que la muestra se puede quemar y no podramos identificar si es
Gram positiva o Gram negativa

Coloracin:
a) 1 minuto en violeta de Genciana (colorante inicial)

b) se lava con agua destilada

c) 1 minuto en lugol (mordiente)

d) se decolora con acetona alcohol (decolorante)

f) 1 minuto en safranina (colorante de contraste)

g) se lava con agua destilada
h) se seca a temperatura ambiente

Observaciones
Finalmente una muestra se torn rojo y la otra azul, as pudimos determinar cul era
gram positiva y gram negativa, ya que la gram positiva es azul y la gram negativa rojo.

IV.

V.

CONCLUSIONES

Se pudo hallar y visualizar la presencia de bacterias gram positiva y gram

negativa.

Cuando se procede al lavado se debe tener cuidado, pues al sellar

ocasiona que la muestra no se pegue al portaobjetos.

La diferencia de coloracin de las dos bacterias se debera por la pared

celular siendo en las bacterias gram positivas azul mientras que en las
gram negativas rojas.

RECOMENDACIONES

Tener cuidado al esterilizar la luna portaobjetos, pues al tratarse con un

mechero hay peligro que se pueda romper por exceso de calor.

Asegurarse de tener el lugar de trabajo desinfectado y esterilizado para una

mayor eficiencia.

Tener cuidado al sellar con mechero, debe ser rpido el proceso pues se
puede correr el peligro que se queme la muestra.

VI.

ANEXOS

Aspergillus fumigatus
Descripcin micolgica
Hongo filamentoso con conidiforos cortos (300 x 3-8m), de pared lisa, incoloros o
ligeramente verdosos, sin tabicar y sin ramificaciones. Nacen de una clula base del
micelio, ensanchando al final en una vescula amplia, coronada de esterigmas en forma
de redoma (20 a 30 m de dimetro). Esterigmas (6-8m) de una sola serie que nacen
de la zona media de la cpula vesicular y cubren parcialmente la superficie de la
vescula. Conidios verdes oscuros, unicelulares, redondos o seudoesfricos (2-3m de
dimetro) formando cadenas largas que no se ramifican y permanecen unidos formando
columnas (200 a 400 m de longitud).
Colonias de crecimiento rpido, planas, vellosas, compactas, blancas al comienzo,
toman rpidamente un color verde grisceo, de aspecto aterciopelado y consistente.
La superficie muestra algunos pliegues y mechones vellosos blancos. Dorso incoloro
que, al envejecer, toma tintes amarillos o pardos. Su crecimiento es ms rpido a 37 C.
Crecimiento de Aspergillus fumigatus en agar glucosado de
Sabouraud durante 10 das a 24C.

Ecologa
Aspergillus fumigatus es un saprobio cosmopolita que se ha aislado prcticamente de
cualquier tipo de sustrato, especialmente del suelo y materiales orgnicos en
descomposicin.

A pesar de esta amplia distribucin, la concentracin de esporasen la atmsfera es baja

en comparacin con otros alrgenos aerotransportados, como Cladosporium herbarum,
Alternaria alternata o diferentes tipos de polen. El polvo de las casas es un nicho
ecolgico muy adecuado. La especie es termotolerante y es capaz de crecer entre los 12
y los 57 C.
Es capaz de crecer en atmsferas que contengan un 100% de N y tolera atmsferas
capnfilas in vitro (10% de CO2).
Tambin es capaz de soportar una pasterizacin a 63 C durante 25 min y provoca un
calentamiento del heno y el maz alterado que alcanzan una alta temperatura (50 C).
Este hongo produce un importante nmero de metabolitos especficos que poseen
efectos antibiticos y txicos, como esfingofunginas, espinulosina, ferricrocina,
festuclavina, filostina, fumagilina, fumiclavina, fumifungina, fumigacina (o cido
helvlico), fumigatina, fumitoxinas, fumitremorgina, fusgeno, gliotoxina, tripacidina,
triptoquivalinas, verrucologeno.

Conidiforo y cadenas de conidios de Aspergillus fumigatus.

Microscopa electrnica de barrido, x1200 aumentos.

Enfermedad humana
Aspergillus fumigatus es un patgeno humano muy importante y puede causar
enfermedades invasoras graves en personas inmunosuprimidas. La mortalidad es muy
elevada en las aspergilosis pulmonares necrotizantes o en las aspergilosis diseminadas.
Entre los factores que contribuyen a esta mortalidad elevada estn la gravedad de la
enfermedad subyacente (que suele cursar con neutropenia severa), el diagnstico tardo
y difcil de la infeccin y la variable respuesta al tratamiento antifngico tradicional que
consiste en anfotericina B intravenosa o itraconazol intravenoso u oral.
Adems, Aspergillus fumigatus puede producir enfermedades de componente alrgico.
La alveolitis alrgica (pulmn de granjero), el asma o la rinitis alrgica pueden
desarrollarse despus de la exposicin a conidios de Aspergillus, como ocurre cuando se
trabaja con heno mohoso o como en los casos de estipatosis por inhalar el polvo de las
fibras de esparto -Stipa tenacissima- que contienen Aspergillus fumigatus y
actinomicetos termfilos.
Aspergillus fumigatus es tambin responsable de muchos casos de aspergilosis
broncopulmonar alrgica y aspergiloma, dos condiciones clnicas en las que dicho
hongo acta como colonizador bronquial y no un invasor tisular. La aspergilosis
broncopulmonar alrgica desencadena una hipersensibilidad de tipo I adems de contar
con la accin ocupante de espacio del crecimiento fngico. El aspergiloma es un

crecimiento fngico miceliar en forma de pelota en una caverna preformada dentro del
parnquima pulmonar (muchas veces posttuberculosa).

Conidiforo de Aspergillus fumigatus. Microscopa

electrnica de barrido, x1600 aumentos.

VII.

BIBLIOGRAFIA

http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/tema03.pdf
http://www.microcsalud.us.es/web/docencia/grado/temas-comunes-

grado/clasificacion_bacterias.pdf
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%209.pdf