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Coleta, ativao e aplicao de Microrganismos Eficientes (EMs) no

tratamento de esgoto sanitrio


C.Z. CORREA1, D. H. NAKAGAWA1, L.F.F. DEMETRIO1, B. O. FREITAS2 e K. V. M. C.
PRATES2
1

Universidade Tecnologia Federal do Paran


Universidade Tecnolgica Federal do Paran, Departamento de Engenharia Ambiental
E-mail para contato: camila.z.correa@gmail.com

RESUMO O objetivo do trabalho foi coletar e ativar Microrganismos Eficientes


(EMs) para utilizao no tratamento de esgoto sanitrio. A coleta dos EMs foi
realizada em mata nativa e a ativao com caldo de cana de acar. Aps 30 dias de
fermentao, amostras foram coletadas para cultivo em meios especficos para Bactrias
Fermentadoras de Lactose (BFL), Leveduras (LVD) e Actinomicetos (ACT) a fim de
determinar as Unidade Formadora de Colnia/mL (UFC/mL) e caracteriza-las
morfologica e microscopicamente. Repetiu-se os mesmos procedimentos com o esgoto
sanitrio bruto. A soluo de EMs mais esgoto bruto foram inseridos em Reator em
Bateladas Sequenciais Aerado (RBSa) contendo material suporte. Para quantificao
dos EMs presentes no RBSa retirava-se um material suporte em ciclos especficos.
Realizou-se analises de pH e DQOT no esgoto bruto e tratado. Os resultados da
quantificao da soluo de EMs ativado foram da ordem 108 UFC/mL para cada
grupo estudado. No esgoto sanitrio bruto obteve-se 104, 106 e 107 UFC/mL de BFL,
LVD, e ACT, respectivamente. Quando avaliada a quantidade de EMs aderidos ao
material suporte chegou-se ordem de 109 UFC/mL. A caracterizao macroscpica das
colnias indicou grande diversidade dos microrganismos.de interesse. Quanto a DQOT
atingiu-se reduo de cerca de 70% e o pH saiu da faixa da neutralidade para a de
alcalinidade. Conclui-se que existe a viabilidade da coleta, ativao e utilizao dos
EMs em processo de tratamento biolgico de esgoto.

1. INTRODUO
No Japo, h aproximadamente 30 anos alguns microrganismos vm sendo capturados e
utilizados na agricultura natural como alternativa aos fertilizantes sintticos (MITSUIKI, 2006). Estes
microrganismos so conhecidos como Microrganismos Eficazes ou EMs.
O grupo dos EMs formado por organismos benficos, altamente eficientes, no patgenos e
no geneticamente modificados (ZACARIA, et al, 2010). Deste grupo de organismos os de maior
predominncia so as bactrias fermentadoras de lactose e leveduras, e em menor nmero os
actinomicetos, as bactrias fotossintticas e outros tipos de organismos, sendo que todos esses so
compatveis uns com os outros e podem coexistir em cultura lquida (HIGA; PARR, 1994).

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Inicialmente o uso da tecnologia EM foi desenvolvida como uma alternativa para os


fertilizantes sintticos e pesticidas (HIGA; WOOD, 2013, p. 03), porm nos ltimos tempos a
utilizao do mesmo vem sendo estendida para tratamentos de guas, efluentes e controle de maus
odores.
Com o intenso crescimento da populao e por consequncia o aumento da gerao de efluentes
domsticos torna-se importante o desenvolvimento de tecnologias sustentveis e eficientes no
tratamento deste resduo. Conhecendo-se da literatura atual a eficincia da utilizao dos EMs em
vrios processos inclusive no processo de degradao da matria orgnica, este trabalho teve como
principal objetivo coletar, ativar e identificar Microrganismos Eficientes (EMs) para posterior
utilizao destes em um Reator em Bateladas Sequencias aerado (RBSa) com material suporte, no
processo de tratamento biolgico de esgoto sanitrio.

2. MATERIAIS E METODOS
2.1 Coleta, Ativao dos EMs
A coleta e ativao dos EMs foram realizadas segundo a metodologia proposta por Bonfim et
al. (2011). O local escolhido para a coleta dos EMs, foi um ambiente de mata nativa, situada em uma
propriedade rural a 5 Km do Distrito de Warta PR, com acesso na Rodovia PR-545, com
coordenadas 231056S e 511246O.
Para captura dos organismos cozinhou-se aproximadamente 0,7 Kg de arroz apenas com gua
por 15 minutos. Aps esfriar o arroz, este foi distribudo em uma bandeja plstica com perfuraes no
fundo para que no ocorresse o acumulo de gua. A bandeja plstica com arroz foi deixada no local
previamente escolhido e coberta com uma proteo de madeira, para evitar que animais pudessem
mexer no mesmo, e tambm protege-lo do vento. Sobre esta proteo de madeira foi colocada a
serapilheira presente no local.
Aps um perodo de aproximadamente 15 dias, j foi possvel observar no arroz deixado na
mata, o crescimento de microrganismos de colorao rosada, azulada, amarelada e alaranjada, que
segundo Bonfim et al. (2011) representa caractersticas de que os EMs estavam presentes no arroz
(Figura 1). As partes que apresentaram estas coloraes seguiram para o procedimento de ativao.
Para a ativao dos EMs, o arroz com crescimento dos microrganismos capturados foi
distribudo em uma mistura de caldo de cana-de-acar e gua (para cada 900 mL de gua destilada
foi adicionado 100 mL de caldo de cana-de-acar). Estas garrafas foram mantidas no laboratrio e
diariamente o gs produzido, em decorrncia da ao dos microrganismos, era liberado. Aps este
perodo de produo de gs cerca de 30 dias, a soluo de EMs apresentava uma colorao
alaranjada com cheiro doce e agradvel. Esta soluo foi ento armazenada 5C em cmara fria.

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Figura 1 Arroz coletado na mata com caracteristicas de crescimento dos EMs.

2.2 Sistema De Tratamento Utilizado - RBSa


Aps a coleta e ativao dos EMs, a soluo ativada foi inserida em um RBSa misturada ao
esgoto sanitrio bruto. O RBSa construdo tinha altura total de 64 cm, dimetro 24,5 cm e volume til
de 10 litros, sendo que destes 50% foram ocupados pelo material suporte espuma de poliuretano e
20% por lodo. Como o meio suporte utilizado era poroso, o volume til a ser tratado de efluente no
reator foi de 6,5 Litros.
O RBSa continha um termostato (Marca H-606, com a finalidade de manter a temperatura do
esgoto constante a 25C (1C), um sistema de aerao (Bomba modelo big Air A-420, com vazo de
4,5 L/min, sendo a distribuio do oxignio realizada no fundo do reator por meio de quatro pedras
porosas), uma bomba para o processo de alimentao e uma bomba para o processo de descarte de
efluente (Marca: Robertshaw de 127 60Hz 34w). O reator foi operado por sistema automatizado
programado em um painel de controle e automao, com a funo de controle do tempo de descarte e
enchimento, alm do perodo destinado a aerao.
O experimento foi conduzido por 76 ciclos, sendo estes de 8 horas cada, totalizando 25 dias de
operao e 608 horas. No incio de cada ciclo, o reator era alimentado com 6,5 litros de esgoto
sanitrio mais 6,5 mL de soluo de EMs ativado (1/1000) baseado no trabalho Namsivayan;
Narendrakumar e Kumar (2011) (Fase de enchimento 5 minutos). A fase de reao aerbia teve
durao de 6,85 horas e a fase de sedimentao 1 hora. Ao termino de cada ciclo, o efluente era
descartado (Fase de descarte 4 minutos).

2.3 Caracterizao dos EMs ativados, presentes no esgoto sanitrio bruto e no


material suporte do Reator em Bateladas Sequenciais Aerado- RBSa
A caracterizao quantitativa para determinao das Unidades Formadoras de Colnia/mL
(UFC/mL) dos EMs ativados e inserido no RBSa foi realizada logo aps a ativao da soluo e a

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caracterizao quantitativa dos EMs presente no esgoto sanitrio bruto foi realizado semanalmente
aps a coleta na estao de tratamento de esgoto. Analises para determinao da UFC/mL dos EMs
tambm foram realizadas no material suporte presentes no RBSa em tempos especficos (Tabela 1).
Tabela 1 Tempos de amostragem dos materiais suportes para determinao da UFC/mL dos
EMs.
Ciclo
10
20
20
40
60
70
100
130

Tempo de Operao Total


dos Reatores (Horas)
8
12
16
32
44
56
80
104

Ciclo
160
220
280
340
400
490
580
760

Tempo de Operao Total dos


Reatores (Horas)
128
176
224
272
320
392
464
608

Para a caracterizao dos EMs presentes na soluo de EMs ativada e no esgoto sanitrio, foi
realizada a diluio em srie em soluo salina (0,80%), at a diluio 10-6. Com auxlio de uma
pipeta automtica alquotas de 0,1 mL das diluies: 10-2, 10-4 e 10-6, foram retiradas e espalhadas,
com uso de swab estril, em placas de Petri contendo meio especfico para contagem dos
microrganismos estes meios foram incubados em temperaturas adequadas para cada tipo de
microrganismo.
O material suporte era retirado do reator seguindo os tempos apresentados na Tabela 1, e
adicionado em um tubo Falcon com 5g de prolas de vidro e 10 mL de soluo Tween 1%, depois
colocava-se mais 5g de prolas de vidro, e agitava-se o tubo durante um minuto para promover a
separao dos microrganismos da espuma, sendo este considerado como a primeira diluio.
Posteriormente realizava-se a diluio seriada e o plaqueamento das amostras seguindo procedimento
semelhante ao citado no pargrafo anterior.
Os meios especficos utilizados para o cultivo do microrganismos pertencentes aos EMs foram:
Meio Yeast Peptone Dextrose (YPD): Leveduras - LVD (28C1); Meio slido Amido Caseina (AC):
Actinomicetos - ACT (36C1); Meio Agar MRS: Bactrias Fermentadoras de Lactose - BFL
(36C1).
Aps o perodo de incubao para cada grupo de organismos, foi realizada a contagem das
UFC/mL. Em seguida, realizava-se a caracterizao macroscpica das colnias presentes nas placas
de Petri, a fim de analisar a diversidade de colnias existentes para cada grupo.
Foi realizado tambm, teste morfo-tintorial a colorao de Gram segundo Okura (2008), dos
EMs cultivados para identificao e confirmao dos organismos cultivados.

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2.4 Anlises fsico-qumicas


Foram realizadas semanalmente no esgoto sanitrio bruto coletado e na sada RBSa nos
mesmos tempos de coleta do material suporte, analises de pH e Demanda Qumica de Oxignio
Total (DQOT) segundo APHA (2012), a fim de se conhecer as caractersticas do mesmo.

3. RESULTADOS E DISCUSSES
3.1 Quantificaes dos EMs (UFC/mL) presente na soluo ativada, no esgoto
sanitrio bruto e no material suporte
Analisando os resultados da soluo de EMs ativada obteve-se cerca 108 UFC/mL para cada
grupo estudado: BFL, LVD e ACT. No esgoto sanitrio bruto foram quantificados 104 UFC/mL de
BFL, 106 UFC/mL de LVD e 107 UFC/mL de ACT.
Conhecendo a quantidade de EMs inserida no RBSa e presentes naturalmente no esgoto
sanitrio, foi possvel determinar a concentrao inicial destes em cada ciclo de operao do RBSa,
sendo esta de: 105 UFC/mL de BFL, 106 UFC/mL de LVD e 107 UFC/mL de ACT.
Com relao a concentrao de EMs encontradas no material suporte , pode-se visualizar os
resultados na Tabela 2, onde so apresentados os valores de UFC/mL nos tempos de amostragem prdeterminados.
Dos resultados constata-se que as BFL e LVD com 16 horas de operao do RBSa j havia
atingido a sua concentrao mxima no material suporte, j quanto aos ACT a sua concentrao
mxima foi obtida com 80 horas de operao do RBSa. Durante todo o perodo de monitoramento do
reator foram constatadas a existncia destes microrganismos no biofilme estabelecido no material
suporte, indicando boa adaptao ao sistema de tratamento.
Namsivayan; Narendrakumar e Kumar (2011) em seu estudo utilizaram uma soluo de EMs
com o objetivo de avaliar qual a influencia na reduo de alcalinidade total, slidos dissolvidos, DBO
e DQO do esgoto domstico. O reator supracitado possua capacidade para 2 litros, sendo que destes,
1 litro foi preenchido inicialmente com esgoto domstico e 100 mL de EMs ativados. O reator foi
operado por 20 dias, sendo que nos 5 primeiros dias de experimento, foram adicionados mais 0,0001
mL (1/10,000) de EMs no reator.
Estes autores afirmaram que na concentrao de EMs inseria no seu reator havia cerca de 1,0.
104 UFC/mL de bactrias fermentadoras de cido lctico, 105 UFC/mL de LVD, 103 UFC/mL de
ACT e 105 UFC/mL de fungos fermentadores.
O valor inicial encontrado pelos referidos autores em seu reator foram de: 11,2.104 de bactrias
fermentadoras de cido ltico, 2,4.102 actinomicetos, 12,0.103 leveduras e 41,1.103 UFC/mL de
bolores. E aps 20 dias de incubao estes valores passaram para 41,0.107 UFC/mL de bactrias,
51,0.102 UFC/mL de actinomicetos, , 27,1.105 UFC/mL de leveduras e 54,1.104 UFC/mL de bolores.

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Ciclos
10
20
20
40
60
70
100
130
160
220
280
340
400
490
580
760

Tabela 2 Concentrao de EMs em UFC/mL presentes no material suporte


Tempo de
Operao
BFL (UFC/mL)
(Horas)
LVD (UFC/mL)
ACT (UFC/mL)
5
8
2.20.10
8
7.05.10
3.05.107
2.55.105
12
7.00.108
6.75.108
3.05.107
16
1.30.109
9.00.108
8.50.104
32
1.82.109
5.55.108
2.50.104
44
1.56.109
9.65.108
56
3.05.105
5.50.108
5.65.107
80
9.00.104
2.25.105
1.13.109
104
1.35.107
9.35.107
1.12.109
128
5.30.105
4.65.107
1.29.108
176
5.40.105
6.50.108
1.33.109
224
3.50.106
3.00.107
5
7
272
5.00.10
3.50.10
4.80.108
320
9.50.104
1.05.108
3.20.108
392
5.00.105
3.50.107
1.50.107
464
1.00.104
3.90.108
1.20.108
608
1.50.106
3.50.107
3.10.108

Os autores supracitados constataram que todos os parmetros testados apresentaram reduo, e


quanto ao nmero de organismos em suspenso, notaram que o total da populao bacteriana e de
leveduras aumentou e quanto populao de fungos e actinomicetos no houve mudana
significativa.
Observando os resultados demonstrados na Tabela 2, e os obtidos pelos autores acima, constatase que o nmero de organismos do grupo dos EMs encontrou-se em nmero mais elevado no final
deste experimento, do que nos obtidos por Namsivayam, Narendrakumar e Kumar (2011), isto
possivelmente pode ser explicado pelo fato dos organismos analisados nesse trabalho serem aqueles
aderidos na espuma de poliuretano, formando biofilme, o que possivelmente favoreceu o crescimento
e desenvolvimento destes.

3.2 Caracterizao macroscpica (culturais) e microscpica (morfolgicas) dos


EMs (UFC/mL) presente na soluo ativada, no esgoto sanitrio bruto e no
material suporte
Na caracterizao macroscpica realizada nas colnias presentes nos meios especficos, todos
os grupos apresentaram grande diversidade morfolgica, sendo observado para o grupo das BFL cerca
de 25 tipos de colnias diferentes, 45 tipos de LVD e 30 colnias diferentes de ACT.

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Das colnias cultivadas foram escolhidas cerca de 6 tipos morfolgicos diferentes de BFL, LVD
e ACT diferentes para realizao da colorao de Gram. As anlises confirmaram que todas as
colnias analisadas pertenciam aos grupos de interesse.

3.3 Anlises Fsico- Qumicas: Esgoto Sanitrio Bruto E Na Sada Do RBSa


Para o esgoto sanitrio bruto foram realizadas no total 4 analises de pH e DQOT . O valor mdio
de pH foi de 7,2 0,4 e DQOT mdio de 464 86. Os valores obtidos estavam dentro das faixas de
valor (DQOT: 450-800 mg/L; pH: 6,7-8,0) para um esgoto sanitrio tpico, segundo Von Sperling
(2005). Na sada do RBSa foram realizadas 8 analises de pH e DQO T. Na Tabela 3 so apresentados
os valores de pH e DQOT no efluente tratado.
Tabela 3 Resultados de pH e DQOT (mg/L) do efluente tratado na sada do RBSa nos ciclos
analisados.
Ciclo
Ciclo
pH
DQOT(mg/L)
pH
DQOT(mg/L)
0
0
1
8.25
138
16
7.92
166
0
0
2
8.26
138
22
8.07
147
0
0
2
8.27
138
28
7.97
101
0
0
4
8.05
188
34
7.92
97
0
0
6
8.06
188
40
7.89
71
0
0
7
8.36
145
49
8.02
73
0
0
10
8.22
96
58
7.83
66
0
0
13
8.05
155
76
8.12
57
Avaliando os resultados de DQOT na entrada e sada (Tabela 3) do RBSa, nota-se que houve
reduo da carga organica na sada do reator desde o primeiro ciclo, e aps estabilizao do sistema
foi obtida remoo mdia de 70,8% de DQOT. Quanto ao pH, observa-se que o valor do mesmo
aumentou na sada do RBSa, saindo da zona da neutralidade para alcalinidade.

4. CONCLUSO
Avaliando os resultados constata-se a viabilidade da coleta, ativao e utilizao dos EMs no
processo de tratamento biolgico de esgoto sanitrio. Sendo estes organismos capazes de se manterem
vivos e de se reproduzirem quando inseridos em um RBSa com esgoto sanitrio bruto, alm de
apresentarem grande diversidade macroscpica quando presentes em tal ambiente.

5. REFERENCIAS
APHA, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 22. Ed. Washington:
American Public Health Association, 2012.

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