Produo da variabilidade

Recordando

As propriedades do material gentico:

Replicao;
Informao;
Variabilidade.

Se todos os membros de uma mesma espcie tm o

mesmo conjunto de genes, como pode haver variao
gentica?
Para qualquer gene pode haver um ou muitos alelos
diferentes. O conjunto desta variao allica ao longo de
todo o genoma a base da variao hereditria.

Como surgem as variaes genticas?

Recombinao
Mutao

Recombinao

Funes biolgicas das recombinaes

Gerao de novas combinaes

(quiasma durante a meiose)

gnicas/allicas

Gerao de novos genes

Integrao de um elemento exgeno de DNA (ou vrus)

Reparo do DNA

Usos prticos da Recombinao

Uso em construes de mapas gnicos nos
cromossomos Ex: frequncia da recombinao
inversamente proporcional distncia entre dois genes.
Produo de clulas e organismos transgnicos

Tipos de recombinao
Recombinao geral (ou homloga): ocorre entre
sequncias de DNA que so homlogas (exemplo: meiose,
transformao).
Recombinao stio-especfica: ocorre entre sequncias
com uma faixa muito limitada de similaridade; envolve
stios especficos (Ex: fago).
Recombinao ilegtima: Elementos de DNA mveis se
transportam de um stio a outro, geralmente utilizando
sequncias com pouca similaridade.

Definio de Recombinao Homloga

Evento de quebra e re-organizao de

molculas de DNA em regies homlogas do
cromossomo, gerando novos feixes de DNA

Exemplos de Recombinao Homloga

Recombinao Homloga (Evidncia)

Em 1961, Medelson e Weigle infectaram simultaneamente E. coli
com duas linhagens de fagos.
Linhagem selvagem continha DNA leve (12C e 14N), enquanto a
linhagem mutante continha DNA pesado (13C e 15N).

Processo de incorporao

Modelo de E. coli
A recombinao homloga em E.
coli mediada por protenas Rec.
A
etapa
inicial

o
desenrolamento da duplahlice de DNA por um
complexo proteco RecBCD
(papel de helicase e nuclease).

Esse complexo reconhe o stio

qui (5 GCTGGTGG 3) que
surgem a cada 64 kb e o cliva.
A fita livre de DNA
reconhecida e estabilizada pela
protena SSB.

O papel de RecA
A protena RecA liga-se ao filamento de DNA livre, formando uma
nucleoprotena.
A etapa seguinte a invaso de uma outra dupla-hlice
homloga e o deslocamento da fita corresponde via gasto de ATP.

O papel de RecA

Por dentro da meiose

Como os cromossomos homlogos se paream?

O complexo sinaptonmico

O complexo sinaptonmico

Mecanismo
Para haver recombinao homloga necessrio uma
similaridade entre as sequncias (~90%).
Um pareamento de bases entre duas fitas homlogas s
poder ocorrer se um corte primeiramente feito em uma
delas, deixando a fita livre para os eventos de
desenrolamento e deslocamento necessrios formao de
um heterodplex com a outra molcula de DNA.

Juno recombinante
A troca recproca entre as extremidades livres cria uma conexo
entre os dois dplices, que formam uma molcula unida. O ponto
no qual uma fita de DNA cruza de um ponto para outro
chamado de juno recombinante. A mobilidade dessa juno
chamada de migrao da ramificao.

Estrutura de Holliday

A juno recombinante deve ser desfeita e resolvida

para que as duas cadeias de DNA voltem a ficar
separadas. A resoluo necessita de um novo par de
clivagens. Existem duas possibilidades de clivagem.

Estrutura de Holliday

Modelo de Holliday

Finalizando

O complexo de recombinao

O DNA comporta stios de recombinao (5 GCTGGTGG 3),

chamados de stio chi (um a cada 5 kb em eucariontes).
Tais stios so reconhecidos pelo complexo RecBCD, que cliva uma
das fitas de DNA em uma regio prxima ao stio chi.
Nesse momento a protena RecD desativa o complexo, que
funciona como uma helicase.

As protenas RuvA e RuvB no deslocamento

Protenas RuvA ligam-se ao ponto de ramificao das fitas.

Esse complexo reconhecido e flanqueado por dois anis
hexamricos de RuvB ATPase.
Mediante a quebra de ATP ocorre a chamada migrao de
ramificao.

RuvB

RuvA

Protena RuvC na resoluo de Holliday

Protenas RuvC (endonuclease) reconhecem estruturas

de Holliday e promovem uma clivagem simtrica nos
filamentos de DNA. Ligases promovem a restaurao do
esqueleto fosfodister.