Guzmn G.D
Martnez H.P
Ros L.
RESUMEN
Introduccin: El consumo crnico de alcohol es toxico para la mayora de los
tejidos esto se asocia con el desarrollo de diversas enfermedades inflamatorias y
degenerativas as como infecciones causadas por agentes oportunistas.
Objetivo: En este estudio se busc demostrar si el consumo crnico de alcohol
afecta la fagocitosis de los macrfagos peritoneales de ratones BALB/c machos.
Material y Mtodo: El grupo experimental fueron tratados con 300ml de agua con
el 20% de alcohol y el grupo control con agua, posteriormente se extrajeron los
macrfagos y se le aplicaron levaduras de Candida Albicans para ver la actividad
fagocitica peritoneal, despus se realiz el conteo de clulas endocitadas y se
vieron cuales tenan NBT(+).
Resultado: Se vio que numricamente el grupo control tuvo una mejor funcin
fagocitica que el grupo experimental con 1294 macrfagos peritoneales que
fagocitaron contra 984.
Conclusin: El alcohol disminuye la respuesta fagicitica de macrfagos
peritoneal, al igual que el estallido respiratorio y la respuesta inflamatoria, aunque
no hubo diferencias significativas estadsticamente.
PALABRAS CLAVE:
Alcohol,
fagocitosis, macrfagos, NBT(+).
consumo
crnico,
sistema
inmune,
INTRODUCCIN
El alcoholismo es considerado una enfermedad polignica y multifactorial, ya que
en ella influyen complejas interacciones, adems de factores ambientales,
sociales, culturales, psicolgicos, educacionales, etc. El consumo de alcohol es
una de las causas que ms peso tiene en la morbilidad y mortalidad mundial. Se
De igual forma al haber lesin heptica crnica mediada por el alcohol se asocia
con la activacin de TLR4 mediante la circulacin de LPS en los macrfagos del
hgado que culmina en la activacin NFkB y la produccin de citocinas pro
inflamatorias.4
Al saber que el alcohol puede ocasionar problemas en el
especialmente en la fagocitosis, se debe tener en cuenta
predisposicin a las infecciones por agentes oportunistas y en
respuesta a los procesos inflamatorios sistmicos del paciente
crnico.
sistema inmune
que hay mayor
general hay una
con alcoholismo
METODOLOGIA
Se realiz un estudio de tipo transversal, experimental, comparativo y prospectivo.
Se trabaj con 20 ratones BALB/c, machos de 4-6 semanas de edad, del bioterio
de la Facultad de Estudios Superiores Iztacala, los cuales se encontraron libres de
patgenos de acuerdo a la norma mexicana NOM 062-ZOO-2001. Se dividieron
en 2 grupos de trabajo (10 ratones de grupo experimental y 10 ratones de grupo
control), en primer grupo (muestra) se le dejo alcohol al 20% de 300 ml de agua
por cuatro semanas. Al segundo grupo (control) se le dejo agua el mismo tiempo
que al grupo muestra.
Criterios de exclusin
La primer exclusin, fue el no poder utilizar macrfagos alveolares, ya que en la
extraccin
se observaron muy pocos, por ello se utilizaron macrfagos
peritoneales. Despus tuvimos que esperar a que los ratones crecieran ya que su
sistema inmune no estaba totalmente desarrollado. Por falta de tiempo, el
experimento se tuvo que acortar a 4 semanas de 7 que se haba previsto.
TIPO DE VARIABLES
V. independiente: Consumo crnico de alcohol
V. dependiente: funcin fagoctica de los macrfagos peritoneales
DEFINICIN OPERACIONAL
Se considera consumo crnico de alcohol a periodos continuos de ingesta por
etanol durante 4 semanas.
Proceso fagocitosis: Las primeras clulas que atraviesan la pared vascular son los
leucocitos polimorfonucleares seguidos por los monocitos. Cuando los monocitos
migran hacia los tejidos son denominados macrfagos. En el proceso inflamatorio
ambos tipos de clulas funcionan como fagocitos.
Material y mtodos
El proceso que se realiz durante la intoxicacin de alcohol con los ratones que
se llev a cabo en el bioterio de la Facultad de Estudios Superiores Iztacala, este
se hizo durante cuatro semanas vigilando que tomaran alcohol cada Jueves a
partir del da 14 de abril del 2016; los jueves se tomaron muestra de sangre de dos
6.- se le dio un pequeo masaje en el abdomen al ratn para poder obtener una
mejor muestra de macrfagos peritoneales
7.- con otra jeringa se sacaron lentamente el lquido del peritoneo y se colocaron
en un tubo.
Tcnica de fagocitosis:
Esta tcnica se realiz despus de haber obtenido los macrfagos peritonelas del
ratn estos estuvieron colocados en un tubo de ensayo.
1. Se decantaron los tubos de ensayo
2. Despus se le agregaron 10 microlitros del medio de DEM ETy se
disuelven
3. En otro tubo se colocaron n 10 microlitros de azul trepano y 10 microlitros
de la solucin anterior.
4. Luego se puso en la estufa la caja de Petri con dos cubreobjetos para
vaciar un mililitro de la solucin recin preparada (se deja una hora dentro)
5. Se lavaron los cubreobjetos con solucin de D-MEM.
6. Se le colocaron levaduras de Candida Albicans (se dej una hora)
7. Posteriormente se sacaron los cubreobjetos de la caja de Petri y se le
agreg agua destilada para enjuagar.
8. Despus de enjuagarlos se pusieron en papel absorbente hasta que
secaran.
9. Se montaron en la caja de Petri nuevamente y se le agreg Safranina (se
dej por siete minutos).
10. Enseguida se quit el excedente de Safranina y se enjuag nuevamente
con agua destilada y se dej secar.
11. Se coloc en el cubreobjetos con resina.
Conteo de clulas
El jueves 19 de mayo se ingres al laboratorio de microscopia para realizar el
conteo de clulas, para ello, se llev a cabo el siguiente procedimiento:
1.- pudimos contar 831 macrofagos de dos grupos control (500 de cada muestra)
2.- Contar el nmero de clulas endocitadas
3.- Observar cuales tenian NBT (+) Y NBT (-)
Escala de medicin: cuantitativas
Categoria de la Variable: alto
Diseo estadstico: se utiliza la prueba t-student para muestras independientes
con un valor de p=0.05
Anlisis estadstico
Se utiliz la prueba t para determinar la significancia de los valores obtenidos.
RESULTADOS
El nmero de clulas que no fagocitaron en el grupo control fue de 1706 con una
desviacin estndar de 97.0127139 en comparacin con el grupo experimental
que fue de 1971 con una desviacin estndar 45.8072047 como se puede ver en
la figura nmero 1.
2000
1950
1900
1850
1800
1750
1700
GRUPO
EXPERIMENTAL
GRUPO CONTROL
1650
1600
1550
NUMERO DE CELULAS NO FAGOCITADAS
1400
1200
1000
800
GRUPO
EXPERIMENTAL
600
GRUPO CONTROL
400
200
0
NUMERO DE CELULAS FAGOCITADAS
GRUPO
EXPERIMENTAL
1000
GRUPO CONTROL
500
0
NUMERO DE LEVADURAS FAGOCITADAS
El nmero de levaduras que redujeron el NBT del grupo experimental fue de 614
con una desviacin estndar 44.92067082 en comparacin con el grupo control
que fue de 1081 con una desviacin estndar de 143.9825221 como se puede ver
en la figura nmero 4.
1200
1000
800
600
400
GRUPO
EXPERIMENTAL
GRUPO CONTROL
200
0
NUMERO DE LEVADURA QUE REDUJERON EL NBT
ANALISIS DE RESULTADOS
Despus de observar los resultados se pudo concluir que ambos grupos
(experimental y muestra) se comportaron estadsticamente iguales,
numricamente el grupo control tuvo una mejor funcin fagocitica que el grupo
experimental con 1294 macrfagos peritoneales que fagocitaron, 2063 levaduras
fagocitadas y 1081 macrfagos peritoneales que redujeron el NBT, en
comparacin con el grupo experimental con 984. 1492, 614 respectivamente.
Discusin
CONCLUSIN
Los resultados de la investigacin nos permiten darnos cuenta que nuestra
hiptesis sobre el consumo crnico de alcohol disminuira la funcin fagocitica de
los ratones BALB/c es correcta, ya que si se pudo ver una disminucin de la
actividad fagoctica de macrfagos peritoneales del grupo experimental, pero los
resultados no fueron los esperados, ya que fue mnima la diferencia entre
levaduras fagocitadas y el NBT (+) entre el grupo muestra y control, a lo que lo
atribuimos estos resultados al poco tiempo en el que se llev acabo el
experimento y la cantidad de alcohol administrada a los ratones.
SUGERENCIAS
Aumentar el periodo de administracin de alcohol aproximadamente a
siete semanas
Vigilar que el grupo experimental consuma la dosis indicada de alcohol
al dia, mediante su administracin intramuscular
Aumentar la dosis al 30 % de alcohol
REFERENCIAS:
1.-Gonzlez Guzmn R, Alcal Ramrez Julian. Consumo de alcohol y salud
pblica. FacMed UNAM [internet] 2005 [citado 20 Abr 2016]; 50(1):1-4. Disponible
en: www.ejournal.unam.mx
2.- Organizacin Mundial de la Salud. Centro de prensa. Alcohol. Enero 2015
http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs349/es/ (ultimo acceso 20 abril 2016
OMS)
3.- Consumo de alcohol en Mxico, 2000-2012: estrategias mundiales para reducir
su uso nocivo. Mxico 2010 [actualizado 2012; citado 20 Abr 2016]. Disponible en:
http://ensanut.insp.mx/doctos/analiticos/ConsumoAlcohol.pdf
4.- Mandrekar, P., Dolganiuc, A., Bellerose, G., Kodys, K., Romics, L., Nizamani, R.
and Szabo, G. (2002) Acute alcohol inhibits the induction of nuclear regulatory