Prctica N 5: Determinacin de Triacilglicridos

Objetivo:
a)Obtencin

de las muestras y procesamiento para cuantificar la concentracin de

triacilglicridos en sangre.
b) Manejo del Mtodo Enzimtico
Teora:
A menudo, los triacilglicridos se miden como un reflejo de la ingestin y del
metabolismo de grasas (lpidos) o como parte de una evaluacin de factores de riesgo
coronario.
Los triacilglicridos comprenden la mayor proporcin de grasas (lpidos) en la dieta,
en el tejido adiposo y en la sangre. Inmediatamente despus de una comida, los
triacilglicridos aparecen en la sangre como el mayor constituyente de los
quilomicrones.
Bajo circunstancias normales, los triacilglicridos, dentro de los quilomicrones, son
despojados de los cidos grasos a medida que pasan a travs de varios tejidos
(especialmente el tejido adiposo y el msculo esqueltico). El hgado absorbe los
quilomicrones restantes de modo que estos desaparecen de la sangre en dos o tres horas.
Los restantes triacilglicridos, junto con los triacilglicridos adicionales sintetizados en
el hgado, son empacados de nuevo como VLDL y secretados en la sangre desde el
hgado.
Los triacilglicridos son una forma de almacenamiento de energa que se deposita en
el msculo y en el tejido adiposo, y son gradualmente liberados y metabolizados entre
las comidas, de acuerdo con las necesidades de energa del organismo.
El mtodo enzimtico se basa en hidrolizar los triacilglicridos por medio de una
lipasa especfica liberando cidos grasos y glicerol. El glicerol es fosforilado por la
enzima gliceroquinasa y posteriormente el glicerol-1-fosfato es oxidado a
dihidroxiacetona fosfato por la enzima glicerol fosfato oxidasa, generndose perxido
de hidrgeno. Posteriormente el perxido de hidrgeno reacciona con 4Aminoantipirina y el cido 3,5 diclorobencensulfnico para producir por medio de la
peroxidasa un compuesto coloreado en cantidad proporcional a la concentracin de los
triacilglicridos presentes en la muestra, midindose la absorbancia a 520 nm.
Lipasa
Triacilglicridos ------------------- glicerol + cidos grasos
Gliceroquinasa
Glicerol + ATP ------------------------- Glicerol-3 Fosfato + ADP
Glicero-fosfato oxidasa
Glicerol 3 Fosfato + O2 ---------------------------------Peroxidasa
H2O2 + 4-AAP + DCBS --------------------------

Dihidroxiacetona + H2O2

Compuesto coloreado + 4 H2O

Material y Reactivos:
1.
2.

Estndar: glicerol equivalente a 200 mg/dl de triacilglicridos

Buffer TRIS pH 7.5, 50 mM)

Mg. Ana I. F. Gutirrez Romn

Mg. Milagros Quintana Cceda

anaisabelflor@gmail.com
milagrosquintana@gmail.com

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7.

Lipasa (microbiana) > 500 U/L; Gliceroquinasa > 500 U/L; Glicero-3 fosfato
Oxidasa >1000 y Peroxidasa >1000 U/L.
cido 3,5-Dicloro-2-hidroxibencensulfnico 1.5 mM; ATP 0.50 mM; Mg 2+ 5
mM.
Agua destilada; Tubos y pipetas.
Espectrofotmetro
MUESTRA Biolgica: suero o plasma (Heparina o EDTA) libre de hemlisis.
Debe tomarse en ayunas. Los triacilglicridos son estables algunos das entre 2
8C.

Procedimiento:
1. Preparacin de la Muestras:
Si es sangre total: centrifugar a 3000 rpm/15 min. A temperatura ambiente para
obtener el suero. En estas condiciones los triacilglicridos son estables durante 2 - 8 das
a temperatura refrigerada (2-10 C)
Si es sangre con anticoagulante: centrifugar a 3000 rpm/15 a temperatura ambiente
para obtener el plasma. La estabilidad de los triacilglicridos es la misma que en el
suero.
2. Determinacin de la Concentracin de Triglicridos en la Muestra:
Reactivos

Blanco Estndar
Estndar
(uL)
--10
Muestra
(uL)
----Reactivo de trabajo (mL)
1.00
1.00
Mezclar. Incubar 10 minutos en bao de agua a 37 C.
Leer

Muestra
--10
1.00

a 520 nm. Calibrar el equipo a cero con el blanco..

3. Valores de referencia en el hombre:

Normal: menos de 150 mg/dL

Limtrofe alto: 150 a 199 mg/dL
Alto: 200 a 499 mg/dL
Muy alto: 500 mg/dL o superior

4. Clculos de los resultados:

Triacilglicridos mg/dL = Absorbancia Muestra x factor
Factor =

5.

200 mg/dL
Absorbancia estndar

Resultados:

Mg. Ana I. F. Gutirrez Romn

Mg. Milagros Quintana Cceda

anaisabelflor@gmail.com
milagrosquintana@gmail.com

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Cuestionario:

1.

En qu organelo celular se sintetizan los triglicridos?

2.

En qu forma se transportan los triglicridos en la sangre?

3.

Diferencias entre triglicridos animales y vegetales?

4. Cules son las fuentes alimenticias ricas en triglicridos?

Referencias bibliogrficas:
1. Tietz,N.M.: Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia,
PA. p 154 (1976)
2. Trinder,P. Ann Clin. Biochem., 6/24 (1969)
3. Fossati P., et al Clin. Chem. 28(2078), 1982.
4. DOcon Navaza C, Garca-Saavedra MJ, Vicente Garca JC (1999): Fundamentos y
Tcnicas de Anlisis Bioqumico, Anlisis de Muestras Biolgicas. Editorial
Paraninfo, Madrid.
5. Gonzlez de Buitrago JM, Arilla Ferreiro E, Rodrguez-Sedade M, Snchez Pozo A
(1998): Bioqumica Clnica. Editorial McGraw-Hill.-Interamericana, Madrid.

Mg. Ana I. F. Gutirrez Romn

Mg. Milagros Quintana Cceda

anaisabelflor@gmail.com
milagrosquintana@gmail.com

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