Cada organismo possui um patrimnio gentico que o torna nico: o seu
DNA. Esta molcula biolgica o suporte da informao gentica que coordena todas as atividades celulares e transmitida a todas as clulasfilhas. Desta forma, a molcula de DNA (cido desoxirribonucleico), pode ser comparada a uma longa escada de corda enrolada em torno de um eixo imaginrio, isto , formada por uma dupla hlice. As "cordas" das escadas so formadas pela alternncia regular da desoxirribose e de um grupo fosfato. As duas longas fitas de DNA enrolam-se, estando nucletidos presentes em ambas as fitas da dupla hlice. Os "degraus" so formados por um par de bases azotadas, com quatro variantes possveis (A-T, T-A, GC, C-G) que se ligam entre si atravs de pontes de hidrognio. Estas bases pertencem a duas famlias moleculares - a adenina (A) e a guanina (G) so as bases pricas, a citosina (C) e a timina (T) so bases pirimdicas. O DNA controla toda as funes possveis das clulas e essencial para a existncia da vida, fornecendo instrues para milhes de processos celulares. E para estudar como estas instrues chegam s clulas necessrio isolar o DNA e estudar as suas interaes com as protenas e com o RNA. Neste trabalho laboratorial tnhamos como objetivo separar o DNA dos outros constituintes celulares do quivi, de modo a conseguir observar "novelos" de DNA, que so bem visveis a olho nu. Com isso ficouse a conhecer tcnicas de extrao de DNA das clulas e compreender o processo necessrio para o fazer. Procedimento 1. Descascou-se e cortou-se o quivi em pequenos fragmentos e colocou-se no almofariz. 2. Deitou-se o sal e o detergente num gobel com gua destilada, e de seguida agitou-se suavemente a mistura. 3. Colocou-se a mistura obtida no almofariz e triturou-se. 4. Filtrou-se o produto obtido atravs de papel de filtro, e depois por algodo hidrfilo. 5. Fez-se escorrer lentamente o lcool refrigerado em quantidade aproximadamente igual do filtrado ao longo da parede da proveta. Esperou-se algum tempo e procurou-se observar a formao de duas fases: a alcolica (superior) e a aquosa (inferior). Discusso Para extrair e visualizar o DNA, so necessrios vrios componentes - entre eles o sal, o detergente e o lcool refrigerado - cada um deles utilizado para um fim especfico. Tambm se utiliza o almofariz e filtra-se com o papel de filtro seguido do algodo hidrfilo, que tm todos tambm um papel importante nesta atividade laboratorial. O almofariz serviu para esmagar o quivi e assim conseguir romper as paredes celulares e as membranas citoplasmticas, libertando o contedo
celular, mas sem conseguir romper os ncleos celulares (que onde se
localiza o DNA) por serem demasiado pequenos. O sal utilizado para ajudar a manter as protenas dissolvidas no lquido extrado, impedindo que elas precipitem com o DNA. Este tambm d um ambiente favorvel ao DNA. O grupo fosfato, um dos componentes do DNA, apresenta elevado nmero de cargas negativas, o que significa que estas cargas tm tendncia para se repelirem entre elas. O sal ir contribuir com ies positivos (Na+) que neutralizam a carga negativa impedindo que haja repulso eltrica entre as molculas de DNA, estabilizando-as, e assim permitindo a sua agregao de modo a formar filamentos mais espessos e compridos que so visveis mais facilmente. O detergente tem como principal funo dissolver as gorduras, logo ir tambm dissolver as membranas nucleares, que so constitudas pela camada fosfolipdica, tornando-se ento possvel obter o DNA (que se encontra no ncleo). De seguida filtra-se a mistura de quivi, detergente, sal e gua destilada com papel de filtro e algodo hidrfilo, com esta filtrao sucessiva possvel separar as paredes celulares e as membranas citoplasmticas do restante contedo celular, nomeadamente dos ncleos. Seguido da filtrao, foi utilizado o lcool refrigerado, possibilitando assim a separao do DNA, e desta forma estas molculas dos filamentos de DNA ascendem para fase alcolica e surgem mais prximas da superfcie. Isto acontece porque o DNA menos denso que a gua e que a mistura, e o lcool menos denso que a gua, fazendo assim com que o DNA se mova lentamente para a superfcie, em direo ao lcool, e assim deixando aparecer os pequenos filamentos. Foi utilizado o lcool refrigerado porque quanto mais gelado o lcool estiver, menos solvel vai estar o DNA. Depois deste processo conseguimos visualizar a olho nu milhes de cadeias de molculas de DNA aglomeradas, o que s possvel quando vistas desta maneira, porque molculas individuais possuem um tamanho microscpico. Concluso Este trabalho laboratorial teve como objetivo extrair o DNA de um quivi a partir de alguns processos, que resultaram com sucesso. Depois de seguir o procedimento experimental, conseguiu-se obter o DNA do quivi num tubo de ensaio sobre a forma de um "novelo" a olho nu, enquanto estava suspenso em lcool. Com isto pde-se concluir que a molcula de DNA pouco solvel, pouco densa e que as suas ligaes de pontes de hidrognio so fracas energeticamente. No fim da atividade o objetivo principal pretendido foi cumprido, isto , extrair e visualizar molculas de DNA a olho nu, e ficar a conhecer processos para o fazer.