CENTRO DE CINCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA E BIOLOGIA MOLECULAR
CURSO DE BACHARELADO EM BIOTECNOLOGIA
DISCIPLINA DE BIOFSICA
ALUNOS:
Gabriella Bruno
Germana Nogueira
Henrique Sousa
Wesley Rodrigues
FORTALEZA
2016
Introduo
Eletroforese um processo de separao de substancias eletricamente carregadas
mediante a migrao diferenciadas delas quando as mesmas so dissolvidas em um eletrlito,
no qual aplicado uma corrente eltrica. Essa tcnica, que busca a separao de compostos de
acordo com sua cara e/ou tamanho, foi introduzida inicialmente pelo bioqumico sueco Arne
Tislius em 1939 e uma das mais utilizadas atualmente para separao de protenas, RNA,
DNA, alm de outras estruturas.
Geralmente a eletroforese aplicada no estudo de composies proteicas,
enzimticas ou genticas e na busca de relao de doenas com alteraes de protenas e
enzimas, entre outros exemplos. Seus tipos variam de acordo com a finalidade de aplicao,
podendo ser de acetato de celulose, gel de agarose, gel de poliacrilamida ou
isoeletrofocalizao. Cada uma tem sua especificidade e sensibilidade, sendo usadas tanto em
processos qumicos como em pesquisas.
A eletroforese em gel poliacrilamida (usualmente conhecido como PAGE) foi o
mtodo utilizado na aula prtica. Esse gel formado pela polimerizao de monmeros de
acrilamida na presena de quantidades pequenas de N,N-methylene-bisacrylamide
(normalmente conhecido como bis-acrilamida). A bis-acrilamida consiste de duas molculas
de acrilamida ligadas por um grupo metileno e utilizada como agente formador de ligaes
cruzadas.
O PAGE definido em termos de porcentagem total da acrilamida presente e o
tamanho do poro gerado pode ser alterado variando-se a porcentagem de acrilamida. Baixas
porcentagens resultam em gis com tamanho de poro maior. Alm disso, esse tipo de gel
fornece informaes sobre a massa molecular aparente e composio de subunidades da
protena em meio desnaturante e redutor.
Nessa prtica tambm houve a introduo do preparo de amostras para anlise em
espectrometria de massa. Essa tcnica consiste na anlise microanaltica para obter
informaes sobre o peso molecular e sobre outras caractersticas estruturais da amostra. Alm
disso, esse mtodo j considerado uma das mais importantes ferramentas analticas
disponveis, capaz de fornecer informaes sobre a composio elementar de amostras, a
estrutura molecular e a composio qualitativa e quantitativa de misturas complexas, entre
outras informaes.
Objetivo
Material
Fonte eletrofortica
Placas de Vidro
Espaadores
Tubos eppendorfs
Ponteiras
Reagentes
Acrilamida/Bisacrilamida 30,0%/0,8%
Persulfato de amnio (APS) 1% (p/v)
SDS 10%
Tris-HCl 1,5M pH8,8
Tris 0,5 M pH 6,8;
Tampo de Corrida
Tris 25mM
Glicina 192mM
SDS 0,1%
Tris 80mM
SDS 2%
5%; -mercaptoetanol pH 6,8;
Azul de bromofenol 1% (p/v)
Procedimentos
O gel eletrofortico foi preparado anteriormente por membros no laboratrio do
professor Bruno devido demora, assim, no daria tempo mont-lo em sala de aula. O
utilizado foi um gel de poliacrilamida a 12,5%, seguindo a tabela abaixo:
Resultados e Discusses
Referncias
http://www2.iq.usp.br/docente/miyamoto/DEG_5_Tecnicas_eletroforeticas.pdf. Acesso: 29 de
janeiro de 2016
http://www.abc.med.br/p/exames-eprocedimentos/554982/eletroforese+das+proteinas+o+que+e+isso.htm Acesso: 29 de janeiro
de 2016
https://pt.scribd.com/doc/14171715/Relatorio-aula-pratica-Eletroforese Acesso: 29 de janeiro
de 2016