UNIVERSIDAD DE CORDOBA

LIC. CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIN AMBIENTAL

ASIGNATURA: GENTICA. VIII SEMESTRE
DOCENTE: MNICA MARTNEZ GERMN
PRCTICA DE LABORATORIO:
OBSERVACIN DE CROMOSOMAS POLITNICOS EN LARVAS DE
DROSOPHILA
RESUMEN
Los cromosomas politnicos ms conocidos como cromosomas gigantes se
observaron por primera vez en 1881 yson muy especiales debido a !ue
en ellos las cromatides se duplican muc"as veces pero al #inal !uedan
unidas ya!ue nunca "ay citocinesis dado !ue la mitosis es incompleta$ Este
tipo de cromosomas es e%clusivo de clulas dete&idos !ue necesitan una
alta e%presi'n de genes y se encuentran principalmente en larvas de
algunos insectos$
Introduccin a la politenia y los cromosomas politnicos de Drosophila

Cuando en el ciclo de divisin celular se modifica la alternancia normal de

las fases
S y M, de manera que despus de una mitosis se producen dos perodos de
sntesis sucesivos, tiene lugar el fenmeno de la endorreduplicacin. Un
caso extremo de la misma es la politenia, proceso en el que se produce un
nmero elevado de rondas sucesivas de replicacin (5, 10 o ms) dando
lugar a los llamados cromosomas gigantes o cromosomas politnicos que
estn constituidos por 2n cromatidios (siendo n el nmero de rondas de
replicacin). As, por ejemplo, en las glndulas salivales de varias especies
de Drosophila la replicacin se produce durante diez rondas sucesivas, es
decir, que cada
cromosoma tiene 210 = 1.024 cromatidios.
Los
cromosomas politnicos se mantienen en interfase; por tanto son
cromosomas somticos interfsicos en los que las cromtidas permanecen
descondensadas (como corresponde a la interfase) por lo que la longitud
del cromosoma es entre 100 y 200 veces la del cromosoma mittico
correspondiente. Como las numerosas copias de cada
cromosoma
permanecen unidas y, adems, los cromosomas homlogos tienden a estar
apareados, la politenia produce un grosor total que es unas diez veces el de
los cromosomas metafsicos. Todo ello los hace perfectamente analizables
con microscopia ptica a pesar de tratarse de cromosomas interfsicos.
La politenia no es una anomala del ciclo celular, sino que se considera un
mecanismo de amplificacin gnica dentro de un proceso de
citodiferenciacin. Este sistema permite a los organismos disponer de una
lnea germinal con un contenido de ADN relativamente bajo, con las
ventajas que ello conlleva respecto a replicaciones
rpidas y ciclos
celulares cortos, pero con la capacidad de multiplicar el genoma (o partes
de l) en lneas celulares especficas.
Los cromosomas politnicos fueron descubiertos por Balbiani (1881), pero
su significado no fue comprendido hasta mediado de los aos treinta en
que fueron analizados en las glndulas salivales de las larvas de los
dpteros. Posteriormente, se observaron en otros tejidos u rganos de las
larvas (epitelio intestinal, tubos de Malpigio, etc) y en otros organismos, por
ejemplo en el macroncleo de protozoos ciliados, glndulas de la seda de
Bombix mori, glndulas salivales de insectos colmbolos y tambin en
distintos tejidos vegetales. De todas formas los organismos ms favorables

para la observacin de los cromosomas politnicos son los dpteros, por lo

que los cromosomas politnicos mejor conocidos son los de las glndulas
salivales de las larvas de Drosophila y Chironomus.
Cuando se estudia el desarrollo de las larvas de D. melanogaster se observa
la
formacin de las glndulas salivales por divisiones celulares e
invaginaciones del blastodermo hasta alcanzar un nmero aproximado de
125 clulas cada glndula. A partir de este momento, que coincide con el
periodo de eclosin de la larva, las clulas ya no se dividen ms y
comienzan a aumentar de tamao como consecuencia del proceso de
endorreduplicacin que origina los cromosomas politnicos.
Los
cromosomas politnicos muestran un patrn de bandas tpico, producido por
la
alternancia de regiones condensadas (bandas) y regiones
descondensadas (interbandas). Esta organizacin es consecuencia del
alineamiento exacto de las cromtidas en los cromosomas de forma que las
regiones de fuerte empaquetamiento de las cromtidas
individuales
(correspondientes a crommeros) tienen la apariencia de bandas,
alternndose con las interbandas (Fig. 1).

Fig. 1. Fotografa de un cromosoma politnico

de Drosophila y detalle de su morfologa.
En Drosophila, los cromosomas politnicos aparecen unidos en una zona
central, denominada cromocentro, que se interpreta como la fusin de las
regiones pericentromricas heterocromticas. En otros gneros de dpteros,
como Chironomus, no aparece cromocentro de manera que los cromosomas
politnicos se presentan sueltos
(Fig. 2).

Figura 2. Cromosomas politnicos (a) de Drosophila melanogaster

mostrando la
presencia del cromocentro, (b) de Chironomus thummi, sin cromocentro.

El apareamiento de los brazos homlogos es tan ntimo que suele ser difcil
distinguir un
brazo del otro; sin embargo, en ocasiones se produce la falta de
apareamiento en
regiones homlogas de los cromosomas politnicos
Una vez establecido que el patrn de bandas que presentan los cromosomas
politnicos es caracterstico para cada especie, se pudieron construir mapas
citolgicos muy precisos, en los cuales cada banda cromosmica quedaba
identificada por una letra y un nmero (Fig. 4).
Estos mapas permiten la localizacin de reordenaciones cromosmicas que
producen alteraciones del patrn de bandas. En D. melanogaster, muchas
de estas reordenaciones cromosmicas se han podido asociar a mutantes
fenotpicos determinados, facilitndose la correlacin entre mapas
citolgicos y mapas genticos. Actualmente, la posicin exacta de genes
concretos en el mapa citolgico puede determinarse mediante la tcnica de
hibridacin in situ.

Fig. 4. Mapa gentico, mapa citolgico y fotomapa de las seis primeras

regiones del cromosoma X de D. melanogaster.
OBJETIVO GENERAL:
Aprender a preparar cromosomas politnicos de Drosophila melanogaster
para su observacin al microscopio
Objetivos didcticos:
Aprender el uso del microscopio mediante la observacin de
preparaciones de cromosomas politnicos de D. melanogaster

Aprender a preparar cromosomas politnicos a partir de glndulas

salivares de larvas.

Conocer y practicar las tcnicas ms usuales en la citogentica,

utilizando material biolgico.

Conocer e identificar la existencia de cromosomas gigantes en clulas

glandulares salivales de Drosophila melanogaster as como conocer
su importancia en el campo de la gentica

MATERIAL REQUERIDO:

Cubreobjetos

Caja de petri

Estereoscpio

Aguja de diseccin

Microscopio ptico

Material biolgico:
Larvas de 3er estadio de la mosca
Material reactivo:

Reactivo de aceto orcena

DESARROLLO DE LA PRCTICA:
METODOLOGA:
1. Colocar una larva limpia en un portaobjetos con una gota de NaCl al
0,6%. Situar el
porta sobre la plataforma de la lupa. Como puede
observarse en la figura 6, las glndulas salivales se encuentran unidas
entre s por la parte anterior en un conducto nico que se comunica con la
faringe.

Figura 6: Esquema interno de una larva de Drosophila.

Para extraer las glndulas, se sujeta la parte posterior de la larva con unas
pinzas y
se decapita con una aguja enmangada (Fig. 7). Las glndulas aparecern
como dos
saquitos transparentes, situados a ambos lados del esfago, y unidos a
tejido graso.

2. Aislar las glndulas lo mejor posible pero con cuidado de no daarlas. No

es excesivamente problemtico el hecho de que quede un poco de tejido
graso adherido.
3. Transferir las glndulas a una gota de colorante (orcena actico-lctica) y
mantenerlas durante 25 minutos. Este tiempo se determina empricamente
y depende de la marca de colorante y de la cepa utilizada. Es necesario que
las glndulas permanezcan cubiertas por el colorante ya que, de no ser as,
se secarn y se estropear el material.
4. Tras la tincin, cubrir la preparacin con un cubreobjetos y dar unos
golpes suaves con la punta de la aguja enmangada para que las clulas se
separen. A continuacin, cubrir la preparacin con papel absorbente y
hacer presin sobre el cubreobjetos, evitando que ste se mueva, para que
los cromosomas se extiendan y queden perfectamente aplanados.

PRESENTACIN DE LOS RESULTADOS:

Presentarn un resumen de la prctica en el que figure un esquema de lo
que ha obtenido en sus preparaciones.
PREGUNTAS
1. Dibuje e identifique los cromosomas. Cuntos cromosomas politnicos
observa?
2. Cul ser el nmero diploide de cromosomas del organismo que trabaj?
3. En estas especies est presente o no el cromocentro?
4. Cules son los marcadores cromosmicos ms evidentes en estos
cromosomas?
5. Investigue cmo es posible determinar el centrmero en estos
cromosomas, hay constriccin primaria?

7. Puede observar asinapsamientos? Represente y localice los

asinapsamientos que registre,
8. Observe los telomeros de todos los cromosomas, encuentra alguna
diferencia en los telmeros de los diferentes pares de cromosomas?
9. Cuales son las principales caractersticas que permiten la diferenciacin
de los cromosomas politnicos?
10. Consulte en la literatura cules son las aplicaciones de los cromosomas
politnicos en sistemtica.