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ENSAYO SOBRE EVALUACION POR ENSAYO COMETA DEL DAO

GENOTOXICO INDUCIDO POR EXTRACTOS DE PLANTAS MEDICINALES

En Mxico, tanto en otros pases existen una vasta variedad plantas que el ser
humano ha utilizado de forma medicinal desde tiempos muy remotos, de hecho en
la actualidad en la industria farmacutica muchos medicamentos contienen
principios activos que han sido extrados de plantas, como es el ejemplo del cido
saliclico, extrado de la corteza del sauce, y as podramos mencionar ms
ejemplos en los que las plantas han sido de gran ayuda para el ser humano
respecto al cuidado de su salud. Otro aspecto importante a considerar es sobre la
capacidad que se le provee algunas plantas de tener efectos inmunoestimulantes
y de ser usadas para el tratamiento del cncer como es el caso de Justicia
spicigera Schltdl, usada en la medicina tradicional mexicana. Sin embargo en la
mayora de los casos no se le ha tomado tanta importancia en saber ms all de
los posibles efectos que pudieran tener en caso de ingerir las dosis incorrectas, ya
que estudios han demostrado que diversos compuestos qumicos presentes en las
plantas pueden afectar el ADN, produciendo a largo plazo trastornos en la salud.
Para poder evaluar este dao de genotoxicidad en las clulas, hay tcnicas que
estn diseadas para medir la capacidad de un compuesto de provocar un efecto
mutagenico, una de esas es el Ensayo Cometa, una electroforesis en gel de
clulas individuales, el cual se distingue por su sensibilidad para detectar bajos
niveles de dao al ADN, requiere poca cantidad de muestra, flexibilidad, adems
de que se puede obtener informacin del dao en clulas aisladas, ya que la
mayora de los mtodos solo se encargan de dar una respuesta promedio. El
fundamento de esta tcnica consiste en obtener el ADN por medio de una lisis
celular llevada a cabo por detergentes y concentraciones altas de sal y
posteriormente someter al ADN a un campo elctrico a pH neutro, esto para que
las clulas en las que exista incremento en el dao de ADN se formen fragmentos
y al ser sometidos a una corriente elctrica tengan la capacidad de penetrar la
malla de agarosa migrando hacia el nodo. Dependiendo del tamao de los
fragmentos, ser el resultado de la migracin
Para evaluar el dao inducido por los componentes de plantas utilizadas en la
medicina tradicional de Argentina (Chenopodium multifidum L.; Lithraea
molleoides; Styphnolobium japonicum; Schkuhria pinnata; Prosopis alba; Solanum
sysimbriifolium) y Justicia spicigera, planta originaria de Mxico se utilizaron
clulas mononucleares perifricas para poder observar el dao producido al ADN,
para esto se emplearon varias concentraciones de los extractos etanlicos de las
plantas, con el propsito de conocer hasta que cantidad de extracto de la planta se
produca un dao relevante ADN. Un aspecto importante a considerar para la

obtencin de las muestra de sangre humana, era conocer si el paciente a evaluar


no presentaba antecedentes de causas externas que afectaran el ADN como es la
exposicin al tabaco o a la radiacin, para que estos factores no influyeran al
momento de obtener los resultados, fue por esta razn que se eligieron pacietes
Otra estudio importante que se desarrollo fue la viabilidad celular con sangre
entera de los dadores, para evaluar si los daos al ADN iban acompaados de
efectos citotxicos. La tcnica se realiz a travs del colorante FDA/bromuro de
etidio, no obstante la viabilidad obtenida fue de ms del 70% en todos los
tratamientos, es decir, que al existir dao al ADN es por la interaccin de los
principios activos con el material gentico y no por destruccin de las membranas
celulares. Como en toda experimentacin, cabe destacar, se usaron controles
positivos, Perxido de hidrogeno, el cual es muy oxidante y controles negativos,
en este caso agua destilada.
La electroforesis de una sola clula (ensayo cometa) se llev a cabo con los
diferentes extractos y los distintos dadores, a sus respectivas concentraciones. La
tcnica se realiz aadiendo gel de agarosa y la muestra problema/controles
sobre el cubreobjetos para que despus de colocarlos en la solucin de lisis, los
fragmentos de ADN pudieran trasladarse hacia el nodo en la electroforesis. Para
obtener los resultados se determinaron distintos rangos para la comparacin del
dao que dependan del largo del cometa: bajo (<20 m); medio (20-40 m); alto
(40-80 m) y clulas totalmente daadas (>80m). En los resultados obtenidos se
demostr que cuatro de las seis especies evaluadas indujeron un incremento en
las roturas en la doble hlice del ADN, sin embargo hubo distintas variaciones ya
que tiene que ver mucho la suceptibilidad de cada persona para los extractos.
En el caso de la planta Justicia spicigera se realizaron ms pruebas aparte de las
ya mencionadas, lo cual me parece de mucho inters ya que complementa el
estudio. Una de ellas fue un mtodo para la deteccin de apoptosis sobre clulas
cancergenas, donde la planta JS solo indujo al 7% de la apoptosis celular; otra
prueba fue sobre conocer la toxicidad aguda de la planta en ratones, donde seran
observadas la mortalidad, cambios conductuales y otros signos txicos. La dosis
en la que se observ un dficit neurolgico fue a los 1600 mg/kg, la cual considero
elevada en comparacin a lo que usualmente las personas consumen, por ello se
considera de baja toxicidad. Otra prueba fue sobre la capacidad de esta planta al
ejercer efectos antitumorales, inhibiendo los tumores de clulas significativamente
en un 44% (50 mg/kg) y 51% (100mg/kg). En otro estudio se encontr que JS
estimul la fagocitosis de las clulas de Saccharomyces cerevisiae por los
macrfagos diferenciados humanos. Por lo tanto, Justicia spicigera podra ser una
buena fuente para frmacos potenciales contra el cncer debido a su baja
toxicidad, efectos antitumorales y actividades inmunomoduladoras.