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tabla 1 pruebas de inhibicin

tubo

inhibidor

Abs(410nm)
unidades de tripsina
(UT)

% de inhibicin

3
frijol

0,307
87,714285
7

0,307
87,71428
57

4
frijol

0,124

5
soya

0,125

6
soya

0,31

7
garbanzo

0,353

0,256

tubo

Abs(410nm)

0,158
0,0375

velocidad(Abs/min)

0,0086

0,0158

1/[S]

53,333
3333

26,666
6667

17,77
77778

1/V0

116,27
907

63,291
1392

44,24
77876

0,075
0,028
5
13,33
3333
3
35,08
7719
3

0,317
0,093
75
0,031
7
10,66
6666
7
31,54
5741
3

0,328
0,112
5
0,032
8
8,888
8888
9
30,48
7804
9

0,394
0,131
25
0,039
4
7,619
0476
2
25,38
0710
7

0,456

0,226
0,056
25
0,022
6

0,285

[S](mg/mL)

0,086
0,0187
5

tubo

6,66666667
21,9298246

0,016

0,034

0,032

0,05625

0,045
0,112
5
0,004
5
8,888
8888
9
222,2
2222
2

0,069
0,131
25
0,006
9
7,619
0476
2
144,9
2753
6

0,07

0,0375

0,08
0,093
75

[S](mg/mL)

0
0,0187
5

velocidad(Abs/min)

0,0016

0,0034

53,333
3333

26,666
6667

17,77777
78

0,075
0,003
2
13,33
3333
3

625

294,1176
47

312,5

1/Vi

0,0456

Abs(410nm)

1/[S]

0,15

tiempo de
reaccin:10
minutos.

Sustrato:BAPNA

garbanzo
0,251

31
31,25
77,5
88,25
64
62,75
35,342019 35,627035 88,355048 100,61074 72,964169 71,539087
5
8
9
9
4
9

tabla 2. Estudio cintico de tripsina en ausencia de


inhibidor
tiempo de
reaccin:10
Sustrato:BAPNA
minutos

tabla 3. Estudio cintico de


tripsina en presencia de
inhibidor

0,008
10,66
6666
7
125

0,15
0,007
6,666
6666
7
142,8
5714
3

Tabla 4 Efecto del calentamiento sobre la actividad de los


inhibidores de Tripsina
Tubo
Tiempo de
calentamiento(min)
sin inhibidor

con inhibidor sin calentar


inhibidor
con inihibidor calentado a
ebullicin

15

30

60 A

15

30

60

15

UTI
Abs
410nm

0
0,32
8

0
0,32
8

0
0,32
8

0
0,32
8

0
0,32
8

UTI
Abs
410nm

70,7
5
0,04
5

70,7
5
0,04
5

70,7
5
0,04
5

70,7
5
0,04
5

70,7
5
0,04
5

UTI
Abs
410nm

34,5

44,5

29,5

0,19

0,15

0,21

38,7
5
0,17
3

1,5
0,32
2

Anlisis de resultados
- En las pruebas de inhibicin se tena como objetivo determinar
cual de las tres leguminosas tena una mayor actividad de
inhibidor de Tripsina, dando como resultado que el extracto de
frijol era el ms apto para la cintica de inhibicin, ya que fue el
que dio menor actividad en unidades de tripsina y se entiende
que fue debido a los inhibidores presentes en esta leguminosa.
- Para las pruebas de inhibicin se trabaj con 1,5 mL de solucin
de inhibidor de cada una de las leguminosas de dilucin 1:25
por lo que no se entiende que para la cintica de inhibicin
haya dado un valor menor de absorbancia, ya que se trabaj
con un volumen de inhibidor de 0,75 mL diluido a 1:50. Lo ms
probable es que haya sido un error de procedimiento en las
pruebas de inhibicin, un mayor volumen de enzima o sustrato
aadido, ya que las dems cinticas muestran valore de
absorbancia pequeos en presencia de inhibidor.
- En la cintica de la tripsina en ausencia de inhibidor, se trabaj
con las absorbancias obtenidas hasta el tubo 6, ya que el tubo
7 y 8 daban valores de absorbancia que desviaban el sistema
de una cintica de tipo enzimtico. El problema pudo ser que
sobrepas el tiempo en el termostato, por lo que hubo mayor
formacin de producto.

Las grficas obtenidas en el sistema tripsina con inhibidor,


muestran que la inhibicin es de tipo no-irreversible o de
inhibidores que se fijan fuertemente al sitio cataltico de la
enzima, ya que no siguen una cintica de Michaelis. Esto se
debe a que los inhibidores de la tripsina son protenas de bajo
peso molecular que se fijan fuertemente al sitio cataltico,
formando un complejo-enzima difcil de disociar con el aumento
de la concentracin de sustrato y aunque hay ruptura del
carbonilo de lisina o se retire completamente el inhibidor del
medio, la protena seguir inhibiendo la enzima.
Para el anlisis del efecto del calentamiento sobre los
inhibidores, vemos que la fraccin llevada al autoclave, tiene
una baja cantidad de UTI(unidades de tripsina inhibida) ,
demostrando que este tipo de protenas que disminuyen la
calidad de los alimentos pueden ser parcialmente neutralizadas
por un cambio brusco de temperatura y presin. Para las dems
temperaturas, vemos que las UTI varian muy poco con la
temperatura y esto se debe a que los inhibidores de tripsina
son protenas que no se desnaturalizan tan fcilmente con la
temperatura, debido a la alta presencia de enlaces bisulfuro
que la dan una estabilidad mayor que a la misma tripsina

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