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CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Cruz, R., Ivan; Delgado, P., Jared; Garca, G., Leonardo; Fernndez J., Adrin
Campus Universitario Siglo XXI, Edificio 6, Kilometro 6 carretera Zacatecas-Guadalajara s/n Ejido
la escondida, C.P. 98160, Zacatecas, Zac., Tel (492)9256690 ext. 6129, 6131, 6132, 6133, 6693,
6125
haveth02@hotmail.com

Resumen:
La cromatografa es un proceso de separacin y anlisis de una mezcla en dos o
ms compuestos que involucra la distribucin de los mismos en dos fases, una
mvil y otra estacionaria. La cromatografa comprende una amplia gama de
variedades para poder llevar a cabo este proceso, las cuales dependen de la
naturaleza de las dos fases involucradas en la determinacin cromatogrfica, la
cual puede ser slido-lquido, lquido-lquido o lquido-vapor. La cromatografa que
llevamos a cabo fue una del tipo slido lquido, especficamente cromatografa de
capa fina (CCF), donde la fase estacionaria se encuentra en una placa especial, la
cual est recubierta con el compuesto que forma la fase estacionaria. El uso de la
fluorescena fue esencial para poder determinar cunto se desplaz cada
componente.
Abstract:
The chromatography is a separation and analytical process of a mix that is
separated in two or more compounds that are distributed between two phases, one
of them mobile and the other one stationary. The chromatography has a lot of
varieties to make the best performance of the process, these varieties are related
to the nature of the two phases involved in the chromatography determination,
there are solid-liquid, liquid-liquid, and liquid-vapour. The chromatography that we
use in this work was a solid-liquid type, specifically the thin layer chromatography
(TLC), where the stationary phase is in the cover of a special sheet. The use of the
fluorescein is an important factor to determine how much each compound was
displaced.
Palabras clave: cromatografa, CCF, fluorescena, capilaridad, eluyente.

Introduccin
La cromatografa es un proceso de
separacin y anlisis en el cual se
encuentran involucradas dos fases,
una mvil y otra estacionaria.
En la cromatografa analtica en capa
fina, la fase estacionaria o tambin
llamada, absorbente, se encuentra
colocada uniformemente, formando

una finsima capa de un espesor en

torno a 0.1 mm, sobre un soporte o
placa de vidrio o metal.
La mezcla que deseamos analizar se
colocar a una corta distancia del
borde inferior de la mencionada
placa, la cual introduciremos en una
cubeta o recipiente que contendr la
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fase mvil, o tambin llamado,
eluyente.
La fase mvil ir ascendiendo poco a
poco sobre la placa de la fase
estacionaria a travs de capilaridad,
desplazando
a
los
diferentes
componentes de la mezcla a analizar,
a distintas velocidades, lo que
provocar la separacin de la mezcla.
Cuando el frente del disolvente se
site prximo a la parte superior de la
placa, sacaremos la placa de la
cubeta con la finalidad de dejarla
secar para poder ver las manchas de
los diferentes componentes.
La relacin de las distancias
recorridas por el compuesto y por el
disolvente, desde el punto de origen
del cromatograma, se conoce como
Rf (rate factor), el cual posee un valor
constante para cada compuesto en
condiciones determinadas. Estas
condiciones pueden ser el tipo de
absorbente utilizado, el tamao de la
cubeta, la temperatura, el disolvente,
etc. Es poco factible reproducir
exactamente
las
condiciones
experimentales, as que se suele
comparar una muestra con otra,
eluyendo ambas dentro de la misma
placa.
As, para poder calcular el Rf, se
sigue la siguiente frmula mostrada
en la figura 1:

Figura 1. Clculo del Rf

La
distancia
que
recorre
el
compuesto se suele medir desde el
centro de la mancha, por lo cual se
suelen hacer unas marcas en la
placa, si dichas manchas son
extremadamente grandes, el valor del
Rf ser errneo. As realizamos unas
marcas
en
la
placa
donde
depositaremos con ayuda de una
pipeta un mnimo de muestra.
Para
elegir
un
eluyente,
se
recomienda elegir un disolvente en el
que los componentes que formen la
mezcla presenten un Rf de entorno a
un 0.3 un 0.5. Para encontrar el
eluyente ideal, es necesario probar
con diferentes disolventes de distintas
polaridades o con mezclas de varios
de ellos. En estos casos, debemos
cambiar a disolventes ms o menos
polares, segn sea el caso.
Los eluyentes ms comunes usados
en
la
CCP
son:
n-hexano,
ciclohexano, tolueno, acetato de etilo,
acetona,
isopropanol,
dietil-ter,
metanol, etanol, cloroformo y cido
actico.
Una vez realizada la cromatografa,
pasamos a su visualizacin. La gran
mayora
de
las
placas
cromatogrficas
contienen
un
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producto indicador fluorescente que

permite la visualizacin de los
compuestos que son activos a la luz
ultravioleta, concretamente a 254 nm.
El indicador absorbe la luz UV, y
emite luz visible, por lo general de
color verde. La presencia de un
compuesto activo que se encuentra
en el UV evita que dicho indicador
absorba luz en la parte en la cual
hemos colocado el producto, lo cual
se traduce en ver una mancha en la
placa lo que nos indica la presencia
de un determinado compuesto.
Cuando se trata de compuestos que
no consiguen absorber la luz UV, la
visualizacin
del
cromatograma
necesita usar un agente revelador.
Dicho revelador debe reaccionar con
los productos que son absorbidos
dando compuestos de colores. Por lo
cual, el revelador a usar depende del
tipo de compuesto que queramos
visualizar.
Algunas de las desventajas de la
cromatografa en capa fina son las
siguientes:
-Hay que tener presente la volatilidad
de los disolventes cuando se escojan
sistemas de disolventes para su uso
en ciertos climas.
-Algunos
disolventes
son
potencialmente peligrosos para la
salud y el medio ambiente; as, habr
de tenerse cuidado en su eleccin
(por ejemplo, cloroformo, benceno,
ter).
Material y mtodo
Equipo, materiales
Capilar
Vaso de precipitados
Laminas cromatogrficas
Luz ultra violeta

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Perilla de succin
Pipeta

Concentracin
de la Solucin
9:1
8:2
7:3
6:4
REACTIVOS
Acetato de etilo
Hexano
Fluorescena

RF
0
0.1136
0.4286
0.6744

Se prepararon cuatro muestras de

diferente composicin entre hexano y
acetato de etilo, cada una de las
cuales contenida en 2ml en relacin
9:1, 8:2, 7:3 y 6:4.
El mtodo usado para llevar a cabo la
cromatografa fue el siguiente:
Primeramente se limpia el capilar con
acetato de etilo, para esto se debe
humedecer el mismo y luego secar,
este procedimiento se repite tres
veces.
Para preparar la placa se debe hacer
una marca en el lugar donde se va a
depositar la fluorescena, a fin de
poder medir el desplazamiento
respecto de sta. Al ponerla se debe
nicamente tocar la placa y retirar de
inmediato, no se debe dejar tiempo
en contacto.
Finalmente se introduce la placa en la
solucin que se quiere determinar, se
deja ah hasta que la mezcla suba
(por capilaridad) hasta poco antes del
lmite superior de la placa.
Se debe tener cuidado que la placa
est lo ms vertical posible, esto sin
que est completamente pegada a la

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pared del recipiente que contenga la

muestra a separar y analizar.
Para revelar las manchas que dejaron
los compuestos de la mezcla en la
placa slo se coloca sta en un
revelador de rayos UV o una solucin
de yodo o se roca con un poco de
cido sulfrico 1:1.
Resultados y Discusin
A partir de la frmula dada para
calcular el Rf estos fueron los datos
obtenidos para cada solucin por
cada equipo:
Con estos datos se puede realizar
una grfica que nos muestre el
comportamiento del Rf en funcin de
la concentracin de hexano:
Rf vs composicin
1
Rf 0.5
0
5

f(x) = - 0.23x + 2.06

R = 0.97

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Composicin Hexano

Grfica 1. Comportamiento Rf

En la grfica, podemos observar el

comportamiento esperado en la
separacin del compuesto, ya que
mientras mayor es la composicin de
hexano
(compuesto
no
polar)
obviamente la presencia del acetato
de etilo (compuesto polar) es menor,
por lo que la mayor parte de la
mezcla queda en el indicador, es
decir, la fluorescena, debido a la
similitud de polaridades.

El Protonador
As, se observa que al aumentar la
concentracin de acetato de etilo
(porque disminuye la de hexano) el Rf
es mayor, debido a que se observa
un mayor desplazamiento.
Si nos detenemos a observar el
primer dato de la tabla, o el punto de
mayor concentracin de hexano en la
grfica, nos daremos cuenta que
cuando hay poco acetato en la
solucin, no hay valor del Rf, debido
a que el desplazamiento es nulo, es
decir, no lo hay, por lo que podemos
inferir que la concentracin de
acetato es tan baja que es
prcticamente absorbida por el
hexano y no presenta separacin
alguna, como si la solucin fuera slo
de hexano.
Por
tanto,
se
obtuvo
el
comportamiento esperado, mismo
que se constata tanto en la tabla de
resultados como la grfica que
muestra el comportamiento del Rf
como funcin de la concentracin.
Conclusiones
Con este trabajo de separacin
cromatogrfica pudimos conocer,
observar y realizar los pasos y
tcnicas necesarios para llevar a
cabo una cromatografa en capa fina
(CCF).
De la misma manera, se logr
observar que este mtodo nos ayuda
a conocer los componentes de una
mezcla, debido a la separacin que
experimentan cada uno por separado.
Referencias
SOLOMONS,
GRAHAM;
Qumica
Orgnica, segunda edicin, Limusa,
Mxico, 2002

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MORRISON, ROBERT, T., ET AL;
Organic Chemistry, third edition, Allyn
and Bacon Inc, USA, 1979

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