Transformasi Plasmid ke Sel Inang E.

coli DH5
E. coli DH5 yang digunakan merupakan sel yang sudah bersifat
kompeten.
Peralatan yang dibutuhkan untuk proses transformasi antara lain adalah
1.
2.
3.
4.
5.

Incubator pengocok dan tanpa pengocok 37 C

Pelat agar LB dengan antibiotic ampicillin berdiameter 10 cm
Wadah berisi es
Water bath 42 C
Rak tabung reaksi untuk memungkinkan semua tabung transformasi
diletakkan bersamaan pada water bath

Prosedur pelaksanaan transformasi plasmid ke dalam sel E. coli DH5

1. Mencairkan vial 50 l yang berisi sel E. coli DH5 selama 5-7 menit
2. Mengambil 2 l campuran reaksi mutagenesis dengan pipet ke
dalam vial sel E. coli DH5 dan dicampur dengan ditepuk secara
perlahan
3. Menutup vial, diinkubasi dalam es selama 7-10 menit
4. Memindahkan vial ke rak tabung reaksi dan diinkubasi dalam water
bath 42 C selama 30 detik.
5. Memindahkan rak tersebut dan didiamkan dalam es selama 1 menit
6. Memindahkan keluar dari es dan ditambahkan 200 l medium SOC
yang sudah dihangatkan ke dalam vial
7. Tutup kembali dan diletakkan pada rak microcentrifuge
8. Diinkubasi pada incubator pengocok selama 1 jam pada 225 rpm
dan 37 C
9. Melabel pelat agar LB dan dihangatkan selama 30 menit pada
incubator 37 C
10.
Mengambil 125 l transforman dan dipindahkan ke pelat agar
LB
11.
Transforman disebar di atas pelat agar LB
12. Inkubasi pada 37 C selama 16-20 jam