Microbiologa General y Bucal

Prctica 1: El laboratorio de
Microbiologa
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Prctica 1

Prctica 2

Prctica 3

Prctica 4

Prctica 5

Prctica 6

Descripcin
Un laboratorio de Microbiologa es un lugar habilitado para manejar y estudiar microorganismos.

El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estndares tcnicos y de seguridad propios de un laboratorio de M
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes en la muestra por lo que
precauciones para evitar contaminaciones que den lugar a resultados errneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaucin por su potencial patogenicidad.

Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que deben ser esterilizados p

Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura comn sin haber sido esteriliza

El el laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en caso de vertidos:

Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido con soluci

70%, desinfectante fenlico diluido, etc.). Aclarar con agua los restos de desinfectante.

En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas metlicas, limpiar posteriomente para ev

En caso de derramamientos de material peligroso o formacin de aerosoles: evitar inspiraci

esperar 30 minutos hasta que las partculas se hayan depositado y limpiar con mascarilla, g
protectores.

En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con desinfectante y posteriormente cu

humedecido con desinfectante. Dejar durante 15 minutos y limpiar. En caso necesario aclar

En caso de derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel humedecid

cuando sea necesario.

Los laboratorios debern disponer de los aparatos e instrumental necesario para el correcto desarro
Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiologa Clnica que
monitorizacin de los medios e instrumentos, con el fin de asegurar la adecuada realizacin de los
identificacin y caracterizacin de los patgenos y la realizacin precisa de las pruebas de sensibil
antimicrobianos como referencia teraputica. El sistema de la calidad deber contemplar la existen

formacin de personal.

es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de proteccin personal en el m

aparatos.

Los equipos del laboratorio deben funcionar de forma que se asegure la reproducibilidad de los res
diagnsticas.

El laboratorio deber estar bajo la direccin y responsabilidad de un facultativo con la especialidad

legalmente capacitado para realizar aqullas determinaciones clnicas que el laboratorio tenga auto

El personal tcnico y sanitario del laboratorio deber disponer la titulacin adecuada para las func
conformidad con la legislacin vigente.
Estructura de un laboratorio de Microbiologa Clnica

rea administrativa
rea de recepcin de muestras
rea de extraccin que deber:

Disponer de material de un solo uso para contacto con muestras biolgicas.

Disponer de un rea de extracciones y toma de muestra, una sala de espera para los pacientes y los
correspondientes.
Disponer de personal legalmente autorizado para la toma de muestras.
Disponer de un manual de extraccin, toma y transporte de muestras.
El manual antedicho deber ser elaborado por el responsable
rea de trabajo: anlisis y procesado de muestras
El puesto de trabajo debe debe de estar limpio y ordenado

El material necesario debe prepararse antes de empezar a trabajar y colocarse de forma adecuada para que se f
evitarn accidentes y se minimizar el riesgo de contaminacin

Nunca se debe pipetear con la boca. Utilizar siempre elementos manuales o automticos.
Todo el material utilizado debe estar estril.

1. Elementos y materiales ms frecuentes de un laboratorio de Microbiologa Clnica

1.1. Mesas de laboratorio y fregadero

1.2. Vitrinas y armarios

1.3. Mechero Bunsen

Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del mechero (zona asptica)
En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama

Antes de comenzar a trabajar se procurar disponer de todo el material necesario para el procesamiento de la m

Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminacin de las muestras o/ y cultivo por microorganism
1.4. Gradillas

1.5. Estufa de incubacin

Es una cmara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.

Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura ptima de crecimiento (generalm

1.6. Frigorfico o cmaras refrigeradas

Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos.
Generalmente estn a una temperatura fija de 4C.

1.7. Congeladores

Se utilizan para la conservacin de reactivos y microorganismos a temperaturas inferiores a 0C, llegando a -8

-20, -40 y -80).

1.8. Microscopio ptico

1.9. Centrfuga

Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrfuga lo que permite la separacin de los distintos compone
la precipitacin en el fondo del tubo de las partculas en suspensin.

1.10. Cmaras de seguridad biolgica (ver practica 2)

1.11. Desionizador de agua.

La mayor parte de los trabajos que se realizan en un laboratorio de Microbiologa Clnica necesitan la utilizaci
de evitar cualquier tipo de interferencia. Entre otra caractersticas debe: estar exenta de materiales en suspensi
entre 5,0 y 7,5. Durante aos se ha utilizado agua destilada, en la actualidad los destiladores se han ido aband
a desionizadores que funcionan con resinas de intercambio inico. Tambin se pueden utilizar otras tcnicas c

1.12. Contador de colonias: Es un aparato que mediante la iluminacin de la placa y una lupa, nos permite ob
colonias y por tanto facilita su recuento.

1.13. Balanzas

1.14. Baos termostticos: son recipientes que contienen agua y un sistema de regulacin de la temperatura.
medios de cultivo o incluso para incubar cultivos de microorganismos.

1.15. Agitador/ mezclador

vortex

agitador horizontal

1.16. Jarras de anaerobios:

Recipientes que se usan para conseguir una atmsfera libre de oxgeno para el cultivo de microorganismos

1.17. Asas de siembra:

Se utilizan para sembrar. Pueden ser metlicas o de plstico, curvas o rectas (para la siembra por picadura).

1.18. Ph-metros:

1.19. Material fungible

Placas de Petri: recipientes para la preparacin de medios de cultivo slidos

Placas de Petri con medio slido

Tubos con medio lquido

Tubos con medio slido

Pipetas de vidrio, de plstico y pipeteadores.

Pipetas

Pipeteador automtico

Pipeteador manual

Pipetas automticas (micropipetas) y puntas de pipeta:

Se utilizan para pipetear pequeas cantidades de lquidos.

Se utilizan con puntas desechables de distinto tamao y color segn la micropipeta. Existen cuatro tamaos: d
20-200 m y de 200-1000 m.

Asas acodadas o Asas de Digralsky:

Se utilizan para la extensin de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri.

Portas y cubres
Para realizar las observaciones al microscopio.

Vasos de precipitados y matraces

Cucharas y esptulas:
Se utilizan para pesar muestras o medios de cultivo.

rea de limpieza de material y eliminacin de residuos

Zona donde se procede a la esterilizacin mediante autoclave del material utilizado. El material de
el material reciclave se procede a la eliminacin de residuos y lavado. De esta manera el material q
utilizado.
rea de esterilizacin

Procedimiento por el que se consigue la muerte de todos los organismos vivos y formas de resistencia en
Autoclave

Es el equipo ms utilizado.

Es un procedimiento de esterilizacin mediante c alor hmedo. Se realiza en al autoclave durante 15

a 115C 121C, segn la naturaleza del material que se desee esterilizar.

Autoclavado: es un procedimiento en el que se emplea vapor a presin (a 1 atmsfera). Como tiene g

temperatura y el tiempo utilizados son menores que los que se emplean con el horno Pasteur (121 C, 15-20 m

Se utiliza para esterilizar: Medios de cultivo, ropa, material de plstico resistente al calor hmedo, objetos
con la humedad y sobre todo material de vidrio.

Horno de Pasteur: emplea altas temperaturas (160-180 C) durante un tiempo prolongado (1.5 a 3 hor

capacidad de penetracin se usa para esterilizar vidrio y metales. Acta principalmente desnaturalizando l
secundariamente oxidando los compuestos celulares.

rea de preparacin de medios

Almacn de reactivos

rea de seguridad microbiolgica

Debe ser una zona diferenciada y aislada para la manipulacin de microorganismos susceptibles d
potencialmente infecciosos.