DETERMINACIN DE CAFENA EN BEBIDAS GASIFICADAS

1.RESUMEN DE LA TCNICA EMPLEADA

En este trabajo se us el mtodo de la espectrofotometra UV visible, con la cual
se determin el espectro de absorcin de energa de la cafena en la regin
ultravioleta, a partir de la cual se determin la longitud de onda mxima, luego
de lo cual se estableci la curva de calibracin, para determinar la concentracin
de la cafena en bebidas gasificadas, haciendo uso de la adicin de patrones
externos, el cual se us para establecer una relacin entre absorbancia y
concentracin. Despus que se decidi las condiciones de anlisis, se prepar la
curva de calibracin a partir de una serie de soluciones patrn que abarcan el
intervalo de concentraciones esperados en la muestras ( las soluciones patrn se
prepararon a partir de una muestra de cafena, de la cual se obtuvieron
concentraciones de 3, 5, 7 y 10 ppm). Con estas condiciones, se analizaron 8
muestras de bebidas gasificadas, entre ellas un energizantes.( 7Up, Inca Kola,
Guaran, Fanta y Volt; las concentraciones determinadas fueron 2, 6, 8, 5,13,
ppm, respectivamente). Para la realizacin de este experimento se utiliz el
Espectrofotmetro UV - 1700 - SHIMADZU. El objetivo de este proyecto es el
estudio de la cafena en diferentes compuestos comerciales y su determinacin
cuantitativa.

2. PRINCIPIOS TERICOS
Se basan en la determinacin del espectro de absorcin de energa radiante por
unas sustancias en la regin ultravioleta, a partir del cual se determina la
longitud de onda de mxima adsorcin. Con esta longitud de onda se establece la
curva de calibracin a partir de soluciones estndares preparadas a partir de una
solucin stock.
Espectroscopia UV-Vis
La espectrofotometra de ultravioleta-visible es una tcnica de medicin de
concentracin de masa de elementos y compuestos qumicos (anlisis
cuantitativo), cuyo principio es la interaccin entre la energa electromagntica
con la materia. En forma ms especfica la espectrofotometra ultravioleta-visible
se fundamenta en medir la radiacin monocromtica absorbida por un elemento
molcula causante de desplazamientos electrnicos a capas superiores, estas
transiciones determinan la regin del espectro en la que tiene lugar la absorcin.
La ley fundamental en la que se basan los mtodos espectrofotomtricos es la de
Bouguer-Beer, Lambert y Beer y establece:
La relacin entre la intensidad de la luz transmitida o energa radiante I y la
energa radiante incidente I0 es una funcin del espesor de la celda b a travs
del medio absorbente, de acuerdo a:
A= a*b*c
Donde:

A=absorbancia
b= espesor de celda
a=absortividad
c=concentracin

La cantidad de energa electromagntica monocromtica absorbida por un

elemento es directamente proporcional a la concentracin de la(s) especie(s) que
absorbe(n) y a la longitud de la trayectoria de la muestra para un conjunto de
condiciones instrumentales establecidas.
La absorcin de energa en las regiones visibles y ultravioleta del espectro da
como resultado una excitacin electrnica. La regin del visible se extiende
desde 350 a 800 nm. La regin ultravioleta abarca desde 100 a 200 nm y se
divide en dos regiones diferentes: la regin de ultravioleta lejano, que se
extiende desde 100 a 200 nm y la llamada regin del ultravioleta cercano que va
desde 200 nm a 350 nm. Los datos espectrales de absorcin en el ultravioletavisible se suelen presentar como grficas de absorbancia o logaritmo del
coeficiente de extincin frente a longitud de onda.
Los componentes principales de un espectrofotmetro Ultravioleta-Visible son:
-

Fuente de radiacin
Monocromador
Fotmetro
rea de las muestras
Detector

DATOS DEL ESPECTROFOTMETRO SHIMADZU UV 1601

Measurement Wavelength Range(rango de medicin de longitud de

onda): 190-1100 nm
Spectral Band Width (Resolution): 2nm
Wavelength Display (visualizacin de longitud de onda): 0.1 nm units
Wavelength Setting (ajuste de longitud de onda): 0.1 nm units (lnm units
in scan)
Wavelength Accuracy (precisin de longitud de onda): 0.5nm On-board
automatic wavelength calibration mechanism
Wavelength Repeatability (repetibilidad de longitud de onda): 0.1nm
LCD: Backlit (320x240 dot), Adjustable contrast
Sample Compartment (compartimentos): Interior dimensions 110x230x105
(mm)(WxDxH) (Partial depth 155mm)
Power Supply(fuente de alimentacin): 220, 240V; 50-60 Hz
Dimensions (dimensiones): 550x470x380 (200 at closing LCD unit) (mm)
(WxDxH)
Weight (peso): 18 kg
Temperatura del ambiente: Room temperature 15~35C
Humedad: Humidity 45-80%.

CAFENA
La cafena es el estimulante leve psicoactivo ms consumido en el mundo, se
encuentra en bebidas no alcohlicas: caf, t, cacao, chocolate, bebidas
carbonatadas y gran variedad de frmacos de prescripcin y venta directa. La
cafena es un alcaloide del caf, t, cacao y otras plantas que contienen la
mayora de los refrescos de guaran, bebidas gasificadas, es una xantina

metilada, posee una estructura 1,3,7 trimetilxantina, las metilxantinas poseen

una escasa solubilidad, aunque sta se intensifica mucho por la formacin de
complejos con muy diversos compuestos. Los complejos ms notables son los
que se forman entre la teofilina y la etilendiamina. La formacin de sales dobles
en complejo o sales verdaderas tambin mejora su hidrosolubilidad.
Mecanismo de Accin:
El mecanismo de accin de la cafena se basa en el bloqueo de los receptores A1
y A2a de adenosina del sistema nervioso central. Esto produce una inhibicin de
la fosfodiesterasa que da lugar a un aumento de las concentraciones de AMPc y
de hecho, la cafena es considerada un antagonista competitivo de los receptores
de adenosina, localizados en las membranas celulares del sistema nervioso
central y del sistema nervioso perifrico.
Efectos beneficiosos para la salud
- Aporta energa y disminuye la depresin. La cafena estimula el
sistema nervioso, facilitando la coordinacin, mejorando el estado de
nimo y la motivacin. Incrementa la energa, la resistencia y la rapidez, y
disminuye el cansancio.
- Reduce el riesgo de sufrir Parkinson. A pesar de no haberse
demostrado una relacin dosis respuesta, la cafena podra disminuir el
riesgo de aparicin de la enfermedad de Parkinson (EP) en hombres y en
mujeres. Tambin se ha sugerido el uso de la cafena en otras
enfermedades neurodegenerativas: enfermedades de Alzheimer y de
Huntington.
- Mejora el asma y las alergias. La cafena dilata los bronquios,
combatiendo la crisis de asma y otras alergias. La cafena es una de las
principales sustancias de medicamentos para problemas respiratorios.
- Disminuye el riesgo de desarrollar cncer. Estudios realizados por
control de diferentes casos han relacionado el consumo crnico de caf
con la reduccin del riesgo de cncer colorrectal y de colon, pero ningn
estudio lo ha confirmado. La cafena presenta efectos supresores sobre
clulas tumorales en metstasis experimentales.
Carral Maha E.M, Determinacin analtica de la cafena en diferentes productos
comerciales. Barcelona, 12 de junio de 2011. Pginas 17-27
BEBIDAS CARBONATADAS
Las bebidas carbonatadas, no alcohlicas, se consideran como un lquido
burbujeante y refrescante al que se le ha agregado cierta mezcla de ingredientes
con el fin de satisfacer las preferencias de las personas que las consuman.
Contienen dixido de carbono disuelto, saborizantes, colorantes, etc. A pesar de
ser un producto competitivo en el mercado, algunos de los ingredientes que

posee son nocivos al organismo si se consumen en exceso ya que puede producir

daos a corto y largo plazo en la salud.
Sandoval Martinez, Ashly S. Cuantificacin De Cafena En Bebidas Carbonatadas
De Mayor Consumo Por Nios En Edad Escolar y Preadolescentes, En Colegios
Privados De La Ciudad Capital. Guatemala Octubre 2006 . pg 3-4
BEBIDAS ENERGTICAS/ ESTIMULANTES
Unas bebidas de difcil catalogacin son las que se autodenominan energizantes,
que ms bien en ciertos casos debieran denominarse estimulantes. As algunas
bebidas refrescantes de extractos vegetales incorporan sustancias estimulantes,
cuyo principal y prcticamente nico representante es la cafena, en unas
cantidades mximas de 150 mg/L.
Pero las bebidas estimulantes incorporan cantidades mayores de esta sustancia
y/o de otras de similar efecto que pueden llegar a ser perjudicial para personas
sensibles o en el caso de que se consuman grandes cantidades, lo que en ciertas
circunstancias entre la poblacin joven puede ocurrir, en un intento de
contrarrestar los efectos sedantes de las bebidas alcohlicas con las que se
acompaan. Muchas de ellas incorporan tambin aminocidos(taurina) minerales
y vitaminas, con la finalidad de satisfacer un incremento de sus necesidades en
situaciones de desgaste
Rodriguez Rivera Victor M. Bases de la Alimentacin Humana
2008 pg 124 -125
Estructura qumica de la cafeina
La cafena es un alcaloide del grupo de las xantinas ,concretamente pertenece a
la familia de las metilxantinas.las bases xanticas o pricas son alcaloides
derivados de la purina.Concretamente,provienen del anillo de la purina que se
forma a travs de la condensacin de una pirimidina con un imidazol.Fue aislada
del caf por primera vez en 1819 por Friedrich Fredinan Runge. Identificada
estructuralmente, en 1875, por E. Fischer, es una xantina (Fig.) que se encuentra
de forma natural en las hojas, semillas y frutos de ms de 60 plantas, entre ellas
el caf, el t, el cacao y la nuez de cola y en diferentes bebidas, preparaciones de
herboristera
y
productos
farmacuticos.(M.
Salazar, C. Peralta y
F. J. Pastor, 2009).

El espectro de absorcin de la cafena en cido clorhdrico 1 M presenta un

mximo de absorcin cerca de 268 nm, comparado con 273 nm en agua.(Harold
F. Walton y Jorge Reyes, 2005)
3. PARTE EXPERIMENTAL:
3.1 MATERIALES
4 vasos de 50 mL
02 fiolas de 25 mL
04 fiolas de 50 mL
02 fiolas de 10 mL
01 pipetas volumtricas
01 pipetas volumtricas
01 pipetas volumtricas
01 pipetas volumtricas
01 propipeta

de
de
de
de

1
2
3
5

mL
mL
mL
mL

3.2 REACTIVOS
Estndar de cafena y agua destilada
04 muestras de bebidas gasificadas
3.3 PROCEDIMIENTO
A. PREPARACIN DE LA MUESTRA
Se coloc 50 mL de la bebida gasificada en un vaso de 100 mL, luego se
desgasific en un agitador magntico por 15 minutos. Para luego tomar 1, 2 o 5
mL de la bebida desgasificada y llevar a volumen de 25 o 50 mL en una fiola con
agua destilada. ( Segn se muestra en los clculos ).
B. PREPARACIN DE ESTNDARES
Se pes 0,100 g de cafena y llev a la fiola de 100 mL. Se enrasa con agua
destilada.
Se tom 10 mL de la solucin anterior (inicial - 1000 ppm) y se llev a volumen
de 100 mL en una fiola con agua destilada (patrn A: 100 ppm).
Se tom del patrn A: 1, 3 y 7 ml y se llev a enrasar en fiolas de 100 ml con
agua destilada para la preparacin de las soluciones estndares a
concentraciones de 1, 3 y 7 ppm respectivamente.
Luego para la preparacin del patrn B se tom 1 mL de la solucin madre (inicial
- 1000 ppm) y se llev a volumen de 100 mL en una fiola con agua destilada
(patrn B: 10 ppm)

Con el patrn B se prepar el estndar a 5 ppm usando 5 ml del patrn y se

enrasa en una fiola de 10 ml con agua destilada y para el estndar a 10 ppm se
us el mismo patrn B.
C. PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIN PARA LA OPERACIN DEL
ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA- VISIBLE UV - 1700, SHIMADZU
Se encendi el supresor de picos y luego el estabilizador. Antes de encender el
espectrofotmetro se procedi a retirar del compartimiento de muestra la bolsa
que contiene el desecante. Luego se encendi el Espectrofotmetro, se abri la
pantalla y esper a que se realice la verificacin. Se encendi la computadora. Se
presion en el Espectrofotmetro, abri la pantalla y esper a que se realice la
verificacin. Luego se prendi la computadora. Se presion en el
Espectrofotmetro F4 (PC control) y cerr la pantalla. Se ingres al software UV
PROBE haciendo click en el icono UV PROBE. Se ingres al modo SPECTRUM y se
hizo clic en CONECT, para luego seleccionar BASELINE y hacer la correccin de la
lnea de base ( rango 190 a 400 mn)
y finalmente se coloc en el
compartimiento de muestra de las celdas (muestra y referencia) con el blanco y
se presiona AUTOZERO.
D. DETERMINACIN DE LA LONGITUD DE ONDA DE LA CAFENA
Se coloca en el compartimento de la muestra uno de los patrones. Se presiona
START. Luego se selecciona la longitud de onda de la cafena y se retira el patrn
del compartimientos de muestra y se descarta la solucin. Luego se procede a
poner al modo PHOTOMETRIC, seleccionar METHOD e ingresar el valor obtenido
de la longitud de onda de la cafena. Se llena la tabla con el blanco (BK) y los
estndares (ST1; ST2; ST3). Se coloc nuevamente el blanco en las 2 celdas y se
hizo click en blanco (BK) y luego click en READ y finalmente retiramos el blanco
del compartimiento de muestra y descartamos, realizamos el mismo
procedimiento.
E. TRAZAR LA CURVA DE LOS ESTNDARES DE 1, 3, 5, 7 Y 10 PPM.
Se coloc en la celda de muestra el estndar de 1 ppm y se hizo click en READ.
Se procedi a retirar el y descartar la solucin. Se lav la celda 2 veces con la
solucin estndar de 3 ppm y se rellen con esta. Se coloc en la celda de
muestra el estndar de 3 ppm y se hizo click en READ. Hecho esto se retir y
descart la solucin

F. LECTURAS DE LAS MUESTRAS

Rellenamos las tablas con las muestras (M1; M2; M3 ; M4 ; M5 Y M6). Luego se
lav la celda 3 veces con agua destilada y se coloc en la celda de muestra M1 y
hizo click en READ. Se retira y descarta la solucin, se lav 3 veces con agua
destilada y se coloc en la celda de muestra M2 y hizo click en READ. Se procedi
a retirar y descartar la solucin. Otra vez se procedi a lavar la celda 3 veces con

agua destilada y se coloc en la celda de muestra M3 he hizo click en READ. Se

retira y descarta la solucin. Luego se lav la celda 3 veces con agua destilada
para colocar en la celda de muestra M4 y hacer click en READ. Se retir y
descart la solucin.para proseguir de la misma manera tanto con la muestra M5
Y M6.
G. GRFICA DE LA CURVA PATRN
Con los datos obtenidos de absorbancias y concentracin, se traza la curva
patrn.
H. DETERMINACIN DE LAS CONCENTRACIONES DE LAS MUESTRAS
Con las absorbancias obtenidas de la medicin de las muestras, se obtiene la
concentracin de cada una de las muestras ubicndose en la curva patrn.

4.

TABLA DE RESULTADOS Y CLCULOS DETALLADOS

CLCULOS
5.1 Preparacin de la muestra PATRN
Se aade 0,1 g de cafena en 100 mL de agua destilada, (donde 1mg/L=1 ppm),
entonces:

Preparacin de 100 mL de PATRN A ( 100 ppm ):

Donde:
Volumen requerido X Concentracin PATRN = Volumen final X Concentracin
PATRN A

Reemplazando:
VR x 1000 ppm = 100 mL x 100 ppm
V1=10 mL

Preparacin de 100 mL de PATRN B ( 10 ppm ):

Donde:
Volumen requerido X Concentracin PATRN = Volumen final X Concentracin
PATRN A

Reemplazando:
VR x 1000 ppm = 100 mL x 10 ppm
V1=1 mL

Hallando el volumen necesario para obtener las concentraciones

de nuestras soluciones patrn.
Para 1 ppm:
Volumen PATRN A X Concentracin PATRN A = Volumen Solucin X
Concentracin requerida
Dnde: Concentracin Patrn A= 100 ppm
Volumen PATRN A x 100 ppm = 100mL x 1ppm
V = 1mL
Del mismo modo, se halla para las concentraciones de 3 y 7 ppm
Para 5 ppm
Dnde: Concentracin Patrn B= 10 ppm
Volumen PATRN B x 10 ppm = 10mL x 5ppm
V = 5mL
TABLA N1: Volumen requerido para soluciones estndar
Concentracin ( ppm )

Volumen requerido ( mL )

TABLA N2: Datos para la obtencin de la Curva Patrn

Concentracin (ppm)

Absorbancia

0.001

0.0093

0.161

0.276

1.649

10

1.979

Preparacin de las muestras

Seven-Up
Concentracin de cafena : No conocida
Se hizo una dilucin de: 8 mL / 50 mL.
INKA KOLA
Concentracin de cafena : No conocida
Se hizo una dilucin de: 2 mL / 50 mL.
GUARAN
Concentracin de cafena : No conocida
Se hizo una dilucin de: 5 mL / 50 mL.

FANTA
Concentracin de cafena : No conocida
Se hizo una dilucin de: 5 mL / 50 mL.
VOLT 1
Concentracin de cafena : 300ppm
Se hizo una dilucin de: 5 mL / 25 mL.
VOLT 2
Concentracin de cafena : 300 ppm
Se utiliz una fiola de 50 mL, en la cual se puso 1 mL de Volt, hallamos la
concentracin:
300 ppm X 1 mL = C X 50 mL
C = 6 ppm
( concentracin terica )
TABLA N3: Resultados obtenidos con la curva de calibracin
Muestras de bebidas gasificadas

Concentracin ( ppm )

SEVEN-UP

INCA KOLA

GUARANA

FANTA

VOLT (2)

VOLT (1)

17

2.

Cantidades de Cafena por Presentacin

Para hallar las concentraciones reales, se utiliza la siguiente relacin:

Concentracin experimental x Volmen de ltima disolucin = Volumen tomado
de muestra x Concentracin real
SEVEN-UP
Se realiza los clculos para hallar la concentracin real de la muestra:
1.203 ppm X 50 mL = C X 8 mL
C =8 ppm
(concentracin real)
Si la concentracin es 500 ppm, hallamos los mg de cafena en la botella y
contrastamos con los valores que nos dan:
Del mismo modo, se halla para las concentraciones de las dems bebidas.
TABLA N 4: Cantidades de cafena por presentacin
Muestras de
bebidas
gasificadas

Presentacin
( mL )

Cantidad de
cafena ( mg )

Concentracin
real ( ppm )

SEVEN-UP

500

3.125

6.25

INCA KOLA

300

67.5

225

GUARAN

500

15

30

FANTA

500

30

60

VOLT (2)

300

60

200

VOLT (1)*

300

25.5

85

(*) No se considera, por estar fuera de la curva patrn

8. RECOMENDACIONES
Lo ms importante de la prctica es tener una buena curva de de calibracin, ya
que, con esta podremos saber la concentracin de la cafena. Por eso es
indispensable tener varias consideraciones al hacer las soluciones estndares,
entre las consideraciones:
Pesar correctamente la cafena
Al enrazar la fiola fijarse bien el punto del menisco
Luego de hacer el patrn A, de preferencia usar las pipetas con los
volmenes a extraer (ejm: si se extrae 5ml usar la pipeta de ese volumen)
Al usar software seguir las indicaciones de la gua para un correcto
funcionamiento de este, como por ejemplo poner la lnea base rango 190 a
400nm.

Al trazar la curva de calibracin, para obtener la ecuacin que me permita hallar

la concentracin es conveniente usar el mtodo de minimos cuadrados, para de
esa manera obtener un mejor resultado.
9.BIBLIOGRAFA
Skoog D. West D. Anlisis Instrumental SEXTA EDICIN Edit. CENGACE
Learning Mxico 2008. Pg. 147,148 y 153.
Harold F. Walton, Jorge Reyes. Anlisis qumico e instrumental moderno
SEGUNDA EDICIN Edit.REVERT. Espaa. 2005. Pg. 213.
Chang, R. Fisicoqumica (3 ed.). E. U. A.: McGraw-Hil l2008. pp. 768
Sandoval A.Cuantificacin de cafena en bebidas carbonatadas de mayor
consumo por nios en edad escolar y preadolescentes, en colegios privados de la
ciudad capital.Guatemala.2006. Recuperado de:
http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/06/06_2479.pdf
Calle S. Determinacin analtica de la cafena en diferentes productos
comerciales,Barcelona .2011.Recuperado de:
https://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2099.1/11148/PFC1.pdf?sequence=1

10. ANEXOS
Tabla de contenido de cafena en las principales bebidas

fuente: http://www.cafeina.com.es/contenidoCafeina/
Fuentes
FAO, informes 2008,2007.
OCU, informes cafs, bebidas energeticas, cafeina. 2008/2009
FAA, bebidas basadas en colas, caf origen. 2008
EUFIC, normativa europea 2006
Consumer, informe cafs solubles 2009, chocolates con leche, 2009, bebidas
2009