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INSTITUTOPOLITCNICONACIONAL

UNIDADPROFESIONALINTERDISCIPLINARIADE
INGENIERACAMPUSGUANAJUATO

LABORATORIODETCNICASMICROBIOLGICAS
GRUPO:2BV1

PRCTICA3

ESTERILIZACINYPREPARACINDEMEDIOSDE
CULTIVO

EQUIPOAMARILLO#2

INTEGRANTES:
MedinaNAL,JoaqunME,DazBG,MuroSPF

PROFESORES:
JulietaSeplveda
GuadalupeHortensiaLuvanoCormenero
MaraLenReyes

FECHADEREALIZACIN:22defebrerodel2016
FECHADEENTREGA:10demarzodel2016


OBJETIVOS

Conocer la importancia yel proceso dela esterilizacina


la hora de trabajar en el laboratorio, y en especial al
realizarmediosdecultivo.
Realizar medios de cultivo, diferenciado uno testigo
positivo y otro negativo, inoculando en ellos
microorganismos.
Observando el crecimiento de los medios de cultivo
inoculadosparaanalizarsumorfologa.

INTRODUCCIN

Por su minsculo tamao, los microorganismos nopueden estudiarsecomo


individuos, sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es
necesario cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicacin in vitro, en ambientes
especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de sus hbitats
naturales. en estos ambientes se debe eliminar a todos aquello microorganismos
que interfieren en el estudio del microorganismo de inters, al que adems de
proporcionarlosnutrientesnecesariosparasucrecimientoymultiplicacin.
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismosesel MediodeCultivo y elcrecimientode losmicroorganismoses
elCultivo.Sehanpreparadomsde10.000mediosdecultivodiferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedadypresin de oxgeno adecuadas,as como un gradocorrectodeacidezo
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debeestar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayora de lasbacteriaspatgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos mediosde cultivoesuna infusin de extractos decarneyPeptonaalaque
seaadirnotrosingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacinde
mediosde cultivo. Selicacompletamente a la temperaturadelaguahirviendoyse
solidificaalenfriarsea40grados.Conmnimasexcepcionesnotieneefectosobreel
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l. La
Gelatinaesotroagentesolidificanteperoseempleamuchomenosyaquebastantes
bacteriasprovocansulicuacin.

Enlos diferentes mediosdecultivo seencuentran numerosos materiales de


enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratosdeCarbono se adicionan pordosmotivosfundamentales:paraincrementar
el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se
aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin decidoocomoinhibidoresdelcrecimientodeunasbacterias
y no de otras (el Rojo Fenol seusacomoindicadoryaque es rojoenpH bsico y
amarillo en pH cido. LaVioletade Genciana seusacomoinhibidor ya queimpide
elcrecimientodelamayoradelasbacteriasGrampositivas).

RESULTADOS

Bacillussubtilis24hrs.

Bacillussubtilis96hrs.

Celular24hrs

Celular96hrs.

Bao24hrs.

Bao96hrs.

Testigonegativo24hrs.

Testigonegativo96hrs.

24hrs.

BacillusSubtilis

Bao

Celular

Testigo
negativo

Caldode
cultivo

Medio
slido

Coloracin:opacay
muyturbia.
Cultivograndecon
formaamiboide.

Coloracin:
opacayturbia.
Apenasuno
pequeocon
formacircular.

Coloracin:Casi
transparentes.
Muypequeos
puntos.

Transparente

96hrs.

BacillusSubtilis

Bao

Celular

Testigo
negativo

Caldode
cultivo

Medio
slido

Coloracin:cafclaro
ymuyturbia.
Cultivoconforma
amiboide,borde
onduladoyelevado.

Coloracin:caf
claroyturbio.
Msgrandeyde
formacircular,
bordeentero.

Coloracin:caf
oscuroybordes
difusos.
Formarizoide.

Transparente

DISCUSIN

Dentro del marcodediscusin podemos enmarcardiversos aspectos importantes y


fundamentales dela prctica.Destacamoselresultadopositivosobrelosmediosde

cultivo,yaqueenellosseaplictodalateoraanteriormenteestudiadaportodoslos
miembros del equipo, es decir, las tcnicas de esterilizacin y de preparacin de
mediosdecultivofueexitosaenlosmediosslidos.
Sin embargo despusdeesterilizarloscaldosdecultivo,sellegaalapresuncinde
que al momento de guardarlos para luego ser inoculados, se cometi la
equivocacin de guardarlos en una incubadora en lugardel refrigeradorpor lo que
secontaminarondemicroorganismosdeloscualesnosetenaconsentimiento.
Otro punto a debatir es la diversidad de microorganismo que creci en el cultivo.
Hablamos de que dentro del cultivo crecieron hongos ybacteriasprimordialmente,
logramosdefinirsusestructurasmediantesuobservacinasimplevista.
Para finalizar hablaremos de la gran diferencia deltestigonegativo conformealos
otros. Comosemuestra en lasimgenes, es notorio que sino se inocula unmedio
estril,nocrecerningnmicroorganismodentrodel.

CUESTIONARIO

1.Menciona y describe, al menos dos mtodos de esterilizacin diferentes a


losllevadosacaboenlaprctica.
Incineracin: eliminacin de residuos biopeligrosos mediante su combustin
enhornoscrematoriosoincineradoresdecaractersticasespeciales.
Radiaciones ionizantes (radiacin gamma) tienen una gran capacidad
germicida, gran penetracin. Esterilizacin de materiales slidos o lquidos
envasadosencualquiertipodeenvoltorio.

2.Conqufinalidadselesponealaspipetasunfiltrodealgodn?
El algodn que funciona como filtro, es decir, evita quepenetrenmicroorganismos
contaminantes a tu material estrilcuando ya esten uso,dejando pasaraire libre
demicroorganismos.

3.Culeselpropsitogeneraldelusodelosmediosdecultivo?
Antibiograma, identificacin y multiplicacin. Que es bsicamente el estudio y
observacin delmicroorganismo en una formaaisladaparamejorarla deteccinde
cambiosyfactoresqueloafectan.
1. Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patgeno o de un
alimento.
2.Estudiomorfolgicodelascolonias.
3.Conservacindecepasidentificadas
4. Clasificacin y tipificacin de bacterias por estudio de sus propiedades
bioqumicasenmediosdiferenciales.

5.Obtencindetoxinasoinvestigacindesuscaractersticas.
6.Cultivoycosechadebacteriasparalaelaboracindeproductosbiolgicos.

4.Enuncia el nombre 3 de medios de cultivos (nombre, composicin y


funcin)quenospermitanelcrecimientodebacteriasGramnegativas.
Agar CIN (cefsulodina, irgasn, novobiocina) Medio selectivo para
Yersinia. Contiene manitol y rojo neutro como indicador. Las colonias de
Yersinia presentan un borde transparente con un amplio centro rojo muy
intenso. No es totalmente especfico para Yersinia, ya que pueden crecer
otrosbacilos Gram negativos, en particularCitrobacter freundii,quepresenta
coloniassemejantesalasdeYersinia.
Agar PEA (alcohol feniletlico, phenylethanol) Agregando alcohol
feniletlico a una base con peptona, extracto de carne y agar se obtieneun
medioque inhibeeldesarrollodelasbacteriasGramnegativas.Laadicinde
un 5% de sangre de oveja proporciona nutrientes para estreptococos y
estafilococos. Este medio tambin se emplea para el cultivo de
microorganismosanaerobios quenosoninhibidosporelalcohol.Despusde
supreparacinlasplacasconalcoholfeniletlicohuelenarosas.
Caldo para Gram negativosSe empleacomocaldo selectivoparaelcultivo
de Salmonella y Shigella a partir de muestras de heces e hisopos rectales.
Contiene citratode sodioydesoxicolatosdico(unasal biliar)quedestruyen
los microorganismos Gram positivos e inhiben la multiplicacin temprana de
los coliformes. La adicin de mayor cantidad de manitol que de glucosa
estimula el crecimiento de los patgenos fermentadores de manitol y no es
favorableparaProteus.ElmediosetamponaparamantenerelpHneutroan
despus de laproduccin demetabolitosbacterianoscidos.Paraobtenerel
mximo beneficio de sus propiedades selectivas, el caldo GN debe ser
subcultivado despus de 68 horas tras la inoculacine incubacin iniciales,
yaquedespusdeesteperodoloscoliformessobrepasanalospatgenos.

5. Enuncia 3 medios de cultivo (nombre, composicin y funcin) que nos


permitanelcrecimientodebacteriasGrampositivas.
Agar chocolate con IsoVitaleX y vancomicinaMedio selectivomodificado
para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis a partir de
muestras clnicas que contienen microbiota mixta de bacterias y hongos.La
vancomicinaesactivafrenteabacteriasGrampositivas.
Agar CLED (cistina, lactosa, deficiente en electrolitos) Es un medio
diferencial recomendadoparael anlisisbacteriolgico de orinayaque enl
crecen profusamentela gran mayora de las bacterias,tanto Gramnegativas
como Gram positivas, que provocan infecciones urinarias, pudindose
diferenciaroidentificarsusrespectivascolonias.

Agar PEA (alcohol feniletlico, phenylethanol) Agregado de alcohol


feniletlico a una base con peptona, extracto de carne y agar se obtieneun
medio que inhibe el desarrollo de las bacterias Gram negativas y el
crecimientodelasGrampositivas.

6.Mencionaelnombrede3mediossemislidos.
MIO Medio Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en
base a su movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y produccin de
indol.
SIM Medio Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad,
produccin de indolydesulfurode hidrgenoen unmismotubo.Estilpara
diferenciarmiembrosdelafamiliaEnterobacteriaceae.
O.F. Medio Basal de Hugh & Leifson.Medio de cultivo, que al ser
suplementado con hidratos de carbono, se usa para determinar el
metabolismo oxidativofermentativo de las bacterias Gram negativas. Esta
prueba es til para diferenciar especies bacterianas. Tambin, permite
determinarmovilidadyproduccindegas.

7.De acuerdo a su utilizacin defuentesde carbonoCmoseclasificanlos


organismos?
Conrespectoalafuentedecarbono,seclasificancomo:
Auttrofos,microorganismosqueusanCO2ycarbonatos.
Hetertrofos,aquellosqueutilizancompuestosorgnicos.

8.Proporcionaladefinicindeunfactordecrecimientocon3ejemplos.
Aminocidos
Puriminas
Pirimidinas
Son cualquier compuestoorgnico queunmicroorganismorequierecomoprecursor
oconstituyente de sumaterialorgnico celular,nopuede sintetizarlas porloquese
ledebeproporcionarcomonutriente.

9.Quesunmediomnimo?
Es un medio basal ms una fuente de carbono, contiene los nutrientes mnimos
indispensablesparaelcrecimientodeunacolonia.

CONCLUSIN

Elmediodecultivo,esunodelossistemasmsimportantesparalaidentificacinde
microorganismos y observacin de su crecimiento en sustancias alimenticias

artificiales preparadas en el laboratorio. El cual debe contener los nutrientes y


factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante (FCEN, (s/f)) Para evitar que haya microorganismos contaminantes
en nuestros cultivos, debemos esterilizar todo lo que usamos, para ello podemos
emplear cualquiera de los mtodos que existen, seleccionando en elque msnos
convenga,deacuerdoaltipodematerialomicroorganismoquesevaaesterilizar.

BIBLIOGRAFA

(s/f). Esterilizacin. Procedimientos relacionados. Fecha de consulta: 06 de marzo


del2016.URL:http://assets.mheducation.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf

UNAM. (s/f).UNIDAD 6. Nutricin microbiana y UNIDAD 7. Requerimientos de


oxgeno.
Fecha
de
consulta:
05
de
marzo
del
2016.
URL:http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Protocolodenutricionyrequerimiento
sdeO_19571.pdf

Klug S. William. (2010). Conceptos de Gentica (8va edicin). Pearson Prentice


Hall.

FCEN, (s/f). Los medios de cultivo en microbiologa. Fecha de consulta: 07 de


marzodel2016.URL:http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.html

Saravia,Katiuska. (2008).Cultivoenlosmicroorganismos.Fechadeconsulta:08de
marzo
del
2016.
URL:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_
5_Cultivo.pdf