Prctica 2

Extraccin de Betanina
Introduccin
Las betacianinas y betaxantinas son un grupo de pigmentos naturales conocidos
como betalanas, y son sintetizados por un limitado nmero de especies vegetales,
entre ellas Beta vulgaris L. ssp. vulgaris (betabel o remolacha), Beta vulgaris L.
ssp. cicla (Acelga), Amaranthus sp. (Amaranto) y futas de cactus del genero
Opuntia y Hylocereus. Son compuestos de bajo peso molecular, hidrosolubles,
nitrogenados, glicosilados y/o aminados, cuya estabilidad depende factores como
el pH, la temperatura y la presencia de iones u oxgeno. La betanina o betanidin-5O--glucsido es la principal betacianina sintetizada y a diferencia de la familia de
las antocianinas, posee un nitrgeno en su esqueleto principal por lo que tambin
entra en la categora de alcaloide. Este compuesto se encuentra en grandes
cantidades en el tallo, las hojas y la raz de Beta vulgaris, y es el responsable de
su color rojo-violeta. La vulgaxantina I y II son las principales betaxantinas
presentes en betabel, al igual que la betacianinas poseen la misma estructura
base (cido betalamico) pero no poseen el anillo cDOPA. En vez de ello, las
betaxantinas se encuentran conjugadas con diferentes aminocidos, o con aminas
de diferentes cadenas. Las betaxantinas con responsables del color amarillo y
pueden sintetizarse a partir de cido betalamico y aminocidos bajo ciertas
condiciones de pH y temperatura, incluso a partir de los productos de
degeneracin de la betanina. El comportamiento espectrofotomtrico de estos
pigmentos en la regin UV-Vis ya ha sido objeto de estudio y se ha determinado
que las betacianinas y betaxantinas presentan espectros de absorciones a
longitudes de onda mxima alrededor de 535-540 nm y 480 nm respectivamente.
En los ltimos aos, se han realizado numerosas investigaciones acerca de las
propiedades bioqumicas de estos compuestos. Por su carcter natural ha crecido
el inters por utilizarlos como colorantes de alimentos, o en fibras textiles, lo que
ha dado lugar a estandarizar los procesos de extraccin. Adems, algunas
investigaciones han demostrado que poseen una importante capacidad
antioxidante, una propiedad asociada con reducir el riesgo de padecer
enfermedades degenerativas.

Objetivo
Evaluar la influencia de las condiciones del proceso de extraccin en la
determinacin del contenido total de betanina en beta vulgaris.

Materiales

80 gr de raz de Betabel (Beta vulgaris)

Sistema Soxhlet
Parrilla elctrica con agitador magntico
9 Cubetas de poliestireno 1 cm de espesor
1 Tamizador de plstico para harina
150 mL Buffer Citrato pH 5

Procedimiento
Extraccin de Betanina
Mtodo A
1.- Cortar 15 g de raz de B. vulgaris en finas rebanadas y secar en un horno con
ventilador a 80 C por 3 horas.
2.- Triturar la muestra en un mortero hasta su pulverizacin.
3.- Colocar la muestra en un vaso de precipitados de 250 ml. y agregarle 50 ml. de
buffer citrato. Mantener la mezcla en agitacin constante por 10 minutos.
4.- Filtrar la muestra a travs de seis gasas para eliminar solidos insolubles.
Despus filtrar el lquido obtenido con papel Whatman # 4.
5.- Tomar 10 ml. del filtrado y centrifugarlo a 3000 r.p.m. por 10 minutos. Rescatar
el sobrenadante para hacer la determinacin de betanina total.
Mtodo B
1.- Cortar 15 g de raz de B. vulgaris en finos trozos y homogenizar con 50 mL de
buffer citrato en una licuadora.
2.- Filtrar la muestra a travs de seis gasas para eliminar solidos insolubles.
Despus filtrar el lquido obtenido con papel Whatman # 4.
3.- Tomar 10 ml. del filtrado y centrifugarlo a 3000 r.p.m. por 10 minutos. Rescatar
el sobrenadante para hacer la determinacin de betanina total.
Mtodo C
1.- Cortar 15 g de raz de B. vulgaris en finos trozos y envolverlos dentro de un
cilindro hecho de papel filtro Whatman # 4. Utiliza clips no. 2 para fijar el papel y
evitar que se el cilindro se abra dentro del tubo Soxhlet.
2.- Colocar el cilindro dentro del tubo Soxhlet, armar el sistema y extraer la
muestra con 50 ml. de alcohol 95 %.
3.- Dejar que el lquido se enfri, de ser necesario, filtre el extracto con papel filtro
Whatman # 4

4.- Tomar 15 ml de lquido y centrifugar a 3000 r.p.m. por 10 minutos.

5.- Tomar 10 ml del sobrenadante y evaporar a bao de agua hasta sequedad (de
10 a 15 minutos). Re suspender la muestra en 10 ml. de buffer citrato y centrifugar
nuevamente a 3000 r.p.m. por 10 minutos.
6.- Rescatar el sobrenadante para hacer determinacin de betanina total.
Determinacin del contenido total de betanina
Determinar de la concentracin de betanina en un espectrofotmetro aplicando la
ley de Beer. Es decir, para un compuesto dado, a una max la A=cl , la cual
implica que en una cubeta de 1 cm de espesor y de 1 mL de volumen la:

[ Betaninamg /mL ]=( A )

(1 )
( PM ) ( d ) .

donde A es la absorbancia a 538 nm, es el coeficiente de extincin molar

(60,000 mol-1cm-1), PM es el peso molecular de la betanina (550g/mol) y d
representa el factor de dilucin de la muestra.
1.- Diluir las muestras 1:200 (v/v) con buffer citrato y medir absorbancia a 538 nm.
Las muestras no deben de sobrepasar la 2.0 unidades, de ser as, diluir 1:400
(v/v).
2.- Para cada muestra realizar la determinacin de betanina total por triplicado,
utilizar buffer citrato como blanco y para todos los casos calcular el promedio y la
desviacin estndar.

Observaciones
Al momento de cortar el betabel en trozos pequeos, nos percatamos de la gran
cantidad de colorantes que posee en su raz.
Colocamos la muestra en un vaso de precipitado, al cual posteriormente le
aadimos 50 ml de buffer citrato y la mezcla se volvi ms homognea, de un
color rosa-violeta muy cargado. Pero ahora para mejorar los resultados es
necesario tenerla en agitacin por 10 minutos.
Despus de los 10 minutos es necesario hacer dos filtraciones, para eliminar las
macromolculas, la primera filtracin es en gasas, donde quedaran atrapadas las
partes ms grandes de betabel, la segunda filtracin es en papel Whatman para
eliminar pequeas partculas flotantes, es muy importante filtrar las muestras que
va a ser analizadas en equipos que usan la luz porque el desvo o absorcin de
fotones puede dar resultados con desviaciones considerables.
A continuacin, hay que tomar 10 ml de la muestra y centrifugarlos a 3000 r.p.m.
para despus tomar el sobrenadante y leerlo en el espectrofotmetro y as saber
su absorbancia.

Para determinar la absorbancia de la muestra se debe hacer una dilucin con 0.5
mililitros de sobrenadante de betabel y 95.5 de citrato.
Se tom la lectura a 538 nm en el espectrofotmetro Gnesis (4001/4) Visible
Spectrophotometer con un valor arrojado de absorbancia de 0.091

Evidencias

Conclusiones
1.- Tomando en cuenta los resultados obtenidos y los trabajos realizados por
Czapski 1990; y Guesmi y col., 2012, Cul fue el mtodo ms eficiente para
la extraccin de betanina? Cul es su explicacin?
El mtodo ms eficiente para la obtencin de betanina es el mtodo B
porque el betabel que es de donde se obtiene este colorante est en su
estado natural, as que es ms fcil que se libere de los tejidos vegetales y
pase a la solucin de citrato, aparte el proceso es ms rpido, sin
condiciones que pudieran desnaturalizar o alterar el estado fsico y qumico
de la sustancia.
2.- Argumente sus razones en base a las condiciones que usted utiliz
durante todo el proceso de extraccin como lo son: tratamiento de la
muestra, medio de extraccin, temperatura, tiempo, exposicin al oxgeno y
pH.
Uno de los factores ms importantes que debemos tomar en cuenta es que
a lo largo del proceso se agreg el citrato, que en realidad es citrato de
sodio y funciona como antioxidante, esto quiere decir que al exponer
nuestra muestra al oxigeno esta no va a presentar seales de oxidacin tan
rpidamente, adems tiene un pH cido lo que ayuda a retirar los
colorantes ms fcilmente de los tejidos vegetales.
3.-En base a la ley de Lambert-Beer donde A=cl , cmo se llegara
usted a la frmula que utiliz para la determinacin de Betanina?

La ley de Lambert-Beer describe la correlacin entre el comportamiento de

absorcin de una sustancia, as como la concentracin y el espesor de la
capa de esta sustancia en la solucin. Esta relacin se expresa de la
siguiente
manera:
A = L c
Donde el trmino se llama coeficiente de extincin
molar o absortividad molar, el cual presenta unidades de L mol-1 cm-1 y
depende de la longitud de onda de medicin, por tanto su valor se escribe
(, nm), por ejemplo el coeficiente de absortividad medido a 235 nm se
escribe 235. El siguiente trmino L es la longitud de la trayectoria que
realiza la luz medida en cm y c es la concentracin del analito en mol L-1.
La ley de Lambert-Beer se cumple solamente para soluciones diluidas, ya
que, para valores de concentracin altos, el coeficiente vara, debido a

fenmenos de dispersin de la luz, agregacin de molculas, cambios del

medio, etc.

TRATAMIENTO DE RESIDUOS
El buffer de citrato de sodio pH 5 se neutraliza y se desecha al lavabo.