Anda di halaman 1dari 2

Gambar 2.7a.

Gambar 2.7b.

Gambar 2.8

Gambar 2.9.

Prosedur ini memastikan bahwa setiap baik


berperilaku sama selama pemisahan. jika sumur
yang berdekatan dibiarkan kosong, sampel
sebelah akan cenderung menyebar lateral selama
elektroforesis beroperasi.
saat menambahkan sampel, hati-hati untuk
menjaga permukaan yang tajam antara sampel
dan penyangga tangki (Gambar 2.7a).
Penambahkan sampel terlalu cepat atau tidak
teratur akan menyebabkan berputar-putar dan
membentuk zona pemuatan difus. Hal ini akan
menyebabkan hilangnya ketajaman (Gambar 2.7
b). Secara alternatif, sampel dapat ditambahkan
dan kemudian dilapis dengan tangki penyangga.
Ini lebih memakan waktu lama tetapi, bila
dilakukan dengan hati-hati, dapat meminimalkan
kontaminasi antara sumur dan sangat berguna
dengan sampel radiolabeled.
21. Jika standar berat molekul protein yang
digunakan, memuat satu atau dua sumur dengan 5
- 10 l dari campuran standar. Jika gel tersebut
akan diwarnai dengan Coomassie blue, buku ini
harus berisi 0,2-1 g setiap komponen standar.
Jika gel berubah menjadi perak bernoda, gunakan
10-50 ng dari masing-masing komponen.
Menjalankan gel
22. Isi ruang penyangga yang lebih rendah
dengan 41 tangki penyangga. Instal gasket
penyegelan pada buffer ruang teratas dan
letakkan di tempat sandwich gel. Lepaskan Cams
rendah dan cam sandwich ke bagian bawah
penyangga ruang atas. Tempatkan penyangga
ruang atas di tempat pada penukar panas dalam
ruang penyangga yang lebih rendah (Gambar
2.8).

23. Sesuaikan ketinggian penyangga tangki dalam ruang penyangga terendah


sampai sandwich sepenuhnya tenggelam dalam buffer. Jika gelembung yang
terperangkap di bawah akhir sandwich, membujuk mereka pergi dengan pipet.
24. Tambahkan bar berputar ke ruang penyangga yang lebih rendah dan pusat
ruang pada pengaduk magnetik.

Ketika buffer terendah diaduk, suhu buffer tetap seragam. Hal ini penting karena
pemanasan yang tidak merata yang mendistorsi pola pita gel dan mengeluarkan
bau.
25. Hati-hati mengisi buffer ruang atas dengan tangki penyangga. Jangan
tuangkan penyangga ke dalam sumur sampel, karena sumur akanl mencuci sampel
keluar.
26. Letakkan penutup pada unit gel dan menghubungkannya dengan power supply
EPS 301. katoda (lead hitam) terhubung ke buffer ruang atas (gbr. 2.9)
27. Nyalakan alat dengan menekan power supply dan sesuaikan tegangan ke 300
(sehingga tegangan tidak terbatas).
28. Sesuaikan arus ke 30 mA per 1,5 mm gel tebal dan 15 mA per gel 0,75 mmtebal. mulai elektroforesis. tegangan harus mulai dari sekitar 70-80 V, tetapi akan
meningkat selama alat berproses. catat tegangan dan baca saat ini sehingga proses
yang berjalan dapat dibandingkan dan kebocoran arus atau salah pembuatan
buffer dapat dideteksi.
di bawah kondisi ini, gel akan memakan waktu sekitar 3-4 jam untuk
menjalankan. jika lebih untuk menjalankan gel untuk jangka waktu lama
(misalnya 8 jam), kurangi