UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOANLISIS

ESCUELA DE BIOANLISIS
DEPARTAMENTO DE BIOANLISIS CLNICO
CTEDRA DE PRCTICAS PROFESIONALES

PRCTICAS PROFESIONALES INICIALES II. UNIDAD I AREA

HEMATOLOGA.
Resumen elaborado por: Prof. Josefina Solrzano
EXTRACCIN SANGUNEA
El Laboratorio Clnico tiene como finalidad orientar al Medico a
confirmar una impresin clnica, descartar un diagnstico, controlar
un tratamiento, establecer un diagnstico y/o realizar exploracin
selectiva para conocer la evolucin de una enfermedad, a travs del
anlisis clnico de muestras biolgicas. La sangre es el fluido ms
utilizado en la prctica clnica, gracias a la gran cantidad de
elementos que la componen por lo que es til para determinar los
estados fisiolgicos y bioqumicos de un individuo.
La correcta toma de muestra es indispensable para llevar a cabo el
anlisis del mismo, se debe rechazar muestras inadecuadas y no
invertir tiempo ni recursos procesando espcimen de dudoso valor ya
que no garantiza obtener un resultado confiable. En todo Laboratorio
deben existir las instrucciones que describan una correcta toma de
muestra y las caractersticas de un adecuado espcimen sanguneo.
Dentro del laboratorio clnico, existe una clasificacin en etapas
que engloban los procesos que se llevan a cabo para la recepcin
de la muestra, procesamiento y entrega de resultados. Estas
etapas se denominan etapa pre-analtica, etapa analtica y
etapa post- analtica. En este escrito describiremos un poco la
etapa pre-analtica que concierne a este a la etapa inicial de la
muestra.
En la etapa pre-analtica se debe respetar los siguientes
ordenantes de la obtencin de cualquier espcimen:
1. Solicitud del examen
2.

Indicaciones al paciente

3.

Preparacin del material

4.

Seleccin de los tubos para la toma de muestra (con o sin

anticoagulante, dependiendo del caso)
5. Identificacin del paciente. Anamnesis
6. Preparacin del paciente
7.

Si es un espcimen sanguneo seleccin del lugar a puncionar

8.

Obtencin de la muestra

9.

Transporte y almacenamiento

Antes de realizar la obtencin del espcimen hay que considerar los

siguientes aspectos:
1.- Factores pre-analticos que pueden afectar la valoracin de
analitos:
Existen muchos factores que pueden afectar las pruebas de
laboratorio, algunos de ellos se pueden evitar con una adecuada
orientacin al paciente y una correcta tcnica de extraccin
sangunea. A continuacin enumeraremos algunos de estos factores y
recomendaciones al respecto.
La ansiedad y la tensin mental o fsica puede afectar los
niveles de muchos componentes sanguneos, por lo que se
recomienda que el paciente repose un poco antes de la toma
de muestra.
Se recomienda evitar ejercicios fsicos vigorosos durante 3 das
previos a la toma de muestra si se pretende conocer los niveles
de CK, LDH, AST, potasio, lactato, prolactina y cortisol.
El ritmo diurno de algunos fluidos corporales muestran
fluctuaciones durante el da. Por ejemplo los niveles de cortisol
son altos en la maana, pero decrecen en la tarde. Los niveles
de hierro tienden a caer durante el da.
La situacin diettica del paciente puede ser importante para
ciertas pruebas. Tal es el caso de las variaciones en la
concentracin de lpidos despus de una comida grasosa. El
suero sanguneo muestra una apariencia lechosa debido a la
presencia de triglicridos y quilomicrones. Estos sueros
hiperlipidmicos influyen en las mediciones, por lo que se
recomienda tomar muestra despus de un periodo de ayuno,
usualmente de toda la noche.
La ingestin de etanol induce cambios en la composicin de los
lpidos corporales. De particular inters son las enzimas
hepticas, como la fosfatasa alcalina, transaminasas, gama
glutamil transferasa y otros componentes como la glucosa,
triglicridos, uratos y lactato.
2.- Los pacientes deben estar preparados
espcimen sanguneo

a la hora de obtener el

 El Ayuno del Paciente.

Otras condiciones especiales que requieran antes de la
obtencin del espcimen.
Todas las muestras deben ir acompaadas de una solicitud
debidamente formulada. La solicitud debe contener la siguiente
informacin:
La identificacin completa del paciente:
Nombre completo
Sexo
Nmero de cdula
Datos para su localizacin:
Sala y nmero de cama si est hospitalizado
Nmero de telfono si es ambulatorio
Mdico solicitante:
Nombre completo
Especialidad
Registro
Impresin diagnostica
Pruebas que se realizarn

Es deseable que la solicitud incluya informacin clnica de

utilidad:
Ingestin de drogas
Restricciones especiales
Antecedentes de enfermedades familiares.
Antecedentes de enfermedades.

Si la orden de solicitud la enva con el espcimen, debe contener la

siguiente informacin:
Fecha de orden y fecha de coleccin
Iniciales de la persona que realizo la toma del espcimen.
Hora de extraccin.
TOMA DE MUESTRA SANGUNEA
1.-Seleccin del sitio a puncionar:
Al proceder a seleccionar el sitio a puncionar, evite reas con
hematoma, fstulas, quemaduras, escoriaciones de la piel o cicatrices.
Si se trata de un paciente hospitalizado evite tomar muestra de un
brazo en la que est colocada la va intravenosa, o del costado en que
se ha realizado una mastectoma reciente.
1.1.- La palpacin:
La vena debe palparse para saber la direccin que trae. Puede ser:
Palpable y visible
Palpable y no visible

No palpable y no visible, para este caso se recomienda al

paciente abrir y cerrar la mano varias veces.
Antes de proceder a puncionar, se debe escoger la vena. La mejor
manera es realizando una palpacin de las mismas. Para ello, coloque
el torniquete 3 a 4 cm por encima del codo para visualizarlas mejor.
Debe tener presente en no mantener el torniquete por ms de 3
minutos, para evitar la hemoconcentracin.
Las venas ms utilizadas para la venopuncin, estn localizadas en el
rea antecubital. Entre stas tenemos:
a) Vena Cubital: Es la ms larga y gruesa de todas y es la
preferida por bordear la musculatura del brazo.
b) Vena Ceflica: Tiene iguales caractersticas de la anterior,
pero es un poco menos gruesa.
c) Vena Baslica: Es ms pequea que las anteriores. Esta
vena est cerca de la arteria braquial, por lo que su puncin
es riesgosa y su rea es ms sensible y dolorosa para el
paciente.
Al palpar hgalo con la punta de sus dedos, tratando de seguir el
rastro de las veas. Aqu tambin son tiles sus conocimientos en la
anatoma de las venas de las extremidades superiores. En ocasiones
si no visualiza la vena, puede forzar la sangre dentro de la vena a
travs de un suave masaje de abajo hacia arriba.

Palpacin de las venas

1.2.- La Descontaminacin:
Una vez que se ha decidido por la vena a puncionar, debe
proceder a descontaminar el rea con alcohol etlico o
isoproplico al 70% utilizando algodn y con movimientos

circulares del interior al exterior (forma de coma). Debe tener

presente que una vez realizada la descontaminacin, no debe
volver a tocar el rea venosa. Si requiere volver a palpar debe
desinfectar los guantes con alcohol.
Descontaminacin del rea

2.- La puncin venosa:

Ahora est preparado para realizar la extraccin sangunea. El brazo
debe estar preferiblemente en posicin cmoda horizontalmente. Con
el torniquete en posicin, haga que el paciente cierre y abra el puo
de 3 a 5 veces para bombear mejor la sangre, y luego que mantenga
el puo cerrado (esto ltimo es opcional).
Si se trata de un nio, es recomendable colocar 2 dedos de la mano,
debajo del codo del paciente, para evitar que doble el brazo durante
la extraccin.
3.- Extraccin con jeringa:
Cuando vaya a proceder a realizar la extraccin con la jeringa, usted
debe tener presente el calibre a utilizar y el tamao de la jeringa
segn el volumen a extraer.
3.1.- Coloque la punta de la aguja unos 5mm por debajo del lugar
donde palpa la vena y en un ngulo de 15 a 30 grados sobre la
superficie de la vena escogida (el ngulo va a depender de si la vena
esta superficial o profunda) y atraviese la piel con un movimiento
firme y seguro, hasta el lumen de la vena.

3.2.- Apretando firmemente la jeringa, debe halar el mbolo con

movimiento continuo para extraer la sangre, afloje el torniquete para
que la sangre fluya mejor, continu extrayendo hasta el volumen
requerido. Evite presionar fuertemente la aguja durante la extraccin.
3.3.- Remueva la aguja del brazo con movimiento suave al terminar
de colectar, sin apretar el rea de la puncin con el algodn.

3.4.- Presione el algodn sobre el sitio de la puncin aplicando una

presin adecuada y no excesiva para evitar la formacin de
hematoma.

4.- Puncin venosa con Vacutainer o Venojet.Vacutainer es una marca comercial de Becton Dickins and company
para un tubo de ensayo especficamente diseado para la
venopuncin. Fue descubierto en 1.947 por Joseph Kleiner.
El sistema consiste en extraer sangre intravenosa al vaco
especficamente de la regin cubital del brazo.
Se utilizan tubos comerciales, camisa y aguja Vacutainer.
Se trata de un tubo de vidrio y plstico al vacio con un tapon de
plstico blando, que permite que lo atraviese una aguja mediante una
leve presin. Existen varios tipos de vacutainer que se diferencian
por el color de su tapon.

Procedimiento:
1. La aguja se enrosca en la camisa.
2. Se introduce la aguja en vena.
3. Introducir el tubo dentro de la camisa y empuje con el
dedo pulgar para que atraviese la goma de la aguja,
perdiendo el vacio y entre la sangre dentro del tubo.
4. Introducir la cantidad de tubos que necesita.
5. Saque primero el tubo y luego la aguja con la camisa.
6. Colocar nuevamente la tapa de las agujas y descartar.

Sistema de Vacutainer MR
El orden de los tubos es importante para prevenir la contaminacin de
las muestras por anticoagulantes no deseados. El orden de extraccin
de los tubos se ha de realizar de la siguiente manera

Tubo para anlisis de suero: sin anticoagulante

Tubo para pruebas de coagulacin: anticoagulante citrato
Tubos restantes con anticoagulantes: EDTA, Heparina de litio,
jeringas de gasometra, tubo de velocidad de sedimentacin
Algunas norman bsicas que debemos tener en cuenta:
*El de citrato destinado a pruebas de coagulacin, debe
extraerse siempre antes que los que llevan otros
anticoagulantes para que no se contamine con EDTA o
Heparina de litio, lo cual puede interferir en el estudio de
coagulacin.
*Si el tubo de coagulacin es el primero en extraer o es el
nico tubo debemos llenar primero un tubo de descarte de por
lo menos 5 ml de sangre para eliminar la posible contaminacin
de la muestra con tromboplastina tisular proveniente del sitio
de puncin.
*Hay que respetar la proporcin sangre-anticoagulante, no
retirar el tubo hasta estar seguros que no se llena ms.
*No destapar los tubos y volverlos a cerrar ya que es tapn
podra saltar por exceso de presin y la muestra se derramara.

5.- Llenar los tubos en su correcto orden. Al llenarlos evite

formar espuma, presionando suavemente el mbolo y distribuya la
sangre por las paredes del tubo de ensayo. Colocar el tapn y
mezclar suavemente en caso que contenga anticoagulante.

6.- Descarte la jeringa y aguja en un contenedor apropiadoRecipiente plstico con tapa que contenga una solucin de hipoclorito
de sodio.

Descarte de agujas

7.- Colocar una bandita adhesiva (curita) o algodn seco en el

sitio de la puncin. Solicite al paciente que mantenga el brazo
extendido hacia arriba.

Problemas que pueden ocurrir durante la extraccin venosa.

Esta es la forma de colocacin correcta de la aguja (con el bisel hacia
arriba)

Diversos problemas pueden

surgir durante la extraccin
de sangre venosa y pudiera no obtenerse sangre o su coleccin sea
incompleta. Entre los que se pueden citar:
a. Cambio en la posicin de la aguja. Movimiento de retroceso que
la desva del lumen venoso.

b.

Movimiento hacia delante que atraviesa la vena.

c. Movimiento de la aguja, tal que el bisel de la aguja quede por

encima de la vena, es decir, sin una
penetracin completa
del bisel, afectando la entrada de la sangre

d. Colapso de la vena, es decir, disminucin del flujo sanguneo.

En estos casos, debe aflojar el torniquete para incrementar el
flujo sanguneo, remueva la aguja ligeramente y vuelva a
direccionarla.

e. Formacin de hematoma:

Si se forma un hematoma bajo la piel adyacente al sitio de la puncin,

afloje el torniquete y retire la aguja. Aplique presin firmemente
sobre el hematoma.

f. Sangre arterial:

Pudiera suceder que se atraviese una arteria, en estos casos la

sangre se observa de un color rojo brillante. Retire la aguja y aplique
presin por 5 minutos.
Como prevenir los hematomas:
Puncione solamente la pared superior de la vena.
Remueva el torniquete antes de remover la aguja.
Escoja las venas superficiales mayores.
Aplique presin sobre el sitio de la puncin.
La hemlisis. Es el fenmeno de la desintegracin de los eritrocitos
(glbulos rojos o hemates), liberando la hemoglobina, por ello se
torna de color rojizo. Puede ocurrir por diversas razones entre las que
se pueden enumerar:
a) Trauma con una aguja de calibre muy pequeo.
b) Por contaminacin con agentes antispticos.
c) Agitacin violenta o excesiva de los tubos.
d) Demasiado tiempo en ser analizadas las muestras o en
ser separado el cogulo de sangre.
e) Incremento en la fragilidad capilar de los eritrocitos o
alto volumen de clulas empacadas, especialmente en
neonatos.
f) Presin excesiva para mejorar el flujo sanguneo.
g) En tubos no llenados al vaco, puede ocurrir hemlisis
al llenarlos haciendo una fuerte presin sobre el
mbolo provocando un chorro de sangre muy fuerte.
Los componentes ms afectados son aquellos cuya concentracin son
ms altas en las clulas que en el plasma, por ejemplo, in potasio,
fosfato, deshidrogenasa lctica, aspartato aminotransferasa, hierro
srico, etc. De ms est decir que la hemlisis afecta en diversa
medida la lectura espectrofotomtrica de los componentes
sanguneos.

La hemlisis puede ser prevenida tomando en cuenta

siguientes:
a) Mezcle los tubos con aditivos anticoagulantes lentamente
por 5 a 10 veces, inmediatamente despus de ser llenado el
tubo.
b) Evite extraer sangre de un hematoma.
c) Acerque el bisel de la aguja a la pared interna del tubo, para
evitar el choque fuerte de la sangre contra
la pared del
tubo

)
)

Hemoconcentracin: Aumento en el nmero de clulas sanguneas

por una disminucin del volumen del plasma o por un aumento de la
produccin de las mismas.
La hemoconcentracin puede ser causada por:
a) Aplicacin prolongada del torniquete.
Masaje vigoroso del sitio a puncionar.
Esclerosis u obstruccin venosa.
ORDEN DE LLENADO DE LOS TUBOS
Jeringa
Sistema Extraccin al Vaci
Vacutainer o Venojet
1.
Tubo
para
prueba
de 1. Tubo Seco.
coagulacin
2.Tubo
para
prueba
de
2. Tubo con anticoagulante
coagulacin.
3. Tubo con anticoagulante
3. Tubo seco
ANTICOAGULANTE
Anticoagulante.- Es una sustancia exgena o endgena que inhibe
la coagulacin de la sangre.
Anticoagulantes ms usados y su utilidad.
Los anticoagulantes se utilizan para obtener plasma (muestra
centrifugada), as como muestras de sangre total. La muestra de
sangre total o completa se utiliza para estudiar las caractersticas
morfolgicas y realizar los recuentos celulares. Por ello, es importante
que los anticoagulantes utilizados no alteren la morfologa de las
clulas sanguneas, eviten la produccin de hemlisis e impidan la
agregacin plaquetaria, permitiendo la conservacin de la muestra y
manteniendo las clulas sanguneas ms parecidas al estado
fisiolgico.
Anticoagulan
te

Proporcin
Anticoagula
nte/Muestra

EDTA
(cido EtilenDiamino
Tetraactico)
Puede ser sal
disdica,
dipotsica o
tripotsica

2 gotas con 2
a 4cc de
sangre.
1,5 a 2,2
mg/mL de
sangre total

Color del
Tapn

Morado o
Violeta

Como
acta

Uso en el
Laboratorio

Acta
como
agente
quelante.
Fija el
calcio de la
sangre

Hematolgica:
recuentos
celulares
Hemoglobina
Hematocrito
Frotis sanguneos,
etc.

Citrato de
Sodio
U
Oxalato de
Sodio

Heparina

1:9, es decir 1
de
anticoagulant
e por 9 de
sangre

Impide que
el calcio se
ionice

El plasma se usa
para realizar
pruebas de
coagulacin.

Impide
que la
protombi
na se
transform
e
Trombina

Qumica Clnica
y Determinacin
de Gases
Arteriales.

Azul
(celeste)

0,1-0,2 mg
de heparina
por mL de
sangre.
Verde

Suero:
Tubo

Color del Tapn

Sin
anticoagula
nte
Rojo

Volumen
de Muestra

Uso en el Laboratorio

4-6 mL

Bioqumica: Ej.: Determinacin

de glucosa, colesterol, Ac. rico,
etc.
Serologa: Ej.: VDRL, pruebas
de hepatitis.

Algunos exmenes hematolgicos

1.- Velocidad de Sedimentacin Globular o
eritrosedimentacin.-

Se define como la distancia (en milmetros) que recorren los glbulos

rojos agregados al caer en el plasma, dispuestos en una columna
vertical al cabo de una hora. La VSG es un test no especfico que
puede ser utilizado para detectar un amplio rango de enfermedades y
para monitorear el curso evolutivo de ciertas enfermedades crnicas
como los procesos inflamatorios crnicos (artritis reumatoidea,
polimialgia reumtica y tuberculosis) o la respuesta a la terapia, por
ejemplo con citostticos (enfermedad de Hodgkin, linfomas y mieloma
mltiple). Sin embargo en ocasiones cuadros tan graves como
neoplasias y cirrosis pueden presentar una VSG normal. Igualmente
hay alteraciones fisiolgicas como por ejemplo durante en el
embarazo, la menstruacin.

Nos ayuda a diferenciar algunas enfermedades con hallazgos clnicos

semejantes, como por ejemplo:
En infartos aumenta y en angina de pecho es normal.
Esta aumentada en fiebre reumtica, artritis reumtica y artritis
pigenes pero no en osteoartritis.
En la cirrosis heptica es normal pero aumenta en el cncer de
hgado.
Se trata de un mtodo sencillo para realizar y requiere de
equipamiento simple
Es importante resaltar que la VSG se debe realizar antes de las 2
horas despus de haber realizado la extraccin de sangre.
Otras enfermedades donde suele estar elevada:
Anemias intensas
TBC
Lupus eritematoso
Vasculitis
Etc.
Suele estar disminuida en: Policitemias
Descenso de protenas en el plasma
Enfermedades renales y hepticas
Aspirinas como aspirinas, corticoides, etc.

Factores tcnicos capaces de modificar la VSG.Causas de aumento:

Desviacin de verticalidad de la pipeta

Aumento de la longitud y dimetro de la pipeta

Dilucin de la sangre

Causas de disminucin:
Reduccin del dimetro del tubo de Wintrobe
Utilizacin tarda de la sangre (espcimen envejecido)
Uso de anticoagulantes inadecuados.

Determinacin de la VSG

Habitualmente se emplean dos procedimientos:

Mtodo Westergreen

Mtodo de Wintrobe

En la actualidad no existe ningn mtodo de referencia para la

determinacin de VSG, aunque el ISCH (International Commitee for
Standardization in Hematology) recomienda el de Westergreen como
el ms aconsejable para la prctica clnica. El mtodo se describe a
continuacin.

Mtodo de Westergren
Pipetas de Westergren en un analizador automtico
1. Extraer sangre venosa (aprox. 1-2 mL) y homogeneizar con el
anticoagulante (citrato sdico 3.8 % en proporcin 1/4). Se
recomienda realizar la determinacin dentro de las 2 horas
posteriores a la extraccin de la muestra.
2. Cargar una pipeta de Westergreen y, en el momento de llegar a
la marca 0, poner en marcha el cronmetro. Asegurarse de que
la pipeta est en una posicin de 90 respecto la superficie,
exenta de vibraciones o de cualquier factor que modifique la
VSG.
3. Transcurridos 60 minutos exactos, leer la sedimentacin
eritrocitaria, que se expresa en mm/hora, y comparar los
resultados obtenidos con los resultados normales.
Metodo de Wintrobe
Materiales.- Muestra de sangre total, jeringa, cnula, tubo de
wintrobe, reloj, soporte de wintrobe
Tecnica.

Mezclar muy bien la sangre venosa

Por medio de una cnula insertada a una inyectadora aspirar

aproximadamente 2 cc de sangre

Eliminar con una gasa el exceso de sangre que queda en la

parte exterior

Descartar las dos primeras gotas

Insertar la cnula con la jeringa llena de sangre al tubo de

wintrobe hasta el fondo, llenndolo lentamente hasta la marca
superior izquierda 0 cero.

Retire la cnula lentamente evitando sacar la punta de la cnula

mientras llene el tubo, evitando as la formacin de burbujas
dentro del tubo.

Colocar el tubo verticalmente en el soporte especial para

asegurar la verticalidad

Ajustar el reloj a una hora

Leer a la hora exacta en la escala izquierda del tubo

El resultado se expresa en mm/h

Correccin de velocidad.Una vez cumplido el tiempo (1 hora), se observa el menisco:

Si est por encima de cero (0) debe restrsele a la lectura

el numero de rayitas que se pasaron de cero

Si est por debajo de cero (0) debe sumrsele a la lectura

el numero de rayitas que este por debajo de cero.

Valores de referencia
Los valores normales de referencia son:

Recin nacidos: de 0 a 2 mm/h.

Lactantes: hasta 10 mm/h.

Hasta la pubertad: hasta 11mm/h.

Hombres jvenes: hasta 10 mm/h.

Hombres adultos: hasta 12 mm/h.

Hombres mayores: hasta 14 mm/h.

Mujeres jvenes: hasta 10mm/h.

Mujeres adultas: hasta 19 mm/h.

Mujeres mayores: hasta 20 mm/h

En la mujer embarazada se puede observar durante los primeros

meses de gestacin una VSG elevada sin consecuencias patolgicas.
Mujer embarazada de 40 45 mm/h

2.- Globulos blancos.Son clulas sanguneas que se encuentran en la medula sea y tejido
linftico, son parte del sistema inmunitario del cuerpo, su funcin es
la defensa del organismo contra agentes infecciosos.
Contaje de globulos blancos.Para la cuenta manual de glbulos blancos se han empleado
diferentes procedimientos. El ms conocido es el que utiliza la
cmara de Neubauer, que es una microcmara de cristal excavada
en un portaobjeto especial que se cierra mediante un cubre
objeto. A esta cmara se le coloca una dilucin de las clulas
sanguneas que posteriormente se visualiza al microscopio. Para la
cuenta de leucocitos el liquido ms usado es el de Turck el cual
hemoliza los glbulos rojos y tie ligeramente el ncleo de los
leucocitos.

Lquido de Trck. Sol. Acuosa al 3% de cido actico glacial,

solucin violeta de genciana al 1%. En 100cc de agua destilada.
Filtrada antes de usar.
Muestra. Sangre capilar (preferiblemente). Sangre venosa con EDTA.
Materiales. Pipeta de glbulos blancos, torniquete con boquilla,
gasa, sangre capilar o total, liquido de Turk, cmara de Neubauer.
Procedimiento:
1. La muestra debe ser mezclada por lo menos 20 veces por
inversin.
2. Aspirar sangre hasta la marca 0,5 con una pipeta de
dilucin de glbulos blancos, enrasando exactamente.
3. Limpie cuidadosamente el exterior de la pipeta con gasa.
4. Colocar la pipeta en forma vertical y aspirar lquido de
Trck, hasta la marca 11.

5. Ocluya la punta de la pipeta con el dedo pulgar, retirar la

goma de succin y ocluya la punta superior con el dedo
medio.
6. Agitar la pipeta a mano durante 3min, en un agitador
mecnico durante 1min.
7. Descartar 2-3 gotas, cargar las dos cmaras del
hematmetro.
8. Esperar por 2min.
9. Montar el hematmetro en el microscopio y observar con
objetivo de menor aumento.
Se cuentan los glbulos blancos de los cuadrados grandes de las
esquinas y el central del hematmetro de Neubauer mejorado.

Cmara de Neubauer

Causas de error en la Cuenta de Glbulos Blanco

El recuento manual de eritrocitos tiene un error del 10%, el cual
puede deberse a:
1. Errores de extraccin: dilucin o hemoconcentracin. Coagulacin
parcial. Hemlisis
2. Mala homogeneizacin, por mezcla insuficiente de la sangre
3. Utilizacin de material mal calibrado, sucio o hmedo
4. Falta de suficiente agitacin de la pipeta de glbulos blancos
5. Cmara de Neubauer mal ajustada, sucia o mojada
6. Llenado incompleto de la cmara de Neubauer
7. Empleo de cubreobjetos deformable, no rgido
8. Clulas mal distribuidas en el fondo de la cmara
Valores de referencia:
Adultos: 5.000 10.000 Gb/mm

3.- Glbulos rojos.-

Uno de los mtodos para la cuenta de glbulos rojos, es el mtodo

visual directo. Para ello la sangre recolectada en un tubo con
anticoagulante se diluye con un lquido denominado Lquido de
Gower`s. este lquido permite observar claramente los hemates sin
alterar su membrana. Con ayuda de la pipeta de rojo se coloca en la
cmara de Neubauer y se procede a la cuenta de los mismos.
Liquido de Gower`s. Liquido isotnico que contiene Sulfato de sodio
anhidro 12,5 gr, Acido actico glacial 33,3 cc, agua destilada 200 cc.
Filtrar antes de usar
Muestra. Sangre capilar (preferiblemente) o sangre venosa con
EDTA.
Materiales:
1. Lquido de Gower`s: Sulfato de sdio anhidro 12.5gr, Acido Actico
glacial 33.3cc, Agua destilada 200cc. FILTRAR antes de usar.
2.- Sangre capilar (preferiblemente) o sangre venosa con EDTA.

Procedimiento:
1.- La muestra debe ser mezclada por lo menos 20 veces por
inversin.
2.- Aspirar sangre hasta la marca 0,5 con una pipeta de dilucin de
glbulos rojos, enrasando exactamente.
3.- Limpie cuidadosamente el exterior de la pipeta con gasa.
4.- Colocar la pipeta en forma vertical y aspirar lquido de Gowers,
hasta la marca 101.
5.- Ocluya la punta de la pipeta con el dedo pulgar, retirar la goma de
succin y ocluya la punta superior con el dedo medio.
6.- Agitar la pipeta a mano durante 3min, en un agitador mecnico
durante 1min.
7.- Descartar 2-3 gotas, cargar las dos cmaras del hematmetro.
8.- Esperar por 2min.
9.- Montar el hematmetro en el microscopio, enfocar con objetivo 10x
de menor aumento, contar con objetivo de 40.x
Se cuentan los glbulos Rojos del cuadrado mediano, de las esquinas
y el central del hematmetro de Neubauer mejorado, como se indica
en la figura.
Valores de referencia
Hombres: 4,5x106-5,5 x106
Mujeres: 4,0 x106- 5,0 x106
Nios: 4,2 x106-5,2 x106
Lactantes (1-6 meses): 3,8 x106- 5,2 x106
Recin nacidos: 5,0 x106-6,0 x106
Diferencia entre Lquido
Turck
Es un una solucin ligeramente
cida que hace los glbulos blancos
ms visibles y destruye a los
eritrocitos.

de Turck y Gowers:
Gowers
Es un lquido isotnico que
previene la hemlisis y crenacin
de los glbulos rojos. Los glbulos
blancos no son destruidos por este
lquido,
pero
como
son
numricamente
escasos,
morfolgicamente diferentes (en
cuanto a tamao y ncleo)
y la
dilucin es tan alta que
los
glbulos blancos no interfieren en
la cuenta.

4.- Hemoglobina.Es una protena que contiene hierro que est dentro de los glbulos
rojos y es el que le otorga el color rojo a la sangre . Su funcin
principal es de transferir oxigeno desde los pulmones a todo el
cuerpo.

La sangre se diluye con el lquido de Drabkin, el cual hemoliza los

hemates y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina
(cianuro de hemoglobina).
Mtodo: Cianometahemoglobina. Mide la hemoglobina total, activa o
no en el transporte de oxigeno, es ideal para la determinacin
rutinaria por su fcil ejecucin.
Lquido de Drabkin: Bicarbonato de sodio 1 gr. Cianuro de potasio
0.05gr. Ferricianuro de K 0.2gr. Agua destilada 100cc. Mezclar.
Esta solucin acta directamente sobre la membrana del glbulos rojo
rompindola y dejando en libertad su contenido, permitiendo
determinar la cantidad de hemoglobina.
Muestra: Sangre capilar (preferiblemente), sangre venosa con EDTA.
Materiales: Pipeta de Shali, torniquete con boquilla, tubo de ensayo
de 13 x 100, liquido de Drabkin, espectofotmetro
1. Con una pipeta volumtrica transferir 5 mL del reactivo de
Drabkin a un tubo de 13x 100.
Aadir por medio de la pipeta de Shali 0,02ml (20 L), de sangre
exactamente a la reactivo de Drabkin. Limpiando previamente la
sangre del
2. exterior de la pipeta de Shali.
3. Mezclar la solucin por inversin del tubo.
4. Esperar 5-10 min para que se forme la cianometahemoglobina.
5. Transferir la mezcla en una cubeta para realizar lectura
colorimtrica con una longitud de onda 540nm. El grado de
absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que
contenga la sangre.
Valores de referencia:
Recin nacidos: 13,6-19,6 g/dL
Nios de 1 ao: 11,3 13 g/dL
Nios de 10-12 aos: 11,5 14,8 g/dL
Mujeres: 11,5 16,5 g/dL
Hombres: 14,0 18,0 g/dL

Errores tcnicos en la determinacin de Hemoglobina:

Errores en la obtencin del espcimen de sangre:
1. Errores de extraccin
2. Empleo de anticoagulantes no recomendados
3. Coagulacin parcial de la sangre
Errores de la dilucin:
1. Empleo de pipetas automticas descalibradas u otras pipetas sucias o
hmedas

2. Exceso de sangre adherida a las paredes externas del capilar antes

de introducirlo en el reactivo
3. Dilucin incompleta de la sangre en el reactivo.

5.- Microhematocrito.El hematocrito es el porcentaje del volumen de la sangre que ocupa

la fraccin de los glbulos rojos en un volumen de sangre dado.
Tcnica del Microhematcrito:
Se pone en contacto la punta del tubo capilar con la gota de sangre
obtenida por puncin capilar o con la sangre venosa bien mezclada,
dejar que el capilar se llene hasta los dos tercios de su longitud.

NOTA: Si la sangre se obtiene por puncin capilar, se usa un capilar

que contiene anticoagulante. Si es por extraccin venosa, use la
sangre que contiene anticoagulante y un capilar sin anticoagulante.
1. Si es sangre capilar incline el tubo de lado a lado, de tal manera
que la columna de sangre se desplace a lo largo del tubo, de un
lado a otro varias veces, para que la sangre se mezcle con el
anticoagulante y deje la columna de sangre finalmente en un
extremo del tubo.
2. Selle con plastilina uno de los extremos del tubo.

3. Centrifugar en micro centrfuga.

Como utilizar la tabla lectora:

1.- Sostenga el tubo capilar frente a la escala de manera que el
fondo de la columna de eritrocitos quede exactamente al mismo
nivel de la lnea horizontal 0.
2.- Desplace el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada
con el N 100 quede al nivel del tope de la columna del plasma, este
pendiente que el fondo de la columna de eritrocitos contine en 0 y
que el tubo este en posicin vertical.
3.- La lnea que pase a nivel del tope de la columna de eritrocitos
indicar el nivel del hematocrito.
Valores de referencia:
Hombres: 40 50%
Mujeres: 38 44%
Nios: 38 - 44%
Lactantes (1 a 6 meses): 37 42%
Recin nacidos: 50 58%

6.- Puncion capilar.Frotis de sangre perifrica.-

Consiste en extender una gota de sangre sobre un portaobjeto o de

un cubreobjeto, a partir del cual se observara al microscopio las
caractersticas de las clulas.
El objetivo es obtener una delgada capa de sangre sobre un cubre o
porta objeto, que luego tieremos con una coloracin especifica con
el fin de poder evaluar la proporcin y morfologa de las clulas
sanguneas.
Es un examen que nos proporciona informacin acerca del nmero y
forma de las clulas sanguneas.
Muestra: En los adultos de la yema de los dedos o lbulo de la oreja.
En lactantes del dedo pulgar del pie o del tobillo.
Materiales: lancetas desechables, alcohol, gasa, lminas
portaobjetos, laminillas cubreobjetos libres de grasa (limpiar con
alcohol)
Procedimiento.- puncin capilar
1. Realizar masajes en la regin a punzar. Generalmente se
selecciona los dedos medio y pulgar, puede ser taln del pie en
los recin nacidos, tal como se indica en la figura:

2. Desinfectar el lugar a puncionar

con alcohol, secndola
posteriormente con gasa seca y estril. Utilizar siempre guantes y
lancetas estriles.
3. Destapar lanceta.
4. Se debe puncionar de forma perpendicular.
5. Limpiar la primera gota de sangre, con gasa seca. Esto se realiza a
fin de eliminar las clulas epiteliales que se desprenden del sitio de
puncin.
6. Realizar una pequea presin del dedo o del taln para que fluya
nuevamente la sangre
7.- Colocar una gota de sangre en la laminilla sin que toque el dedo y
superponer una segunda laminilla sobre la primera como se muestra
a continuacion

8.- Una vez que se ha extendido la sangre, separar las laminillas con un
movimiento rpido y seguro en forma lateral y horizontal

9.- Dejar secar los extendidos al aire libre y colorear.

10.- Otra forma de realizar un frotis sanguneo es a travs de un
extendido sobre laminas portaobjetos. Para ello:
a.- Se debe colocar una gota de sangre en uno de los extremos de la
lmina
b.- Con la ayuda de otra lmina en un ngulo de 45 superponerla
sobre la gota de sangre.
c.- Con un movimiento rpido y seguro llevar la lmina hasta el otro
extremo.
Dejar
secar
y
colorear.

Un buen Frotis debe tener las siguientes caractersticas:

Ocupar las dos terceras partes de la laminilla.

Tiene forma de dedo, ligeramente redondeado en el borde

ms fino
Debe ser continuo ( no contener espacios en blanco)
Debe ser suficientemente delgado.
Al colocar contra la luz la porcin delgada debe tener
aspecto de arco iris.

NOTA: la misma tcnica de puncin capilar, puede ser usada para la

obtencin de sangre, sobre todo en nios recin nacidos.

COLORACIONES
La tincin de los frotis sanguneos con colorantes policromticos,
permite la identificacin de los diversos tipos celulares en la sangre
perifrica.
Coloracin de Wright
Coloracin de Wright es utilizada para teir clulas de frotis de sangre
o de mdula sea.La coloracin de Wright es una modificacin de la
tincin de Romanowsky que se utiliza en la tincin diferencial de
elementos celulares de la sangre. Cuando los frotis de sangre se tien
mediante estas tcnicas, el ncleo de leucocitos y el citoplasma
adoptan la coloracin caracterstica azul o rosa.
Procedimiento:
1.- Coloque las lminas o laminillas sobre un soporte o sobre tapones
de goma invertidos en caso de usar laminillas. Con el frotis hacia
arriba, sobre tapones de goma invertidos, sobre una bandeja de
coloracin.
2.- Cubra las laminillas con solucin colorante de Wright y dejarlo
actuar por 1 2 min.
3.- Aadir una cantidad igual de solucin amortiguadora, evitando
que la mezcla se derrame, soplando suavemente se deja por 2
3min. Un brillo metlico debe aparecer sobre la superficie de la
mezcla colorante.
4.- Lavar con agua e inclinar la laminilla para escurrir, secar al aire y
limpiar el dorso de restos de colorante.
5.- En el caso de frotis en laminillas debe colocarse el extendido
coloreado sobre una lmina con una gota de aceite de inmersin, de
tal manera que el extendido quede entre lmina y laminilla. Observar
al microscopio.

Coloracin de Giemsa:
Se emplea en Hematologa para observar los elementos sanguneos
normales y en Microbiologa para identificar parsitos, espiroquetas,
levaduras, hongos.
Procedimiento:
1.- Coloque las laminas o laminillas, con el frotis hacia arriba, sobre un
soporte. En el caso de frotis en laminillas, colocarlas sobre tapones
de goma invertidos, sobre una bandeja de coloracin.
2.- Cubra los extendidos con metanol durante 3 min, no dejar que se
evapore.
3.- Incline el extendido y descarte el metanol.
4.- Cubrirlo con solucin De Giemsa diluida 1:10. Durante 1 min.
5.- Lavar con agua y secar al aire libre.
6.- Limpiar el dorso del extendido del resto de colorante.
7.- Montar la preparacin sobre una lmina con una gota de aceite de
inmersin de manera que quede el extendido entre lmina y laminilla.
8.- Observar al microscopio
GRUPO SANGUINEO
Es un mtodo para determinar cul es el tipo especfico de sangre
que tenemos. El tipo de sangre que tenemos depende de si hay o no
ciertas protenas, llamadas antgenos, en nuestros glbulos rojos.
La sangre a menudo se clasifica de acuerdo con el sistema de
tipificacin ABO. Este mtodo separa los tipos de sangre en cuatro
tipos:

Tipo A

Tipo B

Tipo AB

Tipo O

El tipo de sangre (o grupo sanguneo) depende de los tipos que

hemos heredado de nuestros padres.
Razones por las que se realiza el examen
Este examen se hace para determinar el tipo de sangre de una
persona. Los mdicos necesitarn conocer su tipo de sangre cuando
le vayan a hacer una transfusin de sangre o un trasplante, debido a
que no todos los tipos de sangre son compatibles entre s.

Si usted tiene sangre tipo A, nicamente puede recibir sangre

tipo A y tipo O.

Si usted tiene sangre tipo B, nicamente puede recibir sangre

tipo B y tipo O.

Si usted tiene sangre tipo AB, puede recibir sangre tipo A, B, AB

y O.

Si usted tiene sangre tipo O, nicamente puede recibir sangre

tipo O.

La sangre tipo O se le puede dar a alguien con cualquier tipo de

sangre, razn por la cual las personas con este tipo de personas son
llamadas donantes de sangre universales.
Si usted es Rh+, puede
recibir sangre Rh+ o Rh-, pero si es Rh-, nicamente puede recibir
sangre Rh-.