Anda di halaman 1dari 4

LAILATUS SHOLEHAH

201010070311137
BIOLOGI 1-C
Prinsip Enzyme Linked Immunoassays (ELISA)
ELISA ( enzyme-linked immunosorbent assay) adalah teknik biokimia banyak
digunakan untuk mendeteksi antigen dalam sampel.Sandwich ELISA menggunakan antibodi
antigen dua spesifik,sebuah antibodi menagkap terikat dengan fase padat dan deteksi antibodi
enzim terkait.Konjugasi langsung enzim antibodi memastikan deteksi yang mudah digunkan
dan tes sensitifitas dengan sinyal latar belakang yang minimal.
Enzim Linked Immunoassays (ELISA) dikembangkan pada tahun 1970 dan menjadi
cepat diterima.Berbagai macam prinsip-prinsip assay dapat digunakan dalam teknik ELISA.Saat
ini yang paling penting adalah:
1.Metode Kompetitif
2.Metode Sandwich
3.Antibodi menangkap metode
1.Metode Kompetitif
Salah satu komponen dari reaksi imun adalah insolubilized dan yang lain diberi label
dengan enzim.Analit kemudian bisa diukur dengan kemampuannya untuk mencegah
pembentukan kompleks antara insolublized dan reagen berlabel.Keuntungan dari pendekatan ini
adalah bahwa hanya satu langkah inkubasi diperlukan dan bahwa rentang konsentrasi yang
analit bisa diukur tanpa pengenceran sampel agak sempit dan bahwa antigen atau antibodi
(dalam kasus dimana baik mungkin ada dalam sampel misalnya hepatitis B) menghasilkan
respon yang sama,dan karena itu bisa tidak bisa menjadi dibedakan dalam alat tes langkah satu.
2.Metode Sandwich (tidak langsung)
Metode dimana komponen yang sama dari reaksi kekebalan tubuh (misalnya antibodi)
digunakan dalam insolubilized dan bentuk berlabel enzim.Komponen lain,analit yaitu (antigen
dalm sampel bentuk jembatan antara dua reagen.Dimana salah satu komponen (biasanya
antigen) digunakan dalam bentuk insolubilized untuk mengikat analit dari sampel
(antibodi),yang selanjutnya ditentukan dengan penambahan antibodi kedua berlabel terhadap
kelas yang sama antibodi sebagai antibodi analit atau protein A.
Pada prinsipnya,kuantifikasi dapat dicapai melalui berbagai konsentrasi analit sagat luas
dalam metode sandwich tersebut.Efek Prozone dapat dihindari dengan cara berikut:
a.menggunakan langkah-lagkah inkubasi sekuensial untuk sampel dan label,atau
b.dengan menggunakan antibodi monklonal
Salah satu metode sandwich adalah metode sandwich inhibisi yaitu metode yang
mengandung sampel yang mengandung analit (biasanya antibodi) adalah pre-inkubasi dengan
jumlah tetap sebesar mitra mengikat perusahaan (misal:antigen) setelah mana sisanya sebesar
antigen ditentukan dalam assay sandwich.Metode ini biasanya sangat rumit dan memiliki
jangkauan pengukuruan terbatas.Metode ini memungkinkan untuk mendeteksi secara simultan
antibodi atau atigen,jika salah satu dari dua analit hadir dalam sampel.
3.Antibodi menangkap Metode
Metode ini digunakan untuk mendeteksi antibodi dari subkelas imunoglobin
spesifik,dengan terlebih dahulu bereaksi sampel dengan misalnyan insolubilized anti-IgM,dan
selanjutnya dengan baik antigen berlabel enzim diikuti oleh antibodi terkait enzim.Baik antibodi
dari subkels immunoglobulin lainnya maupun faktor rheumatoid mengganggu secara signifikan

dalam tes tersebut.Mereka banyak diguanakan untuk diagnosis infeksi akut dengan deteksi
IgM.Tes ini dapat digunakan untuk mendeteksi IgG danIgA.Mengingat
kecenderungan
terhadap penyederhanaan tes dan kuantifikasi analit pada rentang konsentrasi yang uas.Harus
diharapkan bahwa metode penghambatan kompetitif dan sandwich akan berkurang
pentingnya,dan metode sandwich dan antibodi akan menangkap prinsip-prinsip pengujian utama
di masa depan.
1.Assay Karakteistik
Penggunaan antibodi monklonal telah menebabkan banyak perbaikan dalam sistem
ELISA.
1.Tinggi sensitivitas,baik oleh pemilihan antibodi dengan afinitas yang sangat tinggi,atau
dengan pengurangan tinggi dan variabilitas dari reaksi latar belakang,yang membuat konsentrasi
yang sangat rendah anlit lebih mudah terdeteksi.
2.Tinggi spesifisitas,dengan menghindari adanya antibodi apapun dalam sistem uji dengan
rektivitas spesifik terhadap epitop non-analit,dan dengan memilih kombinasi dari antibodi
monokonal yang selanjutnya dapat meningkatan spesifisitas.
3.Tingkat kepraktisan,misalnya dengan memperkenalkan inkubasi simultan label,fase padat dan
sampel tanpa resiko Efek Prozone.
2.Label Enzim
Sebagian besar tes ini menggunakan kuda-lobak peroksidae,fosfatase alkali,atau BDgalaktosidase.Perkembangan baru-baru ini yang paling menarik telah ada metode baru untuk
mendeteksi enzim daripada penggunaan enzim baru.Fluorimeers diperkenalkan pada tahun 1984
untuk mendeteksi alkaline phosphatase dan BD-galaktosidasaeperoksidase.Metode yang
tersedia untuk mendeteksi kuda lobak dengan cara chemilumininescence.Fluorimetric dan
metode luminometric menawarkan sensitivitas tinggi dan jangkauan lebih luas daripada
pengukuran spektrometri konvensional.BMT secara bertahap menggantikan substrat mutagenik
seperti OPD,yang menyebabkan peningkatan kepekaan dan keselamatan.

Lempeng
ELISA:
sumur
berwarna menunjukkan reaktivitas. Semakin gelap warna, semakin tinggi reaktivitas yang
terjadi.

Sandwich ELISA urutan assay - antigen dan deteksi antibodi ditambahkan bertahap
Pada alat tes urutan, sampel diterapkan pada pelat mikro yang dilapisi antibodi-baik.
Menangkap antibodi mengikat antigen dalam sampel. senyawa Unbound dikeluarkan oleh
prosedur mencuci sebelum deteksi antibodi enzim-linked ditambahkan ke sumur. Deteksi
antibodi mengikat ke epitop kedua (bagian imunogenik) pada antigen. antibodi Unbound
dikeluarkan dengan mencuci sebelum penambahan substrat, yang diubah oleh enzim untuk
sinyal berkromogen. Reaksi enzim dihentikan dan hasilnya dipantau spektrofotometri. Antigen
lebih dalam sampel, semakin kuat sinyalnya. Sandwich ELISA juga dapat dibangun sebagai alat
tes simultan di mana antibodi sampel dan deteksi ditambahkan pada langkah yang sama.

Sandwich ELISA assay simultan - antigen dan deteksi antibodi ditambahkan secara
bersamaan.

ELISA assay kompetitif


Tipe kedua adalah tes ELISA kompetitif di mana terdapat mengikat kompetitif dari
antibodi, antigen-spesifik biotin-linked untuk antigen sampel atau untuk antigen terikat pada
mikro dengan baik. Terikat antibodi dideteksi dengan streptavidin enzyme-linked. Karena
konsentrasi antigen-antibodi spesifik adalah penting dan harus dibatasi dalam pengujian ini,
biotin / langkah streptavidin digunakan untuk meningkatkan sinyal.Dalam pengujian ini,emakin
banyak antigen pada sampel atau contoh,sinyal yang lemah.Beberapa alternatif variasi
dariBentuk ELISA ditemukan