: 28 September 2016 : Laboratorium JAK Poltekkes Denpasar
Tujuan Untuk determinasi kualitatif adanya antibodi spesifik semua serotype (IgG, IgM, dan IgA) virus HIV-a termasuk sub tipe-O dan HIV-2 dalam serum, plasma atau whole blood pasien.
II.
Metode Tes imunokromatografi
III.
Prinsip Terjadinya reaksi antara antibodi spesifik (IgG, IgM, dan IgA) pada sampel dengan antigen (gp41, p24, dan gp36) virus HIV, dengan gaya kapilaritas terjadi reaksi antigen-antibodi-antigen dan akan menimbulkan garis warna pada rapid strip test.
I.
DASAR TEORI Human Immunodeficiency Virus adalah virus yang terdiri dari serotipe HIV-1 dan HIV-2 yang dapat menyerang sistem kekebalan dari tubuh manusia yaitu sel darah putih (Sel-T) yang berfungsi untuk mencegah terjadinya suatu infeksi dan pada akhirnya menyebabkan penurunan sistem kekebalan tubuh secara bertahap yang sering dikenal dengan AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) (Caroline, M Royle, dkk. 2014). Sekitar 1,2 juta orang di Amerika Serikat terinfeksi HIV. HIV-1 dan HIV-2 diperoleh melalui kontak dengan cairan tubuh yang terinfeksi, seperti darah, air mani, cairan vagina, atau ASI. Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit (CDC) merekomendasikan
bahwa semua orang berusia 13 sampai 64 tahun diskrining untuk HIV
menggunakan pendekatan opt-out. CDC juga merekomendasikan bahwa semua wanita hamil diskrining untuk HIV pada trimester pertama kehamilan dan diuji ulang selama trimester ketiga jika wanita menunjukkan perilaku berisiko tinggi (Yarbrough dan Anderson. 2016). HIV rapid test merupakan prosedur pemeriksaan untuk mendeteksi adanya anti-HIV yang sering digunakan pada saat ini, hal tersebut disebabkan karena prosedur ini memiliki sensitifitas dan spesifisitas yang cukup baik. Dalam beberapa studi menyebutkan bahwa rapid test dan ELISA memiliki daya deteksi yang sebanding. Selain itu dikarenakan prosedur untuk rapid test ini tidak serumit ELISA maka lebih banyak digunakan disaat ini terlebih lagi untuk skrining tes (Bhanu Mehra, dkk. 2014).
II.
ALAT DAN BAHAN
a. Alat: Mikropipet 50 l Yellow tip Kaset pemeriksaan (HIV rapid test) Tabung merah tanpa antikoagulan Tabung dengan antikoagulan Sentrifuge b. Bahan: SD BIOLINE Rapid Test HIV Tissue Dilluent c. Sampel Serum atau Plasma atau Whole blood (Bila tidak segera diperiksa maka serum dapat disimpan pada suhu 2-80C atau suhu -200C lama. Untuk whole blood bila tidak segera diperiksa disimpan pada suhu 2-80C selama 3 hari.
Sampel tidak dapat digunakan jika hemolisis, lipaemik, ikterik,
dan kontaminasi bakteri). III.
CARA KERJA a. Serum, Plasma atau Whole Blood 1. Siapkan alat, bahan dan reagen yang digunakan pada meja praktikum (semua komponen pemeriksaan disuhu kamarkan terlebih dahulu 30 menit). 2. Kaset test dikeluarkan dari kemasannya, ditempatkan pada daerah datar dan permukaan yang kering 3. Dipipet 10 l untuk serum plasma atau whole blood dipipet 20 l ke sampel well. 4. Tambahkan 4 tetes diluent ke sampel well. 5. Diamkan selama 10-20 menit. Tidak boleh lebih dari 20 menit akan memberikan hasil yang salah. 6. Setelah didiamkan 20 menit lalu baca hasil. b. Darah Kapiler 1. Pilih jari 3 atau 4 sebelum itu diperas terlebih dahulu jari yang akan dipilih. 2. Swab jari tangan tersebut dengan alkohol swab lalu tusuk dengan lancet. 3. Dihisap darah tersebut dengan pipet kapiler sampai batas line hitam. 4. Masukkan pipet kapiler tersebut ke sampel well. 5. Tambahkan 4 tetes diluent ke sampel well. 6. Diamkan selama 10-20 menit. Tidak boleh lebih dari 20 menit akan memberikan hasil yang salah. 7. Setelah didiamkan 20 menit lalu baca hasil.
IV.
NILAI RUJUKAN Negatif (-)
V.
INTERPRETASI HASIL Positif Terbentuk garis pada daerah T1, C : Terbentuk garis pada daerah T2, C : Terbentuk garis pada daerah T2 , T1 dan C :
(+) HIV-1 (+) HIV-2 (+) HIV-1
bila pada garis T1 intensitas waran lebih gelap, sedangkan (+)
HIV-2 bila pada garis T2 intensitas waran lebih gelap.
Negative Terbentuk garis pada daerah C Invalid Tidak terbentuk garis pada daerah C Terbentuk garis pada daerah T1 Terbentuk garis pada daerah T2 VI.
HASIL PENGAMATAN Data Probandus : Nama : Dwi Sri Yani Purwanti Jenis kelamin : Perempuan Umur : 20 tahun Hasil Pemeriksaan : Negatif (-) hanya terdapat garis warna pada line C Gambar :
Sampel yang digunakan
Rapid test yang digunakan
*Kode sampel : Dwi Sri
Didapatkan hasil negati (-) dimana
hanya terdapat 1 garis warna pada daerah Control Line Tempat
(sumur)
memasukkan sampel
untuk
VII.
PEMBAHASAN Human Immunodeficiency Virus adalah virus yang terdiri dari serotipe HIV-1 dan HIV-2 yang dapat menyerang sistem kekebalan dari tubuh manusia yaitu sel darah putih (Sel-T) yang berfungsi untuk mencegah terjadinya suatu infeksi dan pada akhirnya menyebabkan penurunan sistem kekebalan tubuh secara bertahap yang sering dikenal dengan AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) (Caroline, M Royle, dkk. 2014). HIV-1 awalnya berasal dari simian immunodeficiency virus (SIV) yang menginfeksi simpanse (SIVcpz). HIV-1 adalah agen penyebab AIDS, penyakit progresif yang ditandai dengan jumlah CD4 yang rendah. HIV-1 menyebabkan cacat awal pada respon imun seluler selama infeksi akut berlangsung, contohnya terjadi penurunan cepat dalam sel CCR5 + CD4 + mukosa T dan hilangnya IL-2 sekresi oleh sel CD4 + T. Sedangkan HIV-2 berasal dari infeksi SIV dari mangabeys (SIVsm), penularan dan perkembangan penyakit yang ditandai dengan penurunan sel CD4 + T dari HIV-2 ini lebih lambat dibandingkan dengan HIV-1 di dalam tubuh pasien. Namun setelah pengembangan menjadi AIDS, manifestasi klinis HIV-2 pada pasien tidak dapat dibedakan dari infeksi HIV-1. (Caroline, M Royle, dkk. 2014). Mendeteksi adanya antibodi anti-HIV sebagai penanda paparan HIV adalah cara yang paling banyak digunakan untuk diagnosis secara serologi. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) telah menjadi
prosedur
penyaringan
yang
lebih
baik.
Namun
dikarenakan
pemeriksaan ELISA membutuhkan waktu yang lama, instrumen
khusus dan membutuhkan keahlian khusus maka mengakibatkan metode ELISA beralih ke Rapid Test, terutama apabila sumber daya terbatas. Sementara menurut beberapa studi daya deteksi Rapid Tes dan ELISA sebanding. Beberapa peneliti lain juga telah mengangkat mengenai sensitivitas dan spesifisitas dari tes cepat (Bhanu Mehra., dkk. 2014) Dalam kebanyakan kasus, diagnosis baru yang dibuat bertahun-tahun setelah akuisisi HIV dan ketika jumlah CD4 telah jatuh ke tingkat yang mempengaruhi kesehatan, menyebabkan individu untuk mencari bantuan medis. Pada praktikum kali ini dalam pemeriksaan HIV Rapid Strip Test menggunakan metode immunokromatografi dengan prinsip adanya reaksi antara antibodi spesifik HIV dalam serum atau plasma pasien yang melewati membran yang telah dilapisi dengan antigen HIV-1 rekombinan yang menangkap antigen (gp41, p24) yang terikat pada area test T1 dan antigen HIV-2 rekombinan yang menangkap antigen (gp36) yang terikat pada area T2 dan akan menghasilkan garis warna selanjutnya campuran tadi naik ke area kontrol C dimana di area ini terdapat antibodi poliklonal yang tidak spesifik dan akan berikatan dengan campuran tadi dan menimbulkan garis warna. Pada area kontol akan selalu positif sebagai kontrol prosedur, hal ini menunjukkan bahwa jumlah sampel yang digunakan cukup dan membran pada alat telah berfungsi dengan baik. Sampel yang digunakan saat praktikum adalah sampel serum atas nama Dwi Sri. Sampel yang digunakan tidak boleh lipaemik, ikterik ataupun hemolitik, serta tidak disarankan untuk menggunakan sampel yang terindikasi rheumartoid factor karena akan mengganngu interpretasi hasil. Apabila pemeriksaan ditunda maka sampel serum harus disimpan pada suhu 2-8C yang dapat bertahan sampai 48 jam dan pada suhu -20 C yang dapat bertahan sampai 4 minggu. Namun
apabila menggunakan sampel whole blood penyimpanan harus
dilakukan pada suhu 2-8C yang dapat bertahan dalam waktu 3 hari, jika melakukan pemeriksaan dengan menggunakan whole blood dengan penyimpanan lebih dari 3 hari maka akan menyebabkan reaksi nonspesifik yang terjadi antara sampel dengan reagen sehingga dapat memberikan hasil yang salah. (Insert Kit. 2013). Pada pemeriksaan HIV Rapid Strip Test dilakukan secara kualitatif dimana sebelum itu sampel dan reagen dikondisikan pada suhu ruang sebelum digunakan agar nantinya dapat terjadi reaksi antara antibodi dalam serum atau plasma dengan antigen pada Strip Test dengan sempurna serta agar hasil yang didapat lebih dapat diandalkan. Dengan menggunakan mikropipet, diambil 10L sampel serum atau plasma atau 20 L whole blood lalu diteteskan kedalam sumur sampel kemudian ditambahkan 4 tetes buffer. Didiamkan selama 10-20 menit dan dibaca hasil kemudian interpretasikan hasil pengujian setelah 20 menit. Jangan membaca hasil test lebih dari 20 menit karena hal ini dapat memberikan hasil yang salah. Banyak hal yang perlu diperhtikan pada saat prkatikum khususnya untuk praktikan diharuskan untuk menggunakan APD yang lengkap, baik dan benar berhubung sampel pemeriksaan yang dilakukan bersifat infeksius maka dari itu APD sangat diperlukan untuk menghindari terjadinya kontaminasi. Selain itu HIV Strip Test harus disimpan pada suhu 1-300C dan diletakkan pada tempat yang kering tidak direkomendasikan disimpan pada freezer agar komponenkomponen yang ada di dalam HIV Strip Test tersebut tidak rusak sehingga tidak mendapatkan hasil yang salah (tidak sesuai). Prosedur yang dilakukan haruslah sesuai agar dapat memberikan hasil yang tepat, pemipetan sampel atau buffer yang kurang dapat menyebabkan tidak munculnya hasil dikarenakan reaksi yang terjadi tidak sempurna. Dan juga pada saat pengambilan serum atau plasma perlu diperhatikan penggunakan tip yang berbeda untuk setiap sampel hal ini untuk mencegah terjadinya kontaminasi silang antara sampel satu dengan
lainnya yang dapat menyebabkan hasil yang salah. HIV Strip Test ini tidak boleh
digunakan
jika
sudah
kadarluasa karena dapat
mempengaruhi hasil dan juga dapat mendapatkan hasil yang invalid
akibat komponen strip test yang rusak. VIII. SIMPULAN Dari Praktikum pemeriksaan HIV Rapid Test dari probandus Dwi Sri Yani Purwanti berjenis kelamin perempuan didapatkan hasil negati yang menunjukkan tidak memiliki antibodi spesifik HIV pada serum pasien.
IX.
DAFTAR PUSTAKA Caroline, M Royle, dkk. 2014. HIV-1 and HIV-2 differentially mature plasmacytoid dendritic cells into interferon-producing or antigen-presenting cells. [online]. Tersedia: https://www. ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4822683/ (Diakses 30 September 2016). Insert Kit SD HIV-1/2 3.0 Bioline. 2013. The 3rd Generation of ONE STEP antibodies to HIV-1/HIV-2 Test. Mehra, Bhanu, dkk. 2014. Rapid Tests versus ELISA for Screening of HIV Infection: Our Experience from a Voluntary Counselling and Testing Facility of a Tertiary Care Centre in North India. [online]. Tersedia : https://www.hindawi. com/journals/isrn/2014/296840/ (diakses, 30 September 2016) Melanie L. Yarbrough dan Neil W. Anderson. 2016. The Brief Case: A Reactive HIV Rapid Antibody Test in a Pregnant Woman. [online]. Tersedia : http://jcm.asm.org/content/54/4/826.full &usg=ALkJrhhnk2cQO32ji0Gj4yPt3eNRjTKqg (Diakses 30 September 2016)
