ABSTRACT

La eficiencia de la extraccin con fluidos supercrticos (SFE) en la produccin

de aceite con una alta concentracin de tocoferoles (vitamina E), a partir de
semillas de quinua (Chenopodium quinoa Willd.) se investig. Se estudi el
efecto de los parmetros del proceso tales como la presin, temperatura y
tiempo de extraccin en el rendimiento total de tocoferol. Para este
propsito, se aplic la metodologa de superficie de respuesta (RSM). Las
condiciones ptimas de SFE para la extraccin de aceite enriquecido de
tocoferol a partir de semillas de quinua fueron: extraccin de presin de
18,5 MPa, la extraccin de temperatura 130C y el tiempo de extraccin de
180 min. Estas condiciones ptimas dieron una concentracin de tocoferol
de 336,0 mg / 100 g de aceite y la concentracin de tocoferol fue cuatro
veces ms que en la extraccin con hexano.
INTRODUCCIN
La quinua (Chenopodium quinoa Willd.) Es un pseudocereal que se cultiva
en la regin andina desde hace miles de aos. Hoy en da la quinua, como
una planta de cereales, se cultiva principalmente en Amrica del Sur y los
productores y exportadores de semillas de quinua ms grandes del mundo
son Bolivia y Per. Propuesto por el gobierno de Bolivia y recibiendo un
fuerte apoyo de muchos pases de Amrica Central y del Sur, la quinua ha
sido sealada por la Organizacin para la Alimentacin y la Agricultura de
las Naciones Unidas (FAO) como un alimento con un "alto valor nutritivo,"
impresionante biodiversidad y con un papel importante que desempear en
el logro de la seguridad alimentaria en todo el mundo. Recientemente, ha
habido un creciente inters en varios pases (especialmente en Europa),
iniciando la introduccin del cultivo y trabajos de investigacin sobre la
quinua. La prueba americana y europea de la Quinua han dado buenos
resultados y han demostrado el potencial de la quinua como un cultivo de
cereales y forrajes. El grano de la quinua es altamente nutritivo debido a su
calidad proteica, excelente y amplia gama de minerales y vitaminas. La
composicin prxima de la Qunoa vara de 10 a 18% de protenas, 54,1 a
64,2% de carbohidratos, 2,4 a 3,65 de la ceniza, 2,1 a 4,9% de fibra cruda y
4,5 a 8,75% de grasa cruda. El aceite de quinua es rica en cidos grasos
esenciales, como linoleato y linolenato y tiene una alta concentracin de
antioxidantes naturales como -tocoferol y -tocoferol. El contenido de
vitamina E en semillas de quinua dadas en la literatura es bastante
divergente y est entre 4.6 a 5.9 mg / 100 g. La vitamina E se considera que
es uno de los antioxidantes naturales ms importantes que tiene su fuente
en productos de origen vegetal. La presencia de tocoferoles en los aceites
vegetales tiene un efecto en su proteccin contra los procesos oxidativos
desfavorables. Por lo tanto, el aceite de quinua se puede utilizar como una
valiosa fuente de tocoferoles. Debido a la alta calidad de su aceite y el
hecho de que algunas variedades muestran las concentraciones de grasa de
hasta 9,5%, la quinua es considerada como un nuevo valor potencial de los
cultivos oleaginosos.
El aceite de quinua puede ser utilizado en muchas industrias, tales como en
las industrias de cosmticos, farmacutica y alimentaria. Mtodos de
extraccin de disolvente utilizados para extraer los aceites tienen muchas

desventajas tales como disolventes txicos y primero que todo, estos

mtodos se caracterizan por una baja selectividad y pueden conducir a la
prdida de componentes valiosos porque el proceso se lleva a cabo a altas
temperaturas. La extraccin con fluidos supercrticos (SFE) es un mtodo
para la extraccin de ingredientes valiosos a partir de sustancias naturales
con un alto rendimiento y calidad, siendo estudiado ampliamente como una
alternativa a los mtodos de extraccin convencionales. Varios materiales
vegetales se han obtenido mediante el uso de SFE. El dixido de carbono
supercrtico es el disolvente supercrtico ms preferido en extracciones de
alimentos porque no es txico, no es explosivo, barato, fcil y
completamente separado del extracto, que tiene un potencial de
extracciones selectivas mediante la variacin de la presin y la
temperatura.
Por lo tanto, parece aconsejable aplicar extraccin con fluidos supercrticos
para la obtencin de aceite con mayores niveles de vitamina E a partir de la
quinua. Muchos informes sobre la obtencin de aceite con un mayor
contenido de vitamina E de los diversos materiales vegetales tales como:
Silybum, cascarilla residual de oliva, hojas de olivo, meln y semillas Roselle
se dan en la literatura. Sin embargo, hay una falta de informacin disponible
en la literatura sobre la extraccin de aceite de quinua usando SFE.
En el presente trabajo, se investig la eficiencia de la extraccin con fluidos
supercrticos en la obtencin de aceite con una alta concentracin de
vitamina E, a partir de semillas de quinua. Se investig la influencia de los
parmetros de proceso (presin, temperatura, tiempo) en el rendimiento
total de la extraccin y el contenido de vitamina E. Se utiliz la metodologa
de superficie de respuesta (RSM) para evaluar cmo los diferentes factores
influyeron en las variables.
MATERIALES Y METODOS
Materiales
Las semillas de quinua (C. quinoa Willd.) se compraron en una tienda local
(pas de origen Bolivia). La humedad total de las semillas se determin por
Sartorius MA 30 y era igual a 9,8%. El tamao de las semillas antes de la
molienda fue de 2,5 mm (80,4%). Las semillas de quinua fueron molidas en
ZM 200 molinillo de Retsch. El Tamao de las semillas molidas se determin
mediante la realizacin de anlisis de tamiz y fue de 1,0 a 1,4 mm (68%).
Los reactivos y los estndares
Tocoferoles de referencia, DL--T (>96%) de Sigma Chemicals, rac--T (90+
%), -T (99%) y -T (93.7%) fueron adquiridos de Supelco (Bellefonte, PA,
EE.UU.). Acetato de etilo y n-hexano fueron de grado HPLC y se obtuvieron
de POCH S.A. (Gliwice, Polonia). El dixido de carbono (99,5%) se obtuvo de
Linde Gas (Polonia). La arena de grano fino para Soxhlet y SFE extracciones
se tamiz sobre tamices y se recogieron fracciones de 0,2-0,3 mm. Despus,
la arena se purific por elucin sucesiva con calentamiento de agua
destilada, metanol y hexano. La arena se sec despus de cada etapa de
elucin.
Mtodos

Extraccin clsica
Las muestras de 10 g de semillas de quinua de tierra fueron ponderados con
una precisin de 0,0001 g y a continuacin se mezclaron con 10 g de arena
para determinar el contenido de aceite mediante una extraccin Soxhlet
utilizando n-hexano a 60 C durante 16 h. Despus de la extraccin de nhexano se evapor a vaco a 40 C y, posteriormente, el disolvente se
elimin totalmente por el vapor de nitrgeno. Despus de la evaporacin del
disolvente, se determin gravimtricamente el contenido de aceite. La masa
de aceite extrado se supone que es 100% de la materia extrable.
Procedimientos de extraccin de fluidos supercrticos
Un sistema de SFE a escala de laboratorio Lizard 2001 SEKO-K s.r.o (Brno,
Repblica Checa) para la presin mxima de 40 MPa y una temperatura de
150 C, se utiliz en este estudio. El aparato esquemtico utilizado para la
extraccin de CO2 supercrtico se muestra en la Fig. 1. semillas molidas de
quinua fueron cargados en la celda de extraccin de 1,2 ml de capacidad
(0,5 cm de dimetro interno y 6,1 cm de altura efectiva). Acerca de 0,4 g de
arena y 0,6 g de semillas molidas (ponderada con una precisin de 0,0001
g) se encuentran en la clula y el contenido de la celda se agit durante 5
min mediante el uso de un agitador rotatorio. El extracto se recoge en 12 ml
viales (previamente ponderado). Los experimentos se llevaron a cabo de la
temperatura 30 a 130 C, a presin desde 12,5 hasta 28,5 MPa para 15 a
180 min.
El ajuste del flujo de CO2 no es posible en este sistema SFE. Las mediciones
de la velocidad de flujo de CO2 se realizaron al final del capilar (restrictor)
con dimetro de 45 y la longitud de 7 cm. Los flujos SCO2 dependan de las
condiciones de extraccin y estaban dentro del rango de 10,5 a 27,0 l / h.
El rendimiento de la extraccin se determin comparando el peso de aceite
obtenido por SFE con el peso de aceite obtenido por extraccin Soxhlet. Los
extractos obtenidos por SFE en las diferentes condiciones se ensayaron para
determinar la concentracin de tocoferoles. Todos los resultados
experimentales (SFE y anlisis HPLC) reportados son valores promedio de
tres repetidos ensayos experimentales independientes. El error estndar
entre los datos fue alrededor de 5%.
Determinacin de las concentraciones de tocoferol en el extracto
El contenido de tocoferoles en las muestras extradas de aceite se
determin usando un sistema de cromatografa lquida de alta resolucin de
Shimadzu (Kyoto, Japn). El sistema cromatogrfica incluye un detector de
fluorescencia (ex= 294 nm, em= 330 nm) y NH2-NP (250 mm x 4,6 mm,
5m) columna (Supelco, Bellefonte, PA, EE.UU.). El eluyente era n-hexano/
acetato de etilo 70:30 (v/v) con un caudal constante de 1ml/min. Antes del
anlisis HPLC, los aceites se diluyeron con 0,5 o 1,0 ml de n-hexano, filtrado
(0,45 m filtro de jeringa de nylon) y se inyect una muestra de 20 L.
DISCUSIN DE RESULTADOS
El objetivo de los estudios es obtener aceite enriquecido con tocoferol por
medio de la extraccin con fluido supercrtico CO2. El contenido total de

aceite en las semillas de quinua fue determinado usando el mtodo Soxhlet

y fue de 7.210.42g/100g de semilla. Las concentraciones de los
tocoferoles individuales en el aceite fueron: -tocoferol 22.740.40mg/100g
de aceite, -tocoferol 48.420.44mg/100g, -tocoferol 1.620.07mg/100g.
El contenido de -tocoferol fue menor a 0.04mg/100g de aceite.
Como se sabe, los parmetros (presin, temperatura, flujo SCO2 y tiempo
de extraccin) del proceso SFE tienen un impacto significativo en la
cantidad de aceite extrado de las semillas, y lo ms importante en su
composicin. En la etapa inicial de la investigacin, los parmetros de SFE
se eligieron sobre la base de informes de la literatura. Nyam et al. (2010)
investigaron las posibilidades de utilizacin de semillas de meln y Roselle
Kalahari para obtener aceites de tocoferol enriquecido. Se obtuvieron las
mayores concentraciones de tocoferoles (274.74 mg / 100 g de aceite) para
Kalahari meln por extraccin SCO2 en condiciones: 29 MPa, 58C, 180 min,
mientras que para las semillas Roselle, el resultado fue 89,75mg/100g de
aceite en condiciones ptimas: 1MPa; 80 C; 180 min. Otros investigadores
que se han ocupado de la determinacin de las condiciones ptimas para la
extraccin con SCO2 de tocoferoles usando la cscara de oliva residual
lograron los mejores rendimientos en las condiciones de proceso: 25 MPa;
40 C; 360 minutos y el resultado obtenido fue de 15,79 mg de tocoferoles
en 100 g de aceite de cscara de oliva (Gracia et al., 2011). Hadolin et al.
(2001) obtuvieron aceite de vitamina E ricos de S. marianum y el extracto
ms concentrado de tocoferol se logr a 20 MPa; 80 C.
Mendiola et al. (2008) estudiaron las posibilidades de obtener fracciones
altamente enriquecidas en vitamina E a partir de Spirulina platensis micro
alga por SFE y en condiciones: 22 MPa, 83,3 C y 75 min. Obtuvieron la
mayor concentracin de tocoferoles en el material estudiado. Es el resultado
de estos datos que los parmetros de extraccin en los casos descritos eran
diferentes.
No hay datos relativos a la extraccin de aceite de semillas de quinua por el
mtodo SFE en la literatura. Teniendo en cuenta los datos de la literatura y
los resultados de los experimentos preliminares realizados en nuestro
laboratorio, hemos decidido llevar a cabo la extraccin en el intervalo de
temperatura de 50-100 C, a una presin de 12,5 a 24,5 MPa y en el tiempo
de 30-80 minutos. Se emple la metodologa de superficie de respuesta
(RSM) utilizando un diseo compuesto central (CCD) para determinar el
efecto de tres variables en la concentracin de tocoferol. En nuestros
estudios, se han previsto 20 experimentos en los que se determin el
impacto de tres parmetros independientes, a saber, presin, temperatura y
tiempo de extraccin de la cantidad de aceite obtenido. Se aplic el
programa informtico Statistica 6.0 para experimentar la planificacin, el
anlisis de los datos experimentales y la presentacin grfica de
representaciones espaciales de superficie de respuesta. Los resultados de
los estudios se presentaron como la cantidad de aceite obtenido (g/100 g de
semillas) y la concentracin de tocoferol en aceite (mg/100 g). Los
rendimientos del proceso para el aceite obtenido y tocoferoles (%) se
presentan en comparacin con los resultados obtenidos por el mtodo de
Soxhlet. Los valores medios de los resultados se calcularon a partir de al

menos tres repeticiones de los experimentos. Los parmetros de extraccin

y los resultados de los estudios se presentan en la Tabla 1.
Parcelas de superficie de respuesta que muestran el efecto del tiempo de
extraccin, la temperatura y la presin en el rendimiento de tocoferol se
presentan en la Fig. 2 (a) - (c).
Tabla 1 muestra la concentracin de tocoferol en aceite obtenido bajo las
condiciones de prueba de quince diferentes (T, P, t). El anlisis de varianza
de los factores estudiados para el modelo de superficie de respuesta se da
en la Tabla 2. El modelo matemtico generado a partir de los datos
experimentales utilizando Statistica 6.0 se expresa por la siguiente ecuacin
cuadrtica (Y es la concentracin total de los tocoferoles en aceite):
Comparacin de las concentraciones de tocoferol en el aceite, los valores
reales y los valores predichos se presentan en la Fig. 3. El modelo de
segundo orden ecuacin polinmica estaba en muy buen acuerdo con los
resultados experimentales, con R2 de 0,84.
La parcela de superficie de respuesta se represent con una sola constante
de mantenimiento variable en cero (zero-nivel) y el resto de los parmetros
de extraccin cambiado en los rangos del experimento. Los valores cero
para experimento fueron 75 C, 18,5 MPa, y 55 min para la temperatura,
presin y tiempo, respectivamente. Se puede observar a partir de los
resultados obtenidos que la presin de extraccin es un parmetro
importante independientemente de la temperatura y el tiempo de
extraccin. Sobre la base de la figura. 1a y b, presentando un efecto de la
presin, se encontr que se obtuvo la mayor concentracin de tocoferoles
para 18,5 MPa. Extraccin realiza tanto en baja y presiones ms altas
result en rendimientos de extraccin ms bajos. Por otra parte, se puede
concluir de los resultados obtenidos (Tabla 1) que, cuando la extraccin se
llev a cabo en el tiempo de 55 a 80 min y la temperatura de 50 a 75 C, el
aumento de la presin tuvo un efecto desfavorable sobre el contenido de
tocoferoles en el extracto. Simultneamente con el aumento de la presin,
la cantidad de tocoferoles (g / 100 g de semillas) extrado en condiciones de
alta temperatura (100 C) y mucho tiempo de extraccin (80 min) aumenta.
Efecto de la temperatura de extraccin en la concentracin de tocoferoles
se presenta en la Fig. 1a y c. El rango de temperatura en nuestro plan de
investigacin estaba dentro del rango entre 35 y 120 C. El rendimiento de
la extraccin aumenta con el aumento de la temperatura en un tiempo
constante (Fig. 1a) y una presin constante (Fig. 1c). Estos resultados estn
de acuerdo con los resultados de otros investigadores que describen las
dependencias similares.
El efecto del tiempo de extraccin en la concentracin de tocoferoles se
presenta en la figura 1b y c, se observ que de manera similar como para la
temperatura, la concentracin de tocoferoles en una muestra se increment
con el tiempo ms largo de la extraccin. El ms alto contenido de
tocoferoles totales por ejemplo se obtuvo 201,3mg/100 g de aceite a una
temperatura de 120 C (18,5 MPa; 55 min) (Tabla 3).

Los nuevos estudios nos han permitido formular conclusiones ms precisas

sobre el efecto de los parmetros en la eficiencia de la extraccin SCO2 de
tocoferol a partir de semillas de quinua. El contenido de tocoferoles en los
extractos aumenta muy significativamente a altas temperaturas y a
presiones ms bajas (130 C, 18,5 MPa). Una dependencia contrario se
observa en el caso de rendimiento de aceite que es la ms favorable a
temperaturas ms bajas y a altas presiones (75 C, 24,5 MPa).
Dependencias similares fueron observados por Hadolin et al. (2001).
Indicaron que un aumento en la presin durante la extraccin reduca la
concentracin de tocoferoles en el extracto.
Se observ que el aumento de presin de extraccin tuvo un efecto
favorable sobre la concentracin de tocoferoles (mg/100 g de aceite) a corto
tiempo de extraccin (30 min), tanto a baja 50 C y alta temperatura 120
C. Sin embargo, el aumento de la temperatura a 130 C resulto en una
disminucin de la concentracin de tocoferoles en el aceite. El efecto de la
presin, el tiempo y la temperatura de extraccin en el contenido de
tocoferol en el extracto se presenta en la Fig. 4.
Independientemente de las condiciones de presin y temperatura, mayor
tiempo de extraccin tiene un efecto positivo sobre la cantidad tanto de
aceite y tocoferol extrado. Extraccin llevado a cabo durante 60 min (18,5
MPa; 130 C) (Tabla 2) caus el aumento en el contenido de tocoferol en el
extracto a 299,5mg/100 g de aceite. Slo el tiempo ms largo de la
extraccin podra dar lugar a un mayor rendimiento lo que se verifica en
estudios posteriores. Se decidi extender el tiempo de extraccin a 180 min.
Los parmetros de extraccin y los resultados obtenidos se presentan en la
Tabla 4.
Como era de esperar, el tiempo ms largo de extraccin dio como resultado
aumento de la cantidad de tocoferoles extrados. Los resultados ms
preferidos se obtienen cuando la extraccin se lleva a cabo durante 180
min, lo que result en la obtencin del aceite que contiene tocoferoles en
una cantidad de 336,0 mg / 100 g de aceite. La extraccin llevada a cabo
bajo las condiciones seleccionadas (18,5 MPa; 130 C; 180 minutos) nos ha
permitido obtener un rendimiento del 25% de tocoferol. Efecto del tiempo
sobre el rendimiento de la extraccin de tocoferol a partir de semillas de
quinua se presenta en la Fig. 5.
La prolongacin del tiempo de reaccin de 60 min a 180 min result en un
incremento en el rendimiento de la extraccin de tocoferol de las semillas
en aproximadamente un 44% (desde 0,93 hasta 1,34%). Por otra parte, un
aumento significativo en la concentracin de tocoferol en el aceite obtenido
de las semillas de quinua fue observado. La concentracin de tocoferoles en
el aceite obtenido por el mtodo de Soxhlet fue 72,8mg/100g de aceite,
mientras que el contenido de tocoferoles en el extracto obtenido por SFE fue
336,0mg/100 g de aceite, la concentracin del tocoferol en el extracto ha
aumentado en aproximadamente 462%. Se obtuvo tal resultado de las
siguientes condiciones de extraccin: 130C, 18,5MPa y 180min de
extraccin. La comparacin de los resultados obtenidos por SFE y la
extraccin de Soxhlet se presentan en la Tabla 5.

Se obtuvieron valores significativamente ms bajos (28-38%) de los aceites

de tocoferol enriquecido para Kalahari meln, semillas de Roselle y Sacha
inchi (Follegatti-Romero et al, 2009;. Nyam et al., 2010). Sin embargo, otras
investigaciones que obtienen aceite de vitamina E-rico de S. marianum,
cscara de oliva residual y semillas de girasol lograron un aumento
significativo (98-300%) de la concentracin de tocoferol en aceite (de Lukas
et al, 2002;.. Gracia et al, 2011;. Hadolin et al, 2001).
CONCLUSIONES
En este trabajo, hemos utilizado el dixido de carbono supercrtico para la
extraccin de aceite con una alta concentracin de tocoferoles (vitamina E)
a partir de semillas de quinua. Los resultados se compararon con los
obtenidos para la extraccin convencional con disolventes orgnicos (nhexano).
La extraccin de CO2 supercrtico se llev a cabo a temperaturas de 30 a
130 C; presiones entre 12,5 y 28,5 MPa; tiempos entre 15 a 180 min y con
una velocidad de flujo de CO2 entre 10,5 a 27,0 l/h. La aplicacin de la
metodologa de superficie de respuesta (RSM) con un diseo compuesto
central (CCD) se us para optimizar los parmetros de SFE. Como resultado
de nuestros estudios, se encontr que se obtuvo el extracto con alto
contenido de tocoferoles a altas temperaturas (120 a 130 C) y a una
presin de 18 a 20 MPa. Independientemente de las condiciones de presin
y temperatura, mayor tiempo de extraccin tiene un efecto positivo sobre la
cantidad tanto de aceite y tocoferol extrado. Las condiciones ptimas
fueron: presin de extraccin 18,5 MPa, temperatura de extraccin de 130
C y el tiempo de extraccin de 180 min. El rendimiento de la extraccin de
tocoferol en condiciones ptimas es relativamente alta y es 25,65%, el
contenido total de tocoferoles en el extracto es 336,0 mg/100 g. Los
resultados indican que los tocoferoles son ms de cuatro veces
concentrados que los obtenidos por extraccin con hexano clsica.