Serie Oceanolgica. No.

10, 2012

ISSN 2072-800x

Comportamiento
fisiolgico
del
basidiomicete
marino
Nia
vibrissa
(Basidiomycota: Agaricales) en presencia de hidrocarburos aromticos
policclicos
Physiologic behavior of the marine basidiomycete Nia vibrissa (Basidiomycota:
Agaricales) in presence of polycyclic aromatic hydrocarbons
Ayixn Snchez Reyes*, Yessica Delgado Rodrguez*, Ramn Alberto Batista Garca*, Erisbel
Samn-Legr**, Diana Enrquez Lavandera**, Silvia Acosta Daz*, Ana Luisa Martnez Cruz*
*

Centro de Investigaciones del Petrleo. Churruca # 481, e/ Va Blanca y Washington,

Cerro, La Habana, Cuba, CP 12 000, Telf.: (537) 640 3560. Correo: ayixon@gmail.com
**
Instituto de Oceanologa. Ave. 1ra No.18406 e/184 y 186, Rpto. Flores, Playa, CP 11600, Ciudad de La
Habana, Cuba, Telef.: (537) 271 6008.
Resumen
Las potencialidades fisiolgicas de los hongos ligninolticos, se consideran una alternativa para la
restauracin ecolgica de ecosistemas impactados con petrleo crudo y sus derivados. Nia vibrissa, un
basidiomicete marino aislado recientemente en playas del litoral sur oriental de Cuba, constituye una
especie promisoria para la remocin de compuestos orgnicos persistentes. Como objetivo fundamental
de este trabajo se plante caracterizar fisiolgicamente el cultivo sumergido de Nia vibrissa en medio
lquido de sabouraud, suplementado con pireno y dibenzotiofeno, dos hidrocarburos aromticos
policclicos de notable impacto ambiental. Se evalu la biomasa fngica como medida de crecimiento y
los parmetros pH, conductividad, y consumo de la fuente de carbono durante 15 das. Se comprob que
Nia vibrissa creci en el medio seleccionado en presencia de pireno y dibenzotiofeno a una concentracin
de 0,01%, evidenciando tres fases de crecimiento. En los cultivos suplementados con ambos
hidrocarburos como tratamientos independientes, as como en el control sin tratar, se evidenci un
aumento significativo de la conductividad. El pH inicial se increment con el tiempo de fermentacin hasta
valores cercanos a la alcalinidad. Este trabajo constituye el primer estudio fisiolgico de Nia vibrissa en
Cuba y representa un importante aporte al conocimiento de la ecologa y fisiologa de hongos marinos.
Abstract
The physiologic potentialities of ligninolytic fungi are considered an alternative for the ecological
restoration of ecosystems impacted by crude oil and its derivatives. Nia vibrissa, a marine white rot
basidiomycete, recently isolated in Cuban south-eastern beaches, constitutes a promissory species for
the removal of persistent organic compounds. The fundamental objective of this work was the
physiological characterization of submerged cultures of Nia vibrissa in liquid Sabouraud medium, enriched
with pyrene and dibenzothiofhene, two aromatic polycyclic hydrocarbons with significant environmental
impact. Fungal biomass was evaluated as growth measure, and parameters like pH, conductivity, and
carbon source consumption were assessed during 15 days. It was verified that Nia vibrissa grew in the
selected medium in presence of pyrene and dibenzothiofhene at a concentration of 0,01%, evidencing
three growth phases. In the cultures enriched with both hydrocarbons as independent treatments, as well
as in the untreated control, a significant increase in conductivity was confirmed. Initial pH increased with
the fermentation time until near-alkalinity values. This work constitutes the first physiologic study of Nia
vibrissa in Cuba and it represents an important contribution to marine fungi ecology and physiology.
Palabras Claves: Dibenzotiofeno, hongos marinos, restauracin ambiental, pireno.
Keywords: Dibenzothiofhene, marine fungi, environmental restoration, pyrene.

INTRODUCCIN
En la actualidad la creciente demanda energtica ha incrementado la utilizacin del petrleo
y sus derivados, y con ello la aparicin de zonas contaminadas ya sea por derrames de buques
u operaciones del proceso de perforacin, extraccin, refinacin y transporte. La actividad
petrolera impacta directamente el ambiente, teniendo consideracin especial las emisiones

30

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

atmosfricas, los residuales slidos y los efluentes lquidos, los cuales arrastran cantidades
apreciables de hidrocarburos (Tanaka, Matsui, Konishi, Maruhashi & Kurane, 2002; Baldi, Pepi
& Fava, 2003). Los efluentes lquidos inciden sobre los ecosistemas acuticos y terrestres
provocando la ruptura del equilibrio natural de los mismos.
Entre los hidrocarburos con mayor impacto ambiental se consideran los policclicos
aromticos (HAP). Se definen como especies recalcitrantes para los ecosistemas terrestres y
acuticos. Actualmente la comunidad cientfica internacional apela a la bsqueda de soluciones
para atenuar su efecto ambiental y las graves consecuencias para el planeta y la salud humana
en particular (Castao, Errico, Malats & Kogevinas, 2004).
Los microorganismos y en especial los hongos se consideran imprescindibles para las
acciones de restauracin ecolgica en ambientes contaminados con compuestos orgnicos
persistentes. Los hongos filamentosos poseen patrones de excrecin enzimticos que
favorecen la degradacin parcial o completa de numerosos sustratos (Esser & Lemke, 2001).
Los basidiomicetos sobresalen entre los representantes fngicos de mayor atraccin para estas
actividades (Dvila & Vzquez-Duhalt, 2006). Ellos expresan y excretan eficazmente al medio
extracelular, enzimas inespecficas de gran inters en acciones de biodegradacin y
biotransformacin de xenobiticos (Higuchi, 2004; Martnez et al., 2005).
Nia vibrissa, basidiomicete de podredumbre blanca aislado en playas del litoral sur oriental
de Cuba, constituye un representante fngico de gran importancia ecolgica (Samn-Legr &
Enrquez, 2010). No hay referencias bibliogrficas sobre la fisiologa de este hongo marino, ni
sobre sus potencialidades en la biodegradacin de hidrocarburos, de manera que la
prospeccin de sus enzimas y metabolitos con este fin resulta interesante y novedosa.
El pireno y el dibenzotiofeno (DBT) se utilizan como compuestos modelos en los estudios de
biodegradacin de compuestos aromticos condensados y aromticos azufrados (Kanaly &
Harayama, 2000; Li, Zhang, Feng, Cai & Xu, 2007). Numerosos estudios publicados en la
literatura especializada apuntan la utilidad de dichos sustratos en la evaluacin de sistemas
biolgicos, con el fin de detectar nuevas cepas microbianas con potencialidades biotecnolgicas
para la microbiologa e ingeniera ambientales (Zheng & Obbard, 2002; Zahra, Gili & Sharareh,
2006; Kim et al., 2007). Para la realizacin de este trabajo se definieron como objetivos los
siguientes: caracterizar fisiolgicamente el cultivo sumergido del basidiomicete marino Nia
vibrissa atendiendo a su crecimiento en medio lquido de Sabouraud suplementado con pireno y
dibenzotiofeno; as como analizar las modificaciones que este provoca en la conductividad y el
pH del medio, como factores de relevancia para el adecuado desarrollo de un microorganismo
in vitro.
MATERIALES Y MTODOS
Microorganismos
Se utiliz una cepa del basidiomicete marino de podredumbre blanca Nia vibrissa, aislada de
restos de madera de deriva colectados a lo largo de la zona intermareal de la playa Imas,
provincia Guantnamo, Cuba. La identificacin de esta cepa se realiz en el Instituto de
Oceanologa del Ministerio de Ciencia Tecnologa y Medio Ambiente (Samn-Legr & Enrquez,
2010), y su aislamiento se garantiz mediante el mtodo indirecto de incubacin de sustratos
vegetales en cmara hmeda (Volkmann-Kohlmeyer & Kohlmeyer, 1993).
Inculos
Los inculos que se utilizaron fueron obtenidos en placas Petri de 10 cm de dimetro sobre
medio agar extracto de malta (BioCen, 2004). Los cultivos se incubaron a 28C durante 7 das,
bajo condiciones de luz natural. Para la inoculacin de las fermentaciones se utilizaron
porciones de micelio de 5 mm de dimetro del borde exterior de la colonia.
31

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

Medios de cultivo
Para la conservacin e inculo se emple el medio agar extracto de malta (BioCen, 2004). El
medio lquido de Sabouraud (BioCen, 2004) se utiliz para la fermentacin sumergida. Este
medio se suplement con pireno y dibenzotiofeno comercial, grado analtico, sustratos
certificados por la Norma Internacional de Calidad ISO 9001 (Laboratory Chemicals Riedel-de
Han) a concentracin fija para cada ensayo.
Caracterizacin fisiolgica de Nia vibrissa en medio lquido de Sabouraud
Se utilizaron matraces erlenmeyers de 250 mL de capacidad que contenan 50 mL de medio
lquido de sabouraud suplementado con 0,01% de pireno y DBT como tratamientos
independientes. Los matraces fueron inoculados con cinco porciones de micelio de 5 mm de
dimetro del borde de crecimiento activo de la colonia, e incubados en zaranda orbital (modelo
GFL 3300) a 150 r.min-1 durante 15 das a 28C. Los controles abiticos se prepararon en
erlenmeyers que contenan medio de cultivo suplementado con los sustratos seleccionados.
Como controles biticos se utilizaron erlenmeyers con medio de cultivo inoculado con la cepa
de estudio, sin la adicin de los hidrocarburos aromticos policclicos. Se realizaron dos rplicas
por cada variante. Se determinaron a los tratamientos y controles experimentales los
parmetros pH, conductividad y peso seco de la biomasa como medida del crecimiento fngico
a los 3, 6, 9, 12 y 15 das de incubacin. Se estim la concentracin de glcidos totales para el
monitoreo del consumo de la fuente de carbono segn el mtodo fenol/sulfrico descrito por
Dubois, Gilles, Hamilton, Rebers & Smith (1956).
Determinaciones analticas
pH y conductividad
Las determinaciones de pH y conductividad se realizaron a la temperatura ptima
recomendada para el ensayo (250C), con pH metro/conductmetro digital (ORION, Thermo
Scientific) para los tratamientos con pireno y DBT, control bitico y medio de cultivo sin tratar.
Peso Seco
La biomasa se estim mediante mtodo gravimtrico. Se coloc papel de filtro (Filter-Lab) a
60C en la estufa por 24 h, despus se enfro el papel en el desecador por 20 min y se pes en
balanza analtica (Sartorius BL210S). Se separ el micelio de los extractos crudos mediante
filtracin en un embudo Buchner y un matraz kitazato con ayuda de una bomba de vaco. Se
lav la biomasa con agua destilada y el papel de filtro se coloc en la estufa a 60C durante 24
h. Se dej enfriar en un desecador por 20 min y se pes el papel secante junto con la biomasa
(Castro, 2008). El clculo del peso de la biomasa se realiz segn la ecuacin siguiente:

Glcidos totales
La determinacin de la concentracin de glcidos totales presente en los tratamientos se
realiz segn el mtodo fenol/sulfrico descrito por Dubois et al. (1956). En tubos sumergidos
en bao de agua-hielo se adicion 0,5 mL de muestra; 0,5 mL de fenol 5% (p/v) y 2,5 mL de
H2SO4 concentrado. Se colocaron todos los tubos en bao Mara durante 15 min a temperatura
de ebullicin y luego se enfri hasta temperatura ambiente. El monitoreo de la absorbancia a
32

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

490 nm se realiz mediante mtodo continuo durante 30 s. Se obtuvo una curva de calibracin
con medio lquido de Sabouraud empleando una concentracin inicial de 5,0 mg.mL-1 para la
interpolacin de los datos.
Procesamiento estadstico
Para el procesamiento estadstico de los datos se consider un diseo completamente
aleatorizado, emplendose el paquete estadstico StatGraphics Plus 5.1. La normalidad de los
datos se comprob mediante el test de Shapiro-Wilks, y la homogeneidad de varianza se
evidenci por el test de Cochran-Haltley-Bartlet. En la determinacin de diferencias entre las
medias se aplic un procedimiento de comparacin mltiple de medias. El mtodo utilizado
consisti en el anlisis de las menores diferencias significativas de Fischer (LSD -siglas en
ingls-). Los datos que no se ajustaron a una distribucin normal, se analizaron mediante
mtodos no paramtricos empleando el paquete estadstico Statistic 6.0.
RESULTADOS
Caracterizacin fisiolgica de Nia vibrissa en Medio Lquido de Sabouraud
Biomasa
En la figura 1, se presentan los datos de biomasa producida por los tratamientos con DBT,
pireno y el control bitico a los 3, 6, 9, 12 y 15 das de fermentacin. La cepa en estudio mostr
la capacidad de crecer en el medio de cultivo seleccionado y en medio suplementado con DBT
y pireno a la concentracin 0,01% como tratamientos independientes, sin que se identificaran
afectaciones morfolgicas visibles en la biomasa respecto al control. El anlisis de varianza
para la determinacin de las diferencias existentes en la variable analizada para los distintos
niveles, permiti establecer que el crecimiento alcanzado por el hongo fue significativo respecto
a los valores de biomasa al inicio de la fermentacin para un nivel de significacin < 0,05.
La curva de crecimiento correspondiente al control bitico mostr un comportamiento tpico
para hongos filamentosos en medio lquido agitado. Entre los das 0 y 9 se manifiestan dos
fases importantes del crecimiento: fase de adaptacin y fase de crecimiento rpido. En el da 9
de fermentacin se obtuvo el mximo valor de biomasa (13,68 g.L-1), y despus la velocidad
especfica de crecimiento disminuye hasta entrar en la fase de crecimiento neto o autolisis.

Figura 1.Crecimiento del hongo Nia vibrissa durante 15 das de fermentacin en erlenmeyers de 250 mL
de capacidad con 50 mL de medio lquido de sabouraud, suplementado con 0,01% de pireno y DBT como
tratamientos independientes a 28C y 150 r.min-1 (.. Pireno; _ _ _ DBT; ___ Control Bitico).
Figure 1. Growth of the fungus Nia vibrissa during 15 days of fermentation in 250-mL Erlenmeyers with 50
mL of liquid Sabouraud medium, enriched with 0,01% pyrene and DBT as independent treatments, at
28C and 150 r.min-1(.. Pyrene; _ _ _ DBT; ___ Biotic Control).

33

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

El tratamiento con DBT revel un perfil de crecimiento caracterizado por tres etapas: una
fase de adaptacin de 3 das, fase de crecimiento rpido comprendida entre los das 3 y 6, con
el mximo valor de biomasa para este tratamiento (11,55 g.L-1), seguido de una disminucin en
los valores de peso seco correspondiente a una etapa de autolisis aparente, puesto que
despus del da 12 el crecimiento del microorganismo revierte su tendencia hacia el aumento
de la biomasa. El tratamiento con pireno reflej una larga fase de adaptacin con duracin de 6
das, posteriormente se evidenci un aumento del crecimiento (etapa de crecimiento rpido)
hasta el da 12 de fermentacin, con un mximo valor de peso seco (12,48 g.L-1),
manifestndose durante los prximos 3 das una disminucin de la biomasa no significativa
estadsticamente. Aunque se detectaron diferencias estadsticamente significativas entre los
grupos analizados respecto al crecimiento para un nivel de significacin <0,05; los valores
mximos de peso seco alcanzado en las variantes no muestran diferencias significativas entre
s.
pH y conductividad
En las figuras 2 y 3, se muestran los resultados de las determinaciones de pH y
conductividad para los tratamientos con DBT y pireno, control bitico y medio de cultivo. El
medio de cultivo sin tratar no reflej variaciones significativas en los valores de pH y
conductividad iniciales: 5,2 y 1850,5 S.cm-1 respectivamente, durante los 15 das de
fermentacin. Se not una ligera disminucin de los valores de pH en los grupos estudiados.
Este fenmeno para el DBT y pireno ocurre hasta el tercer da, mientras que para el control
bitico se alarga hasta el da 6. Para los tratamientos y control bitico se manifest un aumento
en los valores de pH a partir de los lmites mencionados anteriormente, alcanzndose niveles
mximos al da 15 de fermentacin (7,51 para DBT; 7,81 para pireno; 8,62 para control bitico).
El anlisis estadstico demostr que no existen diferencias significativas entre las variantes
analizadas, respecto a los valores de pH registrados a los diferentes das (ANOVA no
paramtrico: test de Kruskal-Wallis: H (14, N= 30) =13,99933; p= 0,4498).

Figura 2.Variacin del pH en los tratamientos, control bitico y medio de cultivo, durante 15 das de
fermentacin en erlenmeyers de 250 mL de capacidad con 50 mL de Medio Lquido de Sabouraud,
suplementado con 0,01% de pireno y DBT como tratamientos independientes a 28C y 150 r.min-1 (..
Pireno; _ _ _ DBT; ___ Control Bitico; __..__.. Medio de Cultivo).
Figure 2. pH variation in the treatments, biotic control and culture medium, during 15 days of fermentation
in 250-mL Erlenmeyers with 50 mL of liquid Sabouraud medium, enriched with 0,01% pyrene and DBT as
independent treatments, at 28C and 150 r.min-1(.. Pyrene; _ _ _ DBT; ___ Biotic Control; __..__.. Culture
Medium).

Los valores de conductividad para el tratamiento con pireno y control bitico poseen un
comportamiento similar entre s, el cual se caracteriza por un aumento exponencial a partir de
los das 6 y 9 respectivamente, alcanzando valores mximos al da 12 (4030 S.cm-1 para

34

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

Conductividad S.cm 1

Pireno y 4407,5 S.cm-1 para control bitico). Estos valores difieren estadsticamente con los
niveles de conductividad evaluados durante los primeros 6 y 9 das de fermentacin,
respectivamente; sin embargo no se detectaron diferencias entre ambas variantes.
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
0 3 6 9 12 15 18
Tiempo(Das)

Figura 3. Variacin de la conductividad (S.cm-1) en los tratamientos, control bitico y medio de cultivo,
durante 15 das de fermentacin en erlenmeyers de 250 mL de capacidad con 50 mL de Medio Lquido
de Sabouraud, suplementado con 0,01% de pireno y DBT como tratamientos independientes a 28C y
___
DBT; ___ Control Bitico; __..__.. Medio de Cultivo).
150 r.min-1 (.. Pireno;
Figure 3. Variation in the conductivity (S.cm-1) in treatments, biotic control and culture medium, during 15
days of fermentation in 250-mL Erlenmeyers with 50 mL of liquid Sabouraud medium, enriched with
0,01% pyrene and DBT as independent treatments, at 28C and 150 r.min-1(.. Pyrene; _ _ _ DBT; ___
Biotic Control; __..__.. Culture Medium).

El tratamiento con DBT mostr un aumento con tendencia lineal a partir del tercer da de
fermentacin, obtenindose un punto de mxima conductividad al da 15 (5242,5 S.cm-1). Este
tratamiento mostr los niveles ms elevados de conductividad durante todo el proceso
fermentativo. A partir del da 12 los valores de conductividad observados en este tratamiento
difieren estadsticamente de los estimados durante los 9 primeros das de incubacin. En la
grfica se aprecia como permanecen sin variacin los valores de conductividad para el medio
de cultivo sin tratar durante toda la fermentacin.
Concentracin de glcidos totales
La concentracin de glcidos totales presentes en los tratamientos y el control bitico
permiti estimar el consumo de carbohidratos por la cepa objeto de estudio (Fig. 4). El
tratamiento con DBT y el control bitico durante los seis primeros das de fermentacin,
mostraron una rpida y significativa disminucin en la concentracin de glcidos totales, en un
rango entre 20 mg.mL-1 hasta 1,18 mg.mL-1 y 2,29 mg.mL-1 respectivamente. El perfil de estas
curvas se caracteriza por una pendiente abrupta. A partir del da seis estos grupos no
mostraron variaciones significativas mantenindose prcticamente constante hasta el da 15 de
fermentacin.

35

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

Figura 4. Concentracin de glcidos totales en los tratamientos y control bitico, durante 15 das de
fermentacin en erlenmeyers de 250 mL de capacidad con 50 mL de Medio Lquido de Sabouraud,
suplementado con 0,01% de pireno y DBT como tratamientos independientes a 28C y 150 r.min-1 (..
Pireno; _ _ _ DBT; ___ Control Bitico). Los valores estn referidos como mg.mL-1 de dextrosa.
Figure 4. Total glucide concentration in the treatments and biotic control during 15 days of fermentation in
250-mL Erlenmeyers with 50 mL of liquid Sabouraud medium, enriched with 0,01% pyrene and DBT as
independent treatments, at 28C and 150 r.min-1 (.. Pyrene; _ _ _ DBT; ___ Biotic Control). Values are
referred as mg.mL-1 of dextrose.

El anlisis estadstico entre estas dos variantes no mostr diferencias intraespecficas

significativas. El tratamiento con pireno reflej un perfil que asemeja una diauxia invertida,
compuesta por tres fases: fase inicial de consumo de carbohidratos (3 das de duracin; 10,85
mg.mL-1), fase de adaptacin corta con una concentracin al da 6 de 9,03 mg.mL-1, seguido de
una abrupta disminucin de la concentracin de glcidos totales hasta el da 9 (1,38 mg.mL-1), a
partir del cual los valores presentan poca variacin hasta el final de la fermentacin (1,05
mg.mL-1). Este tratamiento solamente mostr diferencias significativas con el control bitico y la
variante con DBT al da 6 de fermentacin.
DISCUSIN
Caracterizacin fisiolgica de Nia vibrissa en Medio Lquido de Sabouraud
Comparado con otros microorganismos, los hongos marinos han sido pobremente
investigados, aunque en general el inters por el estudio de la microbiota asociada a hbitats
marinos y estuarinos aumenta considerablemente (Liberra & Lindequist, 1995). Los hongos
marinos que habitan entre los granos de arena de las playas se conocen como hongos
arencolas. Este grupo posee una importancia ecolgica relevante porque sus miembros
desempean importantes funciones como descomponedores primarios de muchos sustratos
orgnicos, principalmente lignocelulsicos, por lo que contribuyen a mineralizar y reciclar los
nutrientes en ese ambiente (Hyde et al., 1998). En este grupo se encuentra la especie Nia
vibrissa, basidiomiceto recientemente aislado en playas de Cuba.
Adecuadas condiciones de cultivo, constituyen un requisito indispensable para la mxima
produccin de micelio y la sntesis continua de sustancias biolgicamente activas, factores de
singular relevancia en la remocin de estructuras orgnicas recalcitrantes en el ambiente. De
acuerdo con estudios realizados por Helmholz, Etoundi & Lindequist (1999), N. vibrissa
constituye un hongo marino que puede ser cultivado in vitro fcilmente en medios sintticos y
complejos. Muestra adecuado crecimiento bajo condiciones estndar comparado con otras
especies fngicas marinas y terrestres, de manera que no es un evento raro el crecimiento
mostrado en medio lquido de sabouraud de la cepa relativa a nuestro estudio.
Como se constata, la adicin al medio de cultivo de concentraciones de 0,01% de pireno y
DBT, no afect el crecimiento de forma significativa en sus trminos ms generales, debido a
36

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

que en ambos tratamientos se observ un curso temporal del crecimiento que incluy las fases
principales en que se divide la progresin de la biomasa fngica en medio lquido agitado.
Adems, no se observ afectacin en la morfologa de los pellets formados respecto al control
bitico. Ambos resultados apoyan la idea de que la concentracin de hidrocarburos aromticos
seleccionada, no result letal para el crecimiento del hongo en las condiciones en que se realiz
la fermentacin.
El tratamiento con DBT muestra una fase de adaptacin de igual duracin respecto al
control, aunque su fase de crecimiento rpido es mucho ms corta con solo 3 das de duracin
en comparacin con los seis que muestra el control bitico. Esta reduccin se puede entender
como una respuesta fisiolgica del hongo a los efectos de toxicidad del hidrocarburo, que
resultan ms evidentes en la extensa etapa de autolisis aparente que experimenta este
tratamiento. Esta fase, caracterizada por el desequilibrio que genera la muerte de un mayor
nmero de clulas en el cultivo, se interpreta tambin como una etapa que el microorganismo
utiliza para reajustar su maquinaria metablica bien en favor del crecimiento o del
mantenimiento celular en condiciones de estrs; lo cual se sustenta en la reanimacin de este
parmetro a partir del da 12 de incubacin.
Sin embargo, los efectos de toxicidad del pireno pudieran explicarse solo en la primera fase
del crecimiento del hongo, en la cual, el valor mnimo de peso seco alcanzado difiere
significativamente del control, y se evidencia una fase de adaptacin ms extendida que en el
resto de las variantes. Una vez superada esta barrera fisiolgica por el microorganismo, el curso
temporal del crecimiento se manifiesta sin graves desviaciones.
Gmez-Bertel et al. (2008) en trabajos realizados con la especie Phanaerochaete
chrysosporium, plantean la existencia de mecanismos adaptativos asociados a tolerancia
gentica, que pueden surgir en hongos terrestres por la exposicin prolongada a compuestos
orgnicos persistentes. Durante el tratamiento, la cepa desarrolla de manera paralela varios
mecanismos inmediatos o progresivos que permiten adquirir tolerancia a diferentes entidades
moleculares como son: derivados fenlicos, metales pesados y colorantes sintticos. Los
mecanismos son dismiles: engrosamiento de la pared celular que favorece la biosorcin de
mayor cantidad de xenobiticos, sntesis de sustancias activas como las melaninas y la
produccin de cidos orgnicos. El efecto cooperativo de estos mecanismos probablemente se
relacione con el aumento de la biodisponibilidad, disminuyendo la tensin superficial entre los
hidrocarburos y el medio acuoso, lo que proporciona mayor accesibilidad al microorganismo.
Nuestros resultados concuerdan con los informados por Castro (2008) en la degradacin de
fenantreno por cepas de hongos terrestes (Aspergillus sp., Phanaerochaete chrysosporium y
Penicillium pinophillum), quien evidenci que no se manifestaron efectos de toxicidad del
hidrocarburo empleado sobre el crecimiento fngico en el rango de concentraciones 0,05 0,5
g.L-1. Asimismo DAnnibale, Rosetto, Leonardi, Federic & Petroccioli (2006) informaron el
crecimiento y desarrollo de especies de basidiomicetos terrestres (Allescheriella sp., Phlebia
sp.) en presencia de hidrocarburos aromticos policclicos como el naftaleno, antraceno y
derivados de estructura anloga, alcanzando tasas mximas de 12 g.L-1, con las que nuestros
resultados son comparables. Salmanov, Aliyeva, Veliyev & Bekrashi (2008) mostraron un amplio
estudio donde comprobaron el crecimiento de varios gneros fngicos (Aspergillus sp., Mucor
sp., Fusarium sp.) en matrices petrolizadas (Keroseno, Diesel, Petrleo crudo), demostrando
que estos microorganismos utilizan las fracciones aromticas como fuente de carbono y
energa, con lo cual encausan el metabolismo de las mismas hacia el aumento de la biomasa.
Dos razones resaltan la importancia de este estudio: las diferencias significativas en el
crecimiento alcanzado por N. vibrissa entre el inicio y final de la fermentacin, as como con los
picos mximos de produccin de biomasa - la produccin de cantidades significativas de
biomasa aumenta el rea superficial disponible para la remocin (Kaar et al., 2002; Qingbiao et

37

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

al., 2004; Iqbal & Saeed, 2007) - y el hecho de que no se encontraron informes referentes a la
aplicacin de N. vibrissa en la degradacin de los hidrocarburos seleccionados.

pH, conductividad y glcidos totales

Entre los factores que influyen en el cultivo de un microorganismo en condiciones de
laboratorio se encuentran el pH y la salinidad del medio. Nia vibrissa fue cultivado durante 15
das en medio lquido agitado con valores iniciales de pH y conductividad fijos, durante este
tiempo y producto de la actividad metablica del microorganismo, las condiciones del cultivo
estn sujetas a mltiples variaciones que pueden influir significativamente en su
comportamiento fisiolgico (Jones, 2000).
Contrario a lo esperado, el pH del medio de cultivo sometido a tratamiento con
microorganismo tanto en presencia de HAP como en el control bitico, tiende a aumentar. Al
inicio de la fermentacin se manifiesta en todos los casos una leve disminucin de los valores
de pH, la cual puede estar relacionada con el metabolismo oxidativo inicial de aquellos
componentes del medio que constituyen la fuente de carbono ms accesible, y con el rpido
consumo de glcidos en los primeros 6 das de crecimiento, lo que conlleva a una acumulacin
de cidos orgnicos en el cultivo. Toda vez que el basidiomiceto supera la fase de crecimiento
lento, el pH aumenta progresivamente hasta alcanzar valores cercanos a los lmites de la
alcalinidad.
La especie objeto del estudio fue cultivada a pH inicial 5,7. Curran (1980) plante que
muchos hongos marinos crecen mejor a pH ligeramente cidos. Este hecho tambin es una
realidad aceptada para la mayora de los hongos terrestres. Sin embargo, el hbitat natural
donde este tipo de microorganismos desarrolla su nicho ecolgico, muestra niveles de pH en el
rango de la neutralidad. Helmholz et al. (1999) mostraron que Nia vibrissa cultivado en medio
sinttico, con glucosa como fuente de carbono a pH 7,5, incrementaba su crecimiento cerca de
19 veces en trminos de peso seco de la biomasa. De este modo el atpico aumento en los
niveles de pH en la medida que avanz la fermentacin pueden ser explicados teniendo en
cuenta lo planteado por Damare, Raghukumar, Muraleedharan & Raghukumar (2006a y b),
quienes afirmaron que a pesar de que los hongos terrestres generalmente muestran ptimo
crecimiento a pH entre 4,5 - 6,0, los hongos marinos facultativos, crecen y producen muchas
de sus enzimas extracelulares a pH entre 7-8. Adems es probable que el microorganismo
modifique su metabolismo, en la direccin de establecer condiciones semejantes a las del
medio natural en que se desarrolla, as los valores de pH 7,5 para DBT; 7,8 para pireno; 8,6
para el control bitico, se encuentran ms cercanos al pH del agua de mar, que al pH inicial del
medio de cultivo en que se inocul nuestro modelo biolgico.
Una ltima razn se relaciona con el consumo de la fuente de carbono. El carbohidrato
predominante en el medio de cultivo utilizado es la dextrosa. Segn muestra la curva de
glcidos totales, desde el inicio de la fermentacin hasta el sexto da tiene lugar una rpida
disminucin de este parmetro en todas las variantes, aunque en el tratamiento con pireno se
alarga hasta el noveno da. Se puede considerar entonces, que la fuente de carbono ms
sencilla y asequible, se encuentra prcticamente agotada en un estado temprano del
crecimiento, con lo cual el microorganismo comienza a metabolizar oxidativamente las peptonas
del medio de cultivo, generando amonio como producto final, que contribuye a alcalinizar el
medio.
Otro importante factor para el cultivo de hongos marinos lo constituye el nivel de salinidad
del medio. Una caracterstica primordial de los anteriores, respecto a los hongos terrestres, es
su alta tolerancia respecto a este factor. Muchos microorganismos que habitan las costas
exigen condiciones de salinidad estrictas para su crecimiento. Nia vibrissa se considera
facultativo en cuanto a salinidad. Sin embargo, al igual que sucedi con el pH, la conductividad

38

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

en el medio de cultivo experiment un abrupto aumento de sus niveles en todas las variantes.
Este comportamiento puede deberse a varios factores. La presencia de altas concentraciones
de iones sodio en el agua de mar, confiere propiedades nicas a las clulas de los organismos
marinos. El sodio, incluso en pequeas concentraciones, resulta txico a la mayora de las
clulas vivientes en ambientes de agua dulce. La evolucin ha resuelto este inconveniente en
los organismos marinos por medio de un eficiente funcionamiento de una ATPasa responsable
del eflujo de sodio (Benito, Garcia- Debls & Rodriguez-Navarro, 2002), con la cual la cepa
evaluada regula los niveles inicos del medio en que se encuentre.
Por otro lado, los organismos marinos necesitan mantener un potencial de agua menor que
la del medio circundante, que permita a sus clulas la entrada de agua mediante smosis. Los
hongos marinos mantienen este gradiente debido a la acumulacin de osmolitos como glicerol,
manitol, polioles y trealosa (Blomberg & Adler, 1992). Es posible que esta retencin osmtica
interna, se acompae con una mayor actividad en los transportadores que controlan el bombeo
hacia el exterior celular de iones elctricamente cargados, que contribuiran al aumento de la
conductividad en el medio extracelular.
Otro aspecto a considerar sera el efecto de la adicin de los HAP. Probablemente la presin
selectiva que ejerce el medio de cultivo sobre el microorganismo, permite que se potencie la
actividad de varios transportadores inicos en el sentido del eflujo, como alternativa para
establecer condiciones ms adecuadas para el crecimiento o la degradacin de los
hidrocarburos. Aunque en este ltimo caso, el hecho que el control sin tratar muestre similar
aumento de la conductividad, hace que nos inclinemos por una razn ecolgica: el
microorganismo altera las condiciones del medio de acuerdo a potencialidades genticas
seleccionadas evolutivamente o bien adecua su dotacin gentica en el sentido de la
supervivencia.
CONCLUSIONES
Estos resultados constituyen un aporte cientfico novedoso a la ecologa y fisiologa de
hongos marinos, resulta la primera investigacin fisiolgica de Nia vibrissa en Cuba, en el cual
se comprob el crecimiento de la cepa estudiada en presencia de hidrocarburos aromticos
policclicos, as como el aumento significativo del pH y la conductividad en un medio complejo
en condiciones de laboratorio.
BIBLIOGRAFA
Baldi, F., Pepi, M. & Fava, F. (2003).Growth of Rhodosporidium toroloides strain DBVPG 6662
on dibenzothiophene crystals y orimulsion. Applied and Environmental Microbiology,(69)
4689-4696.
Benito, B. Garcia- Debls, B. & Rodriguez-Navarro, A. (2002). Potassium-or sodium-efflux
ATPase, a key enzyme in the evolution of fungi. Microbiology, (148) 933-941.
BioCen.2004. Manual de medios de cultivo. Centro Nacional de Biopreparados. Cuba.
Blomberg, A. & Adler, L. (1992). Physiology of osmotolerance in fungi. Advances in Microbial
Physiology, (33)145-212.
Castao, G., Errico, A., Malats, N. & Kogevinas, M. (2004). Biomarkers of exposure to polycyclic
aromatic hydrocarbons from environmental air pollution. Occupational and Environmental
Medicine, (61)12.
Castro, Y. (2008). Estudios de toxicidad y biodegradacin de hidrocarburos modelo en hongos
filamentosos. Tesis de Maestra. Universidad Autnoma Metropolitana. Iztapalapa. Mxico.
Curran, P. (1980).The effect of temperature, pH, light and dark on the growth of fungi from Irish
coastal waters. Mycologia, (72) 350358.

39

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

DAnnibale, A., Rosetto, F., Leonardi, V., Federic, F. & Petroccioli, M. (2006). Role of
Autochthonous Filamentous Fungi in Bioremediation of a Soil Historically Contaminated with
Aromatic Hydrocarbons. Applied and Enviromental Microbiology, 72 (1), 28-36.
Damare, S., Raghukumar, C., Muraleedharan, U. D., & Raghukumar, S. (2006a). Deep-sea
fungi as a source of alkaline and cold-tolerant proteases. Enzyme and Microbial
Technology, (39)172-181.
Damare, S., Raghukumar, C. & Raghukumar, S. (2006b). Fungi in deep-sea sediments of the
Central Indian Basin. Deep-Sea Research, 1 (53), 14-27.
Dvila, G. & Vzquez- Duhalt, R. (2006). Enzimas ligninolticas fngicas para fines ambientales.
Mensaje Bioqumico, 30.
Dubois, M.K., H. Gilles, J.K. Hamilton, P.A. Rebers & Smith F. (1956). Colorimetric method for
determination of sugars and related substances. Analytical Chemistry, (28), 350-356.
Esser, K. & Lemke A. (2001). The Mycota. A comprehensive treatise on fungi as experimental
systems for basic and applied research. Karl Esser y Paul A. Lemke (eds.) Springer Verlag,
Berlin.
Alemania.
(Activo
junio
2010).
Impreso
en
Internet.
doi:10.1017/S095375620121435X. Mycological Research,105 (5): 638-640.
Gmez-Bertel, S., Amaya-Bulla, D., Maldonado-Saavedra, C., Martnez-Salgado, M. M.,
Quevedo-Hidalgo, B., Soto-Guzmn, A. B. & Pedroza-Rodrguez, A. M. (2008). Evaluacin
de tres hongos lignolticos y de Aspergillus niger como alternativa para el tratamiento aguas
residuales del curtido de pieles. Revista Internacional de Contaminacin Ambiental, 24 (3),
93-106.
Helmholz, H., Etoundi, P. & Lindequist, U. (1999). Cultivation of the marine basidiomycete Nia
vibrissa. Journal of Biotechnology, (70), 203206.
Higuchi, T. (2004). Microbial degradation of lignin: Role of lignin peroxidase, manganese
peroxidase and laccase. Proceedings of the Japan Academy, Series B, (80), 204-214.
Hyde, K. D., Jones, E. B. G., Leao, E., Pointing, B.S., Poonyth, D.A. & Vrijmoed, L.P. (1998).
Role of fungi in marine ecosystems. Biodiversity and Conservation, (7) 1147-1161.
Iqbal, M., & Sabed, A. (2007). Production of an immobilized hybrid biosorbent for the asorption
of Ni(II) from aqueous solution. Process Biochemistry, (42) 148-157.
Jones, E. B. G. (2000). Marine fungi: some factors influencing biodiversity. Fungal Diversity, (4)
53-73.
Kaar, Y., Arpa, C., Tan, S., Denizli, A., Genc, O. & Arica, M. (2002). Biosorption of Hg(II) and
Cd(II) from aqueous solutions: comparison of biosorptive capacity of alginate and
immobilized live and heat inactivated Phanerochaete chrysosporium. Process Biochemistry,
(37) 601-610.
Kanaly, R. A. & Harayama, S. (2000). Biodegradation of high-molecular-weight polycyclic
aromatic hydrocarbons by bacteria. Journal of Bacteriology, (182) 2059-2067.
Kim, S.-J., Kweon, O., Jones, R.C., Freeman, J.P., Edmondson, R.D. & Cerniglia, C.E. (2007).
Complete and integrated pyrene degradation pathway in Mycobacterium vanbaalenii PYR-1
based on systems biology. Journal of Bacteriology, (189) 464-472.
Li, F., Zhang, Z., Feng, J., Cai, X. & Xu, P. (2007). Biodesulfurizarion of DBT in tetradecane
and crude oil by a facullative thermophilic bacterium Mycobacterium goodii X7B. Journal of
Biotechnology, (127) 222-228.
Liberra, K. & Lindequist, U. (1995). Marine fungia prolific resource of biologically active natural
products? Pharmazie, (50) 583588.
Martnez, A.T., Esperanza, M., Ruiz-Dueas, F. J., Ferreira, P., Camarero, S., Guilln, F.,
Martnez, M. J., Gutirrez, A. & Ro, J. C. (2005). Biodegradacin de la lignocelulosa:
aspectos microbiolgicos, qumicos y enzimticos del ataque fngico a la lignina.
International Microbiology, (8) 195-204.

40

Serie Oceanolgica. No. 10, 2012

ISSN 2072-800x

Qingbiao L., Songtao, W., Gang, L., Xinkai, L., Xu, D., Daohua, S., Yuelin, H. & Yili, H. (2004).
Simultaneous bioasorption of cadmium (II) and lead (II) ions by pretreated biomass of
Phanerochaete chrysosporium. Separation and Purification Technology, (34) 135142.
Salmanov, M., Aliyeva, S., Veliyev, M. & Bekrashi, N. (2008).The study of degradation ability of
oil products and oil hydrocarbons by microscopic fungi isolated from polluted coastal areas
of absheron pennsula of Caspian sea. Ekoloji, 17 (68) 59-64.
Samn-Legr, E. & Enrquez, D. (2010). Nuevos registros de hongos marinos en el litoral sur de
Guantnamo, Cuba. Serie Oceanolgica, (7) 61-68.
Tanaka Y, Matsui, T., Konishi, J., Maruhashi, K. & Kurane, R. (2002). Biodesulfurization of
benzothiophene and dibenzothiophene by a newly isolated Rhodococcus strain. Applied
Microbiology and Biotechnology, (59) 325-328.
Volkmann-Kohlmeyer, B. & Kohlmeyer, J. (1993). Biogeografic observations on pacific marine
fungi. Mycologia, (85) 337- 346.
Zahra, E., Gili, E. & Sharareh, P. (2006). Removal of dibenzothiophene, biphenyl y phenol from
waste by Trichosporon sp. Scientific Research and Assay, 1 (3) 072-076.
Zheng, Z. & Obbard, J.P. (2002). Removal of surfactant solubilised polycyclic aromatic
hydrocarbons by Phanerochaete chrysosporium in a rotating biological contactor. Journal of
Biotechnology. (96):241249.

Recibido: septiembre de 2011.

Aceptado: febrero de 2012.

41