NDICE
A. Introduccin
1. Biocatlisis
2. Fermentacin
3. Ventajas del uso de
microorganismos
B. Enzimas clsicas
1. -amilasas
2. Glucosa isomerasas
3. Proteasas
4. Rennina
5. Lipasas
6. Penicilina acilasas
C. Enzimas novedosas
1. Lacasas
2. Celulasas
D. Bibliografa
A. Introduccin
Biocatlisis: proceso que emplea clulas o enzimas aisladas para obtener productos de inters.
Productos comercialmente
importantes de las fermentaciones
Clulas microbianas
Molculas grandes (enzimas y
polisacridos)
Metabolitos primarios
Metabolitos secundarios
Slida
Fermentaciones
Sumergida
Escalado industrial
Proceso econmico
B.1. -amilasas
B.2. Glucosa isomerasas
B.3. Proteasas
B.4. Rennina
B.5. Lipasas
B.6. Penicilina acilasas
Amilasas
Enzimas
Extracelulares
que hidrolizan
enlaces -1,4glicosdicos
Tipos
Aplicaciones
-amilasas
-amilasas
Gluco-amilasas
Enzimas
Fuente
Aplicaciones
-amilasa
-amilasas bacterianas
(ej. B. subtilis) fngicas
(ej. A. niger)
Textil, siropes de
almidn, detergente para
lavar, fermentacin
-amilasa
Cepa de Bacillus
Sirope de maltosa,
destilacin de cerveza
A. niger
Manufacturacin de
siropes de dextrosa y
produccin de sirope rico
en fructosa
-amilasa
Microorganismos
productores
Especies
bacterianas
B. Subtilis
Origen fngico
A. Oryzae
Levaduras
S. cerevisiae
Aumenta
drsticamente antes
de la formacin de
esporas
Fuentes de
carbono
Fuentes de
nitrgeno
pH
Iones metlicos
Humedad
Surfactantes
Uso posterior de
la enzima
Principalmente
inmovilizada
sobre soportes
INCONVENIENTE:
Es cara
- La glucosa acta como represor en una de las principales cepas productoras de glucosa isomerasa (B.
Coagulans).
Fuente adecuada y barata
Fuente de nitrgeno:
Formas complejas
Peptona, extracto de levadura, o
sales de amonio pueden ser
usadas con Bacillus coagulans.
Lquido de macerado
del maz
Requerimiento de iones
Son requeridos para la produccin ptima de la enzima
Depende de la fuente de enzima.
B.2.4. UTILIZACIN POSTERIOR
Enzima inmovilizada
B.3. Proteasas
B.3.1. Introduccin
Hidrolizan protenas rompiendo enlaces peptdicos.
Las ms usadas son las proteasas alcalinas.
Alcalinas
Tipos
Neutras
Enzimas
Fuente
Aplicaciones
Alcalina
Bacillus, Streptomyces y
Aspergillus
Detergentes, industria
lctica, farmacolgica y
del cuero
Neutra
cida
cidas
Bacillus y Aspergillus
Industria alimentaria e
industria del cuero
Aspergillus
Poco utilizadas en la
industria
Enzimas extracelulares.
La bsqueda de las mejores cepas
productores se hace en medios muy
alcalinos.
Mejoras de cepas silvestres:
Mayor estabilidad a pH alcalino y
altas temperaturas.
Resistencias a agentes qumicos.
MICROORGANISMOS
PRODUCTORES
Especies
bacterianas
B. licheniformis y
B. firmus
S. ariseus y S.
rectus
Origen
fngico
A. niger y A.
oryzae
Fuente de carbono
Fuente de nitrgeno
Temperatura
pH
Iones metlicos
Aireacin y agitacin
Entre 25 y 37C
Entre 7 y 11
Mg2+ y Ca2+ aumentan la produccin.
Proceso aerobio.
Requiere agitacin.
Mejorar su
estabilidad
A altas temperaturas
A pH alcalino o cido
Produccin industrial
El cuajo de ternera cubre el 20-30% de la demanda mundial en la fabricacin de queso.
Alternativas: enzimas coagulantes de la leche de origen vegetal, microbiano u obtenidas por tcnicas de
ADN recombinante.
Especificidad de sustrato
Alta relacin actividad coagulante /
Actividad proteoltica (AC/AP)
Suficiente termolabilidad
Quimosina
recombinante
Rhizomucor
miehei
Escherichia
coli K-12
Rhizomucor
pusillus
Kluyveromyces
lactis
Cryphonectria
parastica
Aspergillus
niger var.
awamori
R. Miehei
Caractersticas de la enzima:
- Metabolito secundario parcialmente asociado al crecimiento
- Inducible (principal inductor: casena)
- Regulada por represin del tipo feed-back (retro-regulacin)
Aspergillus
Comercialmente se expende en
polvo, pastilla o lquido
B.5. Lipasas
B.5.1. Aplicacin y situacin actual
Reacciones de hidrlisis y
transesterificacin
Buen comportamiento,
inters industrial
Elevado precio
Microorganismos
utilizados
industrialmente
Hidrlisis de TG
Sntesis de steres a partir de glicerol y AG de cadena larga
Participacin en procesos de: alcoholisis, acidolisis, aminolisis
B.5. Lipasas
B.5.2. Produccin industrial: factores
B.5. Lipasas
B.5.3. Uso posterior
Depende de su aplicacin
Inmovilizadas (por ejemplo en micro o nanopartculas de agar o slice)
Sin inmovilizar, libres
Penicilina G
c. fenilactico
6-APA
Penicilinas semisintticas
(ej.: ampicilina)
Tipos
Tipo II (PGAs)
Tipo III
(ampicilina
acilasas)
Produccin
industrial
Sistema de fermentacin
Clsico: discontinuo.
Ahora tambin discontinuo alimentado (sobre todo para
recombinante).
Uso de sustratos que no ejerzan este efecto.
Mutantes insensibles al efecto glucosa.
Enzima recombinante.
Sustratos
Induccin
Temperatura
pH
Aireacin
Calcio
Presin osmtica
24-30oC.
Evitar formacin de cuerpos de inclusin.
7.0-7.5
Mantener aerobiosis.
OD > 15%.
Suplementar.
Involucrado en procesamiento.
360 mOsmol/kg.
Controlar con [NaCl].
Alta liberacin de enzima al medio.
4. Perspectivas de futuro
Produccin de PGA extracelular.
Recombinante: minimizar cuerpos de inclusin
Co-expresin con chaperonas.
Optimizar la induccin y el inductor.
C.1. Lacasas
C.2. Celulasas
C.1. Lacasas
Aplicaciones
Decoloracin de tintes.
Procesado de zumo de fruta y otras bebidas.
Delignificacin, blanqueo de papel.
Tratamiento de aguas residuales.
Biosensores.
Aplicaciones mdicas.
Lacasas bacterianas
Intracelulares y periplasmticas
Escherichia coli y Streptomyces.
Funcin: produccin de melanina, resistencia de la cubierta de la
espora.
Ventajas: A altas T y pH mayor estabilidad y actividad.
Lacasas fngicas
Extracelulares
Basidiomicetos de raz blanca, ascomicetos, deuteromicetos y
levaduras.
Degradacin de lignina, eliminacin de xenobiticos
Ventajas:
Baja especificidad de sustrato
Utilizan oxgeno como aceptor final de electrones.
Fuente de N: Produccin
estimulada por N, peptona,
urea
Temperatura y pH:
pH 4.5-6
T 25C en luz; 30C
oscuridad
Tipo de fermentador
Inductores: Xenobiticos,
cobre
Oxgeno: 25%
C.2.Celulasas
Celulasas
Aplicaciones
Produccin de bioetanol
Reciclaje de papel
Hongos
Aspergillus
niger
Baja produccin de
-glucosidasa, se
soluciona
aadindola de otros
microorganismos
Baja produccin
de -glucosidasa
por parte de T.
reesei
Temperatura
pH
Iones metlicos
Inductor
28-30C
Aproximadamente 4.8
Permite buen crecimiento
(NH4)2SO4,FeSO4 ,MnSO4, KH2PO4
Lactosa
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