Manual Bioquímica Práctica

MANUAL BIOQUIMICA PRCTICA
INDICE GENERAL
PARTE I: INTRODUCCION
1)
2)
3)
4)
Objetivo de la asignatura
Enfoque general y campo de estudio
Normas y reglas de laboratorio
Materiales de laboratorio
5) Control de calidad en el laboratorio.
PARTE II: ENZIMAS

Concepto, reaccin enzimtica, nomenclatura, clasificacin de las enzimas,
enzimas plasmticas origen e importancia clnica, amilasa srica, lipasa,
fosfatasas, actividad de renina plasmtica, colinesterasa, transaminasa.
1) Dosificacin de la amilasa en suero u orina.
2) Dosificacin de fosfatasa alcalina en suero fresco no hemolizado.
3) Determinacin de transaminasas TGO y TGP.
PARTE III: HIDRATOS DE CARBONO

Generalidades, digestin y absorcin de carbohidratos, determinacin de la
glucosa en la sangre, hormonas importantes en la regulacin de glucosa en la
sangre, importancia mdica del metabolismo de los carbohidratos,
diabetes mellitus, diabetes sacarinas o diabetes clnica, umbral renal para la
glucosa, prueba de tolerancia a la glucosa, dosificacin de la glucosa sangunea y
prueba de tolerancia a la glucosa.
1) Dosificacin de la glicemia en sangre.
2) Prueba de tolerancia a la glucosa en sangre.
3) Determinacin de glucosa en sangre.
PARTE IV: LIPIDOS

Metabolismo de los lpidos, lpidos simples, lpidos compuestos, lpidos derivados,
sustancias asociadas a los lpidos.
1) Dosificacin srica del colesterol total en sangre.
2) Dosificacin srica de triglicridos en sangre.
3) Determinacin del colesterol en sangre.
PARTE V: PROTEINAS
Funciones, origen de las protenas, digestin de las protenas, destino de los
aminocidos, importancia mdica del metabolismo de las protenas, relacin
albumina globulinas.
1) Determinacin de protenas totales.
2) Dosificacin de la albumina.
3) Mtodo para electroforesis de protenas en suero.
PARTE VI: FUNCION RENAL

Rin concepto, funciones del rin, productos de excrecin del rin, importancia
mdica, valores referenciales (urea, creatinina, cido rico).
1)
2)
3)
4)
5)
6)
7)
Dosificacin de urea en sangre.

Dosificacin del cido rico en suero.
Dosificacin de creatinina en suero u orina.
Determinacin de urea (mtodo enzimtico colorimtrico).
Estudio fisicoqumico y sedimento de orina.
Identificacin de glucosa en orina por medio de reactivo de Benedict.
Identificacin de albumina por mtodo cualitativo con reactivo de
Roberth.
8) Pruebas de urea-creatinina.
PARTE VII: FUNCION HEPATICA

Metabolismo de la bilirrubina, datos clnicos.
1) Dosificacin de bilirrubina srica en suero, plasma y lquido amnitico.
2) Determinacin de bilirrubina total y directa.
PARTE VIII: VARIOS

SANGRE
1) Tcnicas y procedimientos para puncin venosa.
2) Frotis sanguneo.
3) Determinar el volumen de clulas rojas concentradas por medio del
hematocrito.
4) Determinacin espectrofometrica de hemoglobina en una muestra de
sangre.
5) Velocidad de sedimentacin.
6) Recuento total de leucocitos en sangre y determinacin de valores por
mtodo diferencial.
2

7) Recuento diferencial de leucocitos.
8) Recuento plaquetario en sangre total.
9) Determinacin del tiempo de coagulacin.
10) Determinacin del tiempo de sangra.
11) Tiempo de protrombina.
12) Determinacin del tiempo de tromboplastina.
OTRAS:
1)
2)
3)
4)
5)
6)
7)
Identificacin de sfilis mediante prueba cuantitativa.

Investigacin de tifoidea por medio de aglutinaciones febriles.
Determinacin del factor reumatoide.
Diagnstico de leishmaniasis por frotis directo.
Investigacin de leptospirosis por mtodo de Elisa y prueba rpida.
Determinacin de anticuerpos contra vih por el mtodo de Elisa.
Investigacin
virolgica
(
dengue,
hepatitis,
toxoplasmosis,
citomegalovirus ).
ANEXOS
Modelo de informe.
Referencia bibliogrfica.
PROPOSITO
El propsito del laboratorio de Bioqumica
es familiarizar al estudiante con
metodologa del trabajo, proporcionarle un ambiente donde tenga oportunidad de
encontrarse con sustancias e instrumentos que lo motiven a experimentar.
Considerando al laboratorio como un lugar donde el trabajo en equipo se facilite,
da lugar a un proceso de constante integracin, comunicacin, investigacin,
construccin de ideas, seguimiento de nuevas preguntas, en fin donde las
actividades experimentales propician la organizacin de conocimientos y facilitan
el alcanzar un aprendizaje significativo.
Para lograr tales fines se propone este manual que va como material de apoyo
didctico.
ENFOQUE GENERAL DE LA ASIGNATURA Y CAMPO DE

ESTUDIO
El estudio de la Bioqumica Practica en el laboratorio es un ambiente dinmico
que est continuamente cambiando para satisfacer las necesidades de la salud
pblica
La Bioqumica prctica es un campo multidisciplinario cuya finalidad es la
aplicacin de la Ciencia para contribuir a la resolucin de problemas de salud.
La funcin del laboratorio de Bioqumica es realizar anlisis, tanto cualitativos
como cuantitativos, en fluidos corporales como sangre, orina, lquido seminal,
lquido cefalorraqudeo, etc. Para que los resultados de dichos anlisis sean tiles
a los mdicos en el diagnstico, tratamiento y seguimiento de una enfermedad,
stos debern realizarse bajo un estricto control de calidad logrando niveles
ptimos de precisin y exactitud, caractersticas deseables en cualquier resultado
de diagnstico.
OBJETIVO DE LA ASIGNATURA
OBJETIVOS GENERALES:
El estudiante:
1. sea capaz de realizar el anlisis de productos biolgicos incluyendo una
adecuada manipulacin de los especmenes, desde la toma y/o recepcin anlisis
de muestras e interpretacin de resultados.
2. Que el alumno adquiera una formacin y preparacin en Bioqumica que le
permita afrontar los retos que encontrar en su vida profesional, ante el creciente
nmero de tcnicas que continuamente se estn desarrollando para la deteccin y
cuantificacin de metabolitos de inters en la medicina Moderna.
3. Que el alumno tenga nociones y realice los procedimientos correctos tanto en
forma manual como automatizada utilizando un equipo mecanizado.
4. Que el alumno adquiera los elementos formativos que le permitan desarrollar
una actitud y pensamientos crticos, y de independencia en el trabajo.
Este proceso de enseanza incluye: planeacin, seleccin, elaboracin y
ejecucin analtica, evaluacin y resolucin de problemas con la metodologa
empleada, aplicacin e interpretacin de programas de control de calidad,
interpretacin de grficas y correlacin de los datos obtenidos con las alteraciones
que se presentan en el organismo en los diferentes cuadros patolgicos de su
formacin profesional.
PRECAUCIONES
PRCTICA
EN
EL
DESARROLLO
DE
CADA
1. Observar donde se dejan los materiales antes de tomarlo en mano.

2. Cuando calientes un tubo de ensayo no lo apuntes hacia ti o compaeros
ya que puede derramarse su contenido y sufrir algn accidente.
3. Al observar un lquido no coloques la cara directamente al envase ya que
puedes intoxicarte.
4. Antes de usar un reactivo, lee dos veces la etiqueta para asegurarte de su
contenido.
5. Los tubos de ensayo siempre se calientan por los lados no por el fondo.
6. No arrojar cuerpos solidos al lavabo ya que se puede corroer.
7. Cuando trabajes con fuego mantn tu cabello recogido para evitar un
incidente con l.
8. Cuando necesites encender el mechero nunca lo hagas con un papel,
puede iniciar un incendio.
5
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

1.2.1. NORMAS GENERALES
No fumar, comer o beber en el laboratorio.
Utilizar una bata y tenerla siempre bien abrochada.
Guardar tus prendas de abrigo y los objetos personales en un armario o

taquilla y no los dejes nunca sobre la mesa de trabajo.
No llevar bufandas, pauelos largos ni prendas u objetos que dificulten la

movilidad.
Procurar no andar de un lado para otro sin motivo y, sobre todo, no correr
dentro del laboratorio.
Si tiene cabello largo, recogerlo.
Disponer sobre la mesa slo los libros y cuadernos que sean necesarios.
Tener siempre tus manos limpias y secas. Si tiene alguna herida,

protegerse.
No pruebe ni ingiera los productos.
En caso de producirse un accidente, quemadura o lesin, comunicarlo.

inmediatamente.
Tener un botiqun a disposicin.
Mantn el rea de trabajo limpia y ordenada.
NORMAS PARA MANIPULAR INSTRUMENTOS Y PRODUCTOS
Antes de manipular un aparato o montaje elctrico, desconctalo de la red

elctrica.
No utilizar ninguna herramienta o mquina sin conocer su uso,

funcionamiento y normas de seguridad especficas.
Manejar con especial cuidado el material frgil, por ejemplo, el vidrio.
Informar al profesor del material roto o averiado.
Fijarse en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los

productos qumicos.
Lavarse las manos con jabn despus de tocar cualquier producto qumico.
Al acabar la prctica, limpiar y ordenar el material utilizado.
Si se salpica accidentalmente, lave la zona afectada con agua abundante.

Si salpica la mesa, limpiar con agua y secar despus con un pao.
Evitar el contacto con fuentes de calor. No manipules cerca de ellas

sustancias inflamables. Para sujetar el instrumental de vidrio y retirarlo del
fuego, utiliza pinzas de madera. Cuando caliente los tubos de ensayo con la
ayuda de dichas pinzas, procura darles cierta inclinacin. Nunca mires
directamente al interior del tubo por su abertura ni dirija esta hacia algn
compaero.
Todos los productos inflamables deben almacenarse en un lugar adecuado

y separado de los cidos, las bases y los reactivos oxidantes.
Los cidos y las bases fuertes han de manejarse con mucha precaucin, ya
que la mayora son corrosivos y, si caen sobre la piel o la ropa, pueden
producir heridas y quemaduras importantes.
Si tienes que mezclar algn cido (por ejemplo, cido sulfrico) con agua,
aade el cido sobre el agua, nunca al contrario, pues el cido saltara y
podra provocarte quemaduras en la cara y los ojos.
No dejes destapados los frascos ni aspires su contenido. Muchas

sustancias lquidas (alcohol, ter, cloroformo, amonaco...) emiten vapores
txicos.
La Bioseguridad tiene por finalidad la proteccin del personal de diagnstico e

investigacin del Laboratorio que maneja material biolgico potencialmente
contaminado con virus, parsitos, bacterias u hongos.
Hay otros riesgos o peligros que se deben conocer para cambiar o eliminar los
factores que lo ocasionan.
Estos riesgos o peligros son de ndole qumicos debido a las propiedades fsicas,
estabilidad, toxicidad, cantidad y duracin de la exposicin, que puede envenenar,
daar o causar enfermedades.
Los peligros fsicos como radiacin, ruidos, cargas trmicas emanadas en el
medio ambiente.
Peligros ergonmicos como localizacin del equipo, altura de las mesas de
trabajo, sillas sin espaldas.
MANEJO
DE
LOS
DESECHOS
INFECCIOSOS Y CORTO PUNZANTES
BIOLOGICOS,
Todo material de trabajo usado en el laboratorio, ya sea muestras de sangre,

heces, fluidos corporales, exudados, etc., aparatos, vidriera deben ser sometidos
a proceso de descontaminacin y esterilizacin, en unos casos para desecharlos y
en otros para su reutilizacin.
Es indispensable que el personal conozca y se encuentren familiarizados con
estos procesos.
1.- DECONTAMINACION POR DESINFECTANTES QUIMICOS:
La descontaminacin se realiza con desinfectantes qumicos como hipoclorito de
sodio al 0.5%; 1; 2.5%; alcohol industrial; fenol al 5%.
Se los usa en:
Superficie y equipos que no pueden esterilizarse por autoclave.

Despus de derrame de materiales biolgicos peligrosos. En solucin para
descartar materiales.
2.- DESCONTAMINACION POR ESTERILIZACION

Se obtiene artculos estriles para ser usados por primera vez, ejemplo: medios de
cultivo o para ser rehusadas como puntas de pipetas automticas.
Los medios de esterilizacin son:
Autoclave a vapor.
Horno de calor seco.
AUTOCLAVE SE UTILIZA PARA:
Materiales contaminados biolgicamente como suero, antes de ser

descartados.
Para esterilizar instrumentos limpios o medios de cultivo deben ser
envueltos previamente.
Todos los materiales a esterilizar deben ser resistentes al calor.
No se debe esterilizar artculos limpios y contaminados al mismo tiempo.
Para maximizar la circulacin colocar los objetos vertical ms que
horizontalmente. Si se agrupan horizontalmente debe emplearse una
gradilla o estante de metal para que exista un fluido libre de vapor.
Usar matraces con tapones que permitan el intercambio de aire, llenarlos a

dos tercios de su capacidad total.
Use salidas o escapes lentos para prevenir la ebullicin de lquidos
calientes cuando la presin de la cmara disminuya.
Permitir que la presin de la autoclave alcance 0 antes de abrir la puerta
para que los vapores salgan.
Controlar los registros antes de abrir el auto clave, ya que una alteracin
puede ser detectada y es indicada para las fluctuaciones leves en los
registros de la tabla de temperatura.
Colocar los lquidos en una bandeja para recogerlos en caso de que se
rompa el recipiente que los contiene.
HORNO SE USA EN:
Secar y esterilizar material de vidrio previamente auto clavado.

Esterilizar torundas de algodn y gasa en papel peridico blanco.
Esterilizar pipetas envueltas en papel y tapn de algodn todo este
material se esteriliza a 175C por 30 minutos.
Esterilizar puntas de pipetas automticas previamente auto clavado y

envuelto en una funda de papel empaque a 120C por 30 minutos.
Esterilizar material para toma de muestra como espculos, porta bistur,
pinzas, tijeras previamente envueltas en campo de tela 175C por 30
minutos.
PROCEDIMIENTOS
El recipiente para descontaminar especmenes, sea de vidrio o aluminio, deber
contar con tapa de seguridad para trasladarlo fuera del lugar de trabajo. En este
caso el exterior del recipiente deber ser mantenido libre de toda contaminacin
de sangre, usando solucin descontaminante.
El desecho de los fluidos orgnicos como orina puede efectuarse por las caeras
habituales una vez que estos hayan sido convenientemente descontaminados
con hipoclorito de sodio al 0.5%, y se debern desechar en fundas rojas as
como las heces.
Es indispensable tener preparadas y a la mano la solucin desinfectante como el
detergente en agua al 1-2%; fenol al 5%; hipoclorito de sodio al 1%; 2% y 5%.
El equipo reusable: puntas de micro pipetas, cnulas, tubos, placas porta objetos,
pipetas de vidrio, entre otros, se lo coloca en un recipiente metlico o de plstico
9

Resistente con solucin jabonosa al 1-2% y solucin de hipoclorito de sodio al
0.5% que deber estar ubicada en el mismo lugar de trabajo.
Luego se lo auto clava a 121C, 15 libras de presin por 15 minutos y ya estar
listo para ser enjuagado, lavado con agua destilada y secado en lugar ventilado y
una vez seco va a esterilizar al horno o estufa.
La limpieza de material de vidrio se determina por la uniformidad con que el agua
destilada moja la superficie, los residuos de grasa, aceite, impide que esto ocurra
y el agua destilada se acumula en forma de gota.
Los mandiles y otras prendas protectoras usadas se harn paquete con papel
peridico blanco y piola en el mismo lugar de trabajo; luego se auto clava para su
posterior lavado.
Todo material descartable como aguja, jeringuillas, lancetas debern ser
colocadas en un recipiente de material resistente a punciones o cortaduras.
Se desecha este material en un galn plstico, debidamente rotulado dentro de la
funda roja.
El material roto se auto clava con mucho cuidado para luego ser colocados en
fundas rojas y depositadas en una caja de cartn debidamente rotulado
MATERIAL CORTO PUNZANTE. PELIGRO y entregados directamente al
recolector de desechos hospitalarios.
ELIMINACION DE DESECHOS.
Se dispondr diariamente en cada departamento de trabajo dos recipientes con
tapa y con rotulo.
1. Desechos infecciosos que contendr funda plstica roja.
2. Desechos comunes que contendr fundas plsticas negras resistentes.
Al finalizar el trabajo se recoger todas estas fundas, se sellan y se depositan en
el contenedor de desechos que puede ser un tacho grande grueso plstico o
metlico con tapa y rueda.
10
EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO

VASO DE PRECIPITADO
Pueden ser de dos formas: altos o bajos. Sin graduar o graduados y nos dan un
volumen aproximado (los vasos al tener mucha anchura nunca dan volmenes
precisos). Se pueden calentar (pero no directamente a la llama) con ayuda de una
rejilla.
DESECADOR
Recipiente de vidrio que se utiliza para evitar que los solutos tomen humedad
ambiental.
En (2), donde hay una placa, se coloca el soluto y en (1) un deshidratante.
11

EMBUDO DE VIDRIO.
Se emplea para trasvasar lquidos o disoluciones de un recipiente a otro y tambin

para filtrar, en este caso se coloca un filtro de papel cnico o plegado.
BUCHNER
El Buchner es un embudo de porcelana, tiene una placa filtrante de agujeros

grandes por lo que se necesita colocar un papel de filtro circular, que acople perfectamente, para su uso.
Se emplea para filtrar a presin reducida. Su uso va unido al Kitasato, recipiente
de vidrio con rama lateral para conectar con la bomba de vaco (normalmente, una
trompa de agua).
12

CRISTALIZADOR
Puede ser de forma baja o alta. Es un recipiente de vidrio donde al aadir una
disolucin se intenta que, en las mejores condiciones, el soluto cristalice.
FILTRO PLEGADO
Se elabora con papel de filtro, sirve para filtrar, se coloca sobre el embudo de
vidrio y el lquido atraviesa el papel por accin de la de la gravedad; el de pliegues
presenta mayor superficie de contacto con la suspensin.
13

EMBUDOS DE DECANTACIN
Son de vidrio. Pueden ser cnicos o cilndricos. Con llave de vidrio o de tefln. Se
utilizan para separar lquidos, inmiscibles, de diferente densidad.
TUBOS DE ENSAYO
Recipiente de vidrio, de volumen variable, normalmente pequeo. Sirven para

hacer pequeos ensayos en el laboratorio. Se pueden calentar, con cuidado,
directamente a la llama. Se deben colocar en la gradilla y limpiarlos una vez
usados, se colocan invertidos para que escurran. Si por algn experimento se
quiere mantener el lquido, se utilizan con tapn de rosca
14

PROBETA
Recipiente de vidrio para medir volmenes, su precisin es bastante aceptable,

aunque por debajo de la pipeta. Las hay de capacidades muy diferentes: 10, 25,
50 y 100 ml.
PIPETAS
Recipientes de vidrio para medir volmenes, son de gran precisin. Las hay de
capacidades muy diferentes: 0'1, 1'0, 2'0, 5'0, 10'0.............. ml (las ms precisas
miden I). En cuanto a la forma de medir el volumen, podemos distinguir entre:
graduadas: sirven para poder medir cualquier volumen inferior al de su mxima
capacidad; de enrase (slo sirven para medir el volumen que se indica en la
pipeta): a su vez pueden ser simples o dobles.
La capacidad que se indica en una pipeta de enrase simple comprende desde el
enrase marcado en el estrechamiento superior hasta el extremo inferior. En una
pipeta de enrase doble, la capacidad queda enmarcada entre las dos seales.
Si el lquido no ofrece peligrosidad, colocando la boca en la parte superior de la
pipeta, se succiona y se hace subir el lquido un poco por encima del enrase. La
pipeta se cierra con el dedo ndice.
Al vaciar la pipeta se debe hacer lentamente para evitar que quede lquido pegado
a las paredes. La ltima gota no es necesario recogerla porque ya viene aforada
para que quede sin caer (salvo que se indique lo contrario en la propia pipeta).
15

ASPIRADOR DE CREMALLERA.
Se utiliza acoplando este material a la pipeta, para succionar lquidos peligrosos.

Se acopla la pipeta en la parte inferior, al mover la rueda, subiendo la cremallera,
sube el lquido. Para vaciar: a) lentamente, moviendo la rueda en sentido
contrario. b) rpidamente, presionando el soporte lateral.
BURETAS
Material de vidrio para medir volmenes con toda precisin. Se emplea,

especialmente, para valoraciones. La llave sirve para regular el lquido de salida.
Manejo:
1) se llena con la ayuda de un embudo.
2) los lquidos han de estar a la temperatura ambiente.
3) el enrase debe hacerse con la bureta llena (aunque tambin se puede enrasar a
cualquier divisin), tomando como indicador la parte baja del menisco.
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4) la zona que hay entre la llave y la boca de salida debe quedar completamente
llena de lquido.
Pueden ser: a) rectas. b) con depsito. c) de sobremesa con enrase automtico.
MATRAZ AFORADO
Material de vidrio para medir volmenes con gran precisin. Existen de

capacidades muy variadas: 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1.000 mI. Slo mide el
volumen que se indica en el matraz. No se puede calentar ni echar lquidos
calientes. El enrase debe hacerse con exactitud, procurando que sea la parte baja
del menisco del lquido la que quede al ras de la seal de aforo. Se emplea en la
preparacin de disoluciones.
17

FRASCOS LAVADORES.
Recipientes en general de plstico (tambin pueden ser de vidrio), con tapn y un

tubo fino y doblado, que se emplea para contener agua destilada o des ionizada.
Se emplea para dar el ltimo enjuague al material de vidrio despus de lavado, y
en la preparacin de disoluciones.
Estos frascos nunca deben contener otro tipo de lquidos. El frasco slo se abre
para rellenar
MORTERO CON MANO O MAZO.
Pueden ser de vidrio, gata o porcelana. Se utilizan para triturar slidos hasta
volverlos polvo, tambin para triturar vegetales, aadir un disolvente adecuado y
posteriormente extraer los pigmentos, etc.
18

ERLENMEYER
Matraz de vidrio donde se pueden agitar disoluciones, calentarlas (usando rejillas),

etc.
Las graduaciones sirven para tener un volumen aproximado. En una valoracin es
el recipiente sobre el cual se vaca la bureta
GRADILLA.
Material de madera o metal (aluminio), con taladros en los cuales se introducen los
tubos de ensayo
19

CMARA DE NEUBAUER
Es un instrumento utilizado en medicina y biologa para realizar el recuento de

clulas en un medio lquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, lquido
cefalorraqudeo, lquido sinovial, etc.
CAJA PETRI
Se utiliza en los laboratorios principalmente para el cultivo de cristales, en los

laboratorios de biologa se utilizan para el cultivo de bacterias o microorganismo
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TUBOS CAPILARES
Nuestros tubos capilares estn designados para una fcil coleccin de muestra
que da como resultado excelentes determinaciones de micro-hematocrito.
EQUIPOS DE LABORATORIO
CENTRFUGA
Se ha diseado para utilizar la fuerza centrfuga para separar slidos

suspendidos en un medio lquido por sedimentacin o para separar lquidos
de diversa densidad.
21

BAO DE MARA
Es un equipo que se utiliza en el laboratorio para realizar pruebas serolgicas y

procedimientos de incubacin, aglutinacin, inactivacin,
biomdicos,
farmacuticos y hasta industriales. Por lo general, se utilizan con agua, pero
tambin permiten trabajar con aceite. Los rangos de temperatura en los cuales
normalmente son utilizados estn entre la temperatura ambiente
y los 60 C. Tambin se pueden seleccionar temperaturas de 100 C, utilizando
una tapa de caractersticas especiales. Los baos de Mara son fabricados con
cmaras cuya capacidad puede seleccionarse entre los 2 y los 30 litros.
22

INCUBADORA
Son equipos modernos de laboratorio que se utilizan para mantener el desarrollo

microbiolgico progresivo de cultivos, regulando factores de crecimiento viables
como por ejemplo la temperatura, la humedad y la ventilacin.
El horno de laboratorio es un tipo de horno comnmente usado para deshidratar
reactivos de laboratorio o secar instrumentos
LECTOR DE ELISA
Se utiliza para la tcnica de Inmunoensayo en la cual un antgeno inmovilizado se

detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un
producto detectable
23

AUTOCLAVE
Es un equipo de laboratorio que se utiliza para esterilizar. Por esterilizar se

entiende la destruccin o eliminacin de toda forma de vida microbiana
(incluyendo esporas) presente en objetos inanimados mediante procedimientos
fsicos, qumicos o gaseosos.
24
DESARROLLO:
PRCTICA N 1
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO
1. OBJETIVO:
Poner en prctica las normas anteriores durante cada sesin de laboratorio
2. FUNDAMENTO:
Conjuntos de normas y procedimientos para obtener una situacin carente de
riesgos o con riesgos limitados.
PRECAUCIONES UNIVERSALES:
1. Acceso restringido, permitido solo a personas autorizadas

2. Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o
cualquier objeto de uso personal dentro del laboratorio.
3. Usar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes (de
ltex) la misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio.
Botas y gorra en casos de exposicin a microorganismos de alta
peligrosidad.
4. Antes de iniciar cualquier actividad en el laboratorio asegurarse de que en
la mano no existan escoriaciones. En caso contrario cubrir las mismas de
manera adecuada.
5. Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y lavado de manos.
6. No tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas
7. Evitar la formacin de aerosoles y gotas.
8. Manejo adecuados de los objetos cortos punzantes. Una vez utilizados se
deben almacenar en recipientes rgidos y eliminarse luego de ser
descontaminados.
9. Terminantemente prohibido pipetear con la boca. Debe utilizarse los
pipeteadores automticos.
10. Descontaminar las superficies de trabajo una vez terminado el trabajo
diario. Se recomienda el uso de hipoclorito de sodio al 10%
11. Evitar conductas inseguras y de riesgo.
12. Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar
tratamiento adecuado especialmente de los infecciosos.
13. Los desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las caeras
habituales una vez que hayan sido descontaminados.
14. Lavarse las manos con abundante agua y jabn luego de haber terminado
el trabajo diario.
15. Plan de inmunizaciones para el personal de laboratorio
25
INFORMACIN SOBRE EL CONTROL DE CALIDAD EN EL

LABORATORIO CLNICO.
El laboratorio clnico es un servicio mdico indispensable, cuya importancia ha ido
creciendo y desarrollndose a lo largo de los aos hasta ocupar un lugar central
en la medicina.
La meta fundamental de los laboratorios clnicos es proporcionar datos confiables
acerca de la composicin de muestras obtenidas de pacientes, de tal forma que
puedan contribuir al diagnstico, tratamiento y seguimiento de diversas
enfermedades.
La obtencin de datos verdaderamente confiables, requiere de la rigurosa
aplicacin de diferentes tcnicas de control de calidad, teniendo siempre presente
que el mejor sistema de control es el que permite prevenir, identificar y corregir los
errores. Cuando no se dedica la atencin suficiente a la calidad, se pueden
presentar deficiencias serias.
Un laboratorio clnico debe tener como uno de sus propsitos principales, la
produccin de datos analticos de alta calidad por medio del uso de mediciones
analticas que sean precisas, exactas y adecuadas para tal fin; conduciendo esto a
resultados confiables.
Para concretar este propsito se hace necesaria la utilizacin de programas de
control de calidad interno y externo, entre otros elementos, se debe recordar que
se puede tener buena o mala calidad en todo tipo de sistemas analticos ya sean
stos manuales o automatizados, por lo que se debe tener mucho cuidado en
ambos casos.
La meta de un sistema de control de calidad deber ser que: La variacin en las
determinaciones que se llevan a cabo en el laboratorio sea lo suficientemente
pequea para que no se afecte la utilidad .
La realizacin de cualquier procedimiento analtico puede estar amenazada por
cometer un sin nmero de errores, algunos de los cuales pueden llegar a tener
consecuencias realmente serias.
Actualmente, frente a la demanda creciente de los usuarios del laboratorio clnico
(mdicos y pacientes) y como resultado del avance cientfico y tecnolgico, Se
requiere controlar la operacin total, incluyendo las etapas pre-analtica, analtica y
post-analtica.
26
1.1 ETAPA PREANALTICA

Las pruebas de laboratorio miden un compuesto analizado en un espcimen de
sangre u otro fluido corporal, son solicitadas por los mdicos para evaluar el
estado del paciente.
Se asume que el resultado analtico obtenido es representativo de la
concentracin real del compuesto analizado en el paciente.
Desafortunadamente, hay numerosos factores que pueden invalidar esta
suposicin. Un nmero de errores no analticos pueden tambin cambiar la
concentracin de uno o ms compuestos analizados en un espcimen de tal forma
que los resultados no reflejan la condicin fisiolgica del individuo.
Estos factores son llamados colectivamente fuentes de error pre-analtico. De la
misma forma en que al controlar la temperatura, la longitud de onda, y tiempo de
incubacin se limitar el error analtico, el error pre-analtico tambin puede ser
controlado.
Es responsabilidad de los laboratorios tomar medidas que minimicen las fuentes
de error, desarrollando procedimientos estandarizados referidos a la preparacin
del paciente, la recoleccin de la muestra, los mtodos de transporte y la
preservacin de la misma.
1. CAUSAS DE VARIACIN PREVIAS A LA RECOLECTA

A) VARIABLES DEL CICLO BIOLGICO
Variacin cclica se refiere a los cambios en la concentracin de los compuestos
analizados, que ocurre de forma predecible a ciertas horas del da, semana o mes.
El estudio de estos cambios cclicos es llamado "cronobiologa". La variacin
rtmica es tpica de muchas funciones biolgicas; la variacin diurna en el
metabolismo de drogas y la incidencia de infarto al miocardio son dos ejemplos de
la importancia de este campo. La variacin cclica ms reproducible es la
circadiana, la cual ocurre durante el transcurso de un solo da.
La variacin cclica durante un perodo de tiempo mayor que un da, tambin
puede afectar los resultados en las pruebas de laboratorio.
La variacin est relacionada con cambios en la dieta debido a la estacin, o con
la variacin del clima.
27

Infradiana: mayor que un da (ejemplo, ciclo menstrual)
Circadiana: alrededor de un da
Ulfradianos: menor de 24 hr
PRUEBAS SUJETAS A VARIACIN DIURNA
Fosfatasa cida *
ACTH
Catecolaminas
Hormona del Crecimiento*
Tolerancia a la Glucosa
Hierro
Osteocalcina*
Hormona Paratiroidea
Prolactina
Ms alta en pasado meridiano ( PM) y las otras, ms altas en (A.M.)
Pruebas Afectadas por la Ingestin de Alimentos
Cloro
Gastrina
Glucagn
Glucosa
Hormona del Crecimiento
Fosfato
Potasio
Triglicridos
B) VARIABLES FSICAS RELACIONADAS CON EL PACIENTE

El ejercicio fsico es una causa comn controlable de variacin en los resultados
de las pruebas de laboratorio.
Dentro de las pruebas qumicas de rutina se ha observado que: el potasio, el
fsforo, la creatinina y las protenas sricas son significativamente alterados por
un perodo breve de ejercicio. Con el ejercicio regular, hay un aumento en las
enzimas relacionadas con la actividad muscular y un aumento en la concentracin
de cido rico en sangre.
28

El ejercicio intenso, como correr en un maratn, produce una rpida elevacin en
la concentracin del potasio, cido rico, bilirrubina y enzimas musculares,
mientras que la concentracin de glucosa y fsforo disminuyen significativamente.
En personas sometidas a entrenamiento para competencias de distancias largas,
las concentraciones de gonadotropina y esteroides sexuales estn marcadamente
disminuidas, mientras que la concentracin de prolactina est aumentada.
La postura es una causa de variacin pre analtica fcilmente controlable.
En la posicin de pie, se observa que un incremento en la presin hidrosttica
causa prdida de agua y electrlitos procedentes del compartimiento del lquido
intravascular, lo que a su vez da como resultando un aumento en la concentracin
de protenas.
PROCEDIMIENTOS PARA MINIMIZAR LAS VARIABLES EN EL

PACIENTE
A) VARIABLES BIOLGICAS CCLICAS.
El laboratorio deber determinar cules de las pruebas realizadas tienen cambios
significativos de concentracin, ya sean cclicos o relacionados con la ingesta de
alimento. En condiciones ptimas, los especmenes para estas pruebas debern
ser colectados tan pronto como el paciente despierte y que est todava en
ayunas.
B) VARIABLES FSICAS.
Si se estn colectando muestras para medir compuestos analizados, que son
afectados por el ejercicio, es necesario interrogar al paciente para saber si ha
realizado ejercicios vigorosos en las ltimas 24 a 48 horas. Cualquier historia de
ejercicio vigoroso deber ser anotada en la forma de requisicin e incluirse en el
reporte final.
Otra alternativa ser pedirle al paciente que regrese despus para la toma de esa
muestra. Antes de la toma de muestra el estado de estrs es difcil de controlar;
sin embargo, los mdicos debern estar informados sobre aquellas pruebas que
pueden estar afectadas, as como de la magnitud del cambio inducido por el
estrs, ya sea fsico o mental.
29
2. CAUSAS DE VARIACIN EN LA RECOLECTA DE SANGRE

TCNICAS PARA LA RECOLECTA DE SANGRE
El uso incorrecto de los procedimientos para obtener especmenes puede inducir
errores significativos en los resultados finales de las pruebas de laboratorio; los
errores relacionados con la colecta de muestras en el laboratorio son las causas
ms comunes de resultados errneos. En hospitales de enseanza, la flebotoma
es llevada a cabo por una variedad de individuos (Enfermeras, asistentes de
mdicos y estudiantes) quienes tienen un entrenamiento formal limitado o incluso
carecen de l, en tcnicas de flebotoma.
En la mayora de los laboratorios, los especmenes son colectados usando tubos
al vaco y agujas especialmente diseadas, que simultneamente permiten la
puncin de la vena y del tapn del tubo. Los tubos para colecta son hechos: de
vidrio, plstico los cuales estos ltimos son usados con ms frecuencia; ambos
son apropiados para la mayora de las pruebas. Muchos tubos estn cubiertos con
silicn, el cual reduce la adhesin del cogulo, permitiendo mejor separacin del
Suero y de las clulas. Los tapones estn tpicamente hechos de hule.
En nios y adultos con difcil acceso venoso, puede hacerse una puncin capilar
para la obtencin de la muestra. Ciertos micros tubos especiales, que contienen
anticoagulantes pueden llenarse por capilaridad.
La contaminacin de la muestra con fluidos de tejido es una causa potencial de
preocupacin en todos los procedimientos de coleccin capilar de sangre, ya que
el fluido tisular virtualmente no contiene protenas y, por lo tanto, no tiene
compuestos analizados unidos a protenas.
Este tipo de contaminacin puede ser minimizado usando solo la sangre que fluye
libremente del sitio de puncin.
TIPOS DE MUESTRAS SANGUNEAS

Las diferencias que existen entre sangre arterial, venosa y capilar, son causas
Ocasionales de resultados errneos. La sangre arterial es la fuente de nutrientes
para todos los tejidos del cuerpo y es la mejor muestra para el anlisis de la
distribucin de sustancias necesarias para los tejidos corporales como el oxgeno
30

La sangre venosa difiere de la sangre arterial en que tiene menores
concentraciones de sustancias usadas en el metabolismo, tales como oxgeno y
ms altas concentraciones de productos de desecho tales como: cidos
Orgnicos, amoniaco y dixido de carbono.
Si sitios especficos como el pie se mantiene tibio, se pueden obtener muestras de
sangre capilar que son muy parecidas a las de sangre arterial. En estados de poca
perfusin tisular y en los neonatos, sin embargo, hay una diferencia significativa
entre la presin parcial de oxgeno (PO2) de la sangre capilar y la arterial.
A)
ERRORES
RELACIONADOS
ANTICOAGULANTES
CON
PRESERVATIVOS
Los preservativos y anticoagulantes son ampliamente usados para colectar

muestras de sangre, orina y otros fluidos corporales. Cuando se extrae sangre del
cuerpo y se deja coagular, sta se separa en una fase lquida llamada suero y en
un cogulo slido conteniendo clulas sanguneas y fibrina.
Si se aade un anticoagulante como la heparina, la fase lquida es llamada
plasma. El suero y el plasma son similares en muchos aspectos. El suero difiere
del plasma en que carece de fibrina, disminuyendo el total de protena. En la
coagulacin, las plaquetas liberan potasio al suero.
Por razones desconocidas, la concentracin de fsforo es ms baja en plasma por
un promedio de 2 g/L. En pacientes con algunos trastornos Hematolgicos estas
diferencias son exageradas.
El EDTA, contenido en el tubo utilizado para la recoleccin de muestras en
hematologa, es usado tambin para algunos ensayos qumicos porque la.
La contaminacin de muestras con anticoagulantes, especialmente EDTA, es un
Problema comn en muchos laboratorios EDTA deban llenarse al ltimo. Si se
est usando anticoagulante lquido, es importante asegurarse que sea
proporcional la cantidad de sangre y anticoagulante.
B) ERRORES RELACIONADOS CON LOS TUBOS SEPARADORES DE SUERO
Los tubos separadores de suero y plasma son usados por muchos laboratorios
para simplificar el proceso de separacin del suero (o plasma) de los elementos
celulares. Los tubos separadores de suero y plasma, contienen un gel
relativamente inerte e impenetrable, el cual tiene una densidad intermedia entre
los elementos celulares y el plasma o suero. Durante la centrifugacin, el gel se
levanta desde el fondo del tubo y forma una barrera mecnica que evita que los
cambios metablicos afecten las concentraciones plasmticas. Los tubos que
31

contienen estos geles pueden ser centrifugados y almacenados sin ser
destapados, reduciendo as el riesgo de producir aerosoles infecciosos y evitando
en forma simultnea la evaporacin.
C) ERRORES RELACIONADOS CON LAS TCNICAS DE RECOLECTA

INADECUADA
Torniquetes.
El uso de los torniquetes constituye una importante causa, adems controlable, de
variacin en los resultados de pruebas de laboratorio. Los torniquetes son
ampliamente usados en flebotomas para bloquear el retorno venoso, causando
dilatacin de las venas y haciendo ms fcil la identificacin de un sitio de
venopuncin. Los torniquetes a menudo permanecen colocados durante el
proceso de venopuncin asumiendo que la continua dilatacin venosa permitir
una colecta ms rpida de la muestra y evitar el "colapso" de la vena.
Aunque los torniquetes hacen el proceso de flebotoma ms fcil, la disminucin
en el flujo de sangre que stos inducen, causa cambios en los resultados de las
pruebas de laboratorio que pueden predecirse. Un minuto despus de aplicar el
torniquete, el incremento de presin causa prdida de agua y electrlitos del
plasma hacia el espacio del fluido extracelular, produciendo una elevacin en la
concentracin de protenas, clulas y sustancias unidas a clulas y protenas.
Si un torniquete se deja por 5 minutos, la elevacin en la concentracin puede
alcanzar hasta 15%. La magnitud de estos efectos puede diferir entre el primero y
el ltimo tubo colectados, mostrando una hemoconcentracin mayor en las ltimas
muestras.
Hemlisis.
La hemlisis ocurre cada vez que hay un trauma en los relativamente frgiles
eritrocitos, ya sea durante la colecta o con menor frecuencia despus de la
flebotoma. Una causa poco comn de hemlisis, es cuando se lleva a cabo la
flebotoma antes de que se seque el alcohol o cualquier otro desinfectante usado.
Frecuentemente, la hemlisis es causada por un flujo turbulento no laminar,
durante el proceso de colecta. Dentro de los tamaos de agujas que comnmente
se utilizan, la hemlisis no es causada por el uso de agujas muy grandes o muy
Pequeas.
32

El flujo no laminar ocurre comnmente cuando la sangre se mueve muy
lentamente o demasiado rpido a travs de la aguja. Si la sangre se extrae con
una jeringa, al sacar el embolo con fuerza o al inyectar la sangre en los tubos
usando presin en el embolo, generalmente se produce hemlisis. En forma
similar, el flujo de sangre lento de una vena colapsada que es depositado a un
tubo con vaco a menudo produce una muestra hemolizada.
La turbulencia en un tubo conteniendo sangre tambin puede causar hemlisis
despus de haber terminado la colecta; los transportadores mecnicos y
centrfugos en mal estado son causas raras de hemlisis.
La hemlisis altera los resultados de las pruebas de laboratorio. De manera
importante el contenido de los glbulos rojos es liberado, incrementando la
concentracin de sustancias intracelulares tales como lactato deshidrogenasa
(LDH), potasio y magnesio, mientras que disminuye la concentracin de solutos
extracelulares como el sodio.
Contaminacin con fluidos intravenosos
A muchos de los pacientes hospitalizados, por prescripcin mdica se les
administra fluidos intravenosos, los cuales tpicamente tienen una concentracin
ms alta de glucosa, drogas y algunos electrlitos, que los que estn presentes en
la sangre.
La contaminacin con fluidos intravenosos ocurre, cuando la sangre es extrada de
una vena conectada a la vena que tiene el catter. Aunque pudiera parecer que
una vena en el antebrazo es suficientemente distante del catter, hay una gran
cantidad de interconexiones. Cualquier extraccin de sangre de una vena que se
encuentre en el mismo lado donde est instalado un catter, corre el riesgo de
experimentar contaminacin por fluidos.
Errores relacionados con la identificacin del paciente y la muestra
correspondiente.
Debido a que no hay forma de probar que una muestra sin etiqueta pertenece a un
paciente dado, resulta esencial la identificacin apropiada de las muestras.
Mientras que el etiquetado puede parecer la parte ms simple de la colecta de
muestras, en la mayora de los laboratorios es la causa ms comn de resultados
errneos.
Muchos errores se cometen cuando se etiquetan muestras de pacientes con
nombres similares
33

3. CAUSAS DE VARIACIN POSTERIORES A LA RECOLECTA
La causas de variacin posteriores a la recolecta son ms fcilmente controladas
por el laboratorio que las variaciones relacionadas con la flebotoma, ya que es
posible desarrollar criterios para las condiciones aceptables de almacenamiento y
manejo de muestras despus de la colecta, durante el tiempo que las muestras
estn en posesin del laboratorio. Dentro de las variables en el manejo de
muestras que afectan los resultados de las pruebas estn: transporte, separacin
del suero de los elementos celulares y las condiciones de almacenamiento.
TRANSPORTE DE MUESTRAS
ERRORES RELACIONADOS CON EL TRANSPORTE DE MUESTRAS.
Comnmente las muestras son transportadas por los flebotomistas o por los
mensajeros. Una tardanza razonable en la transportacin, por lo general es bien
tolerada por la mayora de los compuestos analizados, ya que los cambios
metablicos ocurren relativamente despacio a temperatura ambiente. As, la
tardanza hasta de una hora no cambia la concentracin de la mayora de los
compuestos analizados.
La glucosa, a menudo considerada una de las sustancias ms lbiles en la sangre
disminuye de 2 a 3% por hora, a temperatura ambiente, en tubos sin inhibidores
glucolticos como el fluoruro. Los productos del metabolismo (como lactato,
amonio y el ion hidrgeno) se acumulan en el plasma despus de la toma de la
muestra, a menos que las reacciones enzimticas sean retardadas.
PROCEDIMIENTO
TRANSPORTACIN
PARA
MINIMIZAR
ERRORES
DE
Para minimizar la variacin posterior a la colecta, los especmenes deben ser

entregados y almacenados rpidamente despus de la toma de muestras. Los
compuestos analizados que estn sujetos a cambios de concentracin in vitro a
temperatura ambiente, inmediatamente deben ser transportados en hielo al
laboratorio. Las instrucciones de manejo deben ser claras; en muchos casos, las
muestras son colocadas incorrectamente sobre hielo, transportadas sobresaliendo
de un recipiente con hielo o sumergidas en hielo sin agua. Debido a que un slido
conduce calor ms lentamente que un lquido, las muestras manejadas de esta
manera, no se enfriarn tan rpido y pueden mostrar cambios en la concentracin
del compuesto analizado.
34

Aunque el enfriamiento de las muestras durante su transporte minimiza muchos
cambios artificiales en la concentracin de compuestos analizados, el enfriamiento
tambin incrementa la liberacin de potasio de las clulas.
Para una sustancia que sufre cambios en la concentracin debidos al metabolismo
in vitro, debe indicarse un tiempo especfico tolerable de retraso.
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
ERRORES ORIGINADOS DEBIDO AL PROCESAMIENTO INCORRECTO DE
LAS MUESTRAS
La centrifugacin es el mtodo ms comnmente usado para la separacin inicial
del suero y las clulas. En general, la centrifugacin de muestras por 5 a 10
minutos a 1000-2000 G es adecuada para la completa separacin del suero y
eritrocitos, incluyendo las muestras que contienen geles separadores de suero o
plasma. Las muestras para obtener suero deben ser centrifugadas nicamente
hasta que la formacin del cogulo sea completa (al menos 20 a 30 minutos
despus de su colecta). Se debe tener la precaucin de revisar que realmente el
cogulo se haya formado, ya que puede haber razones fisiolgicas para que
ocurran tiempos prolongados de formacin del cogulo. Por ejemplo, las muestras
de pacientes de dilisis pueden continuar coagulndose por horas despus de la
colecta debido a la heparina empleada en la preparacin de los pacientes para
dilisis. Con tubos que no contienen geles separadores, es necesaria una etapa
adicional para completar la separacin. Antes de la centrifugacin, los objetos
tales como perlas de vidrio, tapones o cualquier otro objeto mecnico puede ser
adicionado a los tubos para realizar la misma funcin que el gel.
El suero debe ser separado de las clulas, de otra manera, las clulas
sanguneas continuarn llevando a cabo sus funciones metablicas y alterarn la
composicin del espcimen.
ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS
ERRORES ORIGINADOS DEBIDOS AL ALMACENAMIENTO INADECUADO DE
MUESTRAS
Una vez que el suero o plasma ha sido separado de las clulas, la mayora de las
sustancias en un perodo de 2-3 das muestran pequeos cambios en la
concentracin cuando se mantienen a 4 C. Para compuestos analizados lbiles,
incluyendo, enzimas y algunas otras sustancias, las muestras deben ser
congeladas para prevenir cambios relacionados con el almacenamiento.
35

Los compuestos analizados que pueden ser intrnsecamente estables en
almacenamiento, tambin pueden cambiar en presencia de otros compuestos.
La evaporacin puede incrementar la concentracin de la muestra. Cuando una
muestra no est cubierta, la velocidad de evaporacin es afectada por la
temperatura, humedad, movimiento del aire y el rea superficial de la muestra.
PROCEDIMIENTOS PARA MINIMIZAR ERRORES POR ALMACENAMIENTO.
Los errores por almacenamiento pueden ser evitados seleccionando
adecuadamente la hora, la temperatura y las condiciones de almacenamiento. La
mayora de los compuestos analizados son estables, cuando se almacenan
refrigeracin durante 72 horas. Si un compuesto analizado no es estable, las
muestras deben ser congeladas, hasta su anlisis. La mayora de especmenes
pueden almacenarse a -70 C sin que sean afectadas las concentraciones de los
compuestos analizados, ms que cuando sean congelados por varios aos. A las
temperaturas estndares de congelacin de 10 a 2 0 C, la mayora de las
sustancias sern estables por perodos ms cortos.
Debe evitarse la descongelacin y recongelacin repetidas de muestras; esto es
especialmente problemtico con los congeladores modernos "libres de escarcha",
los cuales peridicamente incrementan la temperatura de congelacin para
permitir la fusin de la escarcha. Los compuestos analizados que son susceptibles
a ciclos repetidos de congelacin y descongelacin, como el complemento,
debern ser almacenados en otro tipo de congeladores. Las muestras congeladas
deben ser descongeladas lentamente a temperatura ambiente o en un bao de
agua a 37 C, y entonces ser mezcladas meticulosamente antes de su anlisis.
CRITERIO PARA EL RECHAZO DE ESPECMENES
Para evitar el reporte de resultados falsos, cada laboratorio debe establecer el
criterio para el rechazo de especmenes. Un espcimen debe ser rechazado
cuando los resultados obtenidos en su anlisis no representan el estado del
paciente. La causa ms comn de rechazo de un especmenes origina por una
identificacin inadecuada.
Los especmenes deben tener el nombre del paciente y nmero de identificacin
tanto en la muestra como en la requisicin. Los especmenes que no son extrados
por el personal del laboratorio debern ser cuidadosamente revisados antes de ser
aceptados en el laboratorio. En especmenes que requieren manejo especial, las
causas ms comunes de rechazo son la colecta y/o transporte inadecuado.
Cada laboratorio deber tener una lista de muestras alternativas aceptables para
cada prueba; por ejemplo, el manual del laboratorio puede sugerir la colecta de
36

suero para una prueba en particular, pero una muestra de plasma heparinizado
puede ser una alternativa aceptable. Si las muestras contienen otros
anticoagulantes o preservativos, deben ser rechazadas (aunque sean tiles para
otros anlisis). Cuando las muestras se manejen en tubos que contienen
anticoagulantes o preservativos, se indicar la proporcin hay entre los mismos.
Esto es ms crtico con preservativos en soluciones lquidas, pero puede ocurrir
tambin con anticoagulantes en polvo. Los tubos que no tengan la proporcin
apropiada no deben ser aceptados para anlisis. Para pruebas que requieren una
preparacin especial del paciente y si sta no se llev a cabo, las muestras deben
ser rechazadas. Si una prueba es afectada por hemlisis, los especmenes
hemolizada deben rechazarse. As mismo, si el resultado de una prueba es
afectado por lipemia (y la muestra no puede ser clarificada por ultra centrifugacin
antes del anlisis), este resultado de la prueba no deber ser reportado. Aunque
muchos mdicos se quejen cuando el laboratorio no les reporta el resultado de las
pruebas que solicitaron para sus pacientes, si hay alguna duda acerca de la
validez de un resultado este no debe ser reportado.
Los resultados errneos pueden conducir al tratamiento inadecuado del paciente.
ETAPA ANALTICA
En la fase analtica se realizan las mediciones y observaciones en funcin de los
procesos o protocolos que cubre el laboratorio. Cada procedimiento de anlisis
describir no slo las mediciones y observaciones implementadas en el
laboratorio, sino tambin la verificacin de las caractersticas de ejecucin, que
pretende la persona que elabor el procedimiento o el fabricante del sistema
analtico.
Los procedimientos, materiales de sistema de control, varan segn la
especialidad. Algunas veces los valores obtenidos son variables continuas
(mtodo cuantitativo), en otros casos las variables son discretas (semi-cuantitativa
y cualitativas), pero en todos los casos, en la fase analtica se debe considerar la
medicin u observacin y un procedimiento de control. La seleccin del
procedimiento se basa en los criterios de practicabilidad y confiabilidad.
Los aspectos de practicabilidad incluyen la educacin y el entrenamiento
requerido, disponibilidad de reactivos, los requerimientos instrumentales, el tiempo
de ejecucin, el costo y la seguridad. El personal encargado de elaborar los
procedimientos con base en un estndar de operacin, debe cuidar estos
aspectos al igual que la industria que los adapte a su versin comercial y es
importante tomarlos en cuenta antes de seleccionar un procedimiento que se vaya
a implementar en el laboratorio. Los criterios de confiabilidad describen la
37

ejecucin analtica del mtodo cuando se utiliza en condiciones rutinarias y son los
siguientes: la exactitud en la ejecucin, la precisin (expresada como una
desviacin estndar o coeficiente de variacin), la veracidad (expresada como
desviacin), la linealidad, la especificidad analtica, la interferencia analtica, el
lmite de deteccin, el intervalo de medicin y el error total. Las caractersticas
anteriores pueden variar de un laboratorio a otro, ya que la implementacin de
cada uno de ellas modifica las condiciones ptimas.
La etapa o fase analtica tambin incluye otros aspectos como son: la calibracin,
los estndares de calibracin, los mtodos de medicin, la capacidad de rastrear
los resultados para validarlos, los clculos para los resultados, la utilizacin de
curvas de medicin, el uso de relaciones tericas para algunas magnitudes, las
transformaciones de resultados para hacerlos ms informativos al mdico, el uso
de computadoras y analizadores, los procedimientos que permiten monitorear la
ejecucin de un procedimiento de medicin con el propsito de una accin
correctiva, el uso de materiales o sueros control y la preparacin del mismo, el
establecimiento de los lmites de control, la realizacin de grficas de control, la
interpretacin de las mismas, el uso de reglas de control, el archivo de todo lo
relativo al control de calidad para posteriores requerimientos, entre otros aspectos.
POST-ANALTICA
La preservacin de la calidad post-analtica es el proceso para verificar la calidad
en todos los procedimientos que se llevan a cabo cuando el reporte sale del
laboratorio y queda en manos del mdico o profesional al cuidado de la salud.
Adems de utilizar intervalos de referencia correctos, las reas de preservacin de
la calidad post-analtica incluyen:
Verificacin de los clculos en los reportes finales.
Revisin de los resultados de la prueba para detectar posibles errores de
trascripcin.
Que los reportes sean fciles de leer e interpretar.
Procedimientos para informar al mdico de resultados que requieran de atencin
inmediata.
Vigilar que se reporten en el momento preciso los valores en el expediente del
paciente.
Verificar que el mdico interprete en forma correcta las pruebas de laboratorio.
38

Mantener una interaccin constante con el personal responsable de la institucin,
con el fin de asegurar que el paciente reciba cuidados directos de buena calidad
como resultado de las pruebas de laboratorio.
En general, la vigilancia de esta parte de la preservacin de la calidad se realiza
de dos maneras:
Estas observaciones suelen relacionarse con reportes de laboratorio

incorrectos o con que transcurre demasiado tiempo, desde que se solicita la
prueba de laboratorio hasta que se reciben los resultados finales.
El otro tipo de vigilancia de la calidad en esta rea, se practica mediante la
valoracin continua del impacto de los resultados y procedimientos del
laboratorio dentro de la institucin en la cual brinda sus servicios.
El objetivo de estas valoraciones continuas es promover la excelencia en los

cuidados para los pacientes, por medio de las relaciones humanas con todos los
departamentos de la institucin.
Los programas de preservacin de la calidad a nivel institucional toman la forma
de crculos de calidad, comits para preservacin de la calidad o comits
revisores.
El objetivo de estos grupos no es resolver problemas sino evitar que ocurran.
Adems es necesario que el laboratorio tenga algn mtodo para preservar en
forma continua la calidad, verificando peridicamente su capacidad para funcionar
como un departamento de buena calidad. Esto puede incluir la evaluacin de los
espacios disponibles en el laboratorio para asegurar eficacia en los servicios,
revisar el grado de preparacin del personal y apoyarlo, para que participe en
actividades de actualizacin de conocimientos y continuar con su formacin
profesional.
Todos los miembros del personal de laboratorio son responsables de que se
preserve la calidad dentro del mismo. Esto ser una forma de convivencia y una
actitud evidente en todos los niveles de prctica. La calidad debe extenderse ms
all de los confines fsicos del laboratorio e incluye la responsabilidad de los
servicios hacia cualquier mdico que ordene una prueba y una preocupacin
permanente para que el paciente reciba tratamiento eficaz como resultado de los
datos que arroja el laboratorio.
Una vez que se propicie un aseguramiento de la calidad de los estudios en cada
una de las etapas anteriores, se podrn obtener resultados concretos respaldados
con bases slidas, es decir, se podr afirmar entonces que se tiene un laboratorio
con la adecuada estructura operativa y administrativa
39
TEMA: ENZIMAS
OBJETIVOS:
Demostrar la funcin de las enzimas en el diagnstico clnico, diagnstico
diferencial entre infarto de miocardio y pulmn, anemia y hepatopata,
detectar las enfermedades aguda del hgado, enfermedades seas,
pancreatitis, cncer de prstata entre otros.
CONCEPTO: Son protenas de uso repetitivo que catalizan las innumerables

reaccione qumicas necesaria para conservar a las clulas vivas y con funciones
aceleran y controlan la rapidez de las reacciones sin ser destruidas, constituyen el
principal grupo de protenas que se conoce.
REACCION ENZIMATICA
Todas las reacciones que se realizan en las clulas son catalizadas por enzimas,
por tanto podemos denominar de una manera general, como reacciones
enzimticas a todas aquellas que se producen en el interior de nuestro organismo.
La caracterstica ms sobresaliente de los enzimas es su elevada especificidad.

Esta es doble y explica que no se formen subproductos:
1. Especificidad de sustrato. El sustrato (S) es la molcula sobre la que el
enzima ejerce su accin cataltica.
2. Especificidad de accin. Cada reaccin est catalizada por un enzima
especfico.
La accin enzimtica se caracteriza por la formacin de un complejo que

representa el estado de transicin.
E+S
40
ES
E+P
El sustrato se une al enzima a travs de numerosas interacciones dbiles

como son: puentes de hidrgeno, electrostticos, hidrfobos, etc, en un
lugar especfico, el centro activo. Este centro es una pequea porcin del
enzima, constituido por una serie de aminocidos que interaccionan con el
sustrato.

En las reacciones participan diversos elementos que en su conjunto forman lo que
se llama sistema enzimtico y estas son:
1. Sustancia reaccionante o sustrato
2. La enzima
3. El cofactor
4. El producto
5. Los moduladores y los inhibidores
6. Ligasas
OXIDO REDUCTASAS
Son las enzimas relacionas con las oxidaciones y las reducciones biolgicas, que
intervienen en los roces de respiracin y fermentacin.
TRANSFERASAS
Son las que catalizan el traspaso de grupos qumicos a oclusin de hidrgenos
entre dos sustratos, forman parte de este grupo numerosas enzimas que reciben
nombres comunes de transaminasas, quinasas, etc.
HIDROLASAS
Grupo muy numerosos que tienen la capacidad de introducir elementos del agua,
como el hidrogeno y OH en el sustrato atacado, produciendo as la hidrolisis.
LIASAS
Restan grupos a los sustratos pero sin hidrolisis, dejando dobles enlaces en la
estructura molecular de producto.
ISOMERASAS
Son enzimas q catalizan diferentes tipos de isomeracion sean pticos,
geomtricos etc.
LIGASAS
Son enzimas que permiten la unin de dos molculas, simultneamente a la
degradacin de ATP u otros enlaces de alto contenido energtico que en rigor
libera energa necesaria para llevar a cabo la unin de las primeras
41
ENZIMAS PLASMATICAS ORIGEN E IMPORTANCIA CLINICA

MDICA
Con condiciones normales las enzimas se sintetizan en las clulas en la mayora
de los casos ejercen su funcin en el interior de ellas.
Otras enzimas una vez sintetizadas salen de las clulas y funcionan fuera de ellas
como es el caso de:
1. Las enzimas del tubo digestivo
2. Las enzimas del suero sanguneo
3. Las enzimas con funciones definidas en el suero
Entre las enzimas cuyo estudio tiene importancia en la clnica se encuentran las
siguientes:
AMILASAS SERICA
Enzimas del grupo de las hidrolasas, se producen principalmente en la fraccin
exocrina del pncreas y de las glndulas salivales.
Su accin de dirige particularmente a l hidrolisis de polisacridos como almidn y
glucgeno, es decir participan en el desdoblamiento del glucgeno y grasas en
boca, estomago o intestino.
En paciente con pancreatitis aguda esta enzima se encuentra aumentada
(hiperamilasemia) alcanzando los niveles mximos en sangre entre las 10 y 30
horas despus de comenzar la pancreatitis aguda para normalizarse en 48 72
horas siguiente. La amilasa normal no excluye el diagnostico de pancreatitis si la
determinacin se hace despus de las 48 a 72 horas.
Los riones eliminan amilasa de la sangre razn por la cual; los niveles de dicha
enzima pueden permanecer elevados tres a cinco das despus del incremento de
los niveles sricos.
Es importante tener en cuenta que en ciertas enfermedades se puede producir
hiperamilasemia o hipoamilasemia esto depende de la capacidad de
funcionamiento del parnquima para producir amilasa.
LIPASA
Es producida por las clulas acinosas del pncreas y secretada por el jugo
pancretico con el fin de hidrolizar la grasa.
Los niveles de lipasa aumentan en el caso de perforacin de ulcera gstrica
obstruccin intestinal gstrica, cncer pancretico, amefropatias.
42
FOSFATASAS
Esta se dividen en dos: Fosfatasa acida y Fosfatasa alcalina, llamadas as de
acuerdo a la condicin del ph en las que actan.
FOSFATASA ALCALINA
Es un enzima ampliamente distribuido en el organismo cuya funcin depende del
tejido donde se encuentra.
En el adulto esta enzima proviene de parte del hgado, hueso, sistema retculo
endotelial y vascular.
Se encuentra aumentada cuando se eleva la actividad de los osteoblastos, por
ejemplo en la niez o en algunas enfermedades seas como el raquitismo, en este
caso se elevan aun antes de que aparezcan el primer signo y sntomas de la
enfermedad.
FOSFATASA ACIDA
Comprende el grupo de enzimas de esta ndole con mxima actividad de 5 y est
presente en casi todos los tejidos del organismo, siendo fundamentalmente altas
las cantidades de esta enzima de la prstata y semen y en menos extensin en
hgado, baso, eritrocitos, medula sea y plaquetas.
Las dos izo enzimas ms importantes de este grupo son las producidas en la
prstata y en los eritrocitos, adems se produce aumento en las enfermedades
hepticas y renales.
ACTIVIDAD DE LA RENINA PLASMATICA

La secrecin de renina es la primera fase del ciclo renina-angiotensinaaldosterona, que regula el equilibrio de sodio y potasio, el volumen hdrico y la
presin arterial.
La renina es liberada por las clulas yuxtaglomerular de los riones en accin
agitacin de sodio y la prdida de sangre.
La cuantificacin de renina plasmtica es u mtodo inicial de identificacin de
hipertensin reno vascular.
COLINESTERASA
Esta permite conocer las cantidades de dos enzimas similares que hidrolizan la
acetilcolina, que son la coln esterasa y acilcolinesterasa esta ltima est en el
tejido nervioso eritrocitos del vaso y sustancia gris del cerebro, as la
seudocolinesterasa es producida por el hgado, corazn, pncreas e intestino.
43
TRANSAMINASAS
Hay dos tipos:
- TRANSAMINASA GLUTAMICO PIRUVICO
En hepatitis virales y otras formas de enfermedades hepticas que involucran
necrosis del tejido aumentan considerablemente esta enzima.
La TGP surge fundamentalmente en el citoplasma del hepatocito y en menos
cantidad en el rin, corazn, musculo estriado.
- TRANSAMINASAS GLUTAMICA OXALACETICA
Conocida tambin como aminotransferasa o transaminasas de aspartato es una
de las dos enzimas que catalizan la conversin nitrogenada de un aminocido.
DESHIDROGENASA LCTICA
Es una enzima que cataliza la conversin reversible del cido lctico del musculo
en acido pirvico, es posible identificar las 5 izo enzimas por electroforesis dos de
las izo enzimas la forman LDH1 y LDH2 que se encuentran en el corazn,
eritrocitos, riones, la forma LDH3 en el hgado y la LDH 4 y 5 en el musculo
estriado e hgado.
CREATINA FOSFOCINASA (CPK)

Es una enzima que cataliza la va metablica de creatina creatinina en miocito y
tejido celular, por su intervencin neta de la produccin de energa, la CPK refleja
la catablica celular normal, cualquier incremento por arriba de los niveles
normales en suero indica traumatismo de tejido con elevado contenido de tal
enzima.
La CPK puede separarse en tres izo enzimas con estructural moleculares
diferentes, las CPK BB, CPK MB (2), CPK MM (3).
LA CPK se encuentra en el tejido cerebral, la 2 en el musculo cardiaco y musculo
estriado, y la 3 en el musculo estriado.
La fraccin de la CPK MM constituye el 99% del CPK total que esta normalmente
en el suero y la deteccin de la izo enzima BB puede detectar lesin de tejido
cerebral.
ENZIMA GAMA GLUTAMILTRANSFERASA

Participa en la transferencia de aminocidos a travs de membranas celulares
posiblemente en el metabolismo de glucagn.
La GGT es particularmente sensible a los efectos del alcohol en el hgado y los
niveles pueden aumentar despus de la ingestin exagerada de bebidas
alcohlicas y en el alcoholismo crnico.
44
PRACTICA N2
TEMA: DOSIFICACION DE LA AMILASA EN SUERO U ORINA.
OBJETIVOS:
Conocer el mtodo correcto
conjuntamente con el docente.
para
realizar
la
respectiva
practica
FUNDAMENTO
La amilasa es una enzima que es producida principalmente por el pncreas y las
glndulas salivales, y en mucha menor medida, aportan con su produccin, el
hgado y las trompas de Falopio.
La amilasa, o ms propiamente dicho, las amilasas, porque existe ms de una
isoforma, son enzimas hidrolasas, que catalizan la hidrlisis de ciertos
polisacaridos, concretamente aminopectina, amilosa, glucgeno y sus productos
parcialmente hidrolizados.
En este mtodo almidn taponado se incuba con la muestra producindose
hidrolisis enzimtico.
Cuando se produce la disminucin del color respecto de un sustrato control sin
muestra la medida de la actividad enzimtica se expresa en unidades
amilolotricas, decilitro.
VALORES REFERENCIALES:
Normal 130U/dl
Pancreatitis aguda 300 a 1200 U/dl
Pancreatitis - crnica hasta 200 U/dl
Parotiditis 200 a 350 U/dl
RECOLECCION DE MUESTRA.
Obtener suero o plasma con anticoagulante.
Extraemos la sangre venosa por el mtodo de vacutainer o jeringas,
dejamos un momento al medio ambiente y luego llevamos el tubo con la
sangre a la centrifuga por cinco minutos a 3.000 rpm, sacamos la sangre y
separamos el suero del paquete de glbulos rojos.
45
MATERIALES Y EQUIPOS.
Micro pipetas o pipetas.

Volumtricas y serolgicas
Vacutainer o jeringas.
Tubos
Espetrofometro.
Bao mara
Reloj
Alcohol
Algodn
Torniquetes
Centrifugas
H2O destilada.
REACTIVOS.
Sustrato 1 solucin de almidn 500/1 taponado a ph 7 con buffer fosfato mol/l
en cloruro de Na 00.15 mol/l.
Reactivo de iodo; solucin eq/1 de codo en clH 0.02 mol/l
PROCEDIMIENTO.
En dos tubos fotocolimtricos marcados (control y desconocido)
REACTIVO CONTROL DESCONOCIDO
Sustrato1
Dejar unos minutos a 37C a los 7/12 minutos exactos agregar:
Reactivos de iodo 1ml.
Mezclas por agitacin suave y retirar los tubos del bao y agregar:
Agua destilada 8ml
Mezclar por inversin
Leer en el fotmetro a 640nm llevando a 0 el aparato con agua destilada.
46
GRAFICOS:
OBSERVACIONES:
Parte del tratamiento del cuadro clnico pancreatitis aguda es no dar
morfina porque produce espasmo del esfnter de Oddi y aumenta la presin
dentro de la va biliar, lo que agrava el problema.
CONCLUSIONES:
En conclusin se puede mencionar que el pncreas es un rgano de gran
importancia ya sin el nuestro organismo no secretara ciertas sustancias
necesarias para completar el proceso de digestin; finalizo diciendo que para
47

prevenir enfermedades tales como pancreatitis se debe asistir al mdico
constantemente para un revisin general y anlisis laboratoriales.
PREGUNTAS Y RESPUESTAS:
Qu es pancreatitis?
Pancreatitis es inflamacin del pncreas
Por qu se produce?
Hay varios motivos por los cuales te puede dar pancreatitis:
-Uno de ellos es la ingesta descuidada de grasas y alcohol (30% de los
casos de pancreatitis).
-La pancreatitis tambin puede ser causa de una litiasis vesicular (piedras
en la vescula, que puede ser de un 30 a 60 % de los casos).
Las piedras muchas veces descienden por el conducto coldoco y bloquean
el conducto de excrecin del pncreas, produciendo una inflamacin de
este (pancreatitis).
cules son los sntomas de una Pancreatitis Aguda?
-Dolor abdominal en la zona gstrica o periumbilical
-Nuseas y vmitos
-Distencin abdominal
48
PRACTICA N3
TEMA: DOSIFICACION DE FOSFATASA ALCALINA EN SUERO FRESCO NO
HEMOLIZADO.
OBJETIVO:
Conocer el mtodo correcto para la realizacin de la respectiva practica
Conocer los valores referenciales para realizar posteriormente una correcta
lectura del anlisis.
FUNDAMENTO.
La fosfatasa alcalina desdobla al fenilfosfato de sodio en medio alcalino taponado
con aminometil propanol (AMP).
El fenol liberado se determina por reaccin con 4-aminoantoprina y ferricianuro
como agente oxidante.
El color desarrollado es directamente proporcional a la actividad enzimtica y se
mide a 520nm.
RECOLECCION DE MUESTRA.
Extraemos la sangre venosa por el mtodo de vacutainer o jeringas, dejamos un
momento al medio ambiente y luego llevamos el tubo con la sangre a la centrifuga
por cinco minutos a 3.000 rpm, sacamos la sangre y separamos el suero del
paquete de glbulos rojos.
Adultos:
Nios:
18 240 u / l.
100 400 u / l.
MATERIALES Y EQUIPOS.
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Volumtricas y serologa.
Vacutainer o jeringas.
Tubos
Espetrofometro.
Bao mara
Reloj
Alcohol
Algodn
Torniquetes
Centrifuga
H2O destilada
REACTIVOS.
BUFFER- 4 aminoautipirina 29 nmol/l en solucin de aminometil propanol
3m mol/1 ph 10 37C
NAFF-2m mol/l de fenilfosfato de sodio.
Reactivo de color: 10nmol de ferricianuro de potasio.
Estndar: solucin de fenol equivalente a 200 vl/1
PROCEDIMIENTO.
En tres tubos, marcarlo con los nombres (blanco, estndar, desconocido); mezclar
de inmediato cada tubo, retirar los tubos del bao mara y leer en Espetofotometro
a 520 nm o fotocolimetria con filtro verde llevando al aparato a 0 con agua
destilada.
REACTIVO BLANCO
ESTANDAR DESCONOCIDO
Sustrato
0.5ml
0.5ml
0.5ml
Pre incubar en bao de agua a 37C unos minutos.
Suero
________________
_______________
50 ul
Estndar
________________
50ul
_________________
Mezclar e incubar exactamente 10 minutos y agregar:
Reactivos de color
2.5ml
2.5ml
2.5ml
Retirar del bao y mezclar de inmediato cada tubo y leer en fotmetro el filtro 546
50
GRFICOS:
51
OBSERVACIONES:
El rango normal es de 44 a 147 UI/L (Unidades internacionales por litro).
Los valores normales pueden variar ligeramente de un laboratorio a otro, al igual
con la edad y el sexo. Los niveles altos de FA normalmente se observan en nios
que presentan un aumento repentino en su crecimiento y en las mujeres
embarazadas.
CONCLUSIONES:
La insuficiencia renal modifica la distribucin srica de isoenzimas de fosfatasa
alcalina, su cuantificacin podra servir de marcador, no invasivo, para valorar las
complicaciones seas e intestinales asociadas al fallo renal.
PREGUNTAS Y RESPUESTAS
A qu se debe los niveles altos?
Puede deberse a:
-Obstruccin biliar
-Enfermedad sea
-Ingerir una comida grasosa si usted tiene el tipo de sangre O o B
-Consolidacin de una fractura
-Hepatitis
-Hiperparatiroidismo
-Leucemia
-Enfermedad heptica
-Enfermedad de Paget
-Raquitismo
A qu se debe una hipofosfatasemia?
Se debe a:
-Desnutricin
-Deficiencia de protena
52
PRACTICA N4
TEMA: DETERMINACIN DE TRANSAMINASAS: TGO Y TGP
1. OBJETIVOS
Realizar el anlisis de TGO TGP en un suero sanguneo
Conocer la interpretacin del resultado
2. FUNDAMENTO
Las transaminasas son unas enzimas, principalmente localizadas en el hgado.
Las ms importantes son:
TGO: Transaminasa glutmicooxalactica. Est presente en casi todos los
rganos, dentro de las clulas y que cuando se encuentran en sangre en
niveles muy elevados significa que ha habido destruccin celular.
TGP: Transaminasa glutmicopirvica. Se localiza principalmente en el
hgado y su misin es la fabricacin de glucosa.
Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el
organismo con elevada concentracin en corazn, hgado, msculo esqueltico,
rin y eritrocitos. La actividad srica en condiciones normales es baja o nula. Un
dao o enfermedad en cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los
niveles sricos. As, luego de un infarto de miocardio se produce en suero un
marcado aumento de la actividad de GOT (abundante en msculo cardaco)
Para realizar el examen en sangre, previamente es necesario que el paciente,
unos das antes, haga una dieta en la que no sobrecargue el hgado, no tomando
alcohol, escasas protenas y grasas y tambin es necesario no realizar esfuerzos
fsicos importantes.
3. MATERIALES y REACTIVOS:
Espectrofotmetro
Pipetas automticas
Puntas de plsticos para pipeta
Cubetas
Reloj
Reactivos:
TGO
TGP
53
4. DESARROLLO DE LA PRCTICA
(En suero o plasma) tanto para TGO como para TGP:
Longitud de onda: Hg 334 nm
Temperatura: 25 C
Cubeta: 1 cm paso de luz
Ajuste cero: contra el aire
Reactivo de trabajo
1000 ul colocar en la cubeta
Muestra
100 ul
colocar en la cubeta
Mezclar e incubar por 1 minuto a temperatura de 25 C, leer en el

espectrofotmetro (A1), repetir las lecturas exactamente al 2do.( A2) y 3er.
Minuto(A3)
Realizar los clculos:

A/ min = A1 - A2
absorbancia)
(usando los dos primeros minutos de lecturas de
A1/ min = A1 - A2 (usando los tres minutos de lecturas de absorbancia)

A2/ min = A2 A3
A/ min = (A1 + A2)/2
Concentracin de TGP = A x 1790
Concentracin de TGO= A x 1790
Reportar los resultados en U/l
54

5. OBSERVACIONES:
Valores de referencia (vara de acuerdo a la marca comercial del reactivo y a
la temperatura de medicin):
TGO: Mujeres hasta 32 U/l
Hombres hasta 38U/l
TGP: Mujeres hasta 31 U/l
Hombres: hasta 41 U/l
Parmetros a considerar:
Espectrofotmetro encender 20 minutos antes de realizar las lecturas de las
muestras
6. GRFICOS
55
7. CONCLUSIONES:
Para concluir debemos recordar que el hgado es la mayor fbrica del cuerpo
humano y casi siempre se altera por la ingesta, alimentacin y hbitos,
inadecuados.
8. PREGUNTAS y RESPUESTAS:
Cundo se produce un aumento de las transaminasas?
Destacaremos en este apartado las patologas ms habituales en las que se
produce un aumento de las transaminasas.
Las ms frecuentes son las:
-Enfermedades del hgado: Destacan las hepatitis, el excesivo consumo de
alcohol, cirrosis y todas aquellas enfermedades en las que se depositan
sustancias en el hgado de forma excesiva, como la grasa (esteatosis heptica o
hgado graso).
-Enfermedades del pncreas: Cuando se inflama el pncreas, ya sea por el
alcohol o por infecciones vricas, se produce tambin un aumento de las
transaminasas.
-Enfermedades del corazn: Es muy frecuente la elevacin de las transaminasas
en el infarto agudo de miocardio y en la insuficiencia cardaca aguda.
-Alteraciones musculares: Sobre todo, cuando hay destruccin de nuestros
msculos por quemaduras, ejercicio excesivo etc.
56
TEMA: CARBOHIDRATOS
OBJETIVO: Conocer y saber las cuantificaciones de la glucosa, para evaluar la
absorcin intestinal de glucosa y estudiar la funcin del hgado.
GENERALIDADES
Los hidratos de carbono o glcidos son compuestos de carbono, hidrogeno y
oxgeno, siendo muchas veces la proporcin relativa entre los dos ltimos ( el
agua ), de ah su nombre hidratos de carbonos, los representantes ms sencillos
del grupo, los azucares, estn formados por una cadena de 2 a 12 tomos de
carbono, sobre los cuales estn tejidos grupos h y oh y q presentan en un extremo
un grupo aldehdo ( c. h. o. ) o cetona ( c: o ) por lo tanto es posible describir todos
los azucares
sencillos dando el nmero de tomos de c. de la cadena y la
naturaleza del grupo terminal. Si existen 5 tomos de c. y un aldehdo, tenemos

una Aldo pentosa; con gc y aldehdo y una aldohexosa (con glucosa) el grupo
terminal aldehdo es el responsable de las capacidades seductores de la glucosa,
puede combinarse 2 molculas de hexosas, del mismo tipo o de tipos diferentes
para dar los disacridos por ej. La lactosa formada por la unin de dos
polisacridos, glucosa y galactosa.
La polimerizacin de azucares simples pueden dar origen a molculas gigantes de
h. de c., se forman as compuestos de reserva muy importante, como el almidn
para los vegetales y el glucgeno para el reino animal; en el hombre el glucgeno
se almacena en dos lugares, hgado donde forma una reserva que permite regular
la tasa de glucosa en la sangre, y los miembros cuya actividad contrctil alimenta.
Los carbohidratos a pesar de ser compuestos ingeridos en mayor proporcin en la
dieta, solo forman una parte reducida del organismo, hecho que complica su
constante y rpida utilizacin por parte de las clulas.
El papel principal de los carbohidratos en el organismo es la fuente de energa
pero tambin es posible sintetizar aparte de ellos grasas y
57
algunos cidos

aminados, tambin forma parte de la estructura de muchos compuestos
importantes como las enzimas, los glucolpidos, la heparina, etc.
DIGESTION POR ABSORCION DE LOS CARBOHIDRATOS

Los carbohidratos de la dieta estn constituidos principalmente por polisacridos,
como almidones y dextrinas y el disacrido sacarosa; en algunas frutas existe
glucosa y fructosa libres, el proceso de digestin , qumicamente consiste en la
transformacin de molculas grandes en pequeas y se lleva a cabo por una serie
de actividades mecnicas y enzimticas a cargo del aparato digestivo que en caso
de los carbohidratos consiste en su degradacin hasta monosacridos simples
que son absorbidos directamente.
El almidn y glucgeno son digeridos parcialmente por la accin de la amilasa
salival con la formacin de dextrinas intermedia y maltosa. La actividad de la
amilasa es inhibida al pH del estmago...
En el intestino delgado aumenta el pH por el jugo pancretico alcalino, la amilasa
del pncreas efecta la digestin del almidn y glucosa a maltosa, este, ya
formado junto con la lactosa y sacarosa ingeridas es desdoblada por los
disacridos en la mucosa intestinal (maltosa, lactosa y sacarosa) con formacin de
los monosacridos glucosa galactosa y fructosa.
La absorcin de este monosacrido es bastante compleja y parece que ocurre
mediante un proceso de transporte enzimtico activo llamado defosforilacin por
medio de la accin de una enzima del tipo de la hexocinasa y una fuente de
fosfato rico en energa como ATP, para formar un fosfato de hexosa.
Esto se reduce porque la velocidad de absorcin de glucosa y galactosa es mayor
que las pentosas como fructuosa en glucosa, al parecer ocurre una conversin de
fructuosa en glucosa, durante el proceso de absorcin y la inter conversin puede
imaginarse bien en trminos de la forma media comn o ambos.
Despus de la absorcin de las hexosas en la vena porta, estas son transportadas
al hgado, segn las necesidades del cuerpo, los carbohidratos pueden convertirse
58

en glucgeno y ser almacenados en esta forma en el hgado, metabolizarse por
completo a co2 y h2o para proporcionar energa inmediata, convertirse en
cetoacidos, aminocidos y protenas, o convertirse en grasas y almacenarse como
tejido adiposo en algunos tejidos los carbohidratos constituyen menos del 0.1% del
peso seco de la clula mientras en otros (por ej. el hgado) estn en un 15% se
clasifican en tres grandes categoras basndose en su complejidad estructural:
MONOSACARIDOS
Los monosacridos o azucares simples no pueden hidrolizarse para formar
azucares ms simple y se clasifican de acuerdo con la longitud de las cadenas de
carbonos, las cuales tienen 3c (triosas), 4c (tetrosas), 5c (pentosas), 6c (hexosas)
OLIGOSACARIDOS
Los oligosacridos consiste de dos azucares con un enlace glicosidico y se llaman
disacridos (maltosa).
POLISACARIDOS
Los polisacridos se clasifican en dos grandes grupos:
Polisacridos estructurales y polisacridos metablicos.
DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE

El pncreas es una glndula q produce al mismo tiempo enzimas digestivas y
hormonas, el tejido pancretico consiste en miles de lbulos, conteniendo cada
uno de los acinos, donde se fabrican las enzimas, que se vierten despus en el
duodeno. Entre los acinos estn los islotes de Langerhans que contienen dos
tipos de clulas. la clula alfa segregan la hormona glucagn en la sangre cuando
desciende la tasa de glucosa y las clulas beta segregan la hormona insulinas la
tasa de glucosa sube la concentracin normal de glucosa en sangre varia de 70 a
100 ml; luego de la ingesta de alimentos sobrevienen alzas que pueden alcanzar
valores de 120 a 140 mg/100ml; y despus de dos horas regresar a valores en
59

ayunas, estos ajuste q realiza el organismo para conservar constante la
concentracin de glucosa en los lquidos se debe a los mecanismos
homeostticos.
Se denomina hipoglucemia, el descenso por bajo de los 50/60 mg/100ml o 120
mg/100ml; se denomina hiperglucemia.
En ayunas, el nivel de glucosa en la sangre se mantiene por que el cuerpo usa las
reservas de glucgeno del hgado y pueden obtener tambin una pequea
cantidad del rin, estos dos rganos contienen la enzima especfica, glucosa 6
fosfato en glucosa. El musculo estriado aunque almacena glucosa en sangre, a
medida que aumentan los ncleos de glucosa, ordinariamente por absorcin de
carbohidratos del intestino, la glucogenolsis es remplazada por la glucognesis,
por lo cual el exceso de glucosa en la sangre se convierte en glucgeno del
hgado y musculo.
En la regulacin de concentracin de glucosa en sangre son importantes varias
hormonas entre estas tenemos:
LA INSULINA
Producidas por las clulas beta de los islotes de Langerhans en el pncreas,
promueven glucognesis y litognesis (formacin de grasas a partir de
carbohidratos) con la resultante disminucin de los ncleos de glucosa en sangre.
Otra accin importante de la insulina es aumentar la permeabilidad de las clulas
para la glucosa.
LA
HORMONA
DEL
CRECIMIENTO
LA
HORMONA
ADRENOCORTICOTROPICA (ACTH)
Son secretadas por la hipfisis anterior, ambos tienen accin antagnica a la
insulina y tienden a elevar los niveles de glucosa en sangre.
60
LA HIDROCORTISONA Y OTROS 11
Oxiesteroides secretadas por la corteza adrenal, estimulan la gluconeognesis y
es probable q el efecto acth sea el mediador, cuya accin sobre la corteza adrenal
estimule la produccin de 11- Oxiesteroides como estas tienden a aumentar el
nivel de la glucosa en sangre y son antagonistas de la insulina, por lo que reciben
el nombre de hormonas diabeto gnicas.
En pacientes con el sndrome de Cushing, hay sobreproduccin de esteroides
debido a un tumor o hiperplasia de la corteza adrenal y estos pacientes con
enfermedad de Addison, tienen insuficiencia primaria adrenocortical y muestran
hipoglicemia moderada.
LA ADRENALINA
Secretada x la medula suprarrenal, estimula glucogenolisis con el aumento
concomitante en niveles de glucosa en sangre.
Tensin fsica o emocional, causan el aumento en la produccin de adrenalina y
un aumento inmediato en la produccin de glucosa en sangre, para requerimientos
energticos.
Los
tumores
del
tejido
nodular
adrenal
conocidos
como
fotocromocitomas que secretan adrenalina, hiperglicemia en tanto hay reservas

disponibles de glucgeno en el hgado.
GLUCAGON
Secretada por las clulas alfa del pncreas, aumentan tambin los niveles de
glucosa en sangre por estimular la glucogenolsis heptica.
El glucagn no tiene efecto sobre el glucgeno muscular como muestra la falta de
elevacin de los niveles de lactato y piruvato en la sangre despus de su
administracin.
61
LA TIROXINA
Secretada por la glndula tiroides, parece estimular tambin la glucogenolsis. Las
personas tiro toxicas pueden mostrar sntomas de diabetes leve y casi ausencia
completa de glucgeno en el hgado, la tiroxina aumenta tambin la velocidad de
absorcin de glucosa despus de su administracin.
IMPORTANCIA
MDICA
DEL
METABOLISMO
DE
LOS
CARBOHIDRATOS
Existe un conjunto de enfermedades en los cuales se encuentra alterado el
metabolismo de los carbohidratos, la ms frecuente en la prctica mdica es la
deficiencia en la utilizacin de la glucosa, la ausencia de insulina en el organismo,
esta hormona favorece la entrada de glucosa a algunas clulas de algunos tejidos
cuando no se secreta o es inactiva, se produce alteraciones notables, no solo del
metabolismo de los carbohidratos sino tambin de lpidos y protenas, dando
origen al cuadro clnico de la diabetes mellitus.
Existen otras enfermedades en las cuales se halla alterado el metabolismo de los
carbohidratos, debido principalmente a deficiencias enzimticas a nivel de las
rutas del metabolismo que permiten el almacenamiento de la glucosa como
glucgeno conocido como gluconeognesis; hay otras producidas por diferentes
genticas de algunas enzimas, ocurre en la galactosemia definida que se
caracteriza por la deficiencia de glucosa, en estos pacientes se acumula galactosa
en el organismo y como consecuencia hay retardo en el crecimiento corporal y
alteraciones graves del sistema nervioso central.
Por ltimo hay una alteracin que se caracteriza por la deficiencia de enzimas que
intervienen en la digestin de los carbohidratos como es el caso de la deficiencia
congnita de lactosa q da origen a trastornos gastrointestinales severos en los
recin nacidos (lactantes).
62

DIABETES MELLITUS O DIABETES CLINICA:
La diabetes mellitus puede ocasionar modorra y coma, visin defectuosa, boca

seca, exceso de respiracin, fallo cardiaco, altos niveles de azcar en la sangre,
hgado adiposo, infecciones de vejiga y rin, prurito y retraso en la curacin de
heridas y prdida de peso.
Se designa con este nombre genrico a los trastornos del metabolismo de los
carbohidratos que pueden tener causas variadas, pero que se caracterizan por
producir disminucin en la capacidad del organismo de oxidar glucosa que va
acompaada de:
Hiperglucemia.- (aumento de glucosa en la sangre), es decir no existe suficiente
insulina que es la que oxida la glucosa, el nivel de azcar sanguneo en ayunas es
alto y tras las comidas presenta una Hiperglucemia prolongada.
Glucosuria.- (presencia de glucosa en la orina), la hiperglucemia se nota tan
acentuada que se presenta una glucosuria considerable, en casos graves, la orina
63

puede tener 5-10% de glucosa, y esta ingerida se excreta a veces en su totalidad,
el volumen de orina puede estar tambin aumentado.
Glucogenolsis Acelerada.- La ausencia de insulina facilita una elevada
Glucogenolsis heptica, la glucosa formada no puede entrar en las clulas
musculares, en consecuencia no se a acabo en oxidaciones ni se acumula en
forma de glucgenos.
Movilizacin de las grasas.- Debido a la incapacidad de metabolizar
carbohidratos, deben metabolizarse grasas para obtener energa; el transporte de
las grasas por la sangre hace se eleve el contenido en lpidos.
Cetsis.- La incapacidad de metabolizar carbohidratos origina una alteracin del
metabolismo de las grasas, que se pone manifiesto en un aumento de cuerpos
cetnicos en la sangre.
Cetonuria.- Esta acompaada a la cetosis. La orina adems de tener cuerpos
cetnicos pueden ser anormalmente acida y tener un elevado contenido de
amoniaco.
Como resultado de los trastornos existentes, en el metabolismo de los
carbohidratos, grasas y protenas, se produce sed, hambre y prdida de peso.
El concepto Diabetes actualmente, implica una insuficiencia de insulina relativa o
absoluta y que depende del equilibrio de la insulina, las hormonas antagnicas de
ella de origen hipofisario o suprarrenal, y la ingestin alimenticia. Se conocen dos
tipos clnicos principales; la variedad juvenil o diabetes Tipo I, inici en el perodo
de crecimiento, primeros aos de infancia hasta antes de los 20 aos); y la adulta
o diabetes Tipo II, inicio en la madurez; es una enfermedad frecuente que afecta
hasta un 5% de la poblacin, esta puede conducir alteraciones renales, ceguera,
incluso amputacin de las extremidades inferiores provocando el pie atltico, as
como otras anomalas.
64

As mismo existe una relacin entra la obesidad y la diabetes, ya que esta puede
presentarse ms a menudo en personas obesas, y se cree que el obeso ingiriendo
ms alimento una insuficiencia relativa de insulina con ms facilidad.
A la larga esta insuficiencia relativa se hace absoluta, pues el requerimiento
constante de insulina ocasiona el agotamiento de las clulas que las producen.
Se cree que la tendencia a la diabetes se hereda cuando un progenitor es
diabtico, y uno de cada cuatro hijos puede sentar la enfermedad, pero si los dos
padres lo son el 90% los hijos sern afectados.
UMBRAL RENAL PARA LA GLUCOSA

Normalmente no se elimina glucosa por la orina, esto se ya que gracias al sistema
de fosforilacin la glucosa pasa a travs del glomrulo renal al plasma, cuando se
excede la capacidad de fosforilacin aparece el llamado glucosuria (presencia de
glucosa en la orina), esto ocurre normalmente cuando la cifra de glucosa en la
sangre, llegan a 170 mg/10, que se considera el umbral.
En los diabticos el' umbral renal de la glucosa disminuye lo que se observa
glucosuria a concentraciones de glicemias ms bajas.
En personas no diabticas a veces hay glucosuria transitoria por estrs, ingesta
rica en carbohidratos, etc.
PRUEBA DE TOLERANCIA EN LA GLUCOSA.

En la actualidad esta prueba es usada con relativa frecuencia para valorar tantos
procesos sospechosos de hiperglucemia, corno en casos de descensos de
glucosa en la sangre.
Casos en los que se realiza dicha prueba:
1. Personas en que dos mediciones sucesivas presentan resultados dudosos de
glicemia basal (valores en 315 y 140 mg/100ml).
65

2. Pacientes con glucosurias sin hiperglucemias.
3. Personas con glicemia basal normalmente, pero que presenten sintomatologa
de diabetes.
4. Persona que sin presentar sintomatologa de diabetes tenga trastornos que se
asocien a la enfermedad como hipertensin arterial, arterioesclerosis, etc.
5. Obesos.
6. Hijos de Diabticos.
7. Mujeres embarazadas obesas.
8. Recin nacidos con ms de cinco Kilogramos de peso,
9. Embarazadas con antecedentes de partos prematuros o abortos.
Para la realizacin de la prueba el paciente necesita ciertas condiciones:
a.- Actividad fsica normal.
b.- No ingerir anticonceptivos orales, porque interfiere en los resultados.
c.- El paciente debe tener una dieta rica en carbohidratos, dos o tres das antes de
la prueba.
d.- Ayuno de dos a catorce horas antes de la prueba.
e.-El momento del testo la persona debe mantenerse en reposo fsico y mental.
f. - No fumar, no ingerir alcohol, ni caf.
66
PRACTICA N5
TEMA: DOSIFICACIN DE LA GLICEMIA EN SANGRE
Mtodo de trinder
Para la determinacin cuantitativa de la glucosa en suero o plasma.
OBJETIVOS:
FUNDAMENTOS DEL MTODO

La glucosa es oxidada enzimticamente por la glucosa oxidasa (God) a cido
glucnico y agua oxigenada, este ltimo en presencia de peroxidasa (pod)
produce la copulacin oxidativa del p-hidroxibenzoato (p-hb) con la 4aminoantipirina (4aa) dando lugar a la formacin de un cromgeno con
absorbancia mxima a 505nm:
Glucosa + o2 + h2o
cido glucnico +h2o2.
2h2o2
cromgeno + 4h2o
+ 4aa + p-hb
GLUCOSA + OXIGENO + AGUA GOD ACIDO CGLUCONICO =

H202
2H202 + 4 - AF + FENOL POD 4 - (P- BENZOQUINONA) - MONIAMINO FENAZONA + 4 H20
67

TCNICA
Tomar tres tubos de ensayo y proceder.
BLANCO
PATRN
DESCONOCIDO
Agua Destilada
20ul
--------
------
Patrn
-----
20ul
------
Suero
-----
--------
20ul
REACTIVO
2ml
2ml
2ml
Mezclamos y se coloca en Bao Mara por 10 minutos a 37 C, retiramos y leemos

en el espectrofotmetro a 546nm., llevando a 0 la absorbancia con el blanco,
luego leemos la absorbancia del estndar y despus el desconocido.
CLCULOS
(
Dnde:
au = absorbancia del desconocido
As = absorbancia del estndar
cs = concentracin del estndar
Ejemplo:
Si la absorbancia del estndar es de 0.360, su concentre es de l00mg/dl y la
absorbancia del desconocido es de 0,285, entonces:
(
68

PATRN DE GLUCOSA: 100 mg/ dl.
Suero o plasma 70 a 100 mg/dl.
Lquido cefalorraqudeo 40 a 74 mg/dl.
MATERIALES Y EQUIPOS
Tubos de ensayo.
Torniquete.
Jeringuilla de 5 ml.
Alcohol. o Algodn.
Agua destilada.
Gradilla.
Pipetas: de 20ul. 2ml.
Clinicon 4010.
Centrfuga, o Bao de Mara. o Reloj.
Micro pipetas o pipetas para medir volmenes.
REACTIVOS
Reactivo 4 AF 4 Amino Fenasona 25 MMO 1/1.
Reactivo Fenol 55 MMQ 1/1.
Solucin Standar 1 gramo/ 1 glucosa.
God/pods, glucosa, oxidasa 1000 u/ml.
69

RECOLECCIN DE MUESTRA
Obtener suero o, plasma con anticoagulante.
Extraemos la sangre venosa por el mtodo de vacutainer o jeringuilla, dejamos un
momento al medio ambiente y 1uego llevamos el tubo con la sangre a la
centrfuga por cinco minutos a
3.000 rpm sacamos la sangre y separarnos el
suero del paquete de glbulos rojos.

OBSERVACIONES:
Para
realizar
esta
prueba
se
tomar
en
cuenta
las
siguientes
contraindicaciones.
Paciente que no est en ayunas, paciente bajo condiciones de estrs
(despus de una ciruga, o infeccin o con corticosteroides).
Una glucosa en ayunas> de 140 mg/dL en dos ocasiones o una glicemia
post-prandial mayor de 200 mg/dL en dos ocasiones en individuos que no
estn bajo stress, indican una diabetes mellitus, por esta razn est
contraindicada la realizacin de la curva de tolerancia.
La excesiva hormona de crecimiento, las hormonas adrenocorticales y
tiroideas, y las catecolaminas pueden disminuir la tolerancia a la glucosa.
Tomaremos en cuenta tambin los valores normales de la glicemia en la
sangre.
Los valores normales son entre 70 y 105 mg por decilitro. En los nios
pequeos se aceptan valores de 40 a100 mg/dl.
Los valores ms bajos de 40-50 mg/dl se consideran bajos (hipoglucemia).
Los valores ms altos de 128 mg/dl se consideran altos (hiperglucemia)
70

GRAFICOS:
CONCLUCIONES:
El ascenso inicial de glucosa en la sangre se debe a la inundacin del organismo
por la glucosa absorbida en el intestino que excede la capacidad de los tejidos
para fijarla cmo glucgeno Una insuficiencia de la insulina, es lo que produce la
alteracin de la concentracin de la glucosa en sangre.
El nivel en sangre se mantiene a travs de la ingesta y de hormonas reguladoras
como la insulina, glucagn y epinefrina.
Un aumento anormal en la tasa de glucosa sangunea, conocida como
hiperglucemia, puede estar asociado con la diabetes mellitus y con la
hiperactividad de las glndulas adrenales, tiroides o pituitarias.
La hipoglucemia o disminucin anormal por debajo de la tasa hallada en ayunas,
se observa en casos de sobredosis de insulina, tumores secretores de insulina,
hipopituitarismo, enfermedad de Addison, mixedema y condiciones que interfieren
con su absorcin.
La determinacin de glucosa en sangre, es una prueba clave para evaluar y
diagnosticar desrdenes relacionados con el metabolismo de los carbohidratos.
71

PREGUNTAS Y RESPUESTAS
1. Es el test cualitativo un mtodo adecuado para el control de glucosa
urinaria en pacientes diabticos?
El mtodo cualitativo para controlar la glucosa urinaria es adecuado slo para
predecir que el paciente tiene ms de 1,70 grs de glucosa en sangre, para
aquellos pacientes que cursan con menor cantidad de glucosa en sangre debe
dosarse cuantitativamente porque cuando es mayor que 1,70 recin pasa la
glucosa a la orina.
2. Qu ventajas presenta el mtodo de la glucosa oxidasa con relacin al

de
o-toluidina en la cuantificacin de glucosa en un fluido biolgico?
El mtodo de medir la glucosa es ms ventajoso el de glucosa oxidasa porque es
un mtodo enzimtico, ms sensible y ms exacto, utilizas menos cantidad de
muestra y reactivo y a la temperatura estandarizada.
72
PRCTICA N6
TEMA: PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA EN SANGRE
OBJETIVOS
Para confirmara la presencia de Diabetes Mellitus o sicarina.
Establecer el diagnstico de hipoglucemia y sndrome de absorcin deficiente.
FUNDAMENTO:
El test oral de tolerancia a la glucosa o test de sobrecarga de glucosa es un
sistema mdico al cual se somete a un paciente que se sospecha de diabetes.
Primero se le realiza una glicemia en ayunas y si se detecta valores altos se
procede a una glicemia postprandial (despus de ingerir alimentos) la cual se
interpreta 100. 140 mg/dl de sujeto normal, 140 - 200mg/dl sospecha de Diabetes
(proceder a efectuar curva de tolerancia ms de 200 mg/ dl) su diabtico.
momento al medio ambiente y luego llevamos los tubos con la sangre a la
centrfuga por cinco minutos a 3.000 rpm. Sacamos la sangre y separamos el
suero del paquete de glbulos rojos.
De acuerdo a como hemos ido tomando
cada muestra.
INTERPRETACIN
En las personas normales con valores bsales de 70 - 110 mg/dl se produce una
elevacin que llega hasta 160 mg a los primeros minutos para descender debajo
de los 150 mg, a 60 minutos, a los 120 minutos se encuentra por debajo de 120mg
para finalmente a las 3 horas llegar a los valores normales iniciales (100 - 110
mg/dl.).
73

En pacientes con Diabetes Mellitus o sacarina el valor inicial se encuentra sobre
140 - 150 mg, a los 30 minutos los 3 estn entre 180 - 200 mg; y durante los 60 y
120 minutos los valores se mantienen alrededor de 180 mg/dl, para finalmente a
las 3 horas los valores lleguen a 160 mg/dl., se ha encontrado pacientes quienes
sin tener una tolerancia normal a la glucosa tampoco presentan una franca
Diabetes a lo que se le ubica como pacientes intolerantes a los carbohidratos.
En estos pacientes la glicemia basal se encuentre entre 130-140 mg/dl en las
determinaciones siguientes, asciende hasta valores inferiores de 180 mg/dl
pudiendo llegar a las 3 horas o valores entre 115 y 140 mg/dl.
En la mujer embarazada se empieza con valores bsales de 105mg a la hora llega
aproximadamente a 190 mg, a las dos horas 160mg, a las tres horas 145 mg, o
ms durante la prueba se ha obtenido dos valores repetidos por sobre 145 mg. a
de hablar de una Diabetes Sacarina gravdica.
En el nio normalmente los valores de la curva no rebasa 140 mg/dl cambio en el
nio diabtico puede pasar los 200 mg/dl
Tubos de ensayo.
Torniquete.
Alcohol
Algodn.
Agua destilada.
Gradilla
Clinicon 4010.
Centrfuga.
Bao de Mara.
Reloj.
74

REACTIVOS
Reactivo 4 AF 4 Amino Fenasona 2.5 MMO 1/1.
Reactivo Fenol 55 MMO 1/1.
Solucin Estndar 1 gramo/ 1 glucosa.
God/pods, glucosa, oxidasa 1000 u/ml.
Glucosa al 20 % diluida en H20.
PROCEDIMIENTO
Para realizar el test se administra 75 g. de glucosa al / diluida en agua si es
posible con un poco de zumo de limn con el fin de evitar el efecto emtico
que puede provocar glucosa pura, la ingesta debe hacerse en un lapso
aproximadamente de 5 minutos, si la prueba es de una mujer embarazad;
administra 1.75 g. por Kg. de peso.
Primero se dosifica la glucosa por el mtodo apropiadamente de administrar
la carga de glucosa, si se desea el mismo tipo se obtendr una muestra de
orina, es decir si e! laboratorio que hace el estudio lo incluye como parte de
la valoracin Despus de obtener estas muestras se administrar las dosis
de carga de glucosa, ingiriendo todo el contenido (solucin glucosa) en
trminos de cinco minutos, luego se realiza determinaciones cada 30
minutos hasta llegar a 3 horas, para los casos de hipoglucemia se realiza
mediciones hasta cuatro o cinco horas en cada determinacin.
OBSERVACIONES:
Valores normales: pico de glucosa a los 30 - 60 minutos de 160 a 180 mg/ml. Los
valores deben volver a la normalidad luego de 2 a 3 horas.
La glucosa en orina debe permanecer negativa durante el test.
Valores anormales pueden significar: diabetes; sndrome hipoglucmico.
75

GRAFICOS:
CONCLUCIONES:
El test de tolerancia a la glucosa es un examen que determina los niveles de
azcar en nuestro cuerpo, esta herramienta es empleada para diagnosticar la
diabetes y otras enfermedades que se pueden causar por el aumento de la
glucosa en la sangre.
Sin la realizacin de este examen, muchas personas no sabran sobre su estado
de salud, y por ende muchas de ellas podran estar propensas a contraer ciertas
enfermedades catastrficas si no son diagnosticadas y tratadas a su debido
tiempo.
76

Qu es la prediabetes y en qu se parece a la diabetes?
La prediabetes es un estado que ocurre cuando los niveles de glucosa en sangre
de una persona son ms altos de lo normal. Sin embargo estos niveles no son lo
suficientemente altos para diagnosticar diabetes.
Es lo mismo prediabetes que Intolerancia a la Glucosa en Ayuno Alterada?
S. Algunos mdicos llaman a este estado de elevacin de niveles de glucosa en
sangre como Intolerancia a la Glucosa o Glucosa en Ayuno Alterada. Esta
denominacin depende del tipo de anlisis que se utiliz para detectar esta
alteracin.
Cmo se realiza el diagnstico de diabetes o prediabetes por medio de la
prueba oral de tolerancia a la glucosa?
En la prueba de carga oral de glucosa, se miden los niveles de glucosa en sangre
despus de un ayuno y dos horas despus de ingerir una bebida alta en glucosa.
Un resultado normal sera menor a 140 mg/dl dos horas despus de haber tomado
esta bebida. Para el diagnstico de prediabetes, la glucosa dos horas despus
sera de entre 140 y 199 mg/dl. Si los niveles de glucosa en sangre se elevan a
200 mg/dl o ms, la persona se diagnostica con diabetes.
Es recomendable hacer estas pruebas en nios?
No se recomiendan las pruebas en nios ya que no existe evidencia suficiente de
que la diabetes tipo 2 pueda prevenirse o retrasarse en nios que tengan alto
riesgo para desarrollar la enfermedad.
77
PRACTICA N 7
TEMA: Determinacin de glucosa en sangre
1. OBJETIVOS:
Conocer la tcnica mediante la cual se determina la glucosa en sangre
Diferenciar pacientes con hipo e hiperglucemia
2. FUNDAMENTO
La glucosa es la principal fuente de energa de las clulas en el organismo. La
glucosa es un monosacrido con una concentracin postprandial de 90 mg/dl en la
sangre y sirve como una fuente de energa indispensable para la funcin celular.
El diagnstico de los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono se
apoya en parte en la medicin de la glucosa plasmtica, ya sea en ayuna o tras
estimulacin o pruebas de supresin.
Los resultados de la glucosa plasmtica pueden clasificarse como hiperglucmicos
(como la diabetes mellitus) o hipo glucmicos.
Principio de la reaccin:
La prueba utilizada se determina mediante el mtodo enzimtico colorimtrico,
basado en la reaccin de Trinder.
Glucosa + O2 + H2O
GOD (glucosa oxidasa) cido glucnico + H2O2
2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol
POD (peroxidasa)
quinoneimina (rojo) +
4H2O
La glucosa se determina despus de la oxidacin enzimtica en presencia de
glucosa oxidasa. El perxido de hidrgeno formado reacciona bajo la catlisis de
78

peroxidasa con fenol y 4-aminoantipirina formando un complejo rojo violeta
llamado quinoneimina.
Punto final de una reaccin: Las reacciones catalizadas por enzimas son nicas
en el sentido de que presentan aumentos muy grandes de la velocidad en
relacin a las reacciones no catalizadas y muestran una cintica de saturacin, es
decir la velocidad de la reaccin alcanza un valor mximo a una concentracin
determinada de sustrato, no dan por resultado aumento de la velocidad de la
reaccin. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc. En estas condiciones, la velocidad de
reaccin observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede
determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los
reactivos.
En el caso de la reaccin de la glucosa catalizada por la enzima glucosa oxidasa y
la peroxidasa llega a su punto final cuando todo el sustrato (glucosa) se ha
oxidado, y despus se mide el cambio de color.
Espectrofotmetro:
La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolucin se miden con un
aparato denominado espectrofotmetro, el cual consta bsicamente de los
siguientes componentes:
Fuente de luz: Lmpara que emite una mezcla de longitudes de onda.
Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtindola en un haz de
rayos paralelos.
Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una nica longitud de onda.
Detector fotoelctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el
desplazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo una corriente
elctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.
79

Registrador: Mide la seal del detector, la compara y genera una medida en una
escala determinada.
A)
Esquema
de
un
espectrofotmetro
de
un
solo
haz
B) Esquema de un espectrofotmetro de doble haz, en el cual se corrigen las
variaciones espectrales de los diferentes elementos pticos que lo
componen
El funcionamiento del espectrofotmetro es el que sigue: la luz de una fuente
continua pasa a travs de un monocromador, que selecciona una banda estrecha
de longitudes de onda del haz incidente.
Esta luz monocromtica atraviesa una muestra de espesor b, y se mide la
potencia radiante de la luz que sale. Es necesario calibrar el espectrofotmetro
con un blanco antes de medir las absorbancias de la disolucin problema. Esta
celda o cubeta de referencia sirve para compensar los efectos de reflexin,
dispersin o absorcin de luz de la celda con el disolvente.
Cuando emerge poca luz de la muestra (absorbancia alta), la intensidad es difcil
de medir. Cuando emerge mucha luz de la muestra (absorbancia baja), es difcil
detectar la diferencia de absorbancia entre las celdas de muestra y de referencia.
80

3. MATERIALES Y REACTIVOS:
Materiales
Reactivos
Espectrofotmetro
Reactivo para glucosa
Tubos de ensayo
Estndar de glucosa (100 mg/dl)
Gradilla
Muestras de suero sanguneo (

plasma)
Pipetas automtica
Puntas
de
plstico
para
pipetas
automtica..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
4. PROCEDIMIENTO:
Ensayo:
Longitud de onda: Hg 546 nm.
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20-25C
Medicin: frente a un blanco de reactivo. Se requiere un blanco de reactivo por
serie.
Esquema de pipeteo:
Microdeterminacin
Pipetear en las cubetas
Blanco de reactivo
STD muestra
Reactivo para glucosa
STD muestra
5 ul
500 ul
500 ul
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25C 5 minutos a 37C. Medir la

absorbancia del STD y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60
minutos.
81

5. OBSERVACIONES
El exceso de glucosa en la sangre provoca muchos desastres, por ejemplo, los
riones necesitan sacarla rpidamente y para ello utilizan el agua del cuerpo y la
desechan por la orina, lo cual explica porqu las personas con Diabetes tienen
muchas ganas de orinar.
Por otro lado, una gran cantidad de azcar tambin disminuye la capacidad de los
glbulos blancos de combatir infecciones haciendo que el cuerpo sea ms
vulnerable a las enfermedades. Con el tiempo, la glucemia elevada causa
problemas en ojos, nervios, vasos sanguneos, hgado, corazn, riones y una
buena parte de nuestros rganos.
6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES:
En conclusin, la glucosa es totalmente indispensable para el cuerpo, pero tenerla
en la sangre sin que entre a las clulas resulta mortal. De ah que el objetivo del
tratamiento sea reducir el azcar en sangre permitiendo que ste entre a las
clulas. Es decir, que tus medicamentos sirven para que tu cuerpo utilice de
manera adecuada la glucosa y, por tanto, no se quede circulando en tus venas.
82

Dado que la glucosa se obtiene mediante la alimentacin, es necesario comer
aquellos productos que no eleven demasiado el azcar en sangre, pero que le
provean a tu organismo de la energa necesaria para el da a da.
Sin la glucosa no podras vivir y esa es la importancia que este carbohidrato tiene
en el cuerpo.
8. PREGUNTAS Y RESPUESTAS:
Cules son los factores que interfieren en los resultados?
- Muchas formas de estrs (traumatismos, infartos, anestesia general,..) pueden
aumentar los niveles de glucosa en sangre de forma pasajera.
- La cafena tambin puede aumentarlos.
- Frmacos: algunos pueden aumentar los niveles de glucosa en sangre u orina,
otros pueden disminuir los niveles en sangre y otros pueden interferir en los
resultados obtenidos con las tiras reactivas para medir la glucosuria.
Cules son los resultados Normales?
- Glucemia normal:
- Recin nacidos: 30 - 60 mg/dl
- Lactantes: 40 - 90 mg/dl
- Nios menores de 2 aos: 60 - 100 mg/dl
- Nios mayores de 2 aos y adultos: 70-105 mg/dl
A qu se deben los valores anormales?
La hiperglucemia o elevacin de los niveles de glucosa en sangre, puede estar
causada por diversas enfermedades o situaciones anormales:
- Diabetes mellitus
- Situaciones de estrs agudo
- Enfermedad de Cushing
- Hiperparatiroidismo
- Pancreatitis
- Tratamiento con frmacos diurticos
- Tratamiento con corticoides
83
TEMA: LOS LIPIDOS

OBJETIVOS
Identificar, evaluar y esclarecer enfermedades ocasionadas por lpidos. Ej.:
Arterosclerosis, Sndrome heptico.
INTRODUCCIN
Los lpidos son biomolculas orgnicas formadas principalmente por, Carbono e
Hidrogeno y generalmente Oxigeno. Son sustancias heterogneas que tienen en
comn varias caractersticas como el ser insolubles en agua, son solubles en
disolventes orgnicos como el ter, benceno, etc.
Estn presentes en el tejido de los animales (reserva de energa) y las plantas.
Existen diferentes tipos de compuestos orgnicos en este caso lpidos como son:
cidos de alta masa molecular, (denominados cidos grasos) Ceras, Triglicridos,
Fosfolpidos, Glucolpidos, Terpenos, Terpenoides, Esteroles y Esteroides.
Una caracterstica bsica de los lpidos, y de la que derivan sus principales
propiedades biolgicas es la hidrofobicidad, con gran cantidad de enlaces C-H y
C-C. La naturaleza de estos enlaces es 100% covalente y su momento dipolar es
mnimo. El agua, al ser una molcula muy polar, con gran facilidad para formar
puentes de hidrgeno, no es capaz de interaccionar con estas molculas.
Las grasas o lpidos en el organismo humano sirven como depsitos de energa,
como proteccin de los rganos, aislamiento del fro, transporte de las vitaminas
liposolubles disueltas en las grasas y para aportar cidos grasos esenciales.
El cuerpo humano necesita de las grasas para poder realizar la sntesis de ciertas
hormonas como la testosterona.
METABOLISMO DE LOS LPIDOS

1. Lpidos simples.
2. Lpidos compuestos.
3. Lpidos derivados.
4. Sustancias asociada a los lpidos.
84

Los lpidos simples comprenden: Los cridos (ceras), Los glicridos (mono, di,
triglicridos estos ltimos llamados grasas neutras), los eicosanoides
(prostaglandinas y leucotrienos). Los lpidos compuestos se subdividen en
fosfolpidos (lecitina, cefaloma, esfingomielina) Glucolpidos (cerebrsidos y
ganglisidos), sulfolipidos y lipoprotenas.
QUIMICA FUNCIN, ORIGEN DE LOS LPIDOS

Los lpidos derivados comprenden los cidos grasos y el glicerol
Y entre las sustancias asociadas a los lpidos se encuentran el terpeno los
esteroides y las naftoquinonas. Qumicamente la parte lipdica bsica de los
triglicridos y fosfolpidos son los cidos grasos los cuales se obtienen por le
descomposicin de las grasa y aceites naturales. El colesterol no contiene cidos
grasos pero su ncleo esterol se sintetiza a partir de los productos de la
degradacin de dichos cidos, lo que le confiere muchas de las propiedades
fsicas y qumica de otras sustancias lipdicas.
El cuerpo aprovecha los triglicridos sobre todo para producir energa metablica,
el metabolismo energtico depende casi tanto de ello como de los carbohidratos.
As las grasas neutras; tienen propiedades estructurales y realizan funciones de
gran importancia para el sostenimiento del metabolismo.
Debido a que ellas son sustancias no polares o insolubles en agua no pueden
transportarse con facilidad en la sangre pues esta es un medio acuoso; para tal
efecto deben unirse a otros elementos que son las protenas y lpidos antipticos
(colesterol libre y fosfolpidos), los cuales le servirn de vehculo para poder
transportarse por el torrente circulatorio.
DIGESTIN Y ABSORCIN DE LOS LPIDOS

Diariamente con los alimentos una persona adulta ingiere entre 100 y 150g los
triglicridos y absorbida por el intestino delgado contiene muchas vitaminas
liposolubles disueltas.
En condiciones Fisiolgicas del intestino delgado los cidos grasos existen como
jabones y como complejos micelares para facilitar su transporte y absorcin por
parte del epitelio intestinal.
Dentro de las clulas de la mucosa los cidos grasos se combinan nuevamente y
forman triglicridos y glicerofsfatidos, probablemente ocurre lo mismo con mono y
diglicridos. Es importante observar que el glicerol utilizado en la nueva sntesis de
85

lpidos no es el recin absorbido del intestino, el glicerol se convierte en glucosa -y
otros productos. Las enzimas que catalizan la formacin de triglicridos solo
pueden transferir cidos grasos libres o cidos glicerol fosfricos, no a glicerol
libre, la nueva sntesis de grasas es un proceso que requiere energa, la misma
que est presente l la pared intestinal.
Todas estas sustancias van a unirse y junto con protenas van 2 formar un
complejo elemento lipoproteico llamado quilomicrn, que el enterocito expulsa por
exocitosis a los vasos linfticos; estos constan fundamentalmente de triglicridos y
de una pequea, porcin de protenas, colesterol esterificado, colesterol libre y
fosfolpidos. Su funcin es de transportar la grasa ingerida desde el intestino hacia
la linfa y posteriormente a !a sangre para que lo transporte al hgado.
Luego de la ingestin de las grasas la presencia de quilomicrones die la sangre
produce turbidez del suero (lipemia postpandrial) y este fenmeno es la razn por
la cual los exmenes de Sangre No se realizan luego de la ingestin de alimentos.
Una pequea cantidad de la grasa que llega al hgado es utilizada por este rgano
para obtener energa; sin embargo el hgado no puede soportar por largo tiempo la
carga de almacenar toda la grasa ingerida sin degradarla (hgado graso) para
evitar esta condicin patolgica gran parte de los lpidos van a constituir
lipoprotenas alfa y beta las cuales transportaran dichas grasas al tejido adiposo.
Aunque los quilomicrones desaparecen virtualmente una vez que la absorcin es
completa las lipoprotenas estn siempre presentes corno componentes de las
protenas del plasma y la grasa trasportada al tejido adiposo es almacenada como
triglicridos. En obesidad extrema ms del 50 % del peso del cuerpo puede
deberse a la existencia de grasa.
Las lipoprotenas no solo sirven para transportar lpidos preformados sino tambin
aquellos que se forman a partir de los carbohidratos o protenas que se han sido
ingeridos en exceso en la dieta.
LPIDOS DE LA SANGRE
Luego de la ingestin de los alimentos la grasa transportada por la va linftica
pasa al conducto torcico y de ah al torrente sanguneo, lo cual provoca la lipemia
por la presencia de los quilomicrones, varias horas despus de la absorcin. El
hgado y otros tejidos fijan el exceso de grasa circulante logrando as la estabilidad
de la cantidad de lpidos existentes en el plasma. Las formas lipdicas existentes
en la sangre son tres: Grasas neutras, Colesterol y Fosfolpidos. Las cantidades
absolutas de lpidos se encuentran en proporciones relativas con la constancia de
las anteriores. La importancia-de los triglicridos radica en que estn
86

estrechamente ligados con la infiltracin de los lpidos en las arterias humanas que
constituye parte del cuadro patolgico de la arteriosclerosis.
LPIDOS DE LOS TEJIDOS

Los lpidos de los tejidos se dividen en dos grupos que son:
1. Lpidos de depsitos.
2. Lpidos de los rganos y tejidos.
Los primeros estn formados sobre todo por grasas neutras en pequeas
proporciones de lquidos compuestos, Anatmicamente se reconocen tres sitios
principales de depsito que son: El tejido celular subcutneo, la cavidad abdominal
y el tejido conjuntivo intramuscular. La funcin de los lpidos del tejido subcutneo
es regular la temperatura corporal y servir como amortiguador fsico contra los
traumatismos externos; Los lpidos de los rganos y tejidos tienen una distribucin
variable de acuerdo al sitio de su localizacin y sirven como material de reserva
energtica.
COLESTEROL
Es una grasa de la familia de los esferoides, se la encuentra en proporcin
variable en todas las clulas nucleadas-de nuestro organismo y de las
lipoprotenas. Es un producto de origen exclusivamente animal.
La cantidad de colesterol en un adulto es de 140 gramos, de los cuales 120
gramos se encuentran interviniendo en la fluidez de la membrana celular. La
cantidad de colesterol sanguneo depende de la ingesta y el balance existente
entre su sntesis y excrecin heptica a travs de la bilis.
En cuanto a su sntesis podemos decir que es el hgado su ir productor, sin
embargo otros rganos tales como la piel, glndulas suprarrenales, el bazo, la
mucosa intestinal, el e incluso las paredes arteriales estn en capacidad de decirlo
tambin. Es este ltimo aspecto el que produce acumulacin de este lquido a ese
nivel produciendo el cuadro patolgico del tipo de la ateroesclerosis. El sistema de
sntesis el colesterol muestra un mecanismo regulador que depende de la cantidad
de colesterol absorbida por el intestino, do el colesterol diabtico es bajo, su
sntesis en el organismo aumenta y lo opuesto sucede en caso contrario; de esta
manera hay una tendencia a sostener el colesterol corporal en nivel relativamente
constante.
Entre las funciones del colesterol esta l-a de convertirse en uncas de gran
importancia en la fisiologa humana en las se destaca ciertas hormonas como las
87

sexuales masculinas y femeninas, corticoesteriodes, provitamina B3, cidos "es;
cumple funciones estructurales en el citoplasma y en membranas celulares entre
otras.
TRIGLICRIDOS
Los triglicridos son conocidos tambin como grasas neutras, pueden ser
sintetizados por las propias clulas o provenir de quilomicrones. Su oxidacin
puede realizarse en la mayora de los tejidos, a partir de este proceso se obtienen
cidos oso y glicerol. Los cidos grasos se oxidan en la mitocondria de la clula,
como por una serie de reacciones se transforman cido ctrico participando en el
ciclo de Krebs que es el destino final del catabolismo de sustancias tales como los
carbohidratos y las protenas, que sirve para obtener la energa existente en los
alimentos, en tanto el glicerol sale de la clula, pasa a la sangre donde es captado
en tejidos como el hgado y el corazn que los fosforilan y lo incorporan a la
glucosa en el organismo.
FOSFOLPIDOS
Los principales fosfolpidos corporales son: las lecitinas, las cefalinas, y las
esfingomielina. Estas se sintetizan a partir de sustancias tales como el glicerol, el
cido fosfrico y los cidos grasos. Entre las funciones de los fosfolpidos
tenemos-que constituyen elementos esenciales de las clulas, forman parte de
ellas, entran en combinacin con las protenas con las cuales forman las
membranas celulares, estn relacionada con la coagulacin sangunea puesto que
forman la tromboplastina y sor necesarias para la actividad de diversas enzimas
relacionadas especialmente con los fenmenos de xido-reduccin.
PERFIL LIPIDICO
Las determinaciones de los lpidos plasmticos o sricos en individuos sanos con
edad, sexo diferente, presentan los rangos referenciales que se exponen a
continuacin:
LIPIDOS TOTALES
FOSFOLPIDOS
400 - 1000 mg/dl

250 mg/dl
COLESTEROL
150 - 250 mg/dl
TRIGLICRIDOS
100 - 160 mg/dl
QUILOMICRONES
100 - 250 mg/dl
LP DE BAJA DENSIDAD (LDL)
200 - 400 mg/dl
88

LP DE ALTA DENSIDAD (HDL)
35 -
55 mg/dl (varones)
45 -
65 mg/dl (mujeres)
Por razones hormonales y genticas los niveles de colesterol HDL son diferentes
en los dos sexos.
El estudio de la distribucin de los lpidos a travs del plasma ha tomado gran
importancia ya que trastornos en este proceso son el origen de enfermedades
tales como la ateroesclerosis y enfermedades de las arterias coronarias, mismas
que estn dadas por cmulos de grasas fibroblastos y productos de la coagulacin
en la ntima de las arterias, producindose la obstruccin de la luz, deficiencia en
el riego y la consecuente isquemia lo que conduce en el caso de las arterias
coronaria un infarto del miocardio.
La determinacin del colesterol en forma aislada tiene utilidad, diagnostica
limitada, sin embargo su concentracin varia de manera ms o menos predecible
en gran nmero de condiciones clnicas el colesterol es uno de los factores
contribuyentes formacin ateromas, por ello las complicaciones arteriosclerticas
prevalecen en individuos colesterolemicos.
La elevacin de los niveles de triglicridos lleva consigo el aumento del riesgo del
infarto del miocardio, independientemente de los niveles de colesterol en la
sangre, La elevacin de valores est originada por la excesiva ingesta de
hidratos y asociada con la diabetes sacarina, lipoprotena est formada por
triglicridos, colesterol y lpidos en cantidades variables, e igualmente con un tipo
particular de porte hace que su densidad y carga elctrica sea diferente los que
permite clasificarlas en de acuerdo a la velocidad en la que flotan en la ultra
centrfuga, es por este conque lo podemos clasificar de la siguiente manera:
QUILOMICRONES
Son las lipoprotenas ms grandes y menos densas su principal componente son
los triglicridos (80-90%) se sintetizan en el tino y transportan los triglicridos
exgenos que llegan al organismo con los alimentos, del intestino pasan al plasma
y luego a los diferente tejidos donde se almacenan o se utilizan segn el
metabolismo individual.
89
LIPROTENA DE MUY BAJA DENSIDAD (VLDL)

Las lipoprotenas de muy baja densidad tambin conocidas como VLD Lson
complejos macromoleculares sintetizados por
el hgado que transportan
triglicridos, steres de colesterol y fosfolpidos principalmente hacia los tejidos

extrahepticos. Se caracterizan por tener una baja densidad, aunque mayor que la
de los quilomicrones (entre 0,94 y 1,0006) y un pequeo dimetro, entre 30 y 70
nm. Se compone principalmente de lpidos, en un 90%, y un 10% de protenas
especficas. Son las precursoras de las LDL
Su componente proteico est constituido mayoritariamente por una molcula de
apolipoprotena APOB100, APOE y APOC2, incorporada en el hgado durante su
biosntesis, y varias apolipoprotenas de menor peso molecular incorporadas
durante la circulacin.
LIPOPROTENAS DE BAJA DENSIDAD (LDL)

Denominada tambin
lipoprotena beta, est formada por un 50% a 60% de
colesterol con 25% de protenas.

La mayor parte de las placas de ateromas arteriales fueron inicialmente de este
tipo de lipoprotenas, sus propiedades fsicas-qumicas, permiten que la entrada a
los vasos sanguneos ms fcil que su salida, se desintegran en el vaso y dejan
residuos de esteres de colesterol difciles de metabolizar.
LIPOPROTENAS DE ALTA DENSIDAD (HDL)

Conocidas tambin como lipoprotenas alfa, son las ms pequeas de todas,
estn formadas por protenas y colesterol pero con muy poca cantidad de
triglicridos, las funciones biolgicas inherente a los distintos tipos de
lipoprotenas, las variaciones de su composicin y los resultados de diversos
estudios epidemiolgicos indican que los valores aislados de colesterol HDL,
considerados como factor protector, y el del LDL considerados como factor de
riesgo o pueden tomarse como ndice productivo de riego, y no que es necesario
conformar un perfil lipdico completo.
90
SISTEMAS ENZIMATICOS REGULADORES DEL METABOLISMO

DE LOS LPIDOS
Entre las principales enzimas que regulan el metabolismo de los lpidos tenemos
las siguientes:
1. La lipoprotein lipasa 2. (LPL2)
2. La Lecitin colesterol acil tranferasa (CLAT),
3. La lipasa hormono sensible (LHS)
La lipasa lipoproteica perifrica, es sintetizada en las clulas, translocada a la
superficie de la pared vascular y liberada por la heparina. Es activada por la Apo
C2 e inhibida por la Apo C3 y es sensible a la insulina. Es responsable de la
catabolizacin de quilomicrones y VLDL.
La lipasa lipoproteica heptica, est regulada por la sntesis de colesterol a nivel
heptico, es responsable del catabolismo de los remanentes de quilomicrones y
de VLDL y de las HDL2.
La lecitin colesterol acil transferasa (LCAT), esterifica el colesterol libre en las
HDL, transfieriendo cidos grasos desde los fosfolpidos al colesterol libre. Es
estimulada por la Apo A1 y ApoC1.La protena transportadora de colesterol ster
(CEPT) es responsable del transporte de colesterol ster desde las HDL a VLDL,
IDL y LDL y de triglicridos desde las VLDL a HDL y LDL.
91
PRACTICA N8
TEMA: DOSIFICACIN SRICA DEL COLESTEROL TOTAL EN SANGRE.
OBJETIVO:
FUNDAMENTO DEL MTODO:
El colesterol se determina despus de hidrlisis enzimtica y oxidacin. El
indicador es la quinoneimina formada por el perxido de hidrgeno y 4aminoantipirina, en presencia de fenol y peroxidasa.
VALORES REFERENCIALES
Sospechoso: Sobre 220 mg/dl
Elevado: sobre 260 mg/dl.
PRINCIPIO DE LA REACCIN
CHE
Esteres de colesterol + H20___Colesterol + cidos grasos
CHO
Colesterol + 02
Colestene - 3 - ona + H2
POD
H202 + 4 - aminoantipirina + fenol Quinoneimina + 4 H20
Extraernos la sangre venosa por el mtodo de vacutainer o jeringuilla, dejamos un
momento al medio- ambiente y luego vamos el tubo con la sangre a la centrfuga
por cinco minutos a 3.000 rpm sacamos la sangre y separamos el suero del
92

Tubos de ensayo.
Torniquete.
Alcohol.
Algodn.
Agua destilada.
Gradilla.
Clinicon 4010.
Centrfuga.
Bao de Mara.
Reloj
REACTIVOS
Reactivo Colesterol Liquicolor (Mtodo Chop Pap) Casa HUMAN.
Suero Patrn.
Estndar de Colesterol.
PROCEDIMIENTO
En tres tubos de ensayo, marcar blanco (B), estndar (ST)\y desconocido (D).
Blanco
Estndar
Desconocido
Blanco
-------
-------
-------
Standar
------
10 ul
-------
Suero
------
-------
10 ul
Reactivo
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Mezclar, incubar 10 minutos, de 20 a 25 C o por 5 minutos a 37C medir la

absorbencia de la muestra frente al blanco del reactivo antes de 60 minutos, leer
en espectrofotmetro 546nm.
93

OBSERVACIONES:
El perxido de hidrgeno, gracias a la accin de la enzima peroxidasa, reacciona
con la 4 aminofenazona y fenol brindados en el reactivo, formndose una quinona
de color rojo, cuya intensidad de coloracin se puede medir mediante fotometra.
La intensidad del color formado es directamente proporcional al nivel de colesterol
presente en sangre.
GRAFICOS:
CONCLUSIONES:
La determinacin de colesterol en sangre se utiliza para diagnstico y seguimiento
de dislipemias, sobre todo cuando se trata de hipercolesterolemias.
El nivel elevado de colesterol total en sangre, conjuntamente con niveles bajos de
la fraccin colesterol HDL, es un factor de riesgo muy importante para
enfermedades tales como aterosclerosis, hipertensin arterial, infarto de miocardio
y otras enfermedades cardiovasculares.
94
PRACTICA N9
TEMA: DETERMINACION SERICA DE TRIGLICERIDOSEN SANGRE.
OBJETIVO:
FUNDAMENTO DEL MTODO
El colesterol se encuentra en el suero o en plasma en forma libre o esterificada
con cidos grasos, para la determinacin del colesterol en sangre se utiliza un
aserie de reacciones enzimticas.
Los triglicridos se determinan despus de la hidrlisis enzimtica con lipasa. El
indicador es la quinoneimina formada por perxido de hidrgeno, 4 amino
antipirina y 4-clorofenol, bajo la influencia cataltica de la peroxidasa.
Sospechoso: Sobre 150 mg/dl.
Elevado: sobre 200 mg/dl
RECOLECCION DE MUESTRA
momento al medio ambiente y luego llevamos el tubo con la sangre a la centrfuga
por cinco minutos a 3.000 rpm sacamos la sangre y separamos el suero del
PRINCIPIO DE LA REACCIN
LIPASA
Triglicridos ____________ Glicerol + cidos grasos.
GK
Glicerol + ATP ____________ Glicerol 3 fosfato +ADP
95

GPO
Glicerol 3 fosfato + O2 ____________ Dihidroxiacetonafosfato + H2O
POD
H2O + 4 aminoantipirina _______Quinoneimina + HCl + H2O + 4 clorofenol
Tubos de ensayo
Torniquete
Jeringuilla de 5 ml
Alcohol.
Algodn.
Agua destilada.
Gradilla.
Clinicon 4010.
Centrfuga.
Bao de Mara.
Reloj
Micropipetas o pipetas para medir volmenes.
REACTIVOS
Reactivo triglicridos GPO Liquicolor (Mtodo GPO Pap) Casa Human.
Estndar de triglicridos.
Blanco
Estndar
Desconocido
Blanco
-------
-------
-----
Estndar
-------
10 ul
-----
Muestra
-------
-------
10 ul
Reactivo
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Mezclar, encubar por 10 minutos, de 20 a 25 C o por 5 minutos a 37 C medir, la

absorbencia de la muestra frente al blanco reactivo antes de 60 minutos.
96

PROCEDIMIENTO:
-Tomar muestra por sistema vacutainer
-Centrifugar 5 minutos a 2500 rpm
-Rotular los tubos
-Aadir soluciones:
1. Reactivo para colesterol 200 ul en cada tubo

2. Agua destilada tubo 1: 20 ul
3. Patrn de colesterol: 200 mg/dl tubo 2: 20 ul
4. Muestra tubo 3: 20 ul
-Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente
-Leer en espectrofotmetro a 500 nm de longitud de onda
-Leer en un perodo no mayor a 60 minutos
-Obtener absorbancia del patrn y muestra
-Realizar ecuacin.
OBSERVACIONES:
-En la primera reaccin, los esteres se hidrolizan dejando libre al grupo 3 OH.
-En la segunda reaccin este grupo se oxida y se obtiene como un producto el
perxido de hidrgeno, el cual, por efecto de la peroxidasa, transfiere uno de sus
oxgenos a un aceptor cromognico, la absorbancia de este cromognico se mide
a 500 nm de longitud de onda.
GRAFICOS:
97

CONCLUCIONES:
La prueba de triglicridos es un anlisis que se utiliza para determinar el nivel de
estos en la sangre, as como tambin para evaluar la funcin heptica y un posible
riesgo cardiovascular. Los triglicridos son transportados a todo el organismo para
dar energa o bien para ser almacenados como grasa.
98
PRACTICA N10
TEMA: DETERMINACIN DE COLESTEROL EN SANGRE
1. OBJETIVOS:
Conocer la tcnica mediante la cual se determina el colesterol en sangre
Diferenciar pacientes con hipo e hipercolesteremia
2. FUNDAMENTO:
Los principales lpidos del plasma humano son el colesterol, los steres del
colesterol, los triglicridos, los fosfolpidos y los cidos grasos no esterificados. El
colesterol es un importante componente estructural de las membranas celulares y
un precursor para la biosntesis de los cidos biliares y las hormonas esteroideas.
El riesgo cardiovascular es una funcin continua de la concentracin de colesterol
y que los individuos situados en el lmite superior del margen normal tienen un
riesgo mayor que los que estn situados en el lmite inferior. La prueba utilizada
para determinar colesterol es mediante el mtodo enzimtico colorimtrico del
siguiente modo:
Principio de la reaccin:
Esteres de colesterol + H2O
CHE(colesterol esterasa) colesterol + cidos grasos
Colesterol + O2
CHO (colesterol oxidasa) colesterol- 3-ona + H2O2
2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD (peroxidasa)

H2O
Quinoneimina (rojo) + 4
El colesterol se determina despus de hidrlisis enzimtica y oxidacin. El

indicador es la quinoneimina (complejo rojo) formada por el perxido de hidrgeno
y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa.
99
3. MATERIALES Y REACTIVOS:
Materiales
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Reactivos
Reactivo para colesterol
Estndar de colesterol (200 mg/dl)
Muestras de suero sanguneo (o
plasma)
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas
automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
4. DESARROLLO DE LA PRCTICA:
Extraer una muestra de sangre del paciente con el tubo. Centrifugarlo por 10
minutos.
En tres tubos o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S
(Standard) y D (Desconocido) colocar:
Mezclar y esperar 10 a 15 minutos en temperatura ambiente.

Medir la absorbancia de los tres tubos en 500 nm de longitud de onda.
Anotar y calcular los resultados.
Ensayo: Longitud de onda: Hg 546 nm
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20-25C
Medicin: frente a un blanco de reactivo. Se requiere un blanco de reactivo por
serie
100

Esquema de pipeteo:
Microdeterminacin
las Blanco de reactivo
STD muestra
Pipetear
en
cubetas
STD muestra
5 ul
Reactivo
para 500 ul
500 ul
colesterol
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25C 5 minutos a 37C.
Medir la absorbancia del STD y las muestras frente a un blanco de
reactivo antes de 60 minutos.
5. OBSERVACIONES:
El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbencias.
Clculo de la concentracin de colesterol
C (mg/dl)= 200 x A muestra
A Estndar
Valores de referencia: hasta 200 mg/dl
6. GRAFICOS
101
7. CONCLUSIONES:
Para obtener este resultados se realizaron dos prcticas, la primera donde se
obtuvo los Triglicridos y la de esta clase las del Colesterol Total y las HDL. El
HDL se encarg otro grupo y confiamos que los resultados hayan dado normal.
Como podemos ver para determinar la LDL es necesario conformar un perfil
lipdico con los valores de colesterol total, colesterol de HDL y triglicridos.
102
TEMA: LAS PROTEINAS

OBJETIVO:
Estudio de las protenas que exponemos en la prctica mide la albumina y
las globulinas del suero, que son las principales protenas de la sangre;
adems permite tambin el estudio de obtener una cuantificacin de las
protenas totales:
INTRODUCCIN
Las protenas son materiales que se desempean el mayor nmero de las
funciones de las clulas de todos los seres vivos. Forman parte de su estructura
bsica de los tejidos y desempean funciones metablicas y reguladoras tambin
son seres vivos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la
estructura del cdigo gentico ADN y de los sistemas de reconocimiento de
organismos extraos en el sistema inmunolgico.
Las protenas son biomolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. El
nombre protena proviene de la palabra griega ("proteios"), que significa "primario"
o del dios Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar.
Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son las
biomolculas ms verstiles y ms diversas. Son imprescindibles para el
crecimiento del organismo. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes,
entre las que destacan:
Estructural. Esta es la funcin ms importante de una protena (Ej:

colgeno),
Inmunolgica (anticuerpos),
Enzimtica (Ej: sacarasa y pepsina),
Contrctil (actina y miosina).
Homeosttica: colaboran en el mantenimiento del pH (ya que actan como
un tampn qumico),
Transduccin de seales (Ej: rodopsina)
Protectora o defensiva (Ej: trombina y fibringeno)
FUNCIONES, ORIGEN DE LAS PROTEINAS.

Son compuestos cuaternarios que estn formados por Carbono (50%) Hidrogeno
(8%) Oxigeno (15%) Nitrgeno (16%).
Son poli pptidos de alto peso molecular que constituyen aproximadamente las
partes de los slidos del cuerpo, estn constituidos por cadenas de aminocido en
nmero variable.
103

A las protenas se las puede clasificar de acuerdo a sus caractersticas fsicoqumico en:
1.- Protenas simples: estn formadas solo por aminocidos,
encontramos la albmina, globulina, escleroproteinas, etc.
entre ellas
2.- Protenas compuestas: son aquellas que aparte de los aminocidos poseen
otro componente diferente, las ms importantes son nucleoprotenas,
fosfoprotenas, lipoprotenas, porfiroproteinas, metaloproteinas, etc.
De acuerdo a su forma tambin puede clasificarse a las protenas en:
Globulares
Fibrosas.
De acuerdo a su funcin las protenas pueden clasificarse en:
Estructurales.
Catalticas
De contraccin
De defensa
Los aminocidos que conforman la protena se conocen cerca de 20, algunos de

los cuales sintetizados por nuestro organismo y otro no.
Las principales funciones de las protenas en el organismo son las siguientes:
La reproduccin de las clulas y el traspaso de los caracteres hereditarios, lo cual
est a cargo de la nucleoprotenas.
La actividad enzimtica de las clulas, est a cargo de las protenas que ejercen
accin cataltica y determinan as la velocidad y el sentido del metabolismo, las
mismas que se conocen con el nombre de enzimas.
El transporte de oxigeno de los mamferos se lleva a cabo por medio de la
hemoglobina que tiene la capacidad de fijar oxigeno molecular.
Ciertas hormonas, especialmente las hipofisarias son protenas otras como las
hormonas tiroides son sustancias derivadas de los aminocidos.
Las protenas contrctiles tienen las propiedades de acortarse y alargarse, se
encuentran en los msculos.
Los anticuerpos de gran importancia en los mecanismos de defensa contra las
infecciones son protenas plasmticas llamadas globulinas.
104
DIGESTIN ABSORCIN Y DESTINO DE LAS PROTEINAS.

La mayora de las protenas ingresan a nuestro organismo parcialmente digeridas
ya que debido a su naturaleza deben ser cocidas antes de su consumo.
Las protenas no experimentan digestin alguna en la boca pues ella carece de las
enzimas necesarias para este proceso.
La digestin proteica se inicia en el estmago por accin de la pepsina, proteasa
secretada en forma de pro-enzima inactiva o zimgeno la misma que se activa de
manera auto cataltica por perdida de un fragmento, la digestin a un nivel gstrico
representa aproximadamente el 10% de todo el proceso de digestin proteica
puesto que el resto del protenas, tanto exgenas como endgenas son
degradadas a pequeos pptidos y aminocidos libres.
Las protenas endgenas provienen de las secreciones de la cavidad oral, del
estmago, del intestino delgado, del pncreas y de las clulas descamadas
durante el recambio normal de la mucosa intestinal, ellas pueden constituir ms
del 50% del total de las protenas digeridas.
El pncreas secreta la proteasas intestinales en forma de zimgenos, entre ellas el
tripsingenos que al activarse forma la triptisia por perdida de un hexapptido,
esta reaccin est catalizada por la intercinasa, enzima que es liberada en la
mucosa intestinal por accin de los cidos biliares. La tripsina activa a las dems
proenzimas pancreticas formando as un grupo de proteasa activadas (tripsina,
quimiotripsina, carboxipeptisidasa). Las dos primeras son endopeptidasas y la
restante es exopeptidasa.
El resultado final de la accin de las enzimas junto con las aminopeptidasas es
una mezcla de aminocidos libres y pptidos cortos (di y tri pptidos) que son
fcilmente captados por el enterocito.
Las protenas digeridas completamente, en forma de aminocidos se absorben
directamente hacia la luz de los capilares de las vellosidades y pasan por va al
hgado, el cual desempea un papel importante en el control de las cantidades y
proporciones de los aminocidos en la sangre portal que se distribuyen al resto del
organismo. Aproximadamente la cuarta parte de los aminocidos que entran al
hgado salen de l bajo esta forma, en tanto que una cantidad menor es secretada
bajo la forma de protenas plasmticas.
Los ndices de degradacin dependen en gran medida de su concentracin en el
tejido, un mecanismo de accin ms prolongado para mantener estables las
105

concentraciones msticas de aminocidos consiste en la induccin o represin de
la actividad de las enzimas que degradan mediante la dieta o las hormonas.
DESTINO DE LOS AMINOCIDOS

Los aminocidos en el interior del organismo toman los siguientes caminos:
Utilizacin de los aminocidos para la utilizacin de sntesis tisulares, plasmticas,
hormonales. Etc.
Fragmentacin del aminocidos en dos partes: el grupo amino y el residuo
desanimado; este residuo desaminado puede ser oxidado completamente o entrar
a formar parte de molculas de Hidratos de Carbono o de Grasas. El grupo amino
se elimina por va renal de modo directo (NH3) o forma parte de un producto de
desecho (UREA) o participa en la sntesis de compuestos nitrogenados.
Transformacin de los aminocidos en sustancia de inters fisiolgico as pueden
convertirse unos aminocidos en otros o entrar a formar parte de compuestos
pigmentados, vitaminas, hormonas como las tiroideas o las de la mdula
suprarrenal.
Sntesis de nuevas protenas: cuando en el organismo aumenta la demanda de
protenas totales, como el crecimiento o durante la organizacin de nuevos tejidos,
durante un traumatismo o una enfermedad, o de una hemorragia; estas protenas
pueden formarse a partir de aminocidos del conjunto metablico.
IMPORTANCIA MDICA DEL METABOLISMO DE LAS PROTEINAS

Debido a que las protenas cumplen mltiples funciones en el organismo son
esenciales para la vida. El plasma contiene tres esenciales de protenas:
albumina, globulinas y fibringenos, estas protenas contribuyen con el
mantenimiento del volumen de la sangre, transportan sustancias relativamente
solubles, actan en la inactivacin de compuestos txicos en la defensa contra
agentes invasores y en la coagulacin sangunea.
La protena ms abundante del plasma es la albmina, una de sus funciones ms
importantes es permitir el transporte de cidos grasos, hormonas esteroides,
bilirrubina que libremente son insolubles en medio acuoso. La concentracin de
albmina Incremento de los niveles de protenas totales: en la deshidratacin,
vmitos, diarreas, acidosis diabtica, infecciones fulminantes y crnicas, leucemia
monoctica, inflamaciones crnicas como artritis reumatoide o cirrosis de Faennes
incipiente.
106

Disminucin de los niveles de protenas totales: desnutricin, enfermedades
gastrointestinales, discrasias sanguneas, hipertensin, enfermedad de Hodgkin,
diabetes sacarina no controlada, absorcin deficiente, disfuncin heptica, toxemia
gravdica, necrosis, choque quirrgico y traumtico, quemaduras graves,
hemorragias, hipertiroidismo, intoxicacin por benceno y tetracloruro de carbono,
insuficiencia congestiva cardiaca.
Incremento de los niveles de albmina: mieloma mltiple.
Disminucin de los niveles de albmina: desnutricin, nefritis, nefrosis, diarreas,
prdida de plasma por quemaduras, enfermedades hepticas, enfermedad de
Hodgkin, hipogammaglobulimenia, lcera pptica, colecistitis aguda, sarcoidosis,
enfermedad de colgena, lupus eritematoso sistmico, artritis reumatoide,
hipertensin metstasis de carcinoma, hipertiroidismo.
Incremento de los niveles de globulina: Sfilis crnica, tuberculosis, endocarditis
bacteriana subaguda, mieloma mltiple, enfermedades de colgeno, lupus
eritematoso sistmico, artritis reumatoide, diabetes sacarina, enfermedad de
Hodgkin.
Disminucin de los niveles de globulina: Los niveles varan en neoplasias,
enfermedades renales, disfuncin heptica y discrasias sanguneas.
107
PRACTICA N11
TEMA: DETERMINACIN DE PROTEINAS TOTALES
OBJETIVO:
FUNDAMENTO DEL METODO:

Los enlaces peptdicos de las protenas reaccionan con el in cprico en medio
alcalino para dar un complejo color violeta con mximo de absorcin a 540nm
cuya intensidad es proporcional a concentracin de protenas totales en la
muestra.
VALORES DE REFERENCIA
Protenas totales: 6.1 a 7.9 g/dl
RECOLECCINDE MUESTRA
por cinco minutos a 3000 rpm sacamos la sangre y separamos el suero del
108
Tubos de ensayo.
Torniquete.
Alcohol.
Algodn.
Agua destilada.
Gradilla.
Pipetas: de 20ul, 2 ml
Clinicon 4010.
Centrfuga.

Bao de Mara.
Reloj.
REACTIVOS
Reactivo EDTA/Cu: Complejo EDTA/Cu
Reactivo BCF
Suero patrn solucin de albminas y protenas en estado nativo.
PROCEDIMIENTO
Extraer una muestra de sangre del paciente con el tubo lila. Centrifugarlo por 10
minutos.
En tres tubos de ensayo, marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido)
colocar:
En tres tubos de ensayo marcados Blanco (B), Estndar (S), y desconocido (D),
colocar:
B
Agua destilada
50 ul
--------
-------
Suero patrn
-----
50 ul
-------
Muestra
-----
--------
50 ul
3.5 ml
3.5 ml
Reactivo EDTA/Cu 3.5 ml
Mezclar los tubos y llevar a bao de mara de 37 x 10m. y leer en filtro 546nm.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Empleando el suero patrn tal como se indica en el procedimiento los clculos se
realizan de la siguiente manera:
Protenas totales (g/dl)= D x f
OBSERVACIONES:
Cuando se hace referencia a las protenas totales en suero, se trata una
medicin aproximada de todas las protenas presentes en la parte lquida de la
109

sangre. La prueba que determina las protenas totales en sangre, examina
especficamente la cantidad total de dos tipos de protenas: globulinas y albmina.
Este examen a menudo se hace para diagnosticar problemas nutricionales,
enfermedad renal o enfermedad heptica.
GRAFICOS:
CONCLUCIONES:
En esta prctica se determin protenas totales en un suero, las protenas son esenciales para
la vida ya que pueden aparecer en forma de enzimas, hormonas, factores de coagulacin. Es
importante este estudio ya que se puede reflejar el estado nutricional del paciente.
110
PRACTICA N12
TEMA: DOSIFICACION DE LA ALBMINA
OBJETIVO:
FUNDAMENTO DEL METODO:

La albumina reacciona especficamente sin separacin previa con la forma
aninica de la bromo cresolsulfon ftalena (BCF), en presencia de un exceso de
colorante, en medio tamponado a Ph 3.8. El aumento de absorbancia a 625 nm
respecto del blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albmina
presente en la muestra.
Albmina: 3.5 a 4.8 g/dl
RECOLECCINDE MUESTRA
por cinco minutos a 3000 rpm sacamos la sangre y separamos el suero del
111
Tubos de ensayo.
Torniquete.
Alcohol.
Algodn.
Agua destilada.
Gradilla.
Pipetas: de 20ul, 2 ml
Clinicon 4010.
Centrfuga.
Bao de Mara.
Reloj.
REACTIVOS
Reactivo EDTA/Cu: Complejo EDTA/Cu
Reactivo BCF
Suero patrn solucin de albminas y protenas en estado nativo.
PROCEDIMIENTO
En tres tubos de ensayo marcados Blanco (B), Estndar (S), y desconocido (D),
colocar:
B
Suero patrn
-----
10 ul
-------
Muestra
-----
--------
10 ul
Reactivo BSF
3.5 ml
3.5 ml
3.5 ml
Mezclar con varilla. Mantener los tubos entre 15 y 28 C por 10 minutos. Leer en el
espectro fsforo a 625 nm o en fotocolormetro con filtro rojo (620-650nm) llevando
a 0 con el blanco de reactivo.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Empleando el suero patrn tal como se indica en el procedimiento los clculos se
realizan de la siguiente manera:
Albmina (g/dl)= D x f
OBSERVACIONES:
La solucin de ALBUMINA HUMANA contiene 130 a 160 miliequivalentes de ion
de sodio por litro y tiene un pH de 6,90,5. El producto no contiene conservantes.
112

GRAFICOS:
CONCLUSIONES:
La Albmina Humana al 20 %, es una solucin acuosa estril de albmina
obtenida por fraccionamiento del plasma sanguneo humano con etanol. Esta
solucin es osmticamente equivalente a aproximadamente 400 ml de plasma
normal y no contiene preservativos
Para la obtencin de la albmina humana se utiliza el mtodo de Cohn o
fraccionamiento alcohlico del plasma. Este mtodo permite la separacin
selectiva de la pasta o fraccin V, rica en albmina.
113
PRCTICA No.13
TEMA: MTODO PARA ELECTROFORESIS DE PROTENAS EN SUERO
1. OBJETIVO:
Aplicar la tcnica de electroforesis para separar las diversas fracciones
proteicas del suero humano
2. FUNDAMENTO:
La electroforesis es una tcnica basada en los movimientos de molculas
cargadas en un campo elctrico, cada molcula se mueve hacia el electrodo de
carga opuesta (ctodo y nodo), este movimiento denominado electroforesis da
nombre a la tcnica. En el transporte electrofortico, a la fuerza del campo
elctrico se opone la resistencia viscosa del medio, producindose, cuando se
igualan una velocidad constante de desplazamiento de las partculas.
En resumen, puede decirse que cuando una molcula cargada se coloca en un
campo elctrico se mover hacia uno u otro electrodo dependiendo de: 1) su carga
elctrica, 2) su tamao, 3) la intensidad del campo elctrico y 4) la temperatura del
medio. La electroforesis se aplica en el campo de la Bioqumica a la separacin de
compuestos que poseen grupos ionizables (aminocidos, pptidos, protenas,
cidos nucleicos) teniendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias
depende del pH del medio en que se encuentren. Si la molcula tiene carga
positiva migrar hacia el ctodo, si tiene carga negativa hacia el nodo. La fuerza
inica de la solucin tampn tiene una importancia fundamental en la
electroforesis, puesto que cuando es baja, permite velocidades de migracin de
los solutos ms rpidas y con menor desprendimiento de calor.Las protenas estn
compuestas de aminocidos que poseen grupos ionizables (principalmente -COOy NH+ 3), pueden encontrarse cargadas positiva o negativamente, o bien de
permanecer elctricamente neutras segn la proporcin de los diversos grupos
ionizados a un determinado pH.En su punto isoelctrico (pI o pHI), la protena tiene
carga neta cero. Por debajo de pI las protenas estarn cargadas positivamente y
por encima del pI negativamente.El porcentaje normal de estas protenas en el
suero humano es:
-Albmina54-62%
--globulinas9-15%
--globulinas14-19%
--globulinas14-19%
114

En el siguiente cuadro se observa la concentracin normal en mg/dl , peso
molecular (PM) y funciones de las protenas (el cuadro no presenta una
clasificacin completa de las protenas, se observan unos cuantos ejemplos que
se encuentran en mayor concentracin)
PROTENAS
PM
CONCENTRACIN
FUNCIN
1)Albmina
69000
3500 a 4500 mg/dl
Presin onctica
transporte
40000
55 a 140 mg/dl
Protena
aguda
54000
200 400 mg/dl
Proteasa inhibidora
Alfa2 macroglobulina
725000
140 420 mg/dl
Proteasa inhibidora
Haptoglobina
90000
380 a 780 mg/dl
Liga HB circulante
Transferrina
76000
200 a 300 mg/dl
Transporte del Fe
Hemopexina
5700
50 a 100 mg/dl
Liga el hem
IgG
150000
700 a 1500 mg/dl
Anticuerpos
IgA
150000 a 300000
Anticuerpos
IgM
750000 a 900000
Anticuerpos
Crioglobulinas
220
Desconocido
2)Globulinas alfa1
Alfa1
cida
glucoprotena
Alfa 1 antitripsina
de
fase
3)Globulinas alfa2
3.Globulinas beta
4.Gama globulinas
3. MATERIALES
1 Gradilla
5 Tubos de ensayo con tapn
2 Cubetas electroforticas con cables y puentes
2 Pipetas Pasteur
115

1 Tijeras
1 Aplicador de muestras semi-micro
2 Pinzas
2 Cubetas para decolorar
1 Probeta de 100 mL
1 Embudo
1 Pera de goma
2 Vasos de precipitados de 100 mL
2 Vasos de precipitados de 250 mL
2 Pipetas de 5 mL
2 Pipetas de 10 mL
1 Soporte para pipetas
Papel Parafilm
Alimentador de corriente
Agitador orbital
Actico glacial 1 L
Metanol 1 L
4. PROCEDIMIENTO
Sumergir las tiras de acetato de celulosa durante al menos 10 minutos en la
solucin tampn.
Absorber el exceso de tampn de las tiras colocndolas entre 2 hojas de papel
de filtro.
Colocar las tiras en el puente con la cara mate hacia arriba (la esquina cortada
debe quedar abajo a la derecha).
Realizar la siembra de la muestra a 1 cm del extremo catdico.
Conectar la fuente de alimentacin a 200 v. durante 60 minutos (una vez
pasado el tiempo desconectar el alimentador).
Revelado:
o teir las tiras con solucin colorante durante 5 minutos.
o Decoloracin: lavar las tiras 3 4 veces con la solucin decolorante
agitando levemente hasta obtener un fondo blanco.
116

Cuantificacin: Colocar las tiras extendidas sobre portaobjetos y dejar 24h
hasta que se transparenten completamente.
Para acelerar el proceso de transparentado es conveniente colocarlas bajo la
luz del flexo durante unos minutos.
Una vez transparentadas leer el proteinograma obtenido en el
fotodesnsitometro, introducindole el valor de protenas totales obtenido por
refractometria para realizar la cuantificacin de cada fraccin proteica.
5. OBSERVACIONES
La aplicacin de este fenmeno a la separacin de los componentes de una
mezcla compleja hace necesaria la existencia de diferentes velocidades de
migracin, que a su vez dependen del campo elctrico aplicado. De aqu que se
defina el concepto de movilidad electrofortica (m) como la velocidad de migracin
para un campo elctrico de gradiente potencial unidad:
m = V/E
6. GRAFICOS
117

7. CONCLUSIONES
Si una disolucin de protenas se somete a la accin de un campo elctrico se
producir una migracin cuyo sentido y velocidad depender de la carga neta,
magnitud y forma de las molculas. En la zona de pH menor que el p.i. las
protenas se comportan como cationes y si el pH del medio es superior al p.i.
se comportan como aniones.
A partir de pH 8.4 las protenas sricas migran hacia el nodo, la albmina con
un p.i. de 4.7 estar cargada ms negativamente que la -globulina que tiene
un p.i. de 7.2, la albmina recorrer mayor distancia que la -globulina cuando
se siten en un campo elctrico.
118
TEMA: PRUEBAS DE FUNCION RENAL

OBJETIVOS:
Detectar las disfunciones del rin y otras alteraciones para un diagnstico.
CONCEPTO RION
Los dos riones estn localizados en la pared posterior del abdomen por fuera de
la cavidad peritoneal.
Es un hombre adulto, cada rin pesa 150g. Y
tiene el tamao aproximado de un puo
cerrado, por trmino medio mide 12 cm de
largo por 7 cm de ancho y 3-4 cm de grueso,
el izquierdo es ms voluminoso que el
derecho, es de consistencia firme de
coloracin rojo pardo tirando algo amarillo. En
la cara interna encontramos el hilo a travs del
cual pasa la vena y arteria renal, los linfticos,
nervios y el urter que lleva la orina final del
rin a la vejiga. En la parte interna del rin
encontramos, la mdula renal, la pirmide
renal, papilas, clices mayor, menor, las
paredes de los clices, la pelvis y el urter tienen elementos contrctiles que
propulsan la orina hacia la vejiga donde esta se deposita hasta que se vaca con la
miccin.
FUNCIONES DEL RION

1. Eliminar el exceso de agua en el organismo.
2. Eliminar los productos de desechos del metabolismo como la urea y la
creatinina.
3. Retener las sustancias necesarias para la fisiologa normal como las
protenas.
4. Regular el equilibrio electroltico, la presin osmtica de los lquidos del
organismo.
5. Regulacin de la presin arterial.
6. Secrecin de hormonas.
7. Gluconeognesis.
119
PRODUCTOS DE ESCRECIN DEL RION
LA UREA
Es el principal producto de excrecin del catabolismo protenico, se forma en el
rin a partir del bixido de carbono y amoniaco. Una vez elaborada la Urea pasa
a la sangre y es excretada por el glomrulo siendo reabsorbido en parte por los
tbulos renales, la reabsorcin depende de la velocidad del flujo urinario, siendo
mayor cuando el flujo es lento y menor cuando aumenta la diuresis, este proceso
se ver reflejada en un incremento de urea srica cuando la excrecin de urea
disminuya y viceversa.
Diariamente el organismo produce entre 25-30 g. de urea, esta cantidad aumenta
o disminuye en las personas con dietas hiperproteicas y menos en las personas
con dietas hipo proteicas.
La urea se acumulara en nuestro organismo si no fuera porque esta se elimina
por la orina.
Los factores principales que determina la eliminacin de la urea son:
La concentracin plasmtica de urea.

El ndice de filtracin glomerular.
Estos factores son los que aumentan la excrecin de urea la cual es eliminada por
la orina del 40 al 60% del total de la carga filtrada. Solo en caso de alteraciones de
la funcin renal esta fraccin vara significativamente.
Renal insuficiente, dichas causas se dividen en:
PRERENAL
Estados en los cuales se altera la circulacin por el rin: choque quirrgico,
enfermedad de Addison, Insuficiencia cardiaca derecha, hemorragia en el especial
del tubo digestivo con digestin y catabolismo de sangre.
RENAL.
Enfermedad de brigth
120
POST-RENAL
Obstruccin de las vas urinarias, como en la hipertrofia prosttica, etc.
Cuando los niveles de creatinina por cualquier razn aumentan en el plasma, el
rin puede eliminar tambin creatinina a travs de los tbulos. Por consiguiente
los niveles de creatinina en la sangre en enfermedad renal no aumentan en
general hasta que no estn menoscabada la funcin renal.
La creatinina aumenta en todos los procesos en los que hay incremento de la
catablica proteica e intensa actividad muscular, embarazo, miopatas, mos
temas, distrofia muscular, encefalitis, administracin de frmacos como
adrenalina, tiroxina, etc.
Estn disminuidas en hipoproteinemias nutricionales y en la insuficiencia renal.
Las pruebas de funcin renal pueden dividirse en dos grupos

principales:
1. Con las pruebas del primer grupo pueden demostrarse la existencia de
enfermedades pero no es posible apreciar hasta qu punto ha sufrido la funcin a
consecuencia del proceso patolgicos entre ellos se encuentran las proteinuria, la
presencia de cilindros en la orina, la hematuria y el hallazgo de leucocitos a travs
del sedimento.
2. En el segundo grupo se encuentran las pruebas con los cuales se trata de
establecer el grado de deterioro producido por la enfermedad, puesto que los
riones normales.
CREATININA.
Sustancia nitrogenada que se encuentra casi exclusivamente en el musculo en un
989%, desempea un papel esencial en la concentracin muscular y se excreta
bajo forma de su anhdrido la creatinina, esta no se modifica en el suero, con la

dieta, edad, sexo, ejercicio, etc. Su aumento va parejo con la urea, aunque
demora general ms en subir.
La creatinina es eliminada del plasma, por filtracin glomerular y luego es
eliminado en la orina sin ser reabsorbida por los tbulos en grado significativo,
cuando los niveles de creatinina por cualquier razn aumentan en el plasma, el
121

rin puede eliminar tambin creatinina a travs de los tbulos. Por consiguiente
los niveles de creatinina en la sangre en enfermedad renal no aumentan en
general hasta que no estn menoscabada la funcin renal.
La creatinina esta aumenta en todos los procesos en los que hay incremento de la
catablica proteica e intensa actividad muscular, embarazo, miopatas, miastenias,
distrofia muscular, encefalitis, administracin de frmacos como adrenalina,
tiroxina, etc.
ACIDO URICO
Es el producto final del catabolismo de las purinas y de los cidos nucleicos, su
principal fuente son las nucleoprotenas de la dieta, en especial la carne, las cifras
se encuentran ms bajas en la mujer. Solo una sexta parte del contenido total del
cido rico est presente en la sangre, mientras el resto est presente en los
tejidos.
Normalmente alrededor de la mitad del cido rico es eliminado y reemplazado
cada da en parte por va de la eliminacin urinaria y en parte por la destruccin en
el tracto intestinal por microorganismo.
Niveles anormales de cido rico en el suero son ndice de desrdenes en el
metabolismo de las sustancias que lo originan o de defectos de eliminacin. El
aumento del nivel del cido rico en la sangre puede obedecer a otras causas
adems de trastornos renales u obstruccin urinaria.
Se encuentran cifras altas por los siguientes mecanismos:
1. EXCESO DE PRODUCCION:
Trastornos que se producen por destruccin nuclear anormalmente rpido como
en la leucemia y algunos casos de anemia hemoltica y policitemia.
2. POR DEFECTOS DE ELIMINACION:

El cido rico se encuentra en el filtrado glomerular se reabsorbe por los tbulos y
se elimina por la orina un 10% cuando se perturba dicho mecanismo, como en la
insuficiencia renal de cualquier tipo, o en la insuficiencia cardiaca congestiva, hay
hiperuremia.
3. POR TRASTORNOS DE METABOLISMO PURINICO:
122

Como ocurre en la gota, en estos pacientes se observa cristalizaciones de cido
rico y sus sales en las membranas sinoviales de articulaciones y en tendones, es
decir desarrollan artritis gotosa (manifestaciones reumatolgicas).
Las principales sustancias que se clasifican son: urea, creatinina, cido rico.
VALORES REFERENCIALES EN NUESTRO ORGANISMODE:
UREA
20 - 45 mg/dl.
CREATININA (SUERO)
0.8 - 1.4 mg/dl.
ACIDO URICO: HOMBRE
3.4 - 7.0 mg%
MUJER
2.4 - 5.7 mg%
123
PRACTICA N14
TEMA: DOSIFICACION DE UREA EN SANGRE.
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO DEL METODO

La ureasa descompone especficamente a la urea produciendo dixido de carbono
y amoniaco, este reacciona con fenol e hipoclorito en medio alcalino produciendo
azul de indofenol que determina colorimtricamente.
Se ha determinado entre 30 a 45 mg/dl
IMPORTANCIA MDICA
La urea constituye la fraccin de nitrgeno no proteico ms importante en la
mayora de los lquidos biolgicos en el hombre es el principal final del
metabolismo proteico.
Una elevacin de la concentracin srica de urea se interpreta generalmente
como una posible disfuncin renal tomando en cuenta que tambin se deben
realizar las pruebas de creatinina y cido rico junto con el de urea.
Una elevacin de la concentracin srica de urea se interpreta generalmente
como la reabsorcin de la urea en los tbulos renales es dependiente de la
velocidad de flujo urinario siendo mayor cuando el flujo es lento y menos cuando
aumenta de diuresis, este proceso se ver reflejado en un aumento de urea srica
cuando la excrecin de urea aumenta y viceversa, sin embargo no se debe dejar
de lado el hecho de que los valores sricos de urea se encuentran ntimamente
relacionados con la dieta y el metabolismo no proteico, por lo que cualquier
alteracin en estos variables se traducir en un cambio de la concentracin de
urea en suero.
124

por cinco minutos a 3.000 rpm. Sacamos la sangre y separamos el suero del
MATERIALES

Volumtricas y serolgicas.
Vacutainer o jeringa
Tubos.
Espectrofotmetro
Bao mara.
Reloj.
Alcohol.
Algodn.
Torniquete.
Centrifuga.
H2o destilada.
Reactivos
Standar.
Ureasa.
Reactivo 1.
Reactivo 2.
PROCEDIMIENTO
MARCAMOS 3 TUBOS DE LA SIGUIENTE MANERA:
REACTIVOS
PROBLEMA O DE.STANDARD
BLANCO
_______
STANDAR
20ul
SUERO O PLASMA
_____
_____
UREASA
1 GOTA
1 GOTA
125
MEZCLAR POR AGITACION SUAVE, INCUBAR 5 MINUTOS EN EL BAO

MARIA 37C.
REACTIVO 1
1 ml
1ml
REACTIVO 2
1ml
1ml
REACTIVO 1
1 ml
1 ml
REACTIVO 2
1 ml
1 ml
MEZCLAR POR AGITACION SUAVE E INCUBAR 5 MINUTOS A 37C.
H2O DESTILADA
10 ml
10 ml
Mezclar por inversin, despus de 10 minutos leer en espectrofotmetro

540mm llevando a 0 con el blanco.
OBSERVACIONES:
Existen patologas relacionadas sobre la urea en sangre, siendo la principal:
HIPERATOZEMIA
Es el exceso de urea o de otros productos nitrogenados en la sangre. Slo se
producen elevaciones consistentes de la concentracin del nitrgeno de urea
cuando la funcin renal, especficamente el IFG, est disminuido de 40-60 por
ciento. El ndice de filtracin glomerular puede alterarse no slo por disfuncin
renal sino por tambin por desviacin prerrenal de agua (prdida de volumen
circulante por una causa cualquiera), la cual conduce a un aumento de retencin
de la urea.
Entre los materiales usados en las prcticas para la obtencin de urea en sangre
los reactivos utilizados, como son el reactivo 2, resulta ser corrosivo, puede
provocar quemaduras graves, que en caso de contacto con los ojos, lavarse
inmediatamente y abundantemente con aguay acudir al mdico.
126

GRAFICOS:
Espectrofotmetro
CONCLUCIONES:
En esta prctica se logr hacer la determinacin de urea, la cual es el
resultado final del metabolismo de las protenas; en suero, debido a que si
se utiliza la sangre entera, es decir plasma ms suero, en estos hay una
gran diferencia de valores que existe entre el suero y los eritrocitos, por lo
que se prefiere el suero o en su defecto el plasma para esta determinacin.
Tambin con la prctica se logr observar como para cada anlisis se
deben realizar los procedimientos adecuadamente y de la forma
determinada para cada anlisis para que no tengamos discrepancias en
nuestros resultados.
1. A qu se llama azoemia?
La azotemia (o azoemia) es una condicin clnica caracterizada por los niveles
anormalmente altos de compuestos nitrogenados en la sangre, tales como la urea,
creatinina, desperdicios del metabolismo celular, y varios otros compuestos ricos
en nitrgeno. Est principalmente relacionada con problemas renales, lo cual
impide la correcta filtracin y depuracin de la sangre.
127

2. En qu rgano se sintetiza la urea y por donde es eliminado?
La urea se forma en el hgado como producto final del metabolismo de las
protenas. Y se excreta en la orina por medio de los riones.
3. Para qu se realiza este estudio?
En general, es un parmetro que indica la funcin renal, aunque puede estar
alterado en enfermedades del hgado o en la deshidratacin.
4. Cules son los valores normales de urea en sangre?
Los valores normales en los adultos son entre 7 y 20 mg por decilitro, en los nios
de aceptan valores de 5 y 18 mg/dl.
5. Cules son las enzimas que catalizan las reacciones de la formacin
de la urea?
1. Carbamoil fostafo sintasa I
2. Orinitin transcabamoilasa
3. Arginasa
4. Argininosuccinasa
5. cido argininosuccnico sintasa
128
PRACTICA N15
TEMA: DOSIFICACION DEL ACIDO URICO EN SUERO.
METODO
Mtodo colorimtrico para la determinacin cuantitativa del cido rico en la
sangre y otros lquidos biolgicos.
OBJETIVO:
FUNDAMENTO
El cido rico es oxidado enzimticamente por las uricasa (vodurato: oxigeno
reductasa) a alantonina con produccin de carbono y h2o el h2) generada en la
oxidacin produce coplacin oxidativa de fenol con la 4 aminaferrasona catalizada
por la peroxidasa (pod donador: perxido de hidrogeno oxidoreductasa) con
formacin de una quivonimina roja, se mide colorimtricamente con filtro 546nm.
HOMBRES 3.4 - 7.0 mg%
MUJERES
2.4 - 5.7 mg%
por cinco minutos a 3.000 rpm. Sacamos la sangre y separamos el suero del
129
Micropipetas o pipetas.
Tubos.
Espectrofotmetro
Bao mara.
Reloj.
Alcohol.
Algodn.
Torniquete.
Centrifuga.
H2o destilada.
Reactivos
Reactivo de trabajo.
Standar.
PROCEDIMIENTO
Marcar 3 tubos y colocar:

B
BLANCO
--------
--------
______
ESTANDAR
--------
20 ul
______
DESCONOCIDO
---------
----------
20 ul
REACTIVO
2 ml
1 ml
1 ml
130
Mezclar y llevar a bao mara a 37c por 15 minutos. Leer el

espectrofotmetro el filtro 546 nm.
Concentracin / estndar 10.
OBSERVACIONES:
Niveles anormales de cido rico en suero son ndice de desorden en el
metabolismo de la sustancia que lo origina o defectos de eliminacin.
HIPERURICEMIA
Es un exceso de cido rico en la sangre. Para mantener valores normales de la

sangre, la mayora es excretado (eliminado) en la orina o pasa a los intestinos ; es
tpica, aunque no exclusiva, en la enfermedad de la gota (es una enfermedad
producida por una acumulacin de cristales de sales de urato o cido rico; en
distintas partes del cuerpo, sobre todo en las articulaciones, tejidos blandos y
riones). Las causas de niveles altos de cido rico pueden ser primarias (altos
niveles de purinas) y secundarias (alguna otra enfermedad). Algunas veces, el
cuerpo produce ms cido rico del que puede excretar.
Existen otros desordenes que transcurren acompaados de hiperuricemia, tales

como leucemia, policitemia, mieloma mltiple, intoxicacin plmbica, incluyendo
alteraciones medicamentosas en los tratamientos con citostticos o con tiazidas.
Mientras que otros medicamentos como las drogas uricosricas tales como
salicilatos y la fenilbutazona, aumentan la excrecin del cido rico, disminuyendo
los niveles sricos del mismo.
GRAFICOS:
CENTRIFUGA
131
BAO MARIA
CONCLUCIONES:
En esta prctica se realiz la determinacin de cido rico, importante para el diagnstico de enfermedades
como hiperuricemia (elevacin de cido rico en sangre) y gota, que es imprescindible para mantener los
niveles normales de cido rico.
1. Qu es el cido rico?
El cido rico es oxidado enzimticamente por las uricasa (vodurato: oxigeno
reductasa) a alantonina con produccin de carbono y h2o el h2) generada en la
oxidacin produce coplacin oxidativa de fenol con la 4 aminaferrasona catalizada
por la peroxidasa (pod donador: perxido de hidrogeno oxidoreductasa) con
formacin de una quivonimina roja, se mide colorimtricamente con filtro 546nm.
2. Cules son los valores normales del cido rico?
Mujeres: 2,5 7,5 mg/dl (142 -339 mmol/L)
Hombres: 3,5 8,5 mg/dl (202 - 416 mmol/L)
3. Escriba las tres razones que transcurren en el cido rico elevado.

Aumento de ingesta de purinas. Esta condicin raramente produce estados
hiperuricmicos, pero es importante en personas con gota u otros estados
hiperuricemiantes.
Excrecin disminuida. En estado de disfuncin renal aumenta al igual que la
creatinina y el nitrgeno ureico, pero es poco sensible, por lo que no se utiliza para el
diagnstico de disfuncin renal.
Incremento en la produccin. Aqu entra la gota como enfermedad y los sndromes
gotosos o gota secundarias provocados por aumento de lisis celular. En este caso, est
aumentada su concentracin en orina y hay riesgo de produccin de clculos.
4. Para qu sirve el espectrofotmetro?
Sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una
misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones.
132
PRACTICA N16
TEMA: DOSIFICACION DE CREATININA EN SUERO O EN ORINA.
METODO
Mtodo clorimtrico para la determinacin cuantitativa de la creatinina verdadera
en suero y orina.
OBJETIVO:
FUNDAMENTO
La creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio tamponado, previa
desproteinizacin con cido pilrico obtenindose un cromgeno que se mide
510nm.
SUERO 0.8 - 104mg/dl
por cinco minutos a 3.000 rpm.. Sacamos la sangre y separamos el suero del
133
Micropipetas o pipetas.
Tubos.
Espectrofotmetro
Bao mara.
Reloj.
Alcohol.
Algodn.
Torniquete.
Centrifuga.
H2o destilada.
REACTIVOS
Reactivo 1: cido picrico 41,41 mol/1. 440ml
Reactivo 2: 100ml buffer glicina/ naoh 1 mol/ 1, pH final 12.4.
Estndar: solucin de creatinina 20 mg/ 1. O 2 ml/dl
PROCEDIMIENTO
Primero debe efectuarse una desproteinizacin de la siguiente manera: a

0.7ml de suero, agregar 3.5ml de reactivo 1. Mezclar por inversin, dejar
en reposo 10 min y centrifugar a 3.000 prm durante 5 minutos luego: en 3
tubos colocar (marcados).
DESPROITENIZADO
--------
--------
3 ml
ESTANDAR
--------
0.5 ml
______
AGUA
1.25 ml
0.75 ml
______
REACTIVO 1
1 ml
0.75 ml
0.75 ml
REACTIVO 2
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
134
Mezclar por inversin e incubar 20 minutos a temperatura ambiente, leer en

espectrofotmetro 510nm, llevando a cero con el blanco.
Concentracin 200mg/d
OBSERVACIONES:
METODO COLORIMETRICO
Son mtodos basados en la reaccin de Jaff, que incorporan un indicador redox
en el medio del cultivo que cambia de color cuando existe crecimiento fngico en
el pocillo, facilitando la lectura visual del mismo.
Existen dos formas de efectuar la lectura:
Punto Final, en sus dos variantes, con o sin desproteinizacin. La

desproteinizacin es til para eliminar la interferencia por protenas,
utilizando como desproteinizante el cido tricloroactico (TCA) al 10%, u
otros como el cido fosfotngstico.
Cinticos, son tiles para minimizar las interferencias positivas. Al efectuar

la lectura en autoanalizadores, se permiten mltiples puntos de lectura. Las
interferencias positivas se logran minimizar ya que poseen distinta
velocidad de reaccin.
GRAFICOS:
135
CONCLUCIONES:
La
creatinina es un compuesto orgnico generado a partir de la
degradacin de la creatina que es un nutriente til para los msculos, sus

niveles en el organismo pueden ser valorados a travs de su concentracin
en la sangre y la orina.
Por medio de esta prctica se realiz la determinacin cuantitativa de

creatinina en suero y en orina; para ello se necesita que la muestra de orina
debe ser utilizado en 24hrs, por medio de una reaccin colorimtrica.
1. Qu es la creatinina?
La creatinina es el producto de degradacin de la creatina. La creatina es un
derivado de los aminocidos arginina, glicina y metionina, el cuerpo la fbrica
bsicamente en el hgado, los riones y el pncreas, y tambin puede obtenerse a
travs de una dieta rica en carne o pescado.
2. Escriba los valores de referencia de la creatinina en sangre u orina.
Los valores de referencia son:
Neonatos: 0 . 3 1 . 2 m g / d l
Infantes: 0 . 2 0 . 4 m g / d l
Nios:0.3 0.7 mg/dl
Adolescentes: 0 . 5 1 m g / d l
Mujeres adultas: 0 . 5 1 . 1 m g / d l
Varones adultos: 0.6 1.2 mg/dl
3. En qu situaciones se disminuye la creatinina?
136
Embarazo
Etapa temprana de la diabetes mellitus
Disminucin de masa muscular
PRCTICA No. 17
TEMA:
DETERMINACIN
COLORIMTRICO)
DE
UREA
(MTODO
ENZIMTICO-
1. OBJETIVOS:
Realizar el anlisis de urea en un suero sanguneo
Conocer los valores normales
2. FUNDAMENTO:
TEORICO
La urea es el principal compuesto nitrogenado no proteico ms importante en la
mayora de los lquidos biolgicos. En el hombre es el principal producto final del
metabolismo proteico. Se produce en el hgado y es excretada en la orina a travs
de los riones.
Una elevacin de la concentracin srica de urea, se interpreta generalmente
como una posible disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho
de que los valores sricos de urea se encuentran ntimamente relacionados con la
dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteracin en estas variables
se traducir en un cambio de la concentracin de urea en suero.
MTODO:
La urea se hidroliza por accin de la ureasa en presencia de agua para producir
amonaco y dixido de carbono. En una reaccin de berthelot modificada los iones
amonio reaccionan con hipoclorito y salicilato produciendo un complejo verde
llamado indofenol que se determina colorimtricamente.
Ureasa
NH2 CO NH2 + H2O
(NH4+)2 + CO2
Nitroprusiato (no es enzima)

(NH4+)+salicilato+ClONa+ 2-oxoglutarato
(verde)
137
Indofenol

3. MATERIALES.
Gradilla
Cuatro tubos de ensayo
Espectrofotmetro
Pipetas automticas
Puntas de plstico para pipeta automtica
Cubetas de plstico para espectrofotmetro
Reloj
Reactivos:
Reactivo 1: Buffer fosfatos (pH 7.0), Salicilato de sodio, Nitroprusiato de
sodio,
EDTA
Reactivo 2: Buffer fosfato (pH 13), hipoclorito
Standard: solucin de urea 80 mg/dl
Ureasa (enzima): Solucin estabilizada y tamponada de alta potencia
Suero sanguneo
4. DESARROLLO DE LA PRCTICA (en suero o plasma):
En cuatro tubos de ensayo marcados como B (blanco), S (Standard), M1 (muestra
1) y M2 (muestra 2) agregar:
B
M1
M2
Standard
10 ul
Suero o plasma
10 ul
10 ul
Reactivo 1
1000 ul
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Enzima ureasa
5 ul
5 ul
5 ul
5 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 3 minutos a 37C
Reactivo 2
1000 ul
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 5 minutos a 37C. Leer
la absorbancia de la muestra (A muestra) y del estndar (A Estndar) en
espectrofotmetro a Hg 578 nm frente a un blanco reactivo antes de 60 minutos
138

5. OBSERVACIONES
Clculos de concentracin de urea:
C (mg/dl)= A_ muestra x 80
A estndar
Valores de referencia en suero: 10 50 mg/dl
Parmetros a considerar:
- El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de realizar las
lecturas de las muestras
6. GRAFICOS
ELECTROFOTOMETRO
GRADILLA
PIPETA AUTOMATICA
7. CONCLUSIONES
Prueba fundamental para conocer el funcionamiento renal.
Se elabora las pruebas y se interpreta el resultado.
139

8. PREGUNTAS Y RESPUESTAS
1. Qu son las pipetas automticas?
Las pipetas son dispositivos que se caracterizan por carecer de depsito y que se
utilizan para medir o transvasar pequeos volmenes de lquido de un recipiente a
otro con gran exactitud.
2. Escriba las ventajas de los ensayos enzimticos.
Las muestras no requieren tratamiento previo
Perfectamente adaptados a su utilizacin en analizadores automatizados

sin ISE
Reactivos listos para usar
Mayor especificidad que los ensayos fotomtricos
Reactivos lquidos listos para usar
Sin interferencias significativas con muestras que contengan bilirrubina, Hb,

lpidos, magnesio o calcio
3. Cules son los factores que incrementan las concentraciones

sanguneas y urinarias?
La concentracin sangunea y urinaria se pueden incrementar por: la actividad
muscular, traumas, infecciones, ayuno, etc.). Se encuentran concentraciones
elevadas de urea en plasma como consecuencia de una dieta hiperproteca, o
tratamiento con glucocorticoides (uremia prerrenal).
4. Qu es el mtodo enzimtico- colorimtrico?
Mtodo enzimtico y colorimtrico basado en la accin especifica de la ureasa que
hidroliza la urea en iones amonio y carbonato. Los iones amonio forman con el
cloro y el salicilato un complejo coloreado azul-verde. La intensidad de coloracin
es proporcional a la concentracin en urea en la muestra, medida a 600 nm.
140
PRACTICA N18
ESTUDIO FISICO QUIMICO Y SEDIMENTO DE ORINA
1. OBJETIVOS
Determinar la importancia de un examen general de orina, como est
compuesto este examen, y como debe de recibirse una muestra de orina
para as obtener un resultado sin errores para el paciente ya que este es
utilizado para diagnosticar algunas enfermedades como las renales.
2. MARCO TEORICO
Tambin conocido como ego o urianlisis. Se hace el examen para detectar
trastornos renales o metablicos, y para la deteccin de infecciones del tracto
rutinario. El examen se debe hacer cuando se hace un examen rutinario o cuando
padecen sntomas de infeccin del tracto urinario, como dolor abdominal, dolor
lumbar, emisiones de orina frecuentes o dolorosas, o cuando aparece sangre en la
orina; tambin formando parte de una revisin durante un embarazo, o de un
ingreso hospitalario, o del estudio preoperatorio antes de una intervencin
quirrgica. Un urianlisis est constituido por un conjunto de pruebas que detectan
y miden de manera semicuantitativa distintos componentes eliminados por la
orina, incluyendo productos intermediarios del metabolismo as como tambin
clulas, bacterias, y fragmentos celulares.
Examen qumico:
Nitritos: Negativo
PH: 4.6 - 8.0 (media: 6.0)
Protenas: <0.15 g /24 horas
Glucosa: Negativo
Cetonas: 17 42 mg / dl
Pigmentos biliares: Negativo
Urobilingeno: 0.2 1.0 mg / dl
Densidad: 1.016 -1.02
SEDIMENTO URINARIO
Leucocitos: 0 5 / campo de 40 x
Eritrocitos: 0 2 / campo de 40 x
Clulas epiteliales: Cantidad variable
141

ASPECTO Y COLOR DE LA ORINA:
ASPECTO Y
COLOR
CAUSA
SIGNIFICADO CLNICO
Incoloro
Orina muy diluida
Poliuria, diabetes inspida.
Amarillo
anaranjado
Orina
concentrada
Deshidratacin, fiebre.
Amarillo
amarronado
Bilirrubina,
biliverdina.
Hepatopatas.
Lechoso
- Abundantes
neutrfilos
- Grasas (lipiria,
quiluria)
Infecciones bacterianas
Nefrosis, obstruccin linftica
Turbio
- Hemates
Traumatismos del tracto urinario, anemias

hemolticas, infecciones.
- Leucocitos
Piel nefritis, inflamacin de vas urinarias.
- Contaminacin
fecal
Fstula recto vesical.
- Bacteriuria
Infeccin de vas urinarias.
- Cristales de
oxalato de calcio
- Cristales de
cido rico.
Clculos renales, diabetes mellitus,

enfermedad renal crnica.
- Hemoglobina
Hemoglobinuria paroxstica nocturna,

hemoglobinuria de la marcha, dficit de
glucosa 6-P deshidrogenasa, infecciones por
clostridios y Plasmodium falciparum.
- Mioglobina
Mioglobinuria paroxstica y de la marcha,

traumas, infecciones.
- Hemates.
Contaminacin menstrual.
Porfirinas
Porfirinas.
Rojo
Rojo prpura
142

PH: En situacin fisiolgica el pH de la orina oscila entre 4.6-8.0 con una media de
6.0
SIGNIFICADO CLNICO
ORINA
- Dieta con alto contenido en protenas de la carne.
CIDA pH < -Ingestin
de
algunas
frutas
7.0
- Medicamentos como el cloruro amnico, la metionina, el
mandelato de metenamina y los fosfatos cidos que se utilizan
para acidificar la orina en el tratamiento de litiasis renal.
- En estados patolgicos: acidosis respiratoria, acidosis
metablica como en la cetosis diabtica, en la uremia, en
diarreas
severas
y
en
la
inanicin.
Infecciones
urinarias
por
E.
Coli.
- En dficit de potasio.
ORINA
ALCALINA
pH > 7.0
143
- Ingesta elevada de vegetales o frutas especialmente ctricos.

- Medicamentos como el bicarbonato sdico, el citrato potsico y
la acetazolamida que se utilizan para el tratamiento de litiasis
renal.
Tratamientos
con
sulfamidas.
- En el tratamiento de la intoxicacin por salicilatos.
- Orinas recolectadas en el perodo post prandial.
- En la alcalosis respiratoria y en la metablica (vmitos)
- En infecciones urinarias provocadas por grmenes que
desdoblan la urea como Proteusspp, Pseudomonasspp.
- Muestras contaminadas con bacterias que tardan en procesarse
y quedan a temperatura ambiente. Por ello el pH elevado en una
orina en estas condiciones carece de valor.

DENSIDAD (PESO ESPECFICO) DE LA ORINA:
PESO
ESPECIFICO
Recin
nacidos
1,012
Lactantes
1,002 -1,006
Adultos
1,001 -1,035
Adultos con
ingesta
normal de
lquidos
1,016 -1,024
PROTEINAS:
La presencia de proteinuria puede ser el indicador ms importante en una
alteracin renal. Sin embargo luego de actividad fsica, en estado febril, estrs y
exposicin al fro, puede haber un aumento en la excrecin de protenas en la
orina
Normalmente en el rin sano se excreta solo una pequea cantidad de protenas
de bajo peso molecular. Esto se debe a que la estructura de la membrana
glomerular no permite el pasaje de protenas de alto peso molecular. Las
proteinurias se pueden clasificar de acuerdo a su etiologa y al mecanismo
involucrado:
144

Proteinuria
Significado clnico
Funcional no
asociada a
enfermedad
renal
- Exceso de ejercicio
-Embarazo
- Proteinuria ortosttica
Orgnica
asociada a
enfermedad
sistmica o
patologa
renal
- Pre- renal: fiebre, hipoxia renal, hipertensin, mixedema,.

- Renal: glomerulonefritis, Sndrome nefrtico y lesiones del
parnquima
- Post- renal: infeccin de la pelvis y de los urteres, cistitis,
uretritis o prostatitis.
Se puede predecir el tipo de enfermedad renal por la cantidad y el tamao de las

protenas presentes:
Proteinuria
Significado clnico
Proteinuria
mnima: < 0.5
g / 24 hs.
-riones poli qusticos

- piel nefritis crnica
-glomerulonefritis crnica inactiva
- proteinuria ortos tatica benigna
Proteinuria
moderada: 0.5
3.5 g /24 hs.
- nefroesclerosis
- enfermedad del intersticio tubular
- pre-eclampsia
- mieloma mltiple
-nefropata diabtica
- piel nefritis con hipertensin
-glomerulonefritis
- nefritis
- enfermedad amiloidea
- nefrosis lipoidea
- glomeruloesclerosis intercapilar
Proteinuria
grave: >3.5 g /
24 hs.
145

GLUCOSA
En orina aparece glucosa cuando el nivel de glucemia supera 180 mg / dl. Cuando
esto sucede los tbulos renales no pueden reabsorber toda la glucosa filtrada y se
produce la glucosuria. Las condiciones ms importantes asociadas con glucosuria
son las siguientes:
Proteinuria
Significado clnico
Sin
hiperglucemia
-Embarazo
-Enfermedad renal
-Errores congnitos
- Contacto con sustancias nefrotxicos (monxido de
carbono, mercurio)
- Recipiente con muestras de orina contaminada con glucosa
(restos de dulce, miel)
Con
hiperglucemia
-Diabetes mellitus
-Glucosuria alimentaria
-Tumores
- Enfermedades endcrinas
- Sndrome de Cushing
-Hipertiroidismo
- Feocromocitoma
146

CETONAS
Aparecen en la orina como parte del metabolismo incompleto de los cidos
grasos. En un individuo con dieta normal el valor medio es de 20 mg/dl.
La acetonuria se observa frecuentemente en la diabetes mellitus
Acetonuria
No
diabtica
Significado clnico
- Estado febril agudo y estados txicos (con vmitos y
diarreas) en nios y lactantes.
- Vmitos del embarazo.
- Caquexia.
-Alcoholismo.
- Post anestesia.
- Dietas pobres en hidratos de carbono.
Diabtica
- Ayuno prolongado.
- Infecciones en nios y adultos jvenes.
- Cetoacidosis diabtica
SANGRE
La presencia de eritrocitos intactos en la orina se denomina hematuria. Tambin
se considera hematuria cuando en orinas muy alcalinas o de muy baja densidad
se produce lisis de los eritrocitos con la liberacin de la hemoglobina.
Presencia de hematuria:
Patologas y traumatismos del tracto urinario

Pacientes anticuagulado
Litiasis renal
Consumo de algunos frmacos
Enfermedades hemorrgicas como anemia hemoltica
Infecciones
Deportistas
NITRITOS
Muchas bacterias producen la enzima reductora, la cual reduce los nitratos
urinarios a nitritos. Esta reaccin da color en el rea reactiva de la tira indicando la
presencia de bacterias en la orina.
147

La sensibilidad del test comparado con la de un cultivo de orina es slo del 50%.
Las tiras reactivas se utilizan como una prueba selectiva que permite detectar
bacteriuria an en los casos en que no se sospecha clnicamente.
Un resultado positivo en la tira reactiva puede ser una indicacin para el cultivo de
orina.
Un resultado negativo no debe interpretarse como indicador de ausencia de
infeccin urinaria, ya que existen bacterias que no forman nitritos.
BILIRRUBINA
En condiciones normales la bilirrubina conjugada no est presente en la orina.
Aparece en la orina debido a obstruccin del tracto biliar extra heptica (clculos
en coldoco, carcinoma en cabeza de pncreas) o intraheptica (hepatitis, cirrosis
activa).
Los mtodos de mayor sensibilidad para la deteccin de bilirrubina son tabletas o
test y las tiras reactivas.
UROBILINOGENO
Es producido por el metabolismo de las bacterias intestinales sobre la bilirrubina
conjugada. Si bien la deteccin de Urobilingeno en orina no forma parte del
anlisis de rutina de la orina completa, la utilizacin de las tiras reactivas sirve
para conocer el estado de la funcin heptica El Urobilingeno est aumentado en
las anemias hemolticas y hepatopatas (hepatitis, cirrosis)
Interferencias: falsos positivos: presencia de
Falsos negativos: presencia de nitritos, formaldehdo.
indol,
porfobilingeno.
SEDIMENTO DE ORINA
Significado clnico:
Es una prctica de mucha utilidad a pesar de su extremada sencillez y su escasa
complejidad.
Su mximo aprovechamiento depender de la relacin que el mdico realice con
el
resultado
obtenido
y
la
clnica
del
paciente.
El sedimento urinario se compone de elementos de distintos orgenes. Ellos
pueden ser productos metablicos del rin como los cristales, clulas derivadas
del flujo sanguneo y del tracto urinario, clulas de otros rganos del cuerpo,
elementos originados en el rin como los cilindros y otros elementos que no
tienen origen humano y que aparecen como elementos contaminantes (bacterias y
levaduras).
148

CELULAS:
Pueden estar presentes en la orina clulas como eritrocitos o glbulos rojos,
leucocitos o glbulos blancos y clulas epiteliales provenientes de distintos puntos
del tracto urinario, desde los tbulos hasta la uretra y tambin provenientes de la
vagina o vulva, como contaminantes.
Eritrocitos o glbulos rojos: Se considera normal la eliminacin de una cantidad
de 0 a 1 o 2 eritrocitos por campo de 40 x.
Al ser la membrana de los eritrocitos permeable a varios solutos de la orina, los
cambios en la forma y tamao de los mismos depende del gradiente osmtico de
la orina por lo cual los eritrocitos se ven hinchados, crenados o de tamao normal.
Significado clnico: Un aumento en el nmero de glbulos rojos en la orina
(hematuria) indica enfermedad de las vas urinarias bajas o enfermedad renal
Sedimento
Frecuente
Menos frecuente
Hematuria
- Todas las formas de glomerulonefritis

- Afeccin renal de enfermedades
sistmicas
- Tumores benignos y malignos del
rin y vas urinarias
- Traumatismos
- Malformaciones
- Trombosis de los vasos renales
- Infeccin primaria
- Tuberculosis
- Nefropata diabtica
- Piel nefritis
- Enfermedades renales
hereditarias
GLBULOS BLANCOS:
Bajo condiciones anormales los polimorfos nucleares son los glbulos blancos
ms
frecuentemente
encontrados
en
el
sedimento
urinario.
Aparecen como granulocitos y son caractersticos de los procesos inflamatorios
del rin y de las vas urinarias. Es menos comn encontrar linfocitos, monocitos o
eosinfilos.
En un sedimento normal se eliminan desde 0 a 5 leucocitos por campo de 40 x.
149

Significado clnico: un incremento en el nmero de glbulos blancos en la orina
(leucocitaria), representa el sntoma fundamental de piel nefritis aguda o crnica,
as como tambin de las enfermedades inflamatorias de la va urinaria
descendente como uretritis, prostatitis, cistitis, pielitis y tuberculosis
Sedimento
Leucocitaria
Frecuente
-Piel nefritis
- Todas las enfermedades
inflamatorias de las vas
urinarias descendentes.
Menos frecuente
-Glomerulonefritis
-Rechazo de trasplantes
-Enfermedades
sistmicas con afeccin
renal
CLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS: se originan en la vagina y en uretra

tanto del hombre como de la mujer. Pueden presentarse en pequea o en gran
cantidad o tambin estar ausentes. Son clulas grandes de aspecto algo irregular
con ncleo pequeo y redondo.
Significado clnico: su presencia no tiene valor patolgico, sin embargo ante un
carcinoma escamoso, estas clulas se ven afectadas y sufren modificaciones.
Clulas epiteliales de transicin: se originan desde la pelvis renal, urter y
vejiga hasta la uretra. Se diferencian de las escamosas porque son polidricas a
esfricas.
Significado clnico: su presencia en gran cantidad puede indicar una inflamacin
de las vas urinarias.
Clulas epiteliales del tbulo renal: se originan del epitelio de revestimiento de
los tbulos renales. Son difciles de diferenciar de las de transicin. Son algo ms
grandes que los leucocitos, tienen cierta granulacin y no siempre se reconoce su
ncleo.
Significado clnico: Son las ms importantes de todas las clulas desde el punto
de vista clnico del sedimento urinario. Su presencia en gran cantidad sugiere
dao tubular que puede producirse en enfermedades como piel nefritis, necrosis
tubular aguda e intoxicacin por salicilatos.
150

CILINDROS
La formacin de los cilindros ocurre en los tbulos dstales y colectores cuando la
acidificacin y la concentracin de la orina llega a su mximo alcance.
Se originan por el espesamiento o precipitacin de protenas, son estructuras
longitudinales que se corresponden con la luz de los tbulos. As como en las
orinas concentradas se favorece la formacin de los cilindros, en las orinas
diluidas tiendes a disolverse.
Existen diferentes tipos de cilindros:
CILINDROS HIALINOS: Son estructuras homogneas, transparentes, incoloras y
poco refringentes. En muchos cilindros hialinos se observan distintos tipos de
inclusiones que quedan atrapadas dentro de los mismos, pueden ser grnulos
finos, ncleos, paredes celulares y clulas sanguneas. Si la matriz hialina
predomina se considera un cilindro hialino con inclusiones.
Significado clnico: se encuentran tanto en orinas de personas sanas como en
pacientes con enfermedad renal. Tambin se los encuentra en la orina de
pacientes que reciben ciertos compuestos teraputicos y qumicos que si bien no
estn relacionados con enfermedad renal, afectan de alguna manera al rin. Se
encuentran en gran cantidad en el sedimento de personas sanas despus de
grandes esfuerzos psquicos y fsicos, tambin se incrementan con la toma de
diurticos como furosemida y el cido etacrnico. Pueden observarse hasta en la
enfermedad renal ms leve. No se asocian a ninguna enfermedad en particular.
CILINDROS GRANULOSOS: Tienen caractersticas morfolgicas similares a los
cilindros hialinos, Suelen ser ms anchos y ms grandes que estos ltimos.
Tienen un ndice de refraccin algo mayor que los hialinos, por lo tanto es ms
fcil su visualizacin.
Significado clnico: estn presentes tanto en sedimentos normales como en
aqullos
que
no
lo
son.
Se encuentran en grandes cantidades despus de esfuerzos fsicos en personas
sanas y por otro lado estn frecuentemente asociados con enfermedades agudas
y crnicas del rin, sobre todo en la glomerulonefritis y ms raramente en la piel
nefritis.
Cilindros creos: Se los reconoce fcilmente en un campo visual comn debido a
que tienen un ndice de refraccin mayor al de todos los cilindros en general, por
sus puntas como quebradas o en terminacin abrupta, as como por sus muescas
151

caractersticas o hendiduras finas en los bordes, las cuales se encuentran en
forma perpendicular al eje longitudinal del mismo. Tienen una tonalidad
ligeramente amarilla.
Significado clnico: su presencia en la orina indica siempre una enfermedad renal
crnica grave.
CILINDROS ERITROCITARIOS Se componen de eritrocitos ms o menos densos
que se adhieren a una sustancia fundamental hialina. Su color vara del rojo
amarillento al pardo, aunque pueden ser ms claros y hasta incoloros.
A medida que se va produciendo la degeneracin de los cilindros eritrocitarios, los
lmites van desapareciendo y se originan los llamados cilindros hemticos de color
rojo amarillento. .
Significado clnico: son indicadores de lesin glomerular. Se los encuentra a
menudo en enfermedades como la glomerulonefritis, lupus eritematoso y ms
raramente en endocarditis bacteriana. Los cilindros eritrocitarios o hemticos
siempre indican hematuria de origen renal
CILINDROS LEUCOCITARIOS: Estn formados por unos pocos leucocitos o por
muchas de estas clulas aglomeradas, que se adhieren al cilindro a travs de una
matriz hialina Los cilindros leucocitarios se producen en presencia de una
exudacin intrarrenal intensa de leucocitos y eliminacin de protenas a travs de
los
tbulos.
La mayora de los leucocitos que aparecen en los cilindros son neutrfilos
polimorfo nucleares.
Significado clnico: no se los encuentra en el sedimento normal. La mayora de las
veces se los asocia con infecciones renales. Se observan en el 80 % de los casos
de piel nefritis, tambin se los observa en la glomerulonefritis.
CRISTALES
Se presentan normalmente en todas las orinas, lo ms importante es saber
diferenciar cristales normales de la orina con aquellos que estn asociados con
alguna patologa. Cuando la orina est sobresaturada con algn compuesto
cristalino en particular o cuando las propiedades de solubilidad de esta se
encuentran alterados se produce la formacin de los mismos. Se observan
cristales amorfos de uratos, cido rico y oxalatos de calcio en orinas cidas,
mientras que los de fosfatos siempre se encuentran en orinas alcalinas.
152

Los cristales pueden tomar diferentes formas que dependen del compuesto
qumico y del pH de la orina.
CRISTALES DE CIDO RICO: Existen en diversas formas,
romboidales, piedra de amolar, rosetas, pesas, barriles y bastones.
cuadros
Su color vara desde el rojo pardo a incoloros.

Significado clnico: Su presencia en la orina no necesariamente indica un estado
patolgico.
Estn presentes en la orina en enfermedades como la gota, leucemia,
metabolismo de las purinas aumentado, enfermedad febril aguda y nefritis crnica
URATOS AMORFOS: Son sales de cido rico que se encuentran en orinas
cidas o neutras, en forma no cristalina, amorfa. Pueden encontrarse uratos de
sodio, potasio magnesio y calcio. Tienen un aspecto granular y pueden ser
rosados, o de un color amarillo rojizo. A este precipitado se lo conoce como polvo
de ladrillo.
Significado clnico: son frecuentes en orinas concentradas como en el caso de la
fiebre y tambin en la gota, pero carecen de importancia diagnstica.
OXALATOS DE CALCIO: Normalmente se los encuentra en orinas cidas,
aunque tambin pueden formarse en orinas con un pH ligeramente alcalino a
neutro. Son incoloros, de forma octadrica o de sobre, simulan cuadrados
pequeos cruzados por lneas diagonales que se intersectan. Otras veces se
presentan como esferas ovales o discos bicncavos con forma de pesas de
gimnasia.
Significado clnico: todas las formas pueden encontrarse en un sedimento
normal, dependiendo de la dieta. Su nmero se incrementa cuando la dieta es rica
en cido oxlico (tomates, naranjas esprragos, y manzanas). Estos cristales
estn relacionados con la formacin de clculos renales y se han visto en gran
cantidad en pacientes con patologas como la diabetes mellitus, enfermedades del
sistema nervioso, enfermedad heptica y enfermedad renal crnica.
CRISTALES DE CIDO HIPRICO: Se observan con escasa frecuencia, pueden
formarse en orinas ligeramente alcalinas o neutras pero siempre se los encuentra
en orinas cidas.
153

Son incoloros o tienen un color amarillo plido. Se los observa como prismas o
placas alongadas, pueden ser tan delgados que parecen agujas y con frecuencia
estn agrupados.
Significado clnico: Normalmente no tienen, pero se los ha encontrado en gran
cantidad en pacientes con estado febril agudo y en enfermedades hepticas.
CRISTALES DE FOSFATOS AMORFOS: Aparecen en orinas neutras y alcalinas
como finos e incoloros grnulos que tienden a presentarse en acmulos. No tienen
significacin clnica.
CRISTALES DE FOSFATOS TRIPLE: Tambin llamados fosfatos amonio
magnsicos, aparecen en las orinas neutras y alcalinas. Se presentan como
prismas incoloros de 3 a 6 caras que con frecuencia tienen extremos oblicuos. A
veces pueden precipitar formando cristales plumosos o con aspecto de helecho.
Significado clnico: aparecen en procesos patolgicos como pielitis crnica,
cistitis crnica, hipertrofia de prstata y en casos en que exista retencin vesical
de la orina. Pueden formar clculos urinarios
CRISTALES DE FOSFATOS TRIPLE DE CALCIO: Tambin conocidos como
fosfatos di clcico, aparecen en orinas alcalinas.
Se los pueden encontrar en forma de grnulos amorfos y tambin en formas
cristalinas. La forma ms comn es la de una gran placa irregular semejando una
lmina de hielo.
Significado clnico: si bien no tienen, se los asocia a pacientes con cistitis con
retencin de orina y con la formacin de clculos renales.
CRISTALES DE URATOS DE AMONIO: Son los nicos cristales de uratos que se
encuentran en orinas alcalinas. Son cuerpos esfricos de color amarillo castao
con espculas largas e irregulares o sin ellas.
Significado clnico: no tienen, pero constituyen una anormalidad slo si se
encuentran en orinas recin emitidas. Aparecen en la formacin de amonio en la
orina vesical.
CRISTALES DE LEUCINA: Se los encuentra en orinas cidas en forma de
esferas con estriaciones concntricas. Son altamente refringentes y aparecen
como cuerpos amarillentos u amorronados. Aparecen en la orina en asociacin
con los cristales de tirosina.
154

Significado clnico: responden a las mismas condiciones que los de tirosina
CRISTALES DE CISTINA: Se encuentran en orinas con pH cido y se observan
como lminas delgadas incoloras y hexagonales.
Significado clnico: la mayora de las veces se los observa en orinas de
pacientes que padecen distintos tipos de desrdenes metablicos hereditarios.
CRISTALES DE TIROSINA: Son muy poco frecuentes y slo se observan en
orinas cidas. Su color vara desde incoloros a amarillo pardo. Su forma es la de
agujas muy finas y refringentes, apareciendo en grupos o acmulos.
Frecuentemente se los encuentra junto con cristales de leucina. Son producto del
metabolismo proteico. Significado clnico: aparecen en orinas de pacientes con
necrosis o degenera miento tisular como por ejemplo enfermedad heptica aguda,
hepatitis, cirrosis, leucemia y fiebre tifoidea.
CRISTALES DE COLESTEROL: Se encuentran en orinas cidas o neutras,
aparecen como lminas planas y transparentes con ngulos mellados. Muchas
veces se encuentran formando una pelcula en la superficie de la orina en lugar de
encontrarse en el sedimento.
Significado clnico: no son comunes en la orina y siempre que estn se los
relaciona
con
alguna
patologa.
Se los encuentra en enfermedades renales como en el sndrome nefrtico y
predominan en la quiluria, que se produce como consecuencia de la obstruccin
del flujo linftico del abdomen.
BACTERIAS
No existen bacterias a nivel renal ni vesical. A pesar de que la orina est libre de
ellas, sta puede contaminarse con bacterias presentes en la uretra o en la
vagina.
Significado clnico: cuando una muestra de orina es recolectada en forma estril y
contiene gran nmero de bacterias y adems es acompaada por muchos
leucocitos, es muy factible encontrar una infeccin del tracto urinario.
155
HONGOS
Son estructuras incoloras de forma ovalada. A veces se los puede confundir con
eritrocitos pero son algo ms pequeos que stos, adems con frecuencia
presentan evaginaciones tubulares o filamentosas, (hifas).
Significado clnico: es comn encontrarlos en pacientes con enfermedades
metablicas (diabetes mellitus).Se les reconoce valor patolgico en pacientes con
bajas defensas, en estos casos es Cndida albicas la que desempea un papel
fundamental.
MUCUS
Se trata de filamentos irregulares de forma acintada, largos, delgados y
ondulantes, de longitud variable. De estos filamentos mucosos muchas veces
cuelgan clulas epiteliales, leucocitos, eritrocitos e incluso cristales.
Significado clnico: existen normalmente en la orina en pequeas cantidades,
pero pueden ser muy abundantes en caso de inflamacin o irritacin del tracto
urinario.
MATERIALES
Muestra de orina analizar

Tira reactiva
Tubos de ensayo
Centrifuga
Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
EXAMEN MACROSCOPICO
Primeramente en este examen macroscpico se observ:
El aspecto:
transparente
La densidad:
1.010 1.030
El volumen:
800250 ml
156

El color:
amarillo mbar
El olor:
amoniacal (normal)
EXAMEN QUMICO
En este examen qumico se utiliz la tira reactiva de orina, que es un instrumento
de diagnstico bsico, que tiene por finalidad detectar, durante un examen
rutinario de orina, algunos de los cambios patolgicos que pueden aparecer en la
orina de un paciente.
Pero antes se vaca un poco de la muestra de orina en un tubo de ensayo, se
etiqueta el tubo, puede ser con el nombre del paciente y evitar confusiones con
otras muestras; para despus colocar la tira reactiva dentro, luego se saca y se
espera por un minuto para poder leerla.
Las reacciones en las tiras reactivas que se detectaron son:
Densidad
1.020
PH
Leucocitos
Negativo
Protena
Negativo
Glucosa
Normal
Bilirrubina
Negativo
Sangre
Negativo
Hemoglobina
Negativo
EXAMEN MICROSCOPICO
Para este tipo de examen, el tubo de ensayo con la muestra se debe de
centrifugar a 1500 RPM durante 5 minutos, ya despus de esto se debe decantar,
luego colocar una gota del sedimento en un porta objetos y sobre este colocar un
cubre objetos.
Mediante el examen al microscopio se comprueba la presencia de clulas

epiteliales renales y de elementos de la sangre que, presentes por lo comn en
157

pequeo nmero, pueden aumentar en caso de enfermedad, etctera. El nmero y
tipo de clulas o material que se encuentra en la muestra de orina puede brindar
informacin detallada sobre la salud del paciente y establecer diagnsticos
especficos. Centrifugamos nuestra muestra de orina. Ya que centrifugamos
nuestra muestra de orina, la decantamos cerca de una fuente de agua.
Posteriormente pondremos una gota del sedimento en un portaobjetos para
observar al microscopio a 10x y 40x.
5. DATOS/OBSERVACIONES
La muestra de orina debe recogerse en un recipiente limpio y seco. Se
recomienda la recoleccin de la muestra con una retencin mnima de cuatro
horas. El anlisis debe realizarse dentro de las dos horas de emitida. Si se
conserva a temperatura ambiente durante varias horas se deterioran los
leucocitos, los hemates y los cilindros. Si el paciente demorara en llevar la
muestra deber indicarse la refrigeracin de la misma.
6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES
El EGO no es ms que una serie de exmenes efectuados sobre la orina, donde
podemos identificar el color, aspecto, densidad, pH, leucocitos, nitritos, entre
muchos otros tipos de sustancias, por as llamarlos. Adems de que con este tipo
de exmenes podemos determinar si el paciente tiene tal vez alguna infeccin o
alguna enfermedad al respecto en el sistema urinario. Todo esto lleva un
procedimiento el cual debe efectuarse con cuidado, sobre todo con limpieza y
responsabilidad.
158

1. Qu es la uroanlisis?
El uroanlisis contempla una serie de exmenes realizados en muestras de orina,
las que pueden ser recolectadas en forma de una muestra de orina miccional
(aislada) o como muestras de orina con recoleccin de 24 horas.
2. Qu es la orina?
La orina es el producto de desecho lquido excretado por los riones, se almacena
en la vejiga hasta el momento de ser vaciada a travs de la uretra; est constituida
por agua, y numerosos sustancias (creatinina, cido rico, urea, fosfatos, sulfatos,
magnesio, calcio sodio, potasio, cloro, etc). Estas sustancias son excretadas a
diario, es decir, cada 24 horas.
4. Cmo funcionan las tiras reactivas?

Estos cuadraditos van impregnados de sustancias que, en contacto con lo que
quieren analizar (por ejemplo, si es un reactivo para azcar en orina, pues al
contacto con esta glucosa) reaccionan cambiando el color. El cambio de color
puede ser desde poco intenso, hasta muy importante.
159
PRACTICA N19
TEMA: IDENTIFICACION DE
REACTIVO DE BENEDICT
GLUCOSA EN ORINA POR MEDIO DE
1. OBJETIVOS
Aprender a medir la glucosa en orina por medio de reactivo de benedict.
Saber dar un diagnstico acertado leyendo los niveles de glucosa en la
orina
2. MARCO TEORICO
El trmino melituria se emplea para designar la presencia de una cantidad
anormal de azcar en la orina. La glucosa (dextrosa) es el azcar que con mayor
frecuencia se encuentra en la orina y en tal caso se habla de glucosuria. Otros
azucares que accidentalmente tambin puede encontrarse en la orina son
levulosa (levulosuria), la lactosa (lactosuria) la galactosa (galactosuria), la pentosa
(pentosuria), etc. Puesto que no todas las melituria son glucosurias, la
identificacin de azcar existente en la orina es con frecuencia un problema de
importancia clnica.
En la orina de sujetos normales se encuentran huellas de glucosa y otros azucares
en cantidad demasiado escasa para que su presencia puede ser revelada por los
reactivos ordinarios.
Son necesarias las reacciones especiales para identificar los distintos azucares
que pueden presentarse en la orina.
En la actualidad, se practican tres tipos de exmenes de orina: anlisis de orina
por tira hmeda, empleado generalmente por los mdicos en sus consultorios y
por los pacientes en sus casas; tamizaje de anlisis hmedo de la orina,
comnmente llamado anlisis bsico o rutinario de orina; y citodiagnstico de la
orina, que es una evaluacin citolgica especializada del sedimento urinario que
correlaciona con los anlisis realizados por medio de la tira reactiva. El anlisis de
orina realizado con la tira hmeda es un ensayo de primera etapa para la
deteccin y monitoreo de pacientes con anormalidades qumicas.
El anlisis de orina hmedo o rutinario, proporciona, a costos razonables, un
tamizaje adecuado para la deteccin de anormalidades qumicas y morfolgicas
presentes en la orina.
160

La Glucosa es una sustancia reductora, la cual reduce al sulfato cprico (color
azul), de la solucin de Benedict, a xido cprico (color rojo) que es insoluble.
3. MATERIALES:
Reactivo de Benedict.
Muestra de orina
Pipetas
Mechero
Pinzas
Tubos
Gradilla
1. Agregar 1.5 de muestra de orina
2. Con una pipeta depositar 1mL de solucin de Benedict en un tubo de
ensayo.
3. mezclar completamente.
4. Hervir durante 2 minutos.
5. Dejar enfriar la muestra a temperatura ambiente en caso de ser necesario
6. Examinar la muestra y ver si existe algn cambio de color o precipitado.
Resultados.
Color
Resultado
Azul
Verde
Verde con precipitado amarillo
Desde amarillo hasta verde oscuro
Castao
Desde anaranjado hasta rojo ladrillo
Negativo
Huellas
+
++
+++
++++
Concentracin
mmol/L*
0
14
28
56
83
111 ms
5. DATOS/OBSERVACIONES:
El examen general de orina (EGO) es una prueba de gran importancia para el
clnico y para el paciente mismo.
El uroanlisis es algo ms que la simple observacin del sedimento, es la
aplicacin de todos nuestros conocimientos y el empleo de todos nuestros
recursos dentro del laboratorio para proporcionar al mdico y al paciente
resultados de y con calidad.
161

6. GRAFICOS:
7. CONCLUSIONES:
Al trmino de la prctica pudimos concluir que los anlisis que se le hacen a
la muestra de la orina son de suma importancia.
Los alumnos estn capacitados para medir la glucosa en orina por este
mtodo.
Adems aprendimos a cmo elaborar correctamente un diagnstico sobre
anlisis en la orina y detectar los niveles de glucosa.
Conocimos que la glucosa en orina se denomina glucosuria.
1.- Que identifica el mtodo de reactivo benedict?
Identifica los azucares reductores en especial la glucosa
162

2.- De que consta el reactivo Benedict?
Consta de:
Sulfato cprico
Citrato de sodio
Carbonato anhdrido de sodio.
3.- Cuantos tipos de exmenes de orina se realiza en la actualidad?

Anlisis de orina por tira hmeda,
Anlisis bsico o rutinario de orina;
Citodiagnstico de la orina,
4.- Que se encuentra en la orina de sujetos normales?

Se encuentra huellas de glucosa y otros azucares en cantidad demasiado escasa.
5.- Cul es el mayor azcar con frecuencia en la orina?
La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se
obtiene fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena
principalmente en el hgado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento
de los niveles de glucosa en sangre (glucemia).
163
PRACTICA N20
TEMA: IDENTIFICACION DE ALBUMINA POR METODO CUALITATIVO CON
REACTIVO DE ROBERTH
1. OBJETIVOS
Aprender a determinar albumina en orina por medio de cualitativo
Interpretar los niveles de albumina en la orina
2. MARCO TEORICO
Las protenas, especialmente la albumina y las globulinas, son los ms
importantes componentes orgnicos de la orina. La cantidad de albumina suele
ser mayor que la de globulinas y aunque el termino proteinuria sea ms exacto
que el de albuminuria, esta ltima designacin se aplica para indicar la presencia
en la orina de sustancias pertenecientes al grupo de las protenas.
La orina normal contiene una reducidsima cantidad de protenas, cantidad
demasiado pequea para su presencia puede ser revelada por los reactivos
habitualmente usados. Algunas veces, cuando el cuerpo produce demasiados
anticuerpos, el nivel de las cadenas ligeras tambin se eleva. Estas protenas son
relativamente pequeas, son eliminadas por los riones y van a la orina.
El mdico tambin puede ordenar este examen:
Para diagnosticar afecciones mdicas que lleven a que se presente

protena en la orina.
Si usted tiene mucha protena en la orina.
Si tiene signos de mieloma mltiple.
Un resultado anormal tambin puede deberse a:
Amiloidosis
Leucemia linfoctica crnica
Linfoma
3. MATERIALES
164
Muestra de orina
Reactivo
Pipetas
Gradilla

En un tubo colocamos 1cc de orina.
Si la orina no fuese transparente, habra que filtrarla
Aadir 1cc de reactivo
Dejamos reposar durante unos minutos
Procedemos a la lectura.: si no se produce enturbiamiento no hay albumina y por
lo tanto la reaccin es negativa.
Todo enturbiamiento indica presencia de albumina. El grado de turbiedad esta en
relacin con la cantidad de albumina presente.
Para investigar la presencia de albumina, la orina debe de ser transparente, si se
quiere que la reaccin sea sensible a pequeas cantidades de dicha sustancia.
Esto se consigue por filtracin o centrifugacin.
6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES
la muestra de la orina son de suma importancia para un diagnostico
Conocimos que presencia de albumina en orina se denomina albuminuria
165

1.- Que es la albumina?
Es una protena que se encuentra en gran cantidad en el plasma sanguneo y es
producida por el hgado.
2.- Cul es la concentracin normal de albumina en la sangre?
Oscilan entre 3,5 y 5,0 gramos por decilitro
3.- Qu produce el nivel alto de albumina en la sangre?
Falta de nutricin
Deshidratacin
4.- Cundo se reduce la albumina?
Se reduce durante el embarazo
5.- Cundo la albumina pasa a la orina?
Cuando los riones no tienen un buen funcionamiento.
166
PRACTICA N21
TEMA: PRUEBAS DE UREA- CREATININA
1. OBJETIVOS
Conocer la importancia la funcin renal para detectar las disfunciones del
rin y otras alteraciones.
Relacionar todas estas pruebas que se realizan en el laboratorio para
aportar en buen diagnostico
2. MARCO TEORICO
La insuficiencia renal o fallo renal se produce cuando los riones no son capaces
de filtrar las toxinas y otras sustancias de desecho de la sangre adecuadamente.
Fisiolgicamente, la insuficiencia renal se describe como una disminucin en el
ndice de filtrado glomerular, lo que se manifiesta en una presencia elevada de
creatinina en el suero.
Algunos problemas de los riones ocurren rpidamente, como el caso un
accidente en el que la prdida importante de sangre puede causar insuficiencia
renal repentina, o algunos medicamentos o sustancias venenosas que pueden
hacer que los riones dejen de funcionar correctamente. Esta bajada repentina de
la funcin renal se llama insuficiencia renal aguda.
La insuficiencia renal aguda (IRA) es, como su nombre implica, una prdida rpida
y progresiva de la funcin renal, generalmente caracterizada por la oliguria, una
produccin disminuida de la orina, (cuantificada como menos de 400 ml por da en
adultos,1 menos de 0,5 mL/kg/h en nios, o menos de 1 mL/kg/h en infantes),
desequilibrios del agua y de los fluidos corporales, y desorden electroltico. Una
causa subyacente debe ser identificada para detener el progreso, y la dilisis
puede ser necesaria durante el tiempo requerido para tratar estas causas
fundamentales.
La insuficiencia renal crnica (IRC) es la condicin que se produce por el dao
permanente e irreversible de la funcin de los riones. A nivel mundial, las causas
ms frecuentes (pero no las nicas) de Enfermedad Renal Crnica son: la
diabetes, la hipertensin, las enfermedades obstructivas de las vas urinarias
(como clculos, tumores, etc.).
La insuficiencia renal crnica puede resultar de la complicacin de una gran
cantidad de enfermedades del rin, tales como nefropata por IgA (enfermedad
de Berger), enfermedades inflamatorias de los riones (llamadas en conjunto
167

glomerulonefritis), piel nefritis crnica y retencin urinaria, y el uso de
medicamentos txicos para el rin (especialmente medios de contraste y algunos
antibiticos). La insuficiencia renal terminales la ltima consecuencia, en la cual
generalmente la dilisis se requiere hasta que se encuentre un donante para un
trasplante renal.
En la mayora de los casos, la funcin renal se deteriora lentamente a lo largo de
varios aos y presenta inicialmente pocos sntomas evidentes, a pesar de estar
relacionada con anemia y altos niveles de toxinas en sangre. Cuando el paciente
se siente mal, generalmente la enfermedad est muy avanzada y la dilisis es
necesaria.
Cualquier persona puede sufrir de enfermedad renal, pero los de ms alto riesgo
son los diabticos, los hipertensos y los familiares de personas que sufren de
enfermedad renal. Como la enfermedad renal no siempre producen sntomas
visibles, las personas en riesgo que mencionamos antes deben hacerse estudios
para detectar la enfermedad, los bsicos son: Creatinina y filtracin glomerular.
Si se detecta la enfermedad en fase temprana puede reducirse la velocidad con la
que el dao progresa, retrasando la necesidad de iniciar las terapias de reemplazo
de la funcin renal y preparando mejor al paciente para cuando sea necesario su
inicio. Las terapias de reemplazo renal son la hemodilisis, la dilisis peritoneal, y
el trasplante renal.
Insuficiencia renal aguda-sobre-crnica
La insuficiencia renal aguda puede estar presente encima de la insuficiencia renal
crnica. Esto se llama insuficiencia renal aguda-sobre-crnica La parte aguda
puede ser reversible y el objetivo del tratamiento, como en ARF, es retornar al
paciente a su funcin renal bsica, que es tpicamente medida por la creatinina del
suero. Tanto el AoCRF, como el ARF, pueden ser difciles de distinguir de la
insuficiencia renal crnica si el paciente no ha sido seguido por un mdico y no
hay disponible un trabajo de base (es decir, muestras anteriores de sangre), para
comparacin.
168

Enfermedad renal terminal
El estado en el cual hay insuficiencia renal total o casi total y permanente se llama
enfermedad renal terminal. Las personas con esta clase de enfermedad deben
someterse, para conservar la vida, a hemodilisis, dilisis o a un trasplante.
En los Estados Unidos, cerca de 80,000 personas reciben el diagnstico de
insuficiencia renal cada ao. Se trata de una afeccin grave en la cual los riones
dejan de eliminar los desechos del organismo. La insuficiencia renal es la etapa
final del deterioro lento de los riones, que es un proceso conocido como
nefropata.
La diabetes es la causa ms frecuente de insuficiencia renal, y constituye ms del
40 por ciento de los casos nuevos. Incluso cuando los medicamentos y la dieta
pueden controlar la diabetes, la enfermedad puede conducir a nefropata e
insuficiencia renal. La mayora de los diabticos no desarrollan una nefropata lo
suficientemente grave como para causar insuficiencia renal. Hay cerca de 16
millones de diabticos en los Estados Unidos y de ellos, unos 100.000 padecen
insuficiencia renal como consecuencia de la diabetes.
Las personas con insuficiencia renal tienen que someterse a dilisis pero no en
todas las ocasiones. Este proceso reemplaza algunas de las funciones de filtracin
de los riones, o a un trasplante para recibir el rin de un donante sano. La
mayora de los ciudadanos estadounidenses que presentan insuficiencia renal
pueden recibir atencin mdica financiada por el gobierno federal. En 1997 el
gobierno federal de Estados Unidos gast cerca de $11.800 millones de dlares
en la atencin de pacientes con insuficiencia renal.
Los estadounidenses de raza negra, los aborgenes estadounidenses, y los
descendientes de hispanoamericanos sufren diabetes, nefropata e insuficiencia
renal en una proporcin superior al promedio. Los cientficos no han podido
explicar este fenmeno ni pueden explicar totalmente la interaccin de factores
que conducen a la nefropata diabtica. Entre estos factores estn la herencia, la
dieta y otras afecciones, como la hipertensin arterial. Se ha observado que la
hipertensin arterial, y las altas concentraciones de glucosa en la sangre,
aumentan el riesgo de que una persona diabtica termine sufriendo insuficiencia
renal.
Una causa tpica de insuficiencia renal en los nios es el Sndrome urmico
hemoltico (SUH), una enfermedad causada por la bacteria Escherichia coli
169

O157:H7(ECEH o Escherichia coli entero hemorrgica) que puede ocasionar la
muerte o dejar daos renales, neurolgicos o hipertensin arterial
Las determinaciones que se analizan para determinar la funcin renal son la
creatinina, la urea y el cido rico.
CREATININA
Hombres adultos
0,7 1,3 mg/dl.
Mujeres adultas:
0,5 1,2 mg/dl.
Nios pequeos
0,2 1 mg/dl.
Los valores ms altos de 4 mg/dl. Se deben a un fallo renal importante.
UREA
La urea aparte de indicar la funcin renal, tambin su valor puede estar alterado
en alteraciones del hgado y en la deshidratacin.
Los niveles ms altos de 100 mg/dl. Se deben a un fallo renal importante.
170
adultos
7- 20 mg/dl.
Nios pequeos
5- 18 mg/dl.

CIDO RICO
Sobre todo sirve para hacer un diagnstico de gota. Pero tambin es til para
evaluar otro tipo de enfermedades.
Hombres adultos: 4 8,5 mg/dl.
Mujeres adultas: 2,5 7,5 mg/dl.
Nios: 2,5 5 mg/dl.
Los valores ms altos de 12 mg/dl. se consideran altos (hiperuricemia).
Pueden modificar los valores de cido rico y no ser por gota ciertas situaciones:
Estrs.
La utilizacin de contrastes radiolgicos.
Ciertos productos y medicamentos: cafena, alcohol, teofilinas
Pueden disminuir los niveles de c. rico: aspirina, corticoides, hormonas
femeninas.
3. MATERIALES
PARA EXAMEN DE UREA
171
pipetas serolgicas
micro pipetas
puntillas de micro pipetas
bulbos
tubos de ensayo
gradilla
bao mara a 37c
Espectrofotmetro y aditamentos
Calculadora, lpiz y marcador indeleble
Papel absorbente
Insertos del reactivo

DESARROLLO DE LA PRCTICA
Medir la muestra de orina utilizando la probeta de 1000ml y anotar el

volumen recibido de orina.
Tomar una olicuota de 5 ml en un tubo de ensayo para la determinacin de
urea en la sangre y la orina
Incubar en el bao maria los tiempos estimados.
Leer absorbancia en el espectrofotmetro contra blanco de reactivos.
Realizar los clculos para la determinacin de urea en ambas muestras.
Interpretar los resultados de acuerdo con los valores normales de
referencia.
PARA EXAMEN DE CREATININA
Pipetas automticas
Puntas para micropipetas
Recipiente para la muestra de orina de 24 horas
Probeta de 1000 ml
Gradilla
Tubos de ensayo 13 x 100
Equipo para la determinacin de creatinina
Equipo: centrifuga clnica
Bao mara
Espectrofotmetro
Cronometro
Calculadora
DESARROLLO DE LA PRCTICA
172
Tomar el peso y la talla del paciente, con esto calcular en el monograma

para la superficie corporal
Tomar muestra de sangre en ayunas del paciente
Determinar la creatinina en sangre o si se solicita la depuracin de
creatinina se determinara tambin en 24 horas para lo cual se deben seguir
las indicaciones de dilucin de la orina.
Realizar clculos para determinar la concentracin de creatinina en suero o
plasma

El examen general de sangre es una prueba de gran importancia para el clnico y
para el paciente mismo.
6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES
la muestra de la sangre son de suma importancia para un diagnostico
Conocimos que presencia de urea y creatinina son importante para el
funcionamiento renal
1.- Dnde se encuentra presente la urea?
Se encuentra en la orina y en la materia fecal.
2.- Cul es la frmula de la urea?
CO (NH2)2
3.- Qu es la creatinina?
Es una sustancia toxica que liberan los riones
4.- Para qu es til la creatinina?
Es un nutriente para los msculos
173
PRACTICA N22
TEMA: IDENTIFICACION DE
REACTIVO DE BENEDICT
GLUCOSA EN ORINA POR MEDIO DE
1. OBJETIVOS
Aprender a medir la glucosa en orina por medio de reactivo de benedict.
Saber dar un diagnstico acertado leyendo los niveles de glucosa en la
orina
2. MARCO TEORICO
El trmino melituria se emplea para designar la presencia de una cantidad
anormal de azcar en la orina. La glucosa (dextrosa) es el azcar que con mayor
frecuencia se encuentra en la orina y en tal caso se habla de glucosuria. Otros
azucares que accidentalmente tambin puede encontrarse en la orina son
levulosa (levulosuria), la lactosa (lactosuria) la galactosa (galactosuria), la pentosa
(pentosuria), etc. Puesto que no todas las melituria son glucosurias, la
identificacin de azcar existente en la orina es con frecuencia un problema de
importancia clnica.
En la orina de sujetos normales se encuentran huellas de glucosa y otros azucares
en cantidad demasiado escasa para que su presencia puede ser revelada por los
reactivos ordinarios.
Son necesarias las reacciones especiales para identificar los distintos azucares
que pueden presentarse en la orina.
En la actualidad, se practican tres tipos de exmenes de orina: anlisis de orina
por tira hmeda, empleado generalmente por los mdicos en sus consultorios y
por los pacientes en sus casas; tamizaje de anlisis hmedo de la orina,
comnmente llamado anlisis bsico o rutinario de orina; y citodiagnstico de la
orina, que es una evaluacin citolgica especializada del sedimento urinario que
correlaciona con los anlisis realizados por medio de la tira reactiva. El anlisis de
orina realizado con la tira hmeda es un ensayo de primera etapa para la
deteccin y monitoreo de pacientes con anormalidades qumicas.
El anlisis de orina hmedo o rutinario, proporciona, a costos razonables, un
tamizaje adecuado para la deteccin de anormalidades qumicas y morfolgicas
presentes
en
la
orina.
La Glucosa es una sustancia reductora, la cual reduce al sulfato cprico ( color
azul), de la solucin de Benedict, a xido cprico (color rojo) que es insoluble.
174

3. MATERIALES:
Reactivo de Benedict.
Muestra de orina
Pipetas
Mechero
Pinzas
Tubos
Gradilla
7. Agregar 1.5 de muestra de orina
8. Con una pipeta depositar 1mL de solucin de Benedict en un tubo de
ensayo.
9. mezclar completamente.
10. Hervir durante 2 minutos.
11. Dejar enfriar la muestra a temperatura ambiente en caso de ser necesario
12. Examinar la muestra y ver si existe algn cambio de color o precipitado.
Resultados.
Color
Resultado
Azul
Verde
Verde con precipitado amarillo
Desde amarillo hasta verde oscuro
Castao
Desde anaranjado hasta rojo ladrillo
Negativo
Huellas
+
++
+++
++++
Concentracin
mmol/L*
0
14
28
56
83
111 ms
5. DATOS/OBSERVACIONES:
El examen general de orina (EGO) es una prueba de gran importancia para el
clnico y para el paciente mismo.
El uroanlisis es algo ms que la simple observacin del sedimento, es la
aplicacin de todos nuestros conocimientos y el empleo de todos nuestros
recursos dentro del laboratorio para proporcionar al mdico y al paciente
resultados de y con calidad.
175

6. GRAFICOS:
7. CONCLUSIONES:
la muestra de la orina son de suma importancia.
Los alumnos estn capacitados para medir la glucosa en orina por este
mtodo.
Adems aprendimos a cmo elaborar correctamente un diagnstico sobre
anlisis en la orina y detectar los niveles de glucosa.
Conocimos que la glucosa en orina se denomina glucosuria.
1.- Que identifica el mtodo de reactivo benedict?
Identifica los azucares reductores en especial la glucosa
2.- De que consta el reactivo Benedict?
Consta de:
Sulfato cprico
Citrato de sodio
Carbonato anhdrido de sodio.
176

3.- Cuantos tipos de exmenes de orina se realiza en la actualidad?
Anlisis de orina por tira hmeda,
Anlisis bsico o rutinario de orina;
Citodiagnstico de la orina,
4.- Que se encuentra en la orina de sujetos normales?

Se encuentra huellas de glucosa y otros azucares en cantidad demasiado
escasa.
5.- Cul es el mayor azcar con frecuencia en la orina?

La glucosa
177
PRACTICA N23
TEMA: IDENTIFICACION DE ALBUMINA POR METODO CUALITATIVO CON
REACTIVO DE ROBERTH
1. OBJETIVOS
Aprender a determinar albumina en orina por medio de cualitativo
Interpretar los niveles de albumina en la orina
2. MARCO TEORICO
Las protenas, especialmente la albumina y las globulinas, son los ms
importantes componentes orgnicos de la orina. La cantidad de albumina suele
ser mayor que la de globulinas y aunque el termino proteinuria sea ms exacto
que el de albuminuria, esta ltima designacin se aplica para indicar la presencia
en la orina de sustancias pertenecientes al grupo de las protenas.
La orina normal contiene una reducidsima cantidad de protenas, cantidad
demasiado pequea para su presencia puede ser revelada por los reactivos
habitualmente usados.Algunas veces, cuando el cuerpo produce demasiados
anticuerpos, el nivel de las cadenas ligeras tambin se eleva. Estas protenas son
relativamente pequeas, son eliminadas por los riones y van a la orina.
El mdico tambin puede ordenar este examen:
Para diagnosticar afecciones mdicas que lleven a que se presente

protena en la orina.
Si usted tiene mucha protena en la orina.
Si tiene signos de mieloma mltiple.
Un resultado anormal tambin puede deberse a:
Amiloidosis
Leucemia linfoctica crnica
Linfoma
3. MATERIALES
178
Muestra de orina
Reactivo
Pipetas
Gradilla

En un tubo colocamos 1cc de orina.
Si la orina no fuese transparente, habra que filtrarla
Aadir 1cc de reactivo
Dejamos reposar durante unos minutos
Procedemos a la lectura.: si no se produce enturbiamiento no hay albumina y por
lo tanto la reaccin es negativa.
Todo enturbiamiento indica presencia de albumina. El grado de turbiedad esta en
relacin con la cantidad de albumina presente.
Para investigar la presencia de albumina, la orina debe de ser transparente, si se
quiere que la reaccin sea sensible a pequeas cantidades de dicha sustancia.
Esto se consigue por filtracin o centrifugacin.
6. GRAFICOS
179

7. CONCLUSIONES
la muestra de la orina son de suma importancia para un diagnostico
Conocimos que presencia de albumina en orina se denomina albuminuria
1.- Que es la albumina?
Es una protena que se encuentra en gran cantidad en el plasma sanguneo y
es producida por el hgado.
2.- Cul es la concentracin normal de albumina en la sangre?

Oscilan entre 3,5 y 5,0 gramos por decilitro
3.- Qu produce el nivel alto de albumina en la sangre?

Falta de nutricin
Deshidratacin
4.- Cundo se reduce la albumina?

Se reduce durante el embarazo
5.- Cundo la albumina pasa a la orina?

Cuando los riones no tienen un buen funcionamiento.
180
PRACTICA N24
TEMA: PRUEBAS DE UREA- CREATININA
1. OBJETIVOS
Conocer la importancia la funcin renal para detectar las disfunciones del
rin y otras alteraciones.
Relacionar todas estas pruebas que se realizan en el laboratorio para
aportar en buen diagnostico
2. MARCO TEORICO
La insuficiencia renal o fallo renal se produce cuando los riones no son capaces
de filtrar las toxinas y otras sustancias de desecho de la sangre adecuadamente.
Fisiolgicamente, la insuficiencia renal se describe como una disminucin en el
ndice de filtrado glomerular, lo que se manifiesta en una presencia elevada de
creatinina en el suero.
Algunos problemas de los riones ocurren rpidamente, como el caso un
accidente en el que la prdida importante de sangre puede causar insuficiencia
renal repentina, o algunos medicamentos o sustancias venenosas que pueden
hacer que los riones dejen de funcionar correctamente. Esta bajada repentina de
la funcin renal se llama insuficiencia renal aguda.
La insuficiencia renal aguda (IRA) es, como su nombre implica, una prdida rpida
y progresiva de la funcin renal, generalmente caracterizada por la oliguria, una
produccin disminuida de la orina, (cuantificada como menos de 400 ml por da en
adultos,1 menos de 0,5 mL/kg/h en nios, o menos de 1 mL/kg/h en infantes),
desequilibrios del agua y de los fluidos corporales, y desorden electroltico. Una
causa subyacente debe ser identificada para detener el progreso, y la dilisis
puede ser necesaria durante el tiempo requerido para tratar estas causas
fundamentales.
La insuficiencia renal crnica (IRC) es la condicin que se produce por el dao
permanente e irreversible de la funcin de los riones. A nivel mundial, las causas
ms frecuentes (pero no las nicas) de Enfermedad Renal Crnica son: la
diabetes, la hipertensin, las enfermedades obstructivas de las vas urinarias
(como clculos, tumores, etc.).
La insuficiencia renal crnica puede resultar de la complicacin de una gran
cantidad de enfermedades del rin, tales como nefropata por IgA (enfermedad
de Berger), enfermedades inflamatorias de los riones (llamadas en conjunto
181

glomerulonefritis), piel nefritis crnica y retencin urinaria, y el uso de
medicamentos txicos para el rin (especialmente medios de contraste y algunos
antibiticos). La insuficiencia renal terminales la ltima consecuencia, en la cual
generalmente la dilisis se requiere hasta que se encuentre un donante para un
trasplante renal.
En la mayora de los casos, la funcin renal se deteriora lentamente a lo largo de
varios aos y presenta inicialmente pocos sntomas evidentes, a pesar de estar
relacionada con anemia y altos niveles de toxinas en sangre. Cuando el paciente
se siente mal, generalmente la enfermedad est muy avanzada y la dilisis es
necesaria.
Cualquier persona puede sufrir de enfermedad renal, pero los de ms alto riesgo
son los diabticos, los hipertensos y los familiares de personas que sufren de
enfermedad renal. Como la enfermedad renal no siempre producen sntomas
visibles, las personas en riesgo que mencionamos antes deben hacerse estudios
para detectar la enfermedad, los bsicos son: Creatinina y filtracin glomerular.
Si se detecta la enfermedad en fase temprana puede reducirse la velocidad con la
que el dao progresa, retrasando la necesidad de iniciar las terapias de reemplazo
de la funcin renal y preparando mejor al paciente para cuando sea necesario su
inicio. Las terapias de reemplazo renal son la hemodilisis, la dilisis peritoneal, y
el trasplante renal.
Insuficiencia renal aguda-sobre-crnica
La insuficiencia renal aguda puede estar presente encima de la insuficiencia renal
crnica. Esto se llama insuficiencia renal aguda-sobre-crnica La parte aguda
puede ser reversible y el objetivo del tratamiento, como en ARF, es retornar al
paciente a su funcin renal bsica, que es tpicamente medida por la creatinina del
suero. Tanto el AoCRF, como el ARF, pueden ser difciles de distinguir de la
insuficiencia renal crnica si el paciente no ha sido seguido por un mdico y no
hay disponible un trabajo de base (es decir, muestras anteriores de sangre), para
comparacin.
182

Enfermedad renal terminal
El estado en el cual hay insuficiencia renal total o casi total y permanente se llama
enfermedad renal terminal. Las personas con esta clase de enfermedad deben
someterse, para conservar la vida, a hemodilisis, dilisis o a un trasplante.
n los Estados Unidos, cerca de 80,000 personas reciben el diagnstico de
insuficiencia renal cada ao. Se trata de una afeccin grave en la cual los riones
dejan de eliminar los desechos del organismo. La insuficiencia renal es la etapa
final del deterioro lento de los riones, que es un proceso conocido como
nefropata.
La diabetes es la causa ms frecuente de insuficiencia renal, y constituye ms del

40 por ciento de los casos nuevos. Incluso cuando los medicamentos y la dieta
pueden controlar la diabetes, la enfermedad puede conducir a nefropata e
insuficiencia renal. La mayora de los diabticos no desarrollan una nefropata lo
suficientemente grave como para causar insuficiencia renal. Hay cerca de 16
millones de diabticos en los Estados Unidos y de ellos, unos 100.000 padecen
insuficiencia renal como consecuencia de la diabetes.
Las personas con insuficiencia renal tienen que someterse a dilisis pero no en
todas las ocasiones. Este proceso reemplaza algunas de las funciones de filtracin
de los riones, o a un trasplante para recibir el rin de un donante sano. La
mayora de los ciudadanos estadounidenses que presentan insuficiencia renal
pueden recibir atencin mdica financiada por el gobierno federal. En 1997 el
gobierno federal de Estados Unidos gast cerca de $11.800 millones de dlares
en la atencin de pacientes con insuficiencia renal.
Los estadounidenses de raza negra, los aborgenes estadounidenses, y los
descendientes de hispanoamericanos sufren diabetes, nefropata e insuficiencia
renal en una proporcin superior al promedio. Los cientficos no han podido
explicar este fenmeno ni pueden explicar totalmente la interaccin de factores
que conducen a la nefropata diabtica. Entre estos factores estn la herencia, la
dieta y otras afecciones, como la hipertensin arterial. Se ha observado que la
hipertensin arterial, y las altas concentraciones de glucosa en la sangre,
aumentan el riesgo de que una persona diabtica termine sufriendo insuficiencia
renal.
183

Una causa tpica de insuficiencia renal en los nios es el Sndrome urmico
hemoltico (SUH), una enfermedad causada por la bacteria Escherichia coli
O157:H7(ECEH o Escherichia coli entero hemorrgica) que puede ocasionar la
muerte o dejar daos renales, neurolgicos o hipertensin arterial
Las determinaciones que se analizan para determinar la funcin renal son la
creatinina, la urea y el cido rico.
CREATININA
Hombres adultos: 0,7 1,3 mg/dl.
Nios pequeos: 0,2 1 mg/dl.
Los valores ms altos de 4 mg/dl. Se deben a un fallo renal importante.
UREA
La urea aparte de indicar la funcin renal, tambin su valor puede estar alterado
en alteraciones del hgado y en la deshidratacin.
Los niveles ms altos de 100 mg/dl. Se deben a un fallo renal importante.
Adultos: 7 20 mg/dl.
Nios: 5 18 mg/dl.
CIDO RICO
Sobre todo sirve para hacer un diagnstico de gota. Pero tambin es til para
evaluar otro tipo de enfermedades.
Hombres adultos: 4 8,5 mg/dl.
Nios: 2,5 5 mg/dl.
Los valores ms altos de 12 mg/dl. se consideran altos (hiperuricemia).
Pueden modificar los valores de cido rico y no ser por gota ciertas situaciones:
184

Estrs.
La utilizacin de contrastes radiolgicos.
Ciertos productos y medicamentos: cafena, alcohol, teofilinas
Pueden disminuir los niveles de cido rico: aspirina, corticoides, hormonas
femeninas.
3. MATERIALES DE UREA
pipetas serolgicas
micro pipetas
puntillas de micro pipetas
bulbos
tubos de ensayo
gradilla
bao mara a 37c
Espectrofotmetro y aditamentos
Calculadora, lpiz y marcador indeleble
Papel absorbente
Insertos del reactivo
Medir la muestra de orina utilizando la probeta de 1000ml y anotar el

volumen recibido de orina.
Tomar una olicuota de 5 ml en un tubo de ensayo para la determinacin de
urea en la sangre y la orina
Incubar en el bao maria los tiempos estimados.
Leer absorbancia en el espectrofotmetro contra blanco de reactivos.
Realizar los clculos para la determinacin de urea en ambas muestras.
Interpretar los resultados de acuerdo con los valores normales de
referencia.
5.- MATERIALES DE CREATININA
185
Pipetas automticas
Puntas para micropipetas
Recipiente para la muestra de orina de 24 horas
Probeta de 1000 ml
Gradilla
Tubos de ensayo 13 x 100

Equipo para la determinacin de creatinina
Equipo: centrifuga clnica
Bao maria
Espectrofotmetro
Cronometro
Calculadora
6.-DESARROLLO DE LA PRCTICA
Tomar el peso y la talla del paciente, con esto calcular en el monograma

para la superficie corporal
Tomar muestra de sangre en ayunas del paciente
Determinar la creatinina en sangre o si se solicita la depuracin de
creatinina se determinara tambin en 24 horas para lo cual se deben seguir
las indicaciones de dilucin de la orina.
Realizar clculos para determinar la concentracin de creatinina en suero o
plasma
7.- DATOS/OBSERVACIONES
El examen general de sangre es una prueba de gran importancia para el clnico y
para el paciente mismo.
8. GRAFICOS
186

9. CONCLUSIONES
la muestra de la sangre son de suma importancia para un diagnostico
Conocimos que presencia de urea y creatinina son importante para el
funcionamiento renal.
10.- PREGUNTAS Y RESPUESTAS
1.- Dnde se encuentra presente la urea?

Se encuentra en la orina y en la materia fecal.
2.- Cul es la frmula de la urea?

CO(NH2)2
3.-Qu es la creatinina?
Es una sustancia toxica que liberan los riones
4.- Para qu es til la creatinina?
Es un nutriente para los msculos
5.- Cules son los sntomas cuando la creatinina es alta?

Color de la orina alta
Dolor en la espalda baja
187
SANGRE
1.-OBJETIVOS:
INTERPRETACIN DEL HEMOGRAMA COMPLETO Y SU APLICACIN
PRCTICA.
2.-FUNDAMENTO Y GENERALIDADES:
El hemograma completo (por su sigla en ingls es CBC) es la prueba de
laboratorio en la se van a cuantificar y evaluar diferentes grupos celulares, las
glbulos rojos (eritrocitos), los glbulos blancos (leucocitos), las plaquetas, el
contenido de hemoglobina, y otros parmetros relacionados con su cantidad,
forma y contenido.
LA SANGRE
Es un tejido circulante especializado, compuesto de clulas suspendidas en una
sustancia intercelular lquida. A diferencia de otros tejidos, las clulas no
conservan una relacin espacial permanente entre s, sino que se mueven
continuamente de un lugar a otro.
La circulacin de la sangre a travs del cuerpo proporciona un medio ambiente
constante, en el que todas las clulas y tejidos realizan sus diversas funciones. De
esta forma, la funcin principal de la sangre es mantener la homeostasis.
En general, el volumen de sangre total para la mayora de los mamferos es
aproximadamente el 7 a 8 % del PV.
La sustancia intercelular, plasma, comprende el 46 al 65% del volumen total y los
componentes celulares constituyen del 35 al 55%.
Las clulas presentes pertenecen a 3 tipos principales: eritrocitos, leucocitos y
plaquetas.
Cuando se centrifuga la sangre, los glbulos rojos ms densos constituyen la parte
inferior del hematocrito, formando los leucocitos una capa blanca en la parte
superior (capa flogstica), las plaquetas se depositan en la superficie ms alta de
la capa de leucocitos.
La estructura de la clula hemtica se estudia por diversos mtodos, pero el ms
corriente es observar las extensiones teidas de sangre desecada (frotis
sanguneo).
188
ERITROCITO
Son elementos discoidales, bicncavos, de 7,5 um de dimetro, anucleados. El
soporte principal en el mantenimiento de la forma celular, se relaciona con la
constitucin molecular del complejo coloidal homogneo del que est formado el
eritrocito.
La elasticidad se debe a esta matriz coloidal, que permite que el eritrocito cambie
de forma cuando circula por los vasos sanguneos, doble los ngulos y se deslice
a travs de los pequeos capilares sin que se desgarre ni rompa la membrana
celular.
Ms de la mitad (60%) del volumen del glbulo rojo consiste en agua y el resto
(40%) est formado por sustancias slidas. Casi el 90 % del material slido es
protena conjugada compuesta de globina y del pigmento hemo, su combinacin
da lugar al color rojo y por esta razn la hemoglobina se considera como un
pigmento. El resto de la fraccin slida est constituida por una pequea cantidad
de un complejo lpido proteico.
La membrana celular es permeable al agua, sodio, cloruros y algunos
polisacridos, pero es impermeable a la hemoglobina. En consecuencia,
laosmolaridad del eritrocito est determinada por la hemoglobina y, puesto que la
osmolaridad del plasma equivale a la del glbulo rojo, las clulas y el plasma son
isotnicos entre s, sin que tengan tendencia a la absorcin de agua. Sin embargo,
si los glbulos rojos se suspenden en una solucin con osmolaridad menor q la del
plasma (hipotnica) las clulas se hinchan.
Si la cantidad de agua que penetra en la clula excede de un volumen crtico, la
clula se rompe, a lo que llamamos hemlisis.
Los eritrocitos viven aproximadamente 120 das y despus se eliminan de la
circulacin antes de desintegrarse por completo. Los glbulos rojos viejos son
fagocitados en bazo, mdula sea e hgado por clulas fagocitarias. El hierro de la
hemoglobina se recupera y se usa para la formacin de nuevos eritrocitos. La
parte porfirnica del pigmento se utiliza para formar bilirrubina que es un pigmento
biliar.
Las clulas y los tejidos del organismo dependen de los eritrocitos para el aporte
de 02, la ausencia de un ncleo, la forma y el contenido de hemoglobina,
contribuyen a hacer al eritrocito ms eficaz en el transporte de 02.
189

LEUCOCITOS
Son clulas tpicas que poseen ncleo, citoplasma y otros organelos celulares, y
todos son mviles en cierto grado. Los glbulos blancos abandonan la sangre y se
desplazan al interior de los tejidos para realizar sus funciones.
Los Glbulos blancos estn encargados de la defensa del organismo.
El nmero total de leucocitos es bastante menor que de eritrocitos y varia en las
diferentes especies animales.
Pueden presentarse grandes fluctuaciones en el recuento de leucocitos, como
consecuencia de cualquier tipo de estrs, ejercicio, alimentacin, edad, raza y una
gran variedad de otras condiciones. Por tanto, los recuentos totales de leucocitos,
para que sean significativos clnicamente, deben desviarse considerablemente de
los valores normales al efecto de que un clnico pueda valorar un proceso de
enfermedad.
Los leucocitos se clasifican en dos grupos principales, tomando como base la
presencia o ausencia de grnulos citoplasmticos especficos. Los que contienen
grnulos citoplasmticos son los granulocitos y los que carecen de ellos son los
agranulocitos.
GRANULOCITOS:
Los tres tipos de granulocitos se designan de acuerdo con la reaccin tintorial de
sus grnulos especficos:
Los eosinfilos tienen grnulos acidfilos claros (se tien de rojo con la
eosina)
Los basfilos poseen grnulos basfilos (prpura) marcados
Los neutrfilos tienen grnulos que no son ni acidfilos ni basfilos
Frecuentemente, los neutrfilos, reciben el nombre de leucocitos
polimorfonucleares
(PMN), como consecuencia de la variada configuracin de los ncleos.
NEUTRFILO
El neutrfilo maduro es de aproximadamente 10-12 um de dimetro, tiene
granulaciones finas en el citoplasma y un ncleo lobulado. La cromatina nuclear es
densa, aglomerada y en grumo. Las bandas de cromatina finas y definidas entre
los glbulos son frecuentes en los neutrfilos de los rumiantes. Las clulas viejas
tienen ms lbulos nucleares que las jvenes. Por ello, los neutrfilos con ncleos
en forma de V, U o de S sin constricciones se consideran como inmaduras y se
190

designan como clulas en bandas o asegmentadas. Enfermedades bacterianas
determinan generalmente un incremento en el nmero de neutrfilos circulantes.
Es importante anotar el nmero de estas clulas al hacer el recuento diferencial ya
que es un indicio de que la mdula sea est liberando nuevas clulas para
combatir la infeccin. Clnicamente, este incremento de clulas jvenes recibe el
nombre de desviacin a la izquierda y es un signo pronstico favorable.
Por el contrario, una cantidad anormal de neutrfilos con hipersegmentacin
nuclear se conoce como desviacin a la derecha y puede ser un signo de
pronstico desfavorable o un sntoma de infeccin crnica.
La funcin de los Neutrfilos es fagocitar y destruir bacterias mediante el
contenido de sus diversos grnulos.
EOSINFILO
Los eosinfilos tienen un tamao similar al de los neutrfilos (12um) y se
encuentran en menor cantidad. El citoplasma es ligeramente basfilo, pero en
general no podemos observarlo debido a la presencia de gran cantidad de
granulaciones gruesas que lo cubren totalmente, dejando libre el ncleo. ste
presenta en general dos lbulos. Los eosinfilos tienen actividad fagoctica.
Modulan y regulan las reacciones alrgicas.
Los eosinfilos interaccionan con otras clulas por la expresin de mltiples
receptores en su superficie.
Los eosinfilos son clulas fagocitarias que demuestran especial afinidad por los
complejos antgeno-anticuerpo, por lo que la mayora de los eosinfilos son
atrados por quimiotaxis. Tambin los eosinfilos pueden ser atrados por
sustancias liberadas de los basfilos como la histamina.
Los eosinfilos pueden regular la respuesta alrgica y las reacciones de
hipersensibilidad mediante la neutralizacin de la histamina por la histaminasa y a
su vez producir un factor inhibidor derivado de los eosinfilos para inhibir la
degranulacin de las clulas cebadas o de los basfilos, que contienen sustancias
vasoactivas.
BASFILO
El ltimo tipo de leucocito polimorfonuclear es el basfilo, es el menos abundante,
razn por la cual es difcil encontrarlos en los extendidos. Son algo ms pequeos
que los anteriores, con un dimetro de 8-10 um. Su citoplasma es acidfilo y est
cubiertopor granulaciones grandes, irregulares, de color negro purpreo que
cubren tambin el ncleo. Por esta causa no es posible observar claramente su
forma.
191

Poseen grnulos de heparina e histamina. Estas sustancias son mediadoras
qumicas que modulan la inflamacin. Tienen funcin en estados alrgicos en la
hipersensibilidad retardada.
La liberacin masiva del contenido de estos grnulos puede causar shock
anafilctico que puede llegar a la muerte del animal si no es controlado.
AGRANULOCITOS:
LINFOCITO
Son leucocitos agranulocitos que juegan un rol fundamental en la respuesta
inmune.
Los linfocitos son clulas de alta jerarqua en el sistema inmune, principalmente
encargadas de la inmunidad especfica o adquirida.
Estas clulas se localizan fundamentalmente en los rganos linfoides. Tienen
receptores para antgenos especficos y, por tanto, pueden reconocer y responder
al que se les presente. Por ltimo, los linfocitos se encargan de la produccin de
anticuerpos y de la destruccin de clulas anormales. Estas respuestas ocurren en
el interior de los rganos linfoides, los cuales, para tal propsito, deben suministrar
un entorno que permita la interaccin eficiente entre linfocitos, macrfagos y
antgeno extrao.
Se pueden encontrar de distintos tamaos, grandes, medianos y pequeos (de 6 a
9um).
Los linfocitos pequeos son los que se encuentran ms comnmente y su
dimetro es aproximadamente igual o ligeramente mayor al de un hemate. El
ncleo es redondo, basfilo, puede presentar agregados de cromatina y una
pequea escotadura en su contorno.
El citoplasma se limita a una estrecha franja que rodea al ncleo de color
azul-celeste; en general no se observan granulaciones en l. Aunque
estructuralmente iguales, mediante marcadores citoqumicos es posible distinguir
3 tipos de linfocitos: linfocitos B, T y nulos.
Segn la variedad de linfocito de que se trate su vida media celular puede variar
entre unos pocos das hasta meses y aos. Su duracin como clulas libres del
tejido conjuntivo es en general de pocos das.
Cumplen un rol fundamental en la respuesta inmune. Relaciones complejas entre
linfocitos B, linfocitos T y clulas presentadoras de antgeno generan las
respuestas de defensa inmune humoral y celular. A su vez, los linfocitos nulos
participan en los mecanismos de defensa dando origen a clulas asesinas.
192

MONOCITO
El monocito es el mayor de todos los leucocitos, de 12 a 20 um de dimetro.
Hay dificultad considerable en la identificacin de algunos monocitos, porque son
formas de transicin entre los linfocitos pequeos y grandes, los que en conjunto
se parecen entre s. Esta afirmacin es especialmente cierta cuando se examinan
extensiones de sangre de ganado vacuno.
La exposicin que sigue se refiere a las formas ms tpicas.
El citoplasma de los monocitos es bastante ms abundante que el de los linfocitos
y es de color azul grisceo plido, con frecuencia con un aspecto granuloso. En
muchos casos hay presentes grnulos azurfilos pulverulentos. El ncleo puede
ser oval, en forma de rin o de herradura, la cromatina nuclear se tie ms
dbilmente que en el linfocito. Existe uno o ms nuclolos, pero no son visibles en
las extensiones teidas.
En el bovino son difciles de distinguir de los grandes linfocitos, ya que el ncleo
puede presentar perfiles y formas de cromatina muy diferentes. Puede ser esfrico
o espiral, con la cromatina dispersa o en grumos. Los grnulos azurfilos no son
un carcter comn de los monocitos del ganado vacuno.
En los monocitos de la oveja y de la cabra, el ncleo puede ser oval, ligeramente
deprimido e incluso lobulado en tres segmentos con la cromatina en grumos o
filamentos. El citoplasma, de color azul gris, es abundante y tiene generalmente
vacuolas agrupadas pero no son frecuentes los grnulos azurfilos.
Los monocitos viven unos tres das en la corriente sangunea y alcanzan su
capacidad funcional total cuando abandonan la circulacin migrando a travs de
los capilares para penetrar los tejidos, en donde se convierten en macrfagos y
eliminan los restos tisulares y sustancias extraas. Cualquier acumulo de
monocitos en el interior de los tejidos refleja condiciones de cronicidad.
Los monocitos son clulas con gran capacidad bactericida. Ante estmulos de
sustancias qumicas siguen a los neutrfilos en las reacciones inflamatorias. Por la
fagocitosis aumentan de tamao y pueden fijarse a los tejidos del bazo, hgado,
pulmn dando lugar
a los macrfagos tisulares que forman el sistema retculo endotelial encargado de
remover el material extrao que circula en la sangre.
193

TROMBOCITOS
Los trombocitos o plaquetas son cuerpos irregulares redondos u ovoides
pequeos, de 2 a 4 um de tamao, derivados de la porcin citoplsmica de
grandes clulas de la medula sea llamadas megacariocitos. Por lo tanto, no
contienen ncleo y puesto que pueden observarse pocos detalles con el
microscopio ptico se han denominado elementos formes en lugar de clulas.
Puesto que todas las estructuras se hallan directamente relacionadas con sus
actividades hemostticas de adherencia, coagulacin y retraccin del coagulo, es
lgico considerar a los trombocitos como clulas funcionales. El nmero total de
plaquetas vara entre 350500 mil/mm3 de sangre. Es difcil de obtener valores constantes, porque los
trombocitos tienden a aglomerarse cuando entran en contacto con la superficie del
vidrio. En consecuencia, salvo que exista una perdida grave, los recuentos totales
no son significativos. En las extensiones teidas y secas son visibles dos zonas
definidas del trombocito. La zona externa se tie de azul plido y la porcin central
aparece de prpura oscuro. Como consecuencia de su pequeo tamao y de la
tendencia a formar grumos, es difcil de ver la mayor parte de los detalles con el
microscopio ptico.
Partiendo de la exposicin anterior es evidente que cualquier alteracin en la
activacin superficial, alteracin de los orgnulos o interacciones bioqumicas
anormales pueden contribuir a que se altere la funcin tromboctica, determinando
hemorragias o trombosis. La prdida grave de trombocitos recibe el nombre de
trombocitopenia y puede ser determinada por medicamentos, deficiencias
vitamnicas y plantas venenosas, as como tambin por algunas enfermedades
autoinmunes.
Aunque el trombocito es nicamente un pequeo fragmento citoplsmico, juega un
papel vital en el mantenimiento de la hemostasia.
194
DEFINICIN DE HEMOGRAMA COMPLETO
El hemograma completo es la prueba de laboratorio en la que se van a cuantificar

y evaluar diferentes grupos celulares, glbulos rojos (eritrocitos), glbulos blancos
(leucocitos), los trombocitos o plaquetas, el contenido de hemoglobina y otros
parmetros relacionados con su cantidad, contenido y forma.
El hemograma es un anlisis de sangre en el que se mide en global y en
porcentajes los tres tipos bsicos de clulas que contiene la sangre, las
denominadas tres series celulares sanguneas:
Serie eritrocitaria o serie roja

Serie leucocitaria o serie blanca
Serie plaquetaria
Cada una de estas series tiene una funcin determinada, y estas funciones se
vern perturbadas si existe alguna alteracin en la cantidad o caractersticas de
las clulas que las componen.
La SERIE ROJA est compuesta por los hemates o glbulos rojos. Su funcin
primordial es transportar el oxgeno desde los pulmones (a donde llega a travs de
la respiracin) a todas las clulas y tejidos del organismo.
Los principales parmetros de la serie roja son el recuento de hemates, eritrocitos
o glbulos rojos, el valor hematocrito, la concentracin de hemoglobina, los ndices
eritrocitarios y el ndice de reticulocitos. La determinacin de todos ellos va dirigida
al diagnstico de las anemias.
NDICES ERITROCITARIOS:
195

El hematocrito mide el porcentaje de hemates en el volumen total de la
sangre.
La hemoglobina es una molcula que forma parte del hemate, y que es la
que transporta el oxgeno y el dixido de carbono; se mide su concentracin
en sangre.
Los ndices eritrocitarios proporcionan informacin sobre el tamao (VCM),
la cantidad (HCM) y la concentracin (CHCM) de hemoglobina de los
hemates; el ms usado es el VCM o volumen corpuscular medio.
Todos estos valores varan dentro de la normalidad segn la edad y el sexo.
El aumento de HEMATES se observa en casos de deshidratacin, shock y
estados de excitacin o esfuerzo fsico.
La disminucin de hemates se asocia a anemia, final de la gestacin y hemlisis.
El VALOR HEMATOCRITO hace referencia a la cantidad de eritrocitos presentes
en sangre. Su valor suele darse en porcentaje y en el caso de los bvidos oscila
entre 25 y 40%.
Las causas del aumento y disminucin del valor hematocrito son las mismas que
las de los hemates.
LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA
Est estrechamente relacionada con los otros dos parmetros, de forma que sus
variaciones obedecen a causas similares a las de los anteriores. Sus valores estn
comprendidos entre 8 y 14gr/100ml (en bovinos).
LOS NDICES ERITROCITARIOS
Son una gran ayuda en el diagnstico de determinadas anemias y de las
caractersticas de los glbulos rojos. Se contemplan el volumen corpuscular medio
y la concentracin media de hemoglobina corpuscular.
EL VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM)
Permite clasificar las anemias en normocticas, macrocticas y microcticas, en
funcin del volumen promedio que presenten los hemates circulantes, se mide en
fentolitros (FL) y se calcula segn la frmula:
VCM= hematocrito (%) / n de hemates
Su valor en bvidos oscila entre 40 y 60 fentolitros.
196

LA CONCENTRACIN MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR (CMHC)
Define la relacin entre el peso de la hemoglobina y el volumen de los glbulos
rojos, se expresa en porcentaje o en gr/100cm3. Se calcula segn la frmula:
CMCH= hemoglobina (gr/100cm3) x 100 / hematocrito (%)
LA HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM)
Expresa el peso de hemoglobina por hemate, permite, como la anterior, clasificar
las anemias en hipocrmicas, normocrmicas e hipercrmicas. Para calcularla
utilizamos la frmula:
HCM= hemoglobina (gr/100cm3) x 100 / n de hemates
Su valor oscila entre 11 y 17 picogramos (pg).
LOS RETICULOCITOS
Son eritrocitos jvenes e inmaduros, su estudio permite evaluar la capacidad de
respuesta de la mdula sea en situaciones de anemia. En condiciones normales
no aparecen en sangre perifrica o son muy escasos. Su observacin requiere
una tincin vital.
La determinacin de su ndice permite clasificar las anemias en regenerativas (hay
respuesta por parte de la mdula) y no regenerativas.
Se calcula multiplicando el porcentaje de reticulocitos por el hematocrito
observado y dividiendo por el hematocrito normal de la especie (en caso del
bovino, 32% promedio).
El resultado obtenido (contaje de reticulocitos corregido) se divide por el tiempo de
maduracin (para un hematocrito de 32%, aproximadamente 2) y obtenemos el
ndice de reticulocitos.
ndice de reticulocitos inferior a 2 indica anemia no regenerativa.
Por encima de 2 significa anemia regenerativa.
Por encima de 3 indica anemia regenerativa y sugiere hemlisis.
Se habla de anemia en bvidos cuando los glbulos rojos se encuentran por
debajo de 5 millones por ul de sangre, el valor hematocrito es inferior a 24% y la
concentracin de hemoglobina baja por debajo de 8gr/dl.
La anemia es grave cuando el recuento de hemates baja de 2,5 millones por ul y,
prcticamente, mortal cuando los glbulos rojos se sitan por debajo de 1,5
millones por ul.
197

LA SERIE BLANCA
Est formada por los leucocitos o glbulos blancos. Sus funciones principales son
la defensa del organismo ante las infecciones y la reaccin frente a sustancias
extraas.
El recuento de leucocitos tiene dos componentes. Uno es la cifra total de
leucocitos en 1
mm3 de sangre venosa; el otro, la frmula leucocitaria, mide el porcentaje de cada
tipo de leucocitos, que son: neutrfilos, monocitos, linfocitos, eosinfilos y
basfilos. El aumento del porcentaje de un tipo de leucocitos conlleva disminucin
en el porcentaje de otros.
Estos valores varan dentro de la normalidad segn la edad.
EL LEUCOGRAMA:
El leucograma incluye el recuento total de leucocitos as como su recuento
diferencial (frmula leucocitaria).
El recuento de glbulos blancos nos informa del nmero de leucocitos por ul de
sangre; en el bovino est comprendido entre 4000 y 10000/ul en los adultos y
entre 6000 y
12000/ul en los terneros.
La disminucin (leucopenia) de los leucocitos se observa en circunstancias
de estrs, en procesos vricos, estadios iniciales de enfermedades
bacterianas graves y en septicemias en fase terminal.
El incremento de los leucocitos (leucocitosis) aparece en las bacteriemias o
procesos infecciosos en general.
Valores 3 veces por encima de los valores normales pueden indicar presencia de:
Leucosis.
Linfocitos.
Son las clulas sanguneas predominantes en los bvidos, se pueden diferenciar

dos tamaos, pequeos y grandes. Su nmero oscila entre 2500 y 7500 por ul (4570% de leucocitos).
El incremento (linfocitosis) se observa por procesos autoinmunes,
inflamatorios crnicos o tumorales (leucemia linfocitaria).
La disminucin (linfopenia) aparece en situaciones de estrs e
inmunodeficiencias.
198

NEUTRFILOS
Los neutrfilos pueden ser jvenes (en banda o en cayado) y maduros
(polimorfonucleares de 2-6 lobulaciones). Su nmero en el bovino oscila entre 600
y 4000/ul (15-45% del total).
Cuando abundan las formas jvenes se dice que la curva de Arneth

(representacin grfica de la clasificacin de los neutrfilos en funcin del
nmero de lobulaciones) est desviada a la izquierda, mientras que la
ausencia de stas se califica como desplazamiento a la derecha de la curva
de Arneth.
El incremento de los neutrfilos (neutrofilia) con desvo a la izquierda nos
indica proceso inflamatorio agudo, mientras que la neutrofilia con desvo a
la derecha define un proceso crnico.
El estrs, asimismo, genera neutrofilia.

La neutropenia se asocia a procesos inflamatorios muy graves o septicemias
terminales.
EOSINFILOS
La cantidad de eosinfilos en el bovino se sita entre 0 y 24000/ul (0-20%).
Su incremento (eosinofilia) indica reacciones alrgicas o
hipersensibilidad o enfermedades parasitarias.
La disminucin (eosinopenia) no tiene significado clnico.
de
BASFILOS
Son muy escasos (0-200/ul o 0-2%). No tienen significacin clnica.
MONOCITOS
199
Su nmero en el bovino oscila entre 25 y 840/ul (2.7%)

Se observa monocitos en infecciones bacterianas, procesos fngicos
crnicos,enfermedades inmunomediadas, crisis hemolticas graves y
necrosis tisularimportante.
Los procesos inflamatorios agudos se caracterizan por leucocitosis,
neutrofilia,desvo a la izquierda de la curva de Arneth y monocitos.
Los procesos inflamatorios crnicos presentan leucocitosis y
neutrofiliamoderadas, desvo a la derecha de la curva y monocitosis.

LA SERIE PLAQUETARIA
Compuesta por plaquetas o trombocitos, se relaciona con los procesos de
coagulacin sangunea.
En el hemograma se cuantifica el nmero de plaquetas y el volumen plaquetario
medio
(VPM), que proporciona informacin sobre su tamao. El recuento de plaquetas
tambin vara con la edad.
RECUENTO DE PLAQUETAS O TROMBOCITOS
El recuento de plaquetas puede ser directo o por aproximacin teniendo en cuenta
el nmero de ellas por campo. Menos de 3-4 plaquetas por campo de inmersin
(normal de
11-25) indican trombocitopenia.
A travs de un contaje directo, menos de 100000 plaquetas por ul, indica
trombocitopenia, siempre que el frotis se haya realizado inmediatamente despus
de la extraccin.
Cuando el recuento se encuentra entre 40000 y 75000 por ul hay dificultades para
retraer el cogulo.
TIEMPO DE SANGRA
Es una prueba que se realiza en vivo y permite evaluar la funcin plaquetaria.
Para medirla hacemos una puncin con una lanceta en el morro u oreja depilada y
cada 20 segundos sacamos la gota de sangre, sin tocar el punto de incisin, con
un papel secante hasta que al retirar el papel no aparezca manchado, lo que
querr decir que la herida ha dejado de sangrar. Esto sucede entre los 2 y 5
minutos.
Los trastornos de coagulacin pueden alargar este tiempo hasta los 15-20minutos.
TIEMPO DE COAGULACIN
El tiempo de coagulacin puede apreciarse de una forma aproximada, colocando
una gota de sangre sobre un porta y atravesndola cada 30 segundos con una
aguja, hasta que en uno de los pases se fijan los primeros hilos de fibrina.
Tiempos superiores a 5 minutos indican alteracin del tiempo de coagulacin.
Otras pruebas, como el tiempo de protrombina y el tiempo parcial de
tromboplastina, permiten la evaluacin de los diferentes factores de coagulacin.
200

INTERPRETACIN DEL HEMOGRAMA PARA SU APLICACIN
PRCTICA
El hemograma es una prueba que sirve para orientar hacia el diagnstico de
diversas enfermedades que se han sospechado por la historia clnica y la
exploracin fsica.
A veces, los datos que nos da son suficientes para confirmar o descartar la
enfermedad sospechada, pero con frecuencia se necesita utilizar otras pruebas
diagnsticas que aporten ms informacin.
ANEMIA
Se define como la disminucin de la cantidad de hemoglobina de los glbulos
rojos o del nmero de glbulos rojos por unidad de volumen; o sea que se trata de
la disminucin de la concentracin de hemoglobina circulante.
Invariablemente la anemia se acompaa con un descenso del valor de hematocrito
y casi siempre del nmero de hemates.
La consecuencia directa de una anemia es la hipoxia en los tejidos por la
disminucin del oxgeno circulante tisular.
La anemia es una consecuencia de muchas enfermedades o alteraciones y no una
enfermedad en s misma se produce por una alteracin en los siguientes factores.
En el desarrollo normal intervienen factores:
a) intrnsecos u hormonales: eritropoyetina, andrgenos, TSH, T3 y T4,
glucocorticoides, ACTH, etc.
b) extrnsecos o nutricionales: hierro, cobre, cobalto, Vit B12, cido flico y
oxgeno.
Al valorar una anemia debe tenerse en cuenta todas aquellas situaciones en las
que pueda existir una alteracin de la distribucin entre volmenes plasmtico y
globular, ya que sta puede dar a falsas disminuciones de la concentracin de Hb
(falsa anemia por hemodilucin). Tal sucede con ciertas condiciones fisiolgicas,
como por ejemplo, durante la preez (anemia fisiolgica).
Debido a su frecuente asociacin a numerosos procesos patolgicos, las causas
de anemia pueden ser muy diversas, aunque su mecanismo comn es el
desequilibrio entre la formacin de hemates por la medula sea (eritropoyesis) y
su eliminacin por el sistema mononuclear fagoctico (SMF).
El descenso de la eritropoyesis se caracteriza fundamentalmente por una
alteracin cualitativa o cuantitativa de los eritroblastos y una disminucin del
201

nmero de reticulocitos en sangre perifrica (anemia arregenerativa). Por el
contrario, el aumento de eritroblastos y reticulocitos es ndice de elevada
capacidad de regeneracin medular (anemia regenerativa). Con mucho ms
frecuencia de anemia es la ferropenia (anemia ferropenia).
Tipos de anemia:
Desde el punto de vista fisiopatolgico, la anemia se puede clasificar en dos
grandes grupos:
A) anemia regenerativa
B) anemia arregenerativa
ANEMIA REGENERATIVA
Se caracteriza por una intensa regeneracin eritroblstica medular que intenta
compensar el dficit hemoglobnico perifrico.
Puede obedecer a dos causas principales:
a) hemorragia
b) hemlisis
La anemia de origen hemorrgico aparece secundariamente a una perdida
perifrica importante de sangre por rotura de un vaso sanguneo de gran i
mediano calibre (hemorragia interna muchas veces ocultas o hemorragias
externas fcilmente detectables).
En el caso de gran hemorragia con prdida abundante de sangre se produce una
anemia en la que existe disminucin simultnea del nmero de hemates y de la
cantidad d de plasma sanguneo.
Debido a ello, el hematocrito e incluso la concentracin de hemoglobina conservan
unos valores situados dentro de la normalidad y no disminuyen hasta despus de
algunas horas de haberse producido la hemorragia, es decir cuando se ha
producido la hemodilucin con que el organismo tiende a compensar la reduccin
del volumen sanguneo.
Las pequeas hemorragias pueden ser causa de anemia, pero esto sucede
cuando presentan un carcter crnico, ya que en este caso produce una
disminucin de la concentracin de hemoglobina secundaria a una prdida o
expoliacin del hierro del organismo a travs de la misma (anemia hipocrmica
ferropnica).
202

Las anemias hemolticas son las que aparecen secundariamente a la rotura de los
hemates a nivel de la microcirculacin (hemlisis intravascular) o a su excesiva
eliminacin por las clulas del SMF (hemlisis extravascular).
ANEMIA ARREGENERATIVA
Se caracteriza por la incapacidad medular de compensar el descenso de la
concentracin de hemoglobina a travs de un aumento de la eritropoyesis y puede
obedecer a dos mecanismos principales:
a) lesin de la medula madre pluripotente
b) alteracin de la maduracin eritroblstica
La anemia por lesin de la clula madre pluripotente aparece como consecuencia
de un descenso de la capacidad de auto duplicacin o diferenciacin y casi
siempre se acompaa de una alteracin simultnea de las restantes lneas
celulares sanguneas (leucocitos y plaquetas). Su forma ms comn es la que
aparece como aplasia medular (AM) o lesin secundaria a una agresin medular
por sustancias qumico orgnicas (txicos industriales, medicamentos o
radiaciones ionizantes) o por mecanismo inmune (Ac).
Las anemias por alteracin de la maduracin eritroblstica pueden clasificarse de
acuerdo con su mecanismo fisiopatolgico en 2 tipos:
a. por alteracin de la maduracin nuclear
b. por alteraciones de la maduracin citoplasmtica
Las alteraciones de la maduracin nuclear obedecen casi siempre a la carencia de
ciertos factores indispensables para la sntesis del cido desoxirribonucleico
(ADN): el cido flico y la vitamina B12.
Las anemias se clasifican en:
POR EL DIMETRO DE LOS GR (VCM)
1. Normocticas: eritrocito normal
2. Microcticas: disminucin en el volumen del eritrocito por carencias de hierro o
hemoglobina.
3. Macrocticas: aumenta el volumen y disminuye en nmero por carencia de
vitamina B12
4. Megalocticas: aumenta el volumen y disminuye en nmero por carencia de
vitamina B12 y cobre.
203

b) Por el contenido de hemoglobina (HBCM):
1. Normocrmica: coloracin normal
2. Hipocrmica: con hemoglobina disminuida
3. Policrmica: con coloraciones distintas.
c) Por el mecanismo de produccin fisiopatolgica:
1. Hemorrgica
2. Hemoltica
3. Por deficiencias de formacin
ALTERACIN DEL CUADRO LEUCOCTICO:
LEUCOPENIA
1) Una leucopenia balanceada es ocasionada por una disminucin de todos los
tipos de leucocitos.
2) De ordinario la leucopenia es causada por la reduccin de uno cualquiera de los
tipos leucocitarios, en cuyo caso recibe los nombres de:
a) Neutropenia (agranulocitosis, granulocitopenia).
b) Linfopenia
c) Eosinopenia
CAUSAS GENERALES DE LEUCOPENIA:
La leucopenia que se encuentra en infecciones abrumadoras y en ciertas
enfermedades producidas por virus se debe por lo comn a un descenso de
la produccin de clulas, a consecuencia de una inhibicin de la mdula
sea.
Muchas infecciones que en su forma habitual localizada producen una
leucocitosis, pueden ocasionar leucopenia cuando se generalizan o llegan a
ser abrumadoras.
La leucopenia representa una debilitacin del proceso defensivo del
organismo y no es necesariamente debida a falta de estimulacin de la
produccin de leucocitos.
CAUSAS QUE PUEDAN PRODUCIR UNA LEUCOPENIA:
1. Infecciones virales (Fiebre Catarral Maligna, DVB) bacterianas y protozoarios
2. Estados caqucticos y de debilitacin
3. Trastornos hematopoyticos (anemias, leucemias)
4. Agentes qumicos (ATBs, Sulfas, antihistamnicos)
5. Leucocitosis:
204
La elevacin del nmero de neutrfilos ocurre con una frecuencia tan

superior a la del aumento del nmero de clulas de otros tipos que, en
general el trmino leucocitosis implica neutrofilia a menos que se le
agregue un adjetivo por ejemplo, leucocitosis eosinoflica.
3.-MATERIALES
Jeringas
Muestra de sangre venosa
Anticoagulante (Floruro de Sodio )
Placas porta y cubre objetos
Un frotis
Liquido de tincin ( giemsa )
Microscopio ptico
Obtencin del muestra de sangre venosa ( normalmente se realiza en

ayuna de 8 horas en el momento de la extraccin se desinfecta la zona de
puncin se inserta la aguja en la vena escogida normalmente la braquial y
recogemos lo necesario )
Confeccin del extendido de sangre ( frotis de sangre )
Se procede a la tincin del extendido ( grunwald o giemsa este ltimos
permite teir todo lo que es cromatina y ncleo)
Se prepara y se observa la muestra en el microscopio ptico
Recuentos celulares
5.-DATOS Y OBSERVACIONES
GLBULOS ROJOS TE BRINDA INFORMACIN ACERCA DE:
RBC: (M/ul)
Hb: (g/dl)
Hc: (%)
VCM: (fl)
HCM: (pg)
CHCM: (g/dl)
RDW: (%). Tamao de glbulos rojos, ver si son uniformes (hasta 16,5% se
considera normal) Ej: podemos ver si existe anisocitosis.
205

GLBULOS BLANCOS
WBC (K/ul)
Neutrfilos (%)
Linfocitos (%)
Monocitos (%)
Eosinfilos (%)
Basfilos (%)
PLAQUETAS
PLT: (K/ul)
VPM.
A su vez, luego de realizar el recuento celular automatizado se realiza el recuento
manual con frotis de sangre fresca teida en extensin, con el fin de verificar si lo
que dio el mtodo Coulter es certero.
Se observa al microscopio con lente 40x de aceite de inmersin a fin de disminuir
el reflejo.
FROTIS
La extensin se prepara repartiendo uniformemente una gota pequea de sangre
sobre un portaobjeto de manera que solo se deposite una capa de clulas.
Despus de teirlas, las extensiones de sangre se usan para:
Determinar las fracciones de nmero de los tipos leucociticos
Para detectar anormalidades celulares
Para detectar hemoparsitos
PREPARACIN DE LA EXTENSIN
1. Recoger una gota de sangre y depositarla ligeramente cerca de un extremo del
portaobjetos.
2. Sostener el portaobjetos con una mano y con la otra colocar el borde del otro
portaobjetos frente a la gota de sangre.
3. Desplazar el segundo portaobjetos hacia atrs hasta que toque la gota de
sangre.
4. Dejar que la gota de sangre se extienda por el borde del segundo portaobjetos.
5. A continuacin, deslice el segundo portaobjetos hacia el extremo opuesto del
primer portaobjetos que contiene la gota de sangre con un movimiento suave (se
deber agotar toda la gota de sangre antes de llegar al extremo del primer
portaobjetos).
206

SECADO DE LA EXTENSIN:
Es esencial que la extensin se seque de manera adecuada para conservar

la calidad, es especial el climas hmedos.
Secar la extensin con rpidos movimientos de vaivn.
FIJACIN:
Si la extensin se ha preparado para determinar fracciones de nmero de

los tipos de leucocitos se deber fijar con metanol, o directamente por
medio de la tincin de May-Grunwald.
Para la deteccin de parsitos se emplear luego la tincin de Giemsa
sobre la extensin.
MTODOS ELECTRNICOS
Actualmente existen en el mercado instrumentos automticos capaces de realizar
los recuentos celulares mediante procedimientos electrnicos. Gracias a ello ha
sido posible aumentar no solo la rapidez de realizacin, sino fundamentalmente la
exactitud y precisin de estas determinaciones analticas. Tales sistemas de
recuento electrnico se basan en diferentes mtodos, de los cuales se destacan
como los ms empleados:
1. Mtodo de resistencia elctrica
2. Mtodo del campo obscuro
3. Mtodo de rayo lser
Hemograma realizado a travs del mtodo COULTER por el laboratorio ALFA:
Este mtodo consta de un aparato automtico conectado a una computadora en el
cual insertando una muestra de sangre de 130 ul es capaz de brindar el resultado
de un hemograma completo en aproximadamente 30 segundos.
El modelo de aparato utilizado en el laboratorio es el CELL-DYN 3500.
La sangre debe ser entera, para esto se debe de extraer sangre con
anticoagulante
(EDTA).
Primero la muestra debe de ser homogenizada por unos minutos con el fin de no
obtener falsos resultados.
Luego por medio de una sonda automtica que absorbe sangre (130ul) el Cell-dyn
comienza a trabajar.
El aparato divide a la sangre en dos fracciones:
Lisa glbulos rojos
207

No lisa glbulos rojos
Con la fraccin que tiene los glbulos rojos lisados te brinda la informacin de
glbulos blancos y hemoglobina en sangre; y con la fraccin que no lisa los
glbulos rojos te brinda la informacin de glbulos rojos.
El aparato genera corriente de glbulos rojos y blancos y los ubica en una lnea
para poder escanearlos. Clasifica a las clulas de acuerdo a su citoplasma.
Realiza un contaje total de glbulos rojos, hemoglobina, plaquetas, glbulos
blancos (con su frmula leucocitaria).
6.-GRAFICOS
208
7.-CONCLUSIN
El hemograma puede ser til para el diagnstico de ciertas enfermedades como
para otras no brindar informacin alguna, por lo que lo consideramos como un
apoyo paraclnico luego de haber realizado un correcto mtodo diagnstico, en
cuanto a anamnesis, exploracin clnica y patologa se trata.
No debe sustituir al diagnstico clnico, muchas veces el Veterinario no sabe
determinar la causa de su caso, ya que no tiene conocimientos claros sobre
semiologa y patologa, por lo busca en el hemograma una solucin, pero este, sin
una adecuada historia y exploracin clnica, no nos brinda informacin suficiente
para ayudarnos en el diagnstico.
El mtodo de exploracin clnica y la patologa son la base para llegar a un
diagnstico correcto, el hemograma es un apoyo.
Por ejemplo, en casos de enfermedades causadas por hematozoarios; la historia
de garrapatas junto con la sintomatologa clnica de decaimiento general y fiebre
en el animal nos lleva a realizar un hemograma, que con la informacin que este
nos brinda de anemia y por frotis la visualizacin de los parsitos intracelulares
nos ayuda a dar un diagnstico definitivo.
209
PRACTICA: N 25
TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS PARA PUNCION VENOSA
1.-OBJETIVOS:
Definir y realizar los procedimientos necesarios para minimizar los errores
en la toma de muestras.
Definir y aplicar adecuadamente el procedimiento para la puncin venosa.
Validar la enorme importancia para obtener una ptima muestra colectada
Realizar la puncin venosa entre los alumnos y poner en prctica los
conocimientos adquiridos.
2.-FUNDAMENTO:
La flebotoma constituye una de las etapas ms importantes en el trabajo del
laboratorio clnico. Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio
y sus pacientes y desde el punto de vista de la muestra sangunea, la enorme
importancia que conlleva una muestra apropiadamente colectada, la seguridad de
su origen y el correcto envasado y transporte, constituyen factores fundamentales
en la evaluacin e informe de los exmenes a realizar.
El personal que ha de realizar la coleccin de la muestra sangunea, debe tener
presente el trato correcto del paciente, orientacin habilidad para realizar su
trabajo.
La presente practica pretende ser una gua para la correcta toma de muestra
sangunea, tal que sta funcin sea estandarizada en sus aspectos tcnicos,
estableciendo las pautas necesarias en bioseguridad y de aquellos factores que
pueden afectar la calidad de la muestra.
3.-MATERIALES:
Para desinfectar la piel:
Alcohol isoproplico al 70%.
Algodn.
Gasas.
Para puncin de la vena
Ligadura de goma de ltex (2-5 mm de dimetro por 35-40 cm. de largo).
Tubos al vaco correctamente identificados.
210
Soporte para tubos VACUTAINER

Agujas desechables estriles
Recipiente para desechos punzo cortantes
Bolsas rojas para desechos biolgicos
4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA:
1. Verificar que las etiquetas coincidan con la solicitud de las pruebas.
2. Se identifica al paciente comprobando su nombre completo y fecha de
nacimiento.
3. Si se encuentra inconsciente, debe de verificarse su identidad a travs de
una enfermera o un familiar.
4. No se debe extraer muestra alguna sin identificar adecuadamente al
paciente.
5. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que el paciente no
ha ingerido alimentos.
6. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento.
7. Se debe colocar adecuadamente al paciente, segn se encuentre sentado o
en decbito prono, para tener acceso fcil a la fosa ante cubital.
8. Se debe preparar todo el material, incluidos los tubos, la ligadura, los
objetos para limpiar la piel, las jeringas; cuando sea necesario, la aguja
estril y el dispositivo para fijarla.
9. Se selecciona la vena adecuada para la puncin las venas que resulten
ms palpables.
10. Se limpia la zona de la puncin con una torunda humedecida con alcohol
isoproplico al 70%. Se comienza en el punto de la puncin y se prosigue la
limpieza hacia fuera siguiendo un movimiento espiral.
11. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de
puncin. No dejarlo ms de un minuto.
12. Se fija la vena tanto por encima como por debajo del lugar de puncin, con
ayuda de los dedos pulgar y medio o ndice y pulgar.
VENOPUNCION:
a) Se penetra la piel con la aguja formando un ngulo de 15 con el brazo y
con el bisel hacia arriba, se sigue la direccin de la vena;
b) Se introduce la aguja con suavidad pero con rapidez para reducir las
molestias. No hay que enterrar la aguja;
c) si se utiliza una jeringa, se tira hacia atrs del mbolo, con tensin lenta y
uniforme a medida que la sangre va fluyendo en su interior; si se utiliza un
tubo al vaco, en cuanto la aguja haya penetrado en la vena se dirigir el
211

tubo todo lo posible hacia delante apoyndose en el dispositivo de sujecin
(de la misma forma en que se introduce el mbolo de una jeringa).
d) Al mismo tiempo mantenga firmemente la aguja en su lugar. Una vez que
se haya llenado el tubo, se retira cogindolo por su extremo y tirando
suavemente de l.
e) Se mezcla la sangre con el anticoagulante por inversin suave. Si la
muestra ha sido extrada con jeringa se transferir la sangre a los tubos
correspondientes despus de retirar la aguja.
5.-DATOS /OBSERVACIONES:
Es de suma importancia tener en cuenta ciertas condiciones para la toma de
muestra de sangunea:
1. Es necesario que la persona que va a tomar la muestra adopte actitud de
confianza, auto seguridad y equilibrio.
2. Conocer y realizar los procedimientos necesarios para minimizar los errores
en la toma de muestras.
3. Debe explicar brevemente al paciente las maniobras que va a realizar para
obtener la mayor colaboracin posible.
4. Debe tranquilizarse al paciente para disminuir el estado de estrs.
5. Revisar que todo el material est listo (tubos rotulados, torundas de algodn,
alcohol, ligaduras, jeringa, gradilla, tapones).
6. El paciente y el operador deben estar en posicin confortable y en un sitio
con buena iluminacin.
7. El paciente debe estar sentado en una silla y debe extender el brazo sobre
el borde de una mesa, encima de una toalla desechable, para tener acceso
fcil y cmodo
8. Evitar el uso de bancos altos sin respaldo.
9. Es necesario tener en cuenta el tipo de anlisis, el volumen de la muestra y
la edad del paciente.
10. Para volmenes pequeos de muestra es recomendable utilizar el lbulo de
la oreja, pues en caso de utilizar los dedos de la mano se corre el riesgo de
infecciones por contaminacin en el trabajo de laboratorio.
11. Para un volumen mayor, el sitio ms adecuado es la vena que se encuentra
en el pliegue anterior de la flexin del codo, se recomienda utilizar la vena
mediana baslica o ceflica
12. En los pacientes obesos las venas que se observan azulosas son
demasiado superficiales y pequeas y es mejor no utilizarlas.
13. Es conveniente que el paciente no mire mientras se est realizando la
puncin radial superficial.
212

6.-GRAFICOS:
7.-CONCLUSIONES Y DISCUSION:
Para realizar una correcta toma de muestra sangunea se debe de tener
muy en cuenta todos los procedimientos y tcnicas ya estudiadas para
esta, logrando as minimizar errores.
Una correcta puncin venosa nos asegura tener una buena muestra de
calidad.
Toda espcimen debe de ser tratado como una muestra de alto riesgo
Es necesario aplicar las normas bioseguridad para evitar accidentes.
213

8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS.
Qu vena es la preferida para extraer una muestra?
De una vena (baslica, ceflica o mediana que une las dos anteriores) usualmente
de la parte interior del codo o del dorso de la mano.
214
PRACTICA N26
TEMA: FROTIS SANGUINEO
1.-OBJETIVO
Aprender la tcnica apropiada para realizar un extendido sanguneo que
permita la visualizacin de los elementos de la sangre por medio de la
microscopia ptica.
2.-FUNDAMENTO Y GENERALIDADES
La realizacin del frotis sanguneo es
interpretacin del hemograma.
de fundamental
importancia en la
Un frotis es un mecanismo cientfico que consiste en el extendido de una gota de

sangre en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de
analizarla posteriormente.
Es ms adecuado emplear sangre que an no ha estado en contacto con el
anticoagulante, pues este podra alterar los resultados (algunos anticoagulantes
tienden a deformar las clulas de la sangre).
La fidelidad de la informacin obtenida de ellos, depende en gran parte de la
calidad de las extensiones. Estas no deben ser demasiado gruesas porque las
clulas se amontonaran y no podran ser reconocidas, ni diferenciarse, ni
demasiado delgadas porque las clulas se deformaran, distorsionaran y
destruiran. Por eso los frotis de sangre deben ser bien nivelados y para obtener
buenos resultados es necesario que:
PARTES DE UNA EXTENSIN:
1.-CABEZA.
215
Es la zona inicial de la extensin.
Es la regin ms gruesa
En ella se encuentra una mayor proporcin de linfocitos, y los hemates

forman aglomerados (pilas de monedas).

2.-CUERPO.
Es la zona media del frotis.
Su espesor es el apropiado.
En ella existe una adecuada proporcin entre los distintos tipos de

leucocitos.
Contiene la "zona ideal" de observacin, que corresponde a la porcin que

limita con la cola.
3.-COLA.
Es la zona final de la extensin.
Suele tener un aspecto redondeado.
Es la regin ms fina.
En ella se encuentra una mayor proporcin de leucocitos grandes

(granulocitos y monocitos), y adems. los hemates estn deformados y
presentan una tonalidad uniforme.
En su porcin terminal suelen ser ms abundantes las plaquetas, sobre

todo si son grandes.
4.- BORDES.
216
Contienen una mayor proporcin de leucocitos grandes.
Si estn deshilachados, en ellos las clulas son difciles de reconocer por

estar deformadas o destruidas

3.-MATERIALES
Lanceta estril en caso de usar sangre capilar

Jeringuilla en caso de usar muestra venosa
Alcohol
Algodn
Placa portaobjeto
1. Rotular la placa con los cdigos respectivos
2. Con los dedos ndice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta
normal (porta soporte), a nivel de sus bordes, y situarlo sobre una mesa.
Tambin puede apoyarse, simplemente, el porta soporte sobre el extremo
del dedo corazn de la mano que lo sujeta. De esta forma, el porta soporte
forma un ngulo con la mesa.
3. Con un capilar cargado mediante capilaridad de sangre problema, depositar
una pequea gota de sta (de unos 5 micro litros) en la cara superior de
ese porta, a no menos de 2 cm del extremo opuesto al que agarra la mano.
4. Colocar un extremo del porta esmerilado (porta difusor o extensor) un poco
por delante de la gota de sangre y formando un ngulo de 45 con el porta
soporte. Es conveniente utilizar siempre el mismo porta extensor, para
adaptarlo a esta funcin.
5. Desplazar suavemente hacia atrs el porta extensor, hasta que alcance la
gota de sangre.
6. Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del
porta extensor que toca el porta soporte.
7. Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el porta
extensor hacia delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una
velocidad media. Este deslizamiento debe acabar, aproximadamente, a 1
cm del extremo final del porta soporte, con un movimiento de ascensin del
porta extensor.
8. Secar rpidamente la extensin, agitndola al aire, para que sus clulas no
se distorsionen.
217

5.-DATOS/OBSERVACIONES:
La forma correcta de extraer sangre capilar es la siguiente:
Elegir el tercer o cuarto dedo de una de las manos.
La sangre venosa tiene que haber sido extrada hace menos de 3 horas, ya
que pasado este tiempo, se producen unos cambios apreciables en las
clulas, que se manifiestan, al ser teidas stas, como alteraciones en su
morfologa.
Una vez extrada, la sangre venosa ha de ser anticoagulada con EDTA.
Para realizar frotis sanguneos no debe utilizarse sangre anticoagulada con
heparina, ya que sta agrega las clulas y produce un fondo azul en las
extensiones de sangre teidas con el colorante de Wright.
6.-GRAFICOS
218

7.-CONCLUSIONES
El estudio de las extensiones sanguneas es esencial para el anlisis
morfolgico de las clulas hemticas y para la realizacin del recuento
diferencial linfocitario (RDL).
Una buena tcnica nos permitir dar resultados de calidad.
8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS
Para qu pruebas se realiza un frotis de sangre?
Un frotis de sangre perifrica se utiliza a menudo como una prueba de
seguimiento de resultados anormales en un conteo sanguneo completo (CBC) .
Se puede usar para ayudar a diagnosticar y / o controlar las condiciones que
afectan a numerosas poblaciones de clulas sanguneas.
Qu cuidados hay que tener para buenos resultados?
219
Evite la contaminacin con suciedades, el agua, las heces o la orina.

Correr la gota de sangre antes de que empiece a coagularse.
Mantenga las diapositivas de muestra limpia y seca.
Hacer un frotis seco tan rpido como sea posible. No refrigerar.
Los frotis que han sido expuestos a vapores de formol o formalina no puede
ser utilizado para el analisis. Mantngase alejado de formalina del frotis.
PRACTICA: N 27
DETERMINAR
EL
VOLUMEN
DE
CELULAS
CONCENTRADAS POR MEDIO DEL HEMATOCRITO
ROJAS
1.-OBJETIVOS:
Entender los conceptos de hematocrito.
Conocer las tcnicas para la obtencin del hematocrito.
Realizar el hematocrito con la sangre del alumno.
Interpretar los valores normales de hematocrito.
2.-FUNDAMENTO: GENERALIDADES
El Hto mide el porcentaje de clulas sanguneas rojas en el volumen total de
sangre. Se determina de forma rutinaria como parte del Hemograma completo.
Los valores normales varan segn la edad y el sexo.
Los valores indican los mismos estados patolgicos que las anomalas en el
recuento de hemates y la concentracin.
Para este tipo de examen se necesita muestra de sangre.
El mdico puede ordenar este examen si el paciente tiene signos de:
Anemia
Deficiencia en la dieta
Leucemia
Otras afeccin mdica
Se debe de tener en consideracin los factores que interfieren. Las alteraciones

en el tamao de los hemates pueden modificar el valor del Hto.
Un nmero extremadamente alto de leucocitos puede afectar los valores
hemodilucin y la deshidratacin pueden afectar los niveles.
La
El embarazo suele reducir ligeramente los valores por la hemodilucin

(Disminucin de la viscosidad de la sangre debido a una reduccin del nmero de
corpsculos celulares y de la cantidad de protenas en la sangre.
220

Se observa en la insuficiencia renal y cardaca a causa de un aumento en la
retencin de agua, o en casos de hemorragia, donde se produce el paso de
lquidos hacia el torrente sanguneo)
La residencia a gran altura aumenta los valores Los valores pueden no ser fiables
inmediatamente despus de una hemorragia Entre los frmacos capaces de
disminuir los niveles se incluyen el cloranfenicol y la penicilina.
Valores normales del hematocrito
HOMBRES.42-52%
MUJERES37-47%en embarazo menos 33%
ANCIANOS.. los valores pueden disminuir ligeramente
NIOS..31-43%
Los valores aumentados se debe a una hemoconcentracin y a una policitemia,
bien sea primaria o secundaria.
Mientras que los valores disminuidos nos indican una anemia, una hemodilucin o
una hemorragia reciente
.Los valores bajos de hematocrito pueden deberse a:
Anemia
Sangrado
Destruccin de los glbulos rojos
Leucemia
Desnutricin
Deficiencias nutricionales de hierro, folato, vitaminas B12 y B6
Sobre hidratacin
Artritis reumatoide
Los valores altos de hematocrito pueden deberse a:
221
traumatismo
Deshidratacin
Eritrocitos
Niveles bajos de oxgeno en la sangre (hipoxia)
Fibrosis pulmonar

3.-MATERIALES
Alcohol isoproplico al 70%.

Algodn.
Ligadura de goma de ltex (2-5 mm de dimetro por 35-40 cm. de largo).
Tubos al vaco correctamente identificados.
Soporte para tubos VACUTAINER
Agujas desechables estriles
Recipiente para desechos punzo cortantes
Bolsas rojas para desechos biolgicos
Capilares
Plastilina
Centrifuga
Regleta para leer hematocrito
4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA:
1. Procedemos a extraccin de sangre por va venosa. Con anti coagulante.
2. Llenamos un capilar a partir de la muestra obtenida
3. Antes de colocar el capilar en la centrifugadora deberemos taponar un
extremo con plastilina para evitar que se pierda la muestra en el proceso de
centrifugacin (15.000 rpm durante 10 minutos).
4. Una vez terminada la centrifugacin, podremos observar dos segmentos del
capilar claramente diferenciados.
5. La parte superior, de un color amarillento, corresponde al plasma.
6. La parte inferior, de un color rojo oscuro, corresponde a las clulas
sanguneas, entre ellas los hemates
7. Con la regla y se mide el total de los dos segmentos y el segmento
correspondiente a los hemates.
222

5.-DATOS /OBSERVACIONES:
Es necesario tener en cuenta lo siguiente:
Antes del procedimiento se debe:
Explicar el procedimiento al paciente
Informarle de que esta prueba no requiere ayuno
Durante el procedimiento se debe:
Recoger 5-7ml de sangre venosa en un tubo de tapn lila; solo se necesitan 0,5ml
cuando se utilizan tubos capilares.
Despus del procedimiento:
Aplicar presin o un apsito a presin en el punto de puncin venosa
Evaluar el lugar de puncin venosa por si hubiese hemorragia.
Los valores aumentados se debe a una hemoconcentracin y a una policitemia,
bien sea primaria o secundaria. Mientras que los valores disminuidos indican
una anemia, una hemodilucin o una hemorragia reciente.
6.-GRAFICOS:
223
7.-CONCLUSIONES:
Con esta prctica se pretende cumplir con lo propuesto que son:
Conocer la tcnica para realizar un hematocrito
Aprender a interpretar resultados en sus niveles
224

8.- PREGUNTAS Y RESPUESTAS:
Con que se relaciona un hematocrito alto?
Un nivel alto de hematocrito se puede asociar a deshidratacin o hipoxia. En
casos de enfermedad pulmonar obstructiva crnica, la hipoxia genera un aumento
en la produccin de eritropoyetina, lo que puede resultar en un hematocrito alto.
Cundo un medico enva este examen?
El mdico puede ordenar este examen si usted tiene signos de:
225
Anemia
Deficiencia en la dieta
Leucemia
Otra afeccin mdica
PRACTICA N28
DETERMINACIN ESPECTROFOMTRICA DE HEMOGLOBINA EN UNA
MUESTRA DE SANGRE
1.-OBJETIVOS:
Manejar correctamente pipetas automticas.
Determinar la concentracin de hemo globina en una muestra de sangre
utilizando el mtodo espectrofomtrico
2.-FUNDAMENTO/ GENERALIDADES:
La hemoglobina es una protena conjugada contenida en el interior de los
eritrocitos a razn de 300000000 molculas de hemoglobina por cada eritrocito en
los humanos. Sirve como vehculo para el transporte de oxigeno de los pulmones,
donde la tensin de O2 es elevada, hacia los tejidos, donde es baja.
Una molcula de hemoglobina es un tetrmero que consta de dos pares de
cadena de poli pptidos, dos sub unidades alfa y de beta que est enfrentada
entre s en torno a una cavidad en el centro de la molcula. Cada subunidad
contiene un grupo hemo (regin ligante de oxgeno, que contiene un tomo de
hierro ferroso), por lo cual una molcula de hemoglobina puede unir 4molculas de
oxgeno.
La hemoglobina reducida es hemoglobina con hierro no asociado al oxgeno.
Cuando cada grupo hem se asocia con una molcula de oxgeno, la hemoglobina
toma la forma oxihemoglobina.
Los valores normales son:
226
Los recin nacidos: 17 a 22 g / dl

Una (1) semana de edad: 15 a 20 g / dl
Un (1) mes de edad: 11 a 15gm/dL
Nios: 11 a 13 g / dl
Adultos hombres : 14 a 18 g / dl
Adultos mujeres : de 12 a 16 g / dl
Los hombres despus de la edad media: 12,4 a 14,9 g / dL
Las mujeres despus de la edad media: 11,7 a 13,8 g / Dl

3.-MATERIALES
Tubos de ensayo
Gradilla
Alcohol rectificado
Algodn
Jeringas desechables
Torniquete
Pipeta automtica (20 ul)
Pipetas graduadas de 5 a 10 ml
Puntas amarillas adaptables para pipeta automtica
Tubos de espectrofotmetro
Espectrofotmetro spectronic 20
Reactivo
Solucin de Drabkin: Bicarbonato de sodio 1gCianuro de potasio
0,05gFerrocianuro de potasio---0,2gH20 deshilada 1000 ml Esta solucin
tiene un pH de 8,6. Debe ser de color amarillo y transparente y al medir su
densidad ptica contra agua como blanco, esta debe ser cero
La solucin debe guardarse en frasco oscuro y debe descartarse si esta
turbia o decolorada. El reactivo es un poco toxico pero debe manejarse con
cuidado Muestra de sangre total con anticoagulante (EDTA)
Anticoagulante(EDTA)Patrn de hemoglobina
1. Se toma con la pipeta automtica 20 ul de la sangre
2. Se diluye en ml dela solucin de Drabkin.
3. Se lee luego a diferentes longitudes de onda(400 a 600) y se grafica en
papel milimetrado.
4. Encender el espectrofotmetro5. Colocar 5 ml de solucin de Drabkin en un tubo-Mezclar suavemente la
mezcla de sangre (agitar el frasco 20 veces)6. Con la pipeta automtica tomar 20 ul de la sangre, limpiando
cuidadosamente la parte exterior de las puntas de las pipetas7. Introducir la pipeta y mezclar la sangre con el reactivo de Drabkin contenido
con el tubo8. Mezclar bien y esperar 5 minutos
9. Leer la absorbancia utilizado como blanco un tubo con solucin de Drabkinpara el clculo de los resultados
227

5.-DATOS/OBSERVACIONES:
La hemoglobina se mide generalmente como parte del conteo sanguneo completo
(CSC) a partir de una muestra de sangre .Existen varios mtodos para medir la
hemoglobina, la mayora de las cuales se llevan a cabo actualmente por las
mquinas automatizadas diseadas para realizar varias pruebas de
sangre. Dentro de la mquina, los glbulos rojos se descomponen para obtener la
concentracin de hemoglobina en una solucin. La hemoglobina libre est
expuesta a una sustancia qumica que contiene cianuro que se une firmemente
con la molcula de hemoglobina para formar ciano metahemoglobina.
El nivel de hemoglobina se expresa como la cantidad de hemoglobina en gramos
(g) por decilitro (dL) de sangre entera, un decilitro son 100 mililitros.
6.-GRAFICOS:
7.-CONCLUSIONES
Como conclusin de esta prctica podemos aclarar que el resultado
depende de la edad, sexo del paciente y condiciones de cada
individuo.
Los niveles bajos de hemoglobina promedio no tienen mayor
significativa por s sola.
228
relacin

Cul es la estructura de la hemoglobina?
Una molcula de hemoglobina es un tetrmero que consta de dos pares decadena
de polipptidos, dos subonidades alfa y dod beta que est enfrentadasentre s en
torno a una cavidad en el centro de la molcula. Cada subunidadcontiene un
grupo hemo (regin ligante de oxigeno, que contiene un tomo dehierro ferroso),
por lo cual una molcula de hemoglobina puede unir 4molculas de oxigeno
229
PRACTICA N29
TEMA: VELOCIDAD DE SEDIMENTACION
1.-OBJETIVOS:
Comprender el concepto de VSG y su importancia clnica.
Conocer los procesos en que la VSG se altera.
Aprender a realizar una lectura de VSG a la 1 h
2.-FUNDAMENTO/ GENERALIDADES
La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido
en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante
por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, as
como en los procesos inactivos o estrictamente locales
Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar sangre
anticoagulada en un tubo en posicin vertical. Se lee macroscpicamente la
columna de plasma al cabo de una hora de reposo.
Un cambio de la VS no se debe especficamente a una enfermedad en particular.
La VSG en nios es inferior a 15 mm. En adultos varones menor de 14 mm. En
mujeres adultas menor de 20 mm.
Un aumento de la VS puede deberse a muchas enfermedades como:
230
Infecciones bacterianas
Parasitosis
Anemia
Obesidad
Hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia
Enfermedades inflamatorias
Hipergammaglobulinemia
Insuficiencia renal o cardaca
Algunos tipos de cncer
Sndrome nefrtico

Una disminucin de la VS puede deberse a:
Poliglobulia
Crioglobulinemia
Hiperleucocitosis
Hiperviscosidad
Anemia hemoltica
Hemoglobinopatas
3.-MATERIALES
Tubos de WINTROBE
Soporte para tubos de Wintrobe
Sangre con anticoagulante
Cnula
1. Extraemos una muestra de sangre venosa con contenido de citrato sdico
en la
2. jeringa.
3. Depositamos la muestra en una pipeta de eritrosedimentacin (pipeta de
4. Wintrobe) y esta sobre un soporte.
5. Esperamos una hora y observamos los resultados
5.-DATOS/OBSERVACIONES
La velocidad se determina midiendo a qu altura del tubo de ensayo se
encuentren las clulas sanguneas al cabo de una y de dos horas. La VS se
expresa en milmetros
La VS aumenta de manera natural con el transcurso de los aos y durante
el embarazo.
Los estrgenos pueden provocar un aumento de la VS.
Los medicamentos antiinflamatorios reducen la VS.
231

6.-GRAFICOS
7.-CONCLUSIONES
La VSG es un indicador bastante fiable de la evolucin de la enfermedad, por lo
que puede emplearse para controlar el resultado del tratamiento, sobre todo en
enfermedades inflamatorias (por ejemplo, enfermedades reumticas o
autoinmunes). Es habitual que la VSG aumente cuando la enfermedad empeora y
viceversa. Si los resultados de la prueba son equvocos o inconsistentes con la
impresin clnica, es habitual realizar otras pruebas (PCR o determinacin de
protena C reactiva).
232

8.-PREGUNTAS Y RESPUESTA
Qu puede elevar el VSG?
Una VSG elevada puede hallarse durante el embarazo (en el 2 y 3 trimestre), en
las infecciones agudas y crnicas, en la fiebre reumtica, en la artritis
reumatoidea, en el infarto de miocardio, nefrosis, hepatitis agudas, menstruacin,
tuberculosis, hipotiroidismo, hipertiroidismo, afecciones tumorales avanzadas y
anemias, entre otras causas. Tambin pueden dar un aumento de la VSG
determinados frmacos, como la metildopa, anticonceptivos orales, teofilinas,
vitamina A, penicilamina y procainamidaCules son los valores normales?
Hombres: hasta 15 mm/h.
Mujeres: hasta 20 mm/h.
Nios: hasta 10 mm/h.
Recin nacidos: 0-2 mm/h.
233
PRACTICA N 30
TEMA:
RECUENTO TOTAL
DE LEUCOCITOS EN SANGRE
DETERMINACION DE VALORES POR METODO REFERENCIAL.
1.-OBJETIVOS:
El alumno analizara junto con el docente la prctica correspondiente al
recuento de leucocitos para su aplicacin
Contar en la cmara de Neubaurer los leucocitos de la sangre en una
persona para su valoracin clnica.
2.-FUNDAMENTO/GENERALIDADES
Los leucocitos tambin sean llamados glbulos blancos son un conjunto
heterogneo de clulas sanguneas que son los efectores celulares de la
respuesta inmunitaria, interviniendo as en la defensa del organismo contra
sustancias extraas o agentes infecciosos (antgenos). Se originan en la mdula
sea y en el linftico. Los glbulos blancos o leucocitos forman parte de los
actores celulares del sistema inmunitario, y son clulas con capacidad migratoria
que utilizan la sangre como vehculo para tener acceso a diferentes partes del
cuerpo.
Los leucocitos son los encargados de destruir los agentes infecciosos y las
clulas infectadas, y tambin segregan sustancias protectoras como los
anticuerpos, que combaten a las infecciones.
El conteo normal de leucocitos est dentro de un rango de 4.500 y 11.500 clulas
por mm de sangre, variable segn las condiciones fisiolgicas (embarazo, estrs,
deporte, edad, etc.) y patolgicas (infeccin, cncer, inmunosupresin, aplasia,
etc.). El recuento de leucocitos se realiza por el mtodo de referencia que es el
recuento en cmara.
El recuento diferencial automatizado de leucocitos tiene mayor precisin que el
examen microscpico, permitiendo la evaluacin de cambios cualitativos y
cuantitativos en los hemates, plaquetas y leucocitos de la sangre
Los glbulos blancos se clasifican en1 :
234
Polinucleares, son los leucocitos con ncleo lobulado y pertenecen a las

clulas mieloides o mielodocitos:
Neutrfilos
Basfilos
Eosinfilos
Mononucleares, son los leucocitos con ncleo sin lbulos:
Linfocito:
Los linfocitos B, T y NK.
Monocitos
La observacin a travs del microscopio mediante la Tincin de Romanowsky ha
permitido su clasificacin:
Granulocitos: presenta grnulos en su citoplasma, con ncleo redondeado
y lobulado, formados en las clulas madres de la mdula
sea: Eosinfilos, Basfilos y neutrfilos.
Causas de aumento:
Las leucocitosis pueden ser secundarias a un aumento tal como ocurre en las
infecciones crnicas o en los sndromes mielo proliferativos, a la salida rpida de
elementos jvenes de la medula sea (por estrs o infecciones agudas), o por
disminucin de la migracin a los tejidos (lo que explica el falso efecto beneficioso
de los corticoides)
Causas de disminucin:
Debido a la importancia relativa de la serie granulocticas sobre el total de
leucocitos en sangre, el concepto de leucopenia es prcticamente equivalente al
de granulocitopenia/ o plaquetopenia puede deberse a:
235
Insuficiencia de la mdula sea (por ejemplo: debido a infeccin, tumor o

cicatrizacin anormal).
Enfermedades vasculares del colgeno (como el lupus eritematoso sistmico).
Enfermedad del hgado o el bazo.
Radioterapia o exposicin a la radiacin.

3.-MATERIALES
Sangre total con anticoagulante

Pipetas de glbulos blancos
Cmara de neubauer
Microscopio
Liquido de turk(lquido para blancos)
agitador
1. Con la pipeta para blancos sealada hasta 11, se aspira sangre hasta la
seal 0.5.
2. Luego se aspira el lquido de dilucin hasta la seal 11 obteniendo as una
dilucin de 1:20
3. Hacer rotar la pipeta durante varios minutos de forma horizontal
4. Se hacen salir algunas gotas desechndolas
5. Se llena la cmara cuenta glbulos,
6. Se espera unos 3 minutos, para dar tiempo a que sedimente n los glbulos
7. Se centra la luz y se enfoca de exactamente donde se va a realizar el
estudio
8. Y se procede a leer
Muchos medicamentos afectan el recuento de leucocitos. Tanto los medicamentos
recetados y de venta libre, incluidos los suplementos a base de hierbas
que tambin deben tenerse en cuenta. Los valores normales tanto para el
recuento de glbulos blancos y diferenciales estn relacionados con la edad.
Las fuentes de error en el recuento manual glbulos son de gran parte debido a la
variacin en la dilucin de la muestra y la distribucin de las clulas en la cmara,
y el pequeo nmero de glbulos blancos que se cuentan.
Con electrnicos recuentos de leucocitos y diferenciales, la interferencia puede ser
causada por pequeos cogulos de fibrina, glbulos rojos nucleados, la
agrupacin de plaquetas y glbulos rojos, no lisadas.
Los glbulos blancos y glbulos rojos nucleados inmaduros pueden causar
interferencia con el recuento diferencial automatizado.
236

6.-GRAFICOS:
237

En el anlisis hecho, los resultados de la cuenta de clulas quedaron as por
casilla
El nmero de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como

resultado 5 550/mm3, lo que indica un ndice normal, sin embargo apenas y
supera el mnimo, pues el paciente era un hombre, de 41 aos
238
7.-CONCLUSIONES
Los leucocitos son las clulas sanguneas que dentro del organismo
participan desarrollando diferentes funciones como son: fagocitosis,
defensa inmunolgica especfica o inespecfica.
El recuento leucocitario representa el nmero de leucocitos en un litro de
sangre completa.
La cuantificacin o recuento de leucocitos es muy importante para el
diagnstico de enfermedades.
239

8.- PREGUNTAS Y RESPUESTAS
Cul es el ciclo del linfocito?
El linfocito puede hincharse y convertirse en monocito, entrando asi en los tejidos
conectivos
y
otros
espacios,
y
convirtindose
en
macrfagos
por qu ocurre un aumentan los globulos blancos?
Hay un aumento por mltiples factores, es decir hay un desorden en el organismo,
por ejemplo los tumores, todos sin excepcin.
Los linfocitos qu porcentaje representan dentro de los glbulos Blancos?
Representan el 25% de los leucocitos
Para qu son utilizados los cuadrantes de la cmara?
Para poder identificar, los derivados de Glbulos Blancos, y medir el volumen en
un examen.
Qu causa una herida crnica?

En si una herida crnica afecta el volumen de Glbulos Blancos, produciendo la
elaboracin exagerada de los mismo.
240
PRACTICA N31
TEMA: RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
1.-OBJETIVOS:
Aprender a diferenciar los leucocitos morfolgicamente
Estudiar la clasificacin de los leucocitos
Conocer los valore normales y relaciones de los valores anormales
2,-FUNDAMENTO: GENERALIDADES
La frmula leucocitaria o recuento diferencial leucocitario (RDL) consiste en la
determinacin del porcentaje que representa cada uno de los tipos de leucocitos
con respecto al total de ellos.
Los leucocitos consisten en dos subpoblaciones principales, las clulas
mononucleares y las clulas granulocticas. Las clulas mononucleares incluyen
linfocitos y monocitos.
Los
granulocitos
incluyen
neutrfilos
(tambin
llamados
leucocitos
polimorfonucleares o neutrfilos segmentados), Eosinfilos y Basfilos. Cada tipo
de clula se describe a continuacin:
Los neutrfilos son leucocitos normalmente los ms abundantes. Miden
12-16 micras de dimetro. Tienen manchas en el ncleo oscuro de color
prpura-azul, y se divide en varios lbulos (generalmente entre tres y cuatro)
que consisten de cromatina densa. Un neutrfilo justo antes de la etapa final de
maduracin tendr un ncleo segmentado en forma de una banda. Estos
neutrfilos banda se pueden contar con los neutrfilos maduros o como una
categora separada. Los neutrfilos son clulas fagoctalas y facilitan la
eliminacin de bacterias y antgenos revestidas de anticuerpo. Los grnulos
neutrfilos son ricos en peroxidasa, y ayudan a la clula en la destruccin de
bacterias y otras clulas ingeridas.
Los Eosinfilos son 14-16 micras de dimetro y contienen un ncleo azul que
est segmentada en dos lbulos. El citoplasma est lleno de grandes
refrctales grnulos de color rojo anaranjado. Los grnulos contienen
peroxidasa, hidrolasas, y protenas bsicas que ayudan en la destruccin de
las clulas fagocitadas. Los Eosinfilos se aumentan en las reacciones
alrgicas e infecciones parasitarias.
241

Los Basfilos Eosinfilos son de 14-16 micras de dimetro y tienen un
ncleo azul bilobulado. El citoplasma de los Basfilos de color azul oscuronegro pueden oscurecer el ncleo. Estos contienen grandes cantidades de
mucopolisacridos histamina, heparina y cido. Los Basfilos ayudan a
mediar la respuesta alrgica mediante la liberacin de histamina.
Los
linfocitos
son
los
segundos
glbulos
blancos
ms
abundantes. Pueden ser pequeos (7-9 micras de dimetro) o grandes (12
a 16 micras de dimetro). El ncleo es de color azul oscuro y es casi
redondo o ligeramente indentado y la cromatina es agrupada y muy
densa. El citoplasma es azul medio y agranular por lo general. Un linfocito
ocasionalmente tiene unos pocos grnulos azurfilos en el
citoplasma. Ellos son responsables de iniciar y regular la respuesta
inmune mediante la produccin de anticuerpos y citocinas.
Los monocitos son los ms grandes de los leucocitos en medicin, miden
de 14-20 micras de dimetro. Ellos tienen un ncleo grande azul de forma
irregular y plegado con la cromatina, es el menos denso que los
dems leucocitos sanguneos. El citoplasma es de color gris-azul, y est
lleno de polvo fino como grnulos de color lila. Los monocitos son clulas
fagoctalas con procesos antgenos y presentes en los linfocitos, ellos son
un aporte requerido para la activacin de linfocitos
Valores normales
Grupo
leucocitos
de Valor %
Valor absoluto
Neutrfilos
55 a 70 %
2.500 a 8.000 mil/mm3
Linfocitos
20 a 40 %
1.000 a 4.000 mil/mm3
Monocitos
2a8%
100 a 700 mil/mm3
Eosinfilos
1a4%
50 a 500 mil/mm3
Basfilos
0a1%
25 a 100 mil/mm3
Cuando en la medicin de leucocitos se ven clulas jvenes aparecen los

neutrfilos en forma de ncleo en forma de bastn (cayados), y un aumento del
porcentaje de los glbulos blancos polimorfo nucleares. Esto se denomina como
242

"desviacin a la izquierda". Este trmino sugiere infecciones bacterianas agudas.
La "desviacin a la derecha" se dice cuando el porcentaje de linfocitos y
monocitos se encuentra aumentado con respecto al de el polimorfo nuclear
(neutrfilos, eosinfilos y basfilos), se asocia en general a enfermedades vricas.
La eosinoflia, que es el aumento del porcentaje o del nmero total de eosinfilos,
sugiere un cuadro alrgico o una infeccin parasitaria
3.-MATERIALES
Microscopio.
Papel y lpiz o un registrador automtico de clulas. Este ltimo consiste en un aparato
que tiene unas teclas. Cada tecla representa a un tipo de leucocito y hace una
anotacin cada vez que es presionada. Cuando el nmero de anotaciones
llega a 100, suena una alarma.
Aceite de inmersin
Extensin de sangre teida
1. Preparar el microscopio para que tenga el condensador alto y el
diafragma abierto.
2. Enfocar la preparacin con el objetivo de 10x3
3. Comprobar que la preparacin es buena y elegir una zona en la que s no
estn superpuestos y los leucocitos se encuentren uniformemente
distribuidos
4. Enfocar esa zona de la preparacin con el objetivo de inmersin
5. Observar esa zona de la preparacin mientras se describe un recorrido en
forma de S.
Es importante tener muy en cuenta terminologa muy utilizados en la formula
leucocitaria
TRMINOS CLAVE:
Basfilos: Glbulo blanco con colores azul oscuro y negro, que libera histamina
en reacciones alrgicas.
Recuento diferencial: Prueba que determina el porcentaje de cada tipo de
glbulos blancos o leucocitos en la sangre de una persona.
243

Eosinfilos Glbulo blanco con grandes grnulos de color rojo anaranjado que
aumenta en respuesta a infecciones parasitarias y reacciones alrgicas.
Linfocitos Clulas mononucleares que es responsable de la inmunidad humoral
(mediada por anticuerpos) y la inmunidad mediada por clulas.
Monocitos Clula mononuclear fagoctica de la sangre que elimina los desechos y
microorganismos por fagocitosis y antgenos de procesos para el reconocimiento
por los linfocitos inmunes.
Neutrfilos Glbulos blancos normalmente comprendidos el 50-70% del total de
los leucocitos. El citoplasma contiene grnulos primarios y secundarios. Los
neutrfilos eliminan y matan a las bacterias mediante fagocitosis.
Fagocitosis Proceso por el cual los leucocitos de la sangre digieren los desechos
y microorganismos para eliminarlos de la sangre.
6.-GRAFICOS
244

7.-CONCLUSIONES
Establecer que el porcentaje de leucocitos puede orientar al diagnstico de
enfermedades infecciosas, inflamatorias, y otros procesos.
El recuento de leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de
hematimetra y recuento leucocitario completo.
Qu es registrador automtico de clulas?
Es donde podemos identificar las clulas de dicha muestra
Qu son los Eosinofilos?
Un Eosinfilos es un leucocito de tipo granulocito pequeo derivado de la mdula
sea, que tiene una vida media en la circulacin sangunea de 3 a 4 das antes de
migrar a los tejidos en donde permanecen durante varios das
Qu son los Basfilo?
Los grnulos de los Basfilos son gruesos pero escasos. Conforman el tipo
de leucocito, Tiene ncleo irregular, difcil de ver por la granulacin, que lo cubre
casi siempre. Tamao semejante al de los segmentados. Se denomina basfilo a
cualquier clula que
se
tie
bsicos (hematoxilina principalmente).
245
fcilmente
con
colorantes
PRACTICA N 32
TEMA: RECUENTO PLAQUETARIO EN SANGRE TOTAL
1.-OBJETIVOS:
Realizar el conteo de plaquetas existentes en un milmetro cbico de
sangre total
Identificar morfolgicamente las plaquetas y apreciar su nmero por campo.
Correlacionar la prctica con la teora expuesta en clase.
2.-FUNDAMENTO/GENERALIDADES:
Las plaquetas o trombocitos son uno de los elementos que conforman nuestra
sangre y juegan un papel muy importante en su proceso de coagulacin de all
que la alteracin de sus niveles pueda tener consecuencias graves en nuestra
salud .Los niveles normales de plaquetas en la sangre de una persona adulta
oscilan entre las 150.000 y las 450.000 por milmetro cbico, cuando en un
anlisis de sangre se muestran valores menores o superiores a esta media se
debe acudir de inmediato a otro tipo de valoracin. Las plaquetas bajas pueden
conducir a una hemorragia interna debido a que se ve afectado el proceso de
coagulacin de la sangre mientras que si se encuentran demasiado altas puede
ocurrir lo contrario, la formacin de cogulos que desencadenen una trombosis,
un infarto. Enfermedades como el dengue, la anemia aplstica, la trombocitopenia,
entre otras o tratamientos como la quimioterapia afectan el conteo de plaquetas
reduciendo su presencia. Ante estos resultados debemos tomar las medidas
pertinentes. Si un paciente cuenta con un alto conteo de plaquetas, y
dependiendo tambin los valores de sus glbulos rojos y blancos, pudiera
presentar los siguientes sntomas:
246
Dolores de cabeza y pecho

Fatiga y debilidad
Mareos y vrtigo
Cambios en la visin
Hormigueo y entumecimiento en pies y manos
Sangrado anormal tras una herida
Sangrado nasal y en las encas
Propensin a la formacin de hematomas
Heces con sangre

4.-MATERIALES
Sangre anticoagulada con EDTA

Solucin de oxalato de amonio al 1%
Pipeta para dilucin de hemates
Cmara de de recuento de Neubauer
Laminilla
Caja de Petri con papel de filtro humedecido
Agitador de pipetas
Microscopio
1. El conteo de plaquetas se realiza en sangre anticuagulada con EDTA y
diluida con oxalato de amonio al 1% mediante el uso de la pipeta
2. Mezcle cuidadosamente, por inversin por lo menos 10 veces, la sangre
anticuagulada con el fin de obtener una muestra homognea
3. Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0
exactamente
4. Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para
no contaminar la solucin diluente
5. Aspire el lquido diluente hasta la marca 101 exactamente
6. Sujeta la pipeta entre los dedos ndice y pulgar, desprenda la boquilla y
deje en reposo durante 3 minutos
7. Agite durante 10 minutos
8. Descarte hasta la mitad del bulbo con el fin de eliminar el lquido del
capilar e inmediatamente llene la cmara
9. Llene la cmara de Neubauer en ambos lados y coloque en ambiente
hmedo por 10 minutos. El ambiente hmedo se logra cubriendo la
cmara con una Caja de Petri que llevar adherido un disco de papel de
filtro humedecido.
10. Coloque la cmara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y
observe el llenado de la cmara. No debe haber agregados plaquetarios.
11. Cuidadosamente enfoque el cuadrado central.
12. Disminuya la intensidad de la luz. As le ser ms fcil distinguir
13. Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeas, opacas,
redondas o alargadas, medianamente retrctiles, y a veces con
prolongaciones
14. El nmero est determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que
se subdivide el cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan
las lneas derecha e inferior.
247

Las plaquetas se cuentan ms fcilmente utilizando microscopio de contraste de
fase, pero si el microscopio de luz se adeca correctamente y el conteo se hace
con un estricto control de calidad el resultado ser igualmente confiable.
Especial
atencin
debe
tenerse
con
las
soluciones
diluentes.
Estas no deben estar contaminadas, pues tanto las partculas como las bacterias
pueden similares plaquetas. Los lquidos diluentes se deben mantener
refrigerados y filtrar antes de su uso.
La limpieza de la cmara de Neubauer y de las pipetas es importante en este
procedimiento,
Si se observan agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse. El uso
de EDTA como anticoagulante ayuda a disminuir la agregacin plaquetaria. El
rango de error para el recuento de plaquetas en el microscopio de luz es de 16
25%. No se debe informar el recuento de plaquetas sin confrontarlo con el
extendido de sangre perifrica
6.-GRAFICOS
248

7.-CONCLUSIONES
El recuento de plaquetas es muy importante ya que con este estudio se

puede diagnosticar o controlar diferentes enfermedades o para identificar la
causa de un sangrado excesivo
forma parte de una biometra hemtica o hemograma, una de
las anormalidades es cuando las plaquetas estn altas o bajas.
Qu funcin cumplen las plaquetas?

Las plaquetas son clulas que mantienen la coagulacin sangunea es decir que su papel es
detener la hemorragia
Cules son los sntomas de un alto de conteo de plaquetas?
Dolores de cabeza y pecho, Fatiga y debilidad, Mareos y vrtigo Cambios en la
visin, Hormigueo y entumecimiento en pies y manos, Sangrado anormal tras una
herida, Sangrado nasal y en las encas Propensin a la formacin de hematomas,
Heces con sangre
249
PRACTICA N33
TEMA: DETERMINACION DEL TIEMPO DE COAGULACION
1.-OBJETIVOS:
Reconocer una muestra en correctas condiciones para la realizacin de

tcnicas de coagulacin.
Relacionar las tcnicas de proceso con una buena obtencin de muestra
Observar resultado de exmenes de coagulacin
2.-FUNDAMENTO/GENERALIDADES:
La prolongacin del tiempo de coagulacin puede obedecer a la disminucin:
Tromboplastina
Protrombina
Del fibringeno
A la presencia de la sangre de algn anticoagulante
La determinacin del tiempo de coagulacin trata de investigar el tiempo que
tarda en coagular la sangre sola, en ausencia de elementos procedentes de
tejidos que pudieran modificar la velocidad del proceso.
Por esta razn, los procedimientos que utilizan la sangre venosa son ms
exactos que aquellos que emplean la sangre capilar tomada de un dedo pues
esta puede estar mezclada con lquidos tisulares.
La coagulacin ser un tanto ms rpida mientras ms estrecho sea el tubo.
Los valores normales con este mtodo varan de 2 a 8 minutos
Se denomina coagulacin al proceso por el cual la sangre pierde su liquidez,
tornndose similar a un gel en primera instancia y luego slida, sin experimentar
un verdadero cambio de estado.
Este proceso es debido, en ltima instancia, a que una protena soluble que
normalmente se encuentra en la sangre, el fibringeno, experimenta un cambio
qumico que la convierte en insoluble y con la capacidad de entrelazarse con otras
250
molculas iguales, para formar enormes agregados macromoleculares en forma

de una red tridimensional.
El fibringeno, una vez transformado, recibe el nombre de fibrina. La coagulacin
es por lo tanto, el proceso enzimtico por el cual el fibringeno soluble se
convierte en fibrina insoluble, capaz de polimerizar y entrecruzarse.
Un cogulo es, por lo tanto, una red tridimensional de fibrina que eventualmente
ha atrapado entre sus fibras a otras protenas, agua, sales y hasta clulas
sanguneas.
3.-MATERIALES
Alcohol
Algodn
Jeringa
Tubo
Lamina
Cronometro
1. Limpiamos bien el dedo y extraemos la sangre con una jeringa e
inmediatamente procedemos a colocar la muestra en un tubo, o en una
lmina ,
2. A intervalos de medio minuto se atraviesa con una aguja en una de las
gotas de sangre
3. Cuando la aguja arrastre filamentos de fibrina al retirar la gota se ha
efectuado la coagulacin
4. El intervalo de tiempo transcurrido entre la colocacin de la gota sobre el
portaobjetos y la formacin de fibrina es el tiempo de coagulacin
251

La determinacin del tiempo de coagulacin debe hacerse a temperatura
uniforme, puesto que el tiempo de coagulacin se prolonga cuando la
temperatura baja y se acorta cuando esta sube.
El tiempo de coagulacin vara segn el mtodo empleado
6.-GRAFICOS
252

7.-CONCLUSIONES
El tiempo de coagulacin sangunea es una prueba muy poco sensible y nunca se
debe utilizar como prueba selectiva. Se usa a menudo para guiar a la teraputica
heparinica, pero los resultados obtenidos son a menudo inseguros, por esto son
preferibles pruebas como el tiempo de tromboplastina parcial activa.
8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS:
Efectos que se produce una hemorragia?
Si es una hemorragia donde se ha perdido gran cantidad de sangre, necesita que
se le administre una bolsa de sangre, caso contrario se puede dar paso a una
anemia.
Qu es un coagulo?
Un coagulo es el producto final de la etapa de coagulacin de la sangre en la
hemostasia
En qu caso continuara una hemorragia?
Cuando una persona tiene bajo volumen plaquetario, ah se continua la
hemorragia.
Hay alguna enfermedad relacionada con la produccin de las plaquetas?

Si hay una enfardad, poco frecuente, es la denominada hemofilia.
253
PRACTICA N34
TEMA: DETERMINACION DEL TIEMPO DE SANGRIA
1.-OBJETIVOS:
Reconocer la utilidad clnica de la medicin de sangrado
Ejecutar correctamente la tcnica de tiempo de sangrado
Conocer la tcnica para la medicin del tiempo de sangrado
2. FUNDAMENTO/GENERALIDADES:
Cuando existe una lesin vascular, por reflejo nervioso y espasmo muscular del
vaso, sobreviene una contraccin del mismo, fenmeno que dura segundos y tiene
como finalidad lograr la estasis de la circulacin y favorece la formacin del tapn
plaquetario. En lesiones de capilares, esta vasoconstriccin, refleja es suficiente
para permitir la adhesin plaquetaria y la detencin de la hemorragia.
El tapn hemosttico plaquetario primario es una masa de plaquetas que se
acumulan en el punto lesionado de la pared vascular, como resultado de su
adherencia, al colgeno del tejido subendotelial que ha quedado expuesto
(adhesin) y luego entre s (cohesin y agregacin).
Los
tapones
primarios
son
inestables
y
fcilmente
eliminados.
Un tiempo de sangrado normal indica una retraccin normal de los capilares y la
existencia de un nmero suficiente de plaquetas, el tiempo normal va de 1 a 3
minutos
3.-MATERIALES
muestra
Lancetas estriles
Torundas de algodn con alcohol (70%)
Un Cronometro
1.-En el brazo del paciente, ejercer una presin de 40mm de Hg. Que se deber
mantener constante durante toda la prueba.
2. Buscar en el antebrazo una zona vascular.
3. Hacer la asepsia con una torunda impregnada con alcohol, dejar secar.
4. Con una lanceta estril y desechable, hacer una puncin de un solo golpe y sin
hacer.
Rasgaduras
laterales,
echar
a
andar
el
cronometro.
254

5. En el momento en que sale la gota de sangre, secar con el papel filtro sin tocar
la piel. 6. Repetir esto cada 15 segundos hasta que el papel filtro no absorba
sangre.
7. Anotar el tiempo.
Al realizar una puncin de tamao y profundidad estandarizados, la accin
conjunta de los vasos y plaquetas detendr el sangrado en un corto tiempo, el cual
es medido y comparado con el normal.
Entre los frmacos que puede causar aumento del tiempo de sangra se incluyen
anticoagulantes.
6.-GRAFICOS
7.-CONCLUSIONES
El tiempo de sangrado es una prueba de pantalla para los desrdenes
cualitativos y cuantitativos de las plaquetas y para las enfermedades varias.
Los mecanismos de coagulacin, aunque en los daos severos de estos,
tambin suele resultar prolongado.
El tiempo de sangrado anormal es evidente de defecto en la fase
paquetera y/o en fase vascular.
255
PRACTICA N35
TEMA: TIEMPO DE PROTROMBINA
1. OBJETIVOS:
Describir y comprender el fundamento del mtodo
Ejecutar correctamente la prueba y la calibracin.
Identificar la utilidad clnica de la medicin del tiempo de protrombina.
2. MARCO TEORICO
La protrombina es una protena estable del tipo de globulinas alfa que contiene
unos 18 aminocidos. Su concentracin normal es la sangre es de
aproximadamente de 20 Mg. Por 100 ml. En presencia de iones de calcio, se
transforma en trombina por la accin enzimtica de las tromboplastinas extrnseca
e intrnseca. Es producida por el hgado bajo la influencia de la vitamina
liposoluble. La protrombina est relacionada con el factor VII, tambin producida
por el hgado. La trombina se transforma en trombina en la etapa segunda de la
coagulacin.
El tiempo de protrombina es una etapa de Quick. Se trata de un tiempo de
coagulacin obtenida el agregar el plasma en exceso de tromboplastina hitica y
calcio. Mide los niveles de factor I Factor II y factor V, VII y X. Es decir que el
nombre de esta prueba dara una idea equivocada, porque no solo el factor II el
que
se
determina.
Al plasma anticuagulado se le induce una coagulacin respondiendo el calcio que
fue inactivado con el anticoagulante y agregando una tromboplastina completa
para activar la va extrnseca. Se mide el tiempo transcurrido, desde la activacin
hasta la formacin del cogulo, es decir, hasta la formacin de fibrina.
Valores de referencia
Porcentaje de actividad 70 a 10%
En segundos 12-15
256

3. MATERIALES
Tubos de ensayo 10x75

Pipetas serolgica de 1.0 ml
Gradilla para tubos de ensayo
Pipeta Pasteur con bulbo
Equipo para puncin sistema vacutainer
Tubos al vaco con citrato de sodio al 3.8%
Papel milimtrico
Cronometro
Bao mara de 37C
Centrifuga
REACTIVOS
Tromboplastina clcica con ndice de sensibilidad internacional (ISI
Solucin salina isotnica.
1. Antes de transcurridos 30m minutos de la extraccin, centrifugar la sangre a
750rpm, durante 5 minutos.
2. Separa el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso.
3. En el tubo de ensayo poner 0.2ml. de la tromboplastina clcica
3. Incubar por unos 2 minutos.
4. Transcurrido ese tiempo con la tromboplastina agregar 0.1ml. De plasma
problema echando a andar simultneamente, el cronometro.
5. Al iniciarse el coagulo el cronometro de detendr. Anotar el tiempo, en
segundos, en que esto ocurri.
6. Convertir el resultado en tiempo, en ndice normalizado internacional.
7. Debido a que se calculara el porcentaje de actividad de protrombina en la
muestra problema, comparada con un normal con actividad
257

Los resultados de la prueba suelen proporcionarse en segundos
Entre los factores que interfieren esta:
La ingesta de alcohol
Dieta rica en grasas puede reducir los valores
Los frmacos que pueden aumentar los niveles son alcohol etlico, sulfamidas,
anticoagulantes orales.
6. GRAFICOS
258

7. CONCLUSIONES:
Dado que el tiempo de protrombina mide la va intrnseca, es el mtodo ideal para
el monitoreo de los anticoagulantes orales. La mayora, como antagonistas de la
vitamina K, actan sobre esta va. Por ello, es indispensable utilizar tromboplastina
estandariza.
Qu son las protrombinas?
Son un tipo de protenas, compuestas por 21 aminocidos, es
una protena del plasma
sanguneo,
forma
parte
del
proceso
de coagulacin mediante la reaccin de sta con la enzima tromboplastina", una
enzima ubicada en el interior de los trombocitos, liberada al romperse la frgil
membrana celular de los trombocitos
Para qu son de utilidad en el organismo?
Porque es un elemento que se encuentra en el plasma y una vez que es activada,
cumple funcin de ayudar a las plaquetas.
Qu tiempo tarda un resultado de protrombinas?
Es en pocos segundos. Aproximadamente menos de 1 minuto.
Los frmacos que efectos producen, en relacin a las protrombinas?
Cualquier tipo de frmaco.
259
PRACTICA N36
TEMA: DETERMINACION DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA
1. OBJETIVOS:
Describir y comprender el fundamento del mtodo
Ejecutar correctamente la prueba
2. MARCO TEORICO
Al plasma anticuagulado se le induce la coagulacin reponiendo el calcio que fue
inactivado con el anticoagulante y agregando una tromboplastina parcial y un
activador de contacto para iniciar la va intrnseca. El anticoagulante remueve el
calcio de la sangre y la centrifugacin, las plaquetas. Los fosfolpidos reemplazan
a las plaquetas.
Siempre que se rompe un vaso sanguneo, los tejidos lesionados que lo rodean, o
los bordes desgarrados del propio vaso, liberan un material lipoproteico
denominado tromboplastina. Este, a su vez, reacciona con los iones de calcio y
con varios factores proteicos del plasma sanguneo, para producir activadores de
protrombina.
La activacin de la actividad trombo plasmtico se realiza por va intrnseca y
extrnseca , esta actividad se presenta por el factor IX activado, junto con el factor
3 plaquetario, calcio y el factor VIII resultado de la va intrnseca; y con el VII
activado, fosfolpidos tisulares, calcio resultado se la va extrnseca.
El
tiempo
de
tromboplastina
parcial
activada
(T.T.P.A.)
Constituye una medida del sistema intrnseco, depende de la totalidad de factores,
excepto calcio, plaquetas y factores VII y XII.
Resultados Normales:
60-70segEntre los factores que prolongan el TTP, se incluyen los antihistamnicos,
cido ascrbico, heparina, salicilatos.
3. MATERIALES
260
Equipo para puncin venosa tubos de ensayo fr 12x75mm

Pipetas serolgicas 1 ml
Gradilla
Pipeta Pasteur con bulbo
Algodn con alcohol al 70%
Tuvo con citrato al vaco

Bao Mara a 37C
Centrifuga
Tromboplastina parcial liquido activad
Cloruro de calcio 0.02m
Sangre venoso obtenida con citrato
1. Las muestras se debe, centrifugar a 750rpm, durante 5 minutos.
2. Separar el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso.
3. En tubos de ensayo, incubar a 37C el cloruro de calcio 0.02M y la
tromboplastina, durante 3 minutos, por lo menos.
4. Calcular la cantidad necesaria para las pruebas que se van a realizar
5. Colocar un tubo de ensayo 0.1ml de la tromboplastina parcial previamente
incubada y dejar incubar exactamente 2 minutos
6. 6. Agregar 0.1ml de la tromboplastina parcial previamente incubada y dejar
incubar exactamente 2 minutos
7. Transcurrido ese tiempo, agregar 0.1ml del cloruro de calcio 0,02M
echando a andar el cronometro y el coagulo metro.
8. Al iniciarse el coagulo, el cronometro de detendr. Anotar el tiempo, en
segundos, en que esto ocurri.
El tiempo de tromboplastina parcial ha reemplazado al tiempo de coagulacin de
sangre completa y al tiempo de recalcificacin, debido a que ambos son difciles
de estandarizar, tienen rangos de referencia amplios y son insensibles a
anomalas leves de coagulacin y hasta moderadamente severos.
261

6. GRAFICOS:
7. CONCLUSIONES
El anlisis de TTP se considera un procedimiento seguro. Sin embargo, al igual
que con muchos otros anlisis, es posible que surjan algunos problemas al no
cumplir con el procedimiento establecido.
El anlisis de tiempo de tromboplastina parcial (TTP) se mide en segundos.
8. PREGUNTAS Y RSEPUESTAS
Qu es este examen?
Este examen mide cunto tiempo toma su sangre para coagular. Se usa para
evaluar problemas sanguneos o de la coagulacin, y vigilar su tratamiento con
heparina (un anticoagulante)
Cules son otros exmenes similares?
Tiempo de protrombina
Estudio del factor de coagulacin XI
Conteo sanguneo completo
Cules son los riesgos?

Sangre: En el sitio donde se toma la muestra puede ocurrir la extravasacin de
sangre, un hematoma (sangre extravasada debajo de la piel), as como una
262

infeccin. Las personas que realizan estos exmenes pueden necesitar hacerlos
ms de una vez. Consulte con su mdico en caso de duda acerca de los riesgos
de este examen.
Cmo se hace el examen?

Cuando se necesita obtener una muestra de sangre venosa, generalmente se
selecciona una vena del brazo. Se puede poner un torniquete (correa larga de
caucho) para ver la vena. Se limpia la piel sobre la vena y se introduce la aguja. Le
pedirn que permanezca muy quieto mientras toman la muestra. La sangre se
puede recolectar en uno o ms tubos y el torniquete puede ser retirado. Cuando
se ha obtenido suficiente sangre para la muestra, el tcnico laboratorista saca la
aguja.
Qu me sentir durante el examen?
El grado de molestia que usted puede sentir depender de muchos factores,
incluyendo su sensibilidad para el dolor. Comunquele a la persona que realiza la
prueba lo que est sintiendo. Informe a dicha persona si usted no puede continuar
con el procedimiento.
263
PRACTICA N 37
TEMA: IDENTIFICACION DE SIFILIS MEDIANTE PRUEBA CUANTITATIVA
1. OBJETIVOS
Determinar la presencia o ausencia de sfilis en suero humano mediante un
antgeno no treponemico, para el diagnstico de la enfermedad causada
por Treponema pallidum.
2. MARCO TEORICO
La sfilis es una enfermedad crnica que se contagia por contacto directo,
transfusiones o por transmisin vertical (de la madre al feto) a travs de la
placenta.
Se caracteriza por presentar etapas sintomticas separadas por perodos
asintomticos o de latencia. En estos perodos de latencia, slo una reaccin
serolgica puede detectar la enfermedad y evitar que contine progresando.
El agente responsable es el Treponema pallidum (TP), tiene forma de espiral y su
longitud alcanza unos 10 a 15 m con un espesor es de 0,15 m.
MANIFESTACIONES CLINICAS
Las manifestaciones clnicas ocurren en 3 estadios diferentes:
a) Primario
b) Secundario
c) Tardo
Esta es la evolucin natural de la sfilis que puede ser detenida en sus primeras
manifestaciones por un tratamiento correcto. Los tratamientos inadecuados
pueden abortar alguna etapa sin curar la infeccin que se manifestar en una
etapa posterior.
Se llama sfilis infecciosa, reciente o temprana a las etapas primaria y secundaria
por ser contagiosas y factibles de curar totalmente. La sfilis tarda en sus diversas
manifestaciones no contagia y si bien puede ser curada, siempre dejar secuelas.
SFILIS PRIMARIA:
La lesin caracterstica primaria, el chancro duro, es una lcera indurada e
indolora que marca el sitio de inoculacin de la bacteria, acompaada por
alteraciones de los ganglios linfticos regionales.
El perodo de incubacin promedio es de 2 a 3 semanas, pudiendo variar de 9
das a 3 meses.
264

El treponema puede atravesar la mucosa sana, o bien aprovecha lesiones en la
piel (traumticas, por hongos, herpticas). Asienta comnmente en glande, surco
balano-prepucial, vulva o crvix; las formas extra-genitales ms frecuentes son
lengua, labios, oro faringe y tambin ano y recto.
El fluido seroso de la lesin contiene numerosos treponemas los cuales son
detectados por microscopa de campo oscuro (CO), que es el diagnstico de
eleccin en esta etapa. La serologa no se recomienda para el diagnstico de la
lesin, pues el chancro suele corresponder con el perodo pre-serolgico de la
sfilis y puede inducir a error (de todos modos, la toma de muestra para serologa
debe efectuarse por protocolo, ante la presencia de una lesin
Si un chancro sifiltico no es tratado, ir atenundose despus de unas semanas y
desaparecer en 30 a 45 das sin dejar cicatriz local.
SFILIS SECUNDARIA:
Si no hay tratamiento exitoso del chancro, luego de una latencia de 60-90 das
(latencia temprana) aparecen los secundarismos en diversos sitios del
organismo, a raz del ingreso de treponemas a la sangre.
Se puede observar el exantema o rosola, una erupcin extendida sobre todo en
torso, que no pica ni descama. Otros sntomas son: ppulas palmares y plantares,
enantema orofarngeo, condilomas planos anales, alopecias, adenopatas
generalizadas.
En los condilomas el diagnostico puede hacerse por CO, pero en general en este
periodo el diagnstico es serolgico, pues todas las reacciones son fuertemente
reactivas.
SFILIS TARDA:
Aparece luego de varios aos (10-20) de latencia (latencia tarda) cuando la
infeccin no es tratada en las etapas anteriores.
Las alteraciones que se producen en este perodo, ya no son infecciosas, sino
post-infecciosas (Ej. gomas, cardiovasculares, nerviosas). Aunque se d el caso
de que alguna de estas lesiones aflore o est ubicada en la piel, ningn foco de
sfilis tarda es contagiante, porque carece de treponemas activos.
En cualquiera de sus formas clnicas el diagnstico es serolgico.
Aproximadamente el 71% de los pacientes con sfilis tarda presentan pruebas notreponemicas
265

3. MATERIALES
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Muestra
Placas
Pipetas
Reactivo para sfilis
Microscopio
Rotador
1. Dispensar 50ul de suero en cada cuadricula o excavacin segn el tipo de
lmina que utilice.
2. Aadir una gota de antgeno de VDRL
3. Coloque la o las lminas tapadas en un rotador 180 revoluciones durante 4
minutos
4. Observar en microscopio
Se observaran partculas en forma de filamentos cortos dispersos, agrupadas y
pequeos, o agrupadas y grandes., en caso de ser Reactivo se realizara
diluciones.
Ninguna de las pruebas por s sola es suficiente para establecer el diagnstico.
Las pruebas de anticuerpos treponmicos, si son positivas, a menudo siguen
sindolo de por vida, a pesar del tratamiento de la enfermedad o de su actividad.
Los ttulos de anticuerpos no estn relacionados con la actividad de la enfermedad
y deben comunicarse como negativos o positivos. Los ttulos de anticuerpos no
treponmicos tienden a estar relacionados con la actividad de la enfermedad;
aumentan normalmente con una nueva infeccin y disminuyen despus del
tratamiento.Estos ttulos deben comunicarse de forma cuantitativa y titularse hasta
el punto final
266

6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES
Obtuvimos un resultado positivo de lo planteado en el objetivo.
La prueba de VDRL es una prueba sumamente importante para la
identificacin de sfilis, enfermedad causada por el agente Treponema
pallidum.
As como esta no es una prueba diagnstica ya que es una prueba no
treponemica motivo por el cual para su diagnstico es necesario mediante
la confirmacin de otras pruebas, pero sin embargo es de suma
importancia en un laboratorio y resultado inicial
267

Qu es la snfisis?
Es una enfermedad crnica que se contagia por contacto directo, transfusiones o
por transmisin vertical (de la madre al feto) a travs de la placenta.
Cules son los tipos de snfisis?
Snfisis primaria.
Snfisis secundaria
Snfisis tarda
Qu diferencia hay entre la snfisis primario y la secundaria?
Snfisis primaria no hay tratamiento exitoso del chancro, luego de una latencia de
60-90 das (latencia temprana) aparecen los secundarismos en diversos sitios
del organismo, a raz del ingreso de treponemas a la sangre.
Mientras que la snfisis secundaria, la lesin caracterstica primaria, el chancro
duro, es una lcera indurada e indolora que marca el sitio de inoculacin de la
bacteria, acompaada por alteraciones de los ganglios linfticos regionales.
El perodo de incubacin promedio es de 2 a 3 semanas, pudiendo variar de 9
das a 3 meses.
Cules son las semejanzas entre la snfisis secundaria y la tarda?
No hay semejanzas entre ambas
Qu tiempo se tarda al realizar la prueba de snfisis?
El anlisis que se realiza puede llegar a tardar unos 5 minutos.
268
PRACTICA N 38
TEMA: INVESTIGACION DE TIFOIDEA POR MEDIO DE AGLUTINACIONES
FEBRILES
1. OBJETIVOS:
Detectar anticuerpos en el suero del paciente contra salmonella
Aprender la interpretacin de la tcnica para un buen diagnostico
2. MARCO TEORICO
La infeccin causada por microorganismos de diversas especies produce entre
otros sntomas una marcada elevacin de la temperatura, tal es el caso de la
fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. enteritis
as como las
paratifoideas causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo causado por el genero
Rickettsias
La infeccin por estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo
humoral con la produccin de anticuerpos que pueden ser detectados con el
antgeno especfico.
La prueba se basa en una reaccin inmunolgica entre los anticuerpos sricos y el
antgeno correspondiente produciendo una reaccin de aglutinacin
macroscpica.
Algunos sueros normales pueden dar un ttulo de 1:20 a1:40 y hasta 1:80 pero
esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infeccin anterior. No siempre se
presenta produccin de aglutininas en infecciones bacterianas. Se pueden
producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas
enfermedades. La vacuna tfica puede producir aglutininas contra antgenos
Proteus .En la reaccin de Huddleson, ttulos de 1:80 pueden considerarse de
significacin clnica
3. MATERIALES
269
todo lo necesario para sacar sangre

jeringa
algodn, alcohol
torniquete
tubo sin anticoagulante
placa de 36 orificios
Aplicadores de madera
pipeta Pasteur
Muestra biolgica: suero sanguneo, anfgenos febriles

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Colocar una gota de suero a 6 orificios de la placa con suero sanguneo.

Agregar una gota de Tfico a un orificio de la placa con el suero sanguneo.
Agregar una gota de Tfico a un orificio de la placa con el suero sanguneo
Agregar una gota de ParatificoA a un orificio de la placa con el suero
sanguneo.
Agregar una gota de ParatificoB a un orificio de la placa con el suero
sanguneo
Agregar una gota de Brucella a un orificio de la placa con el suero
sanguneo.
Agregar una gota de Proteus ox-19 a un orificio de la placa con el suero
sanguneo.
Mezclar con el aplicador de madera (uno para cada uno).
Agitar durante 5 minutos en el agitador de placas.
Observar
El diagnstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el
laboratorio clnico y el mdico, ya que la elevacin del ttulo en la muestra de
suero con sintomatologa reciente y la muestra de suero en fase convaleciente
indicar la exactitud del diagnstico
6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES
270

Con ninguna de las reacciones febriles se puede hacer un diagnstico
definitivo de cualquier enfermedad comprendida en ellas.
El uso inadecuado de estas pruebas o su mala interpretacin generalmente
derivan en el uso injustificado de antibiticos.
Qu es la fiebre tifoidea?
La fiebre tifoidea es una enfermedad infecciosa aguda, febril, que se conoce
tambin con el nombre de fiebre entrica, es producida por Salmonella typhi, se
adquiere al ingerir agua o alimentos contaminados, es de curso prolongado, puede
tener complicaciones graves como la perforacin intestinal, se dispone de varios
paraclnicos para el diagnstico como el hemocultivo y mielocultivo.
Cules son las complicaciones de la fiebre tifoidea?
La perforacin intestinal, la miocarditis y las manifestaciones del sistema
nervioso central
son
complicaciones
frecuentes
Cunto tarda el examen de la fiebre tifoidea?

De 5 a 7 minutos un aproximado
Cul es el tratamiento?
La teraputica antimicrobiana es esencial para el tratamiento de la fiebre tifoidea
como la administracin de antibiticos como:
Coranfenicol 100mg/kg/24 hrs VO IV, dividida en 4 aplicaciones durante 10-14
das.
Ampicilina 200 mg/g/24 hrs IV repartido en cuatro dosis.
Amoxicilina 100 mg/kg/24 hrs VO por 14 das.
Cmo se debe prevenir la fiebre tifoidea?
Se dispone de varias vacunas contra S.typhi.
271
PRACTICA N 39
TEMA: DETERMINACION DEL FACTOR REUMATOIDEO
1. OBJETIVO
Conocer acerca del FACTOR REUMATOIDEO, como una prueba ms
para la deteccin de infecciones reumticas, como artritis reumatoidea
2. MARCO TEORICO
La Artritis Reumatoide es una enfermedad crnica, que produce la inflamacin de
las articulaciones principalmente de manos y pies. Cuando se originan estas
inmunoglobulinas IgG y se fija la IgM, se forman inmunocomplejos IgG-IgM que
activan el Complemento y otros factores inflamatorios que produce
secundariamente la destruccin de las articulaciones afectadas. Por ello se le
llama una enfermedad autoinmune, ya que es el sistema inmunitario del individuo
el que destruye tejidos del propio cuerpo. En personas de la tercera edad pueden
aparecer niveles elevados sin repercusin clnica.
Valores normales o negativos:
Menor de 1300 U/ ml (por nefelometra). Ttulo menor de 1:80 (mtodo de

aglutinacin) En estos valores puede haber muy pequeas diferencias por la
tcnica o por criterios de normalidad propios de laboratorios, a veces depende en
el rango de valores y otras veces por las unidades a las que se hace referencia.
Valoracin De Los Resultados Anormales
Valores alterados o positivos del Factor Reumatoide (FR) en:
272
Artritis Reumatoide
Escleroderma
Hepatitis crnica
Infeccin viral crnica
Mononucleosis infecciosa
Leucemia
Lupus Eritematoso Sistmico (LES)
Sndrome de Sjogren
Sndrome Nefrtico
Tuberculosis

3. MATERIALES
Reactivo de ltex
Muestra
Pipeta
Laminilla con fondo negro
Aplicadores
Rotador
cronometro
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Dejar que las muestras y el reactivo tengan temperatura ambiente

Colocar 50ul de muestra en la laminilla de fondo negro
Agregar 1 gota de reactivo
Con el aplicador homogenizar
Rotar por unos segundos
Y leer por medio de aglutinacin
No es un anlisis especfico de esta enfermedad, aparece positivo en el 80 % de
los pacientes con Artritis Reumatoide, pero puede aparecer negativo. Inclusive
puede aparecer positivo en otras enfermedades no relacionadas (Lupus
Eritematoso Sistmico, Sndrome de Sjogren, etc.).
6. GRAFICOS
273

7. CONCLUSIONES
Se estableci correctamente la prctica aplicando la tcnica indicada
Conocimos que las aglutinaciones de las partculas de ltex indica una
reaccin cuantitativa
Con esta tcnica podemos dar el primer paso para realizar un diagnstico
presuntivo
Para que se realiza este anlisis?
Este examen se usa con mayor frecuencia para el diagnstico de la artritis
reumatoidea o el sndrome de Sjogren.
Cules son los niveles de este examen?
Los resultados generalmente se reportan en una de dos formas:
Menos de 40-60 u/mL
Menos del ttulo 1:80
Un nmero bajo (resultado normal) por lo regular significa que usted no tiene
artritis reumatoidea o el sndrome de Sjogren.
Las personas con niveles ms altos del factor reumatoideo pueden
propensas a otras enfermedades?
274
Si pueden estar propensas a enfermedades como Esclerodermia
Lupus eritematoso sistmico
Enfermedad de Still del adulto
Dermatomiositis
Sarcoidosis
PRACTICA N40
TEMA: DIAGNOSTICO DE LEISHMANIASIS POR FROTIS DIRECTO
1. OBJETIVOS
Conocer la tcnica para un correcto diagnstico de leishmaniasis
2. MARCO TEORICO
La leishmaniasis es una zoonosis de amplia distribucin mundial que representa
un problema de salud pblica en muchos pases del Tercer Mundo. El parsito
Leishmania produce las tres formas clnicas principales de la enfermedad: la forma
cutnea, la forma mucosa y la forma visceral Leishmania es un protozoo parsito
causante de la leishmaniasis, enfermedad de variada presentacin clnica y de
amplia distribucin mundial. La Organizacin Mundial de la Salud la considera una
enfermedad re-emergente y no controlada, y sus patrones de transmisin se han
visto afectados en los ltimos aos por la accin humana, entre otros aspectos. El
diagnstico vara de acuerdo con la forma clnica de presentacin y actualmente
se recomienda la identificacin de la especie infectante como elemento de mucha
utilidad para indicar un tratamiento adecuado, realizar el monitoreo clnico y como
aspecto importante en estudios epidemiolgicos, que incluyan el estudio de
vectores y/o reservorios. El tratamiento oportuno es, hasta el momento, una de las
pocas medidas de control disponibles, ya que a pesar de los esfuerzos realizados,
no existe vacuna contra esta afeccin
Las formas de presentacin de la leishmaniasis cutnea varan desde lesiones
cerradas como ppulas, ndulos y placas que pueden ser de aspecto verrugoso
hasta las formas abiertas como la lcera franca y la lcera vegetante. La lcera
tpica es redondeada, de bordes elevados, eritematosos, acordonados, con centro
granulomatoso, limpio y base infiltrada. Cuando hay sobreinfeccin bacteriana se
tornan dolorosas, de fondo sucio, secrecin purulenta, recubiertas por costra de
aspecto melisrico, eritema en su periferia y signos inflamatorios locales. Ante la
sospecha de un caso de leishmaniasis cutnea es necesario visualizar el parsito
para corroborar el diagnstico e iniciar el tratamiento. La prueba de oro es el frotis
directo. La sensibilidad del mtodo depende del tiempo de evolucin de la lesin.
Se consideran dos cuadros clnicos cutneos: leishmaniasis cutnea localizada
(LCL), generalmente circunscrita al sitio de inoculacin gracias a una respuesta
inmune celular protectora, y leishmaniasis cutnea diseminada (LCD)
caracterizada por una pobre respuesta inmune celular, que permite la
diseminacin no controlada en pie
275

3. MATERIALES
Solucin salina
Agua destilada
Bistur
Placas
1. Aplicar las normas de bioseguridad empleadas en el laboratorio clnico.
2. Realizar la limpieza de la lesin utilizando una gasa con alcohol, solucin
salina o jabn quirrgico y agua destilada.
3. Si hay costra remuvala cuidadosamente y limpie nuevamente con agua
destilada para retirar los excesos de sangre que se presenten.
4. Haga presin en la lesin hasta hacer isquemia y con el borde romo de una
lanceta realice suavemente un raspado sobre los puntos elegidos para la
toma de la muestra.
5. NO realice incisin en la lesin porque el paciente puede quedar con una
cicatriz peor.
6. La linfa obtenida del raspado se extiende sobre una lmina de vidrio
previamente desengrasada (pasar las lminas nuevas por etanol y agua
destilada y por ltimo secarlas con una tela que no suelte mota, este
procedimiento para eliminar los excesos de grasa que pueden tener la
lminas)
7. En cada lmina debidamente rotulada se pueden realizar 3 extendidos.
Es importante tener en cuenta que para realizar esta prueba se debe de sugerir al
paciente no tomar medicina, no aplicarse ninguna crema o ungento que pueda
interferir en la identificacin o diagnstico.
276

6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES
Luego de haber cumplido con el objetivo propuesto llegamos a la conclusin que
para realizar esta tcnica debemos de conocer perfectamente las condiciones
adecuadas para realizar el examen.
Qu es Leishmaniasis?
Es una enfermedad transmitida por la picadura del flebtomo o mosquito simlido
hembra.
Cules son los sntomas de Leishmaniasis?
Es una enfermedad transmitida por la picadura del flebtomo o mosquito simlido
hembra.
Una fiebre cunto dura en la enfermedad d Leishmaniasis?
En los adultos dura de 2 semanas a 2 meses, acompaada de sntomas
como fatiga, debilidad e inapetencia. La debilidad aumenta a medida que la
enfermedad empeora.
277
PRACTICA N41
TEMA: INVESTIGACION
PRUEBA RAPIDA
DE LEPTOSPIROSIS
POR METODO ELISA Y
1. OBJETIVOS
Validar una prueba de ELISA para detectar anticuerpos comparacin con prueba
rpida
2. FUNDAMENTO
La leptospirosis es una enfermedad zoontica de distribucin mundial que afecta
tanto a humanos y animales.
Es considerada tambin como una enfermedad ocupacional, dado que su
transmisin est asociada con la actividad de las personas, sobre todo cuando el
hombre est en contacto directo o indirecto con orina de animales infectados.
.
Esta enfermedad es causada por Leptospira interrogas agrupa ms de 240
serovares que son patgenos para los humanos y animales. En el ambiente
tambin se encuentra otra especie que no causa enfermedad en los humanos es
Leptospira biflexa que agrupa ms de 60 serovariedades.Dentro de las
manifestaciones clnicas de la leptospirosis se encuentran el sndrome de Weil, el
cual muchas veces es fatal para el paciente si es que no se llega a dar un
tratamiento adecuado, sobre todo porque en esta etapa se confunde con
patologas virales.
La enfermedad tpicamente progresa en el cuerpo en dos fases:
La primera fase se caracteriza por sntomas de fiebre sin alguna razn especfica
y la cual incluye dolores de cabeza, dolores musculares, dolor en los ojos
acompaado de luces brillantes, seguido de escalofros y fiebre y un color rojizo
en los ojos. Sin embargo, los sntomas mejoran despus de cinco a nueve das.
La segunda fase comienza despus que el paciente tiene algunos das sintindose
bien. Es luego cuando los sntomas iniciales recurren, pero con ms fiebre y
endurecimiento del cuello, algo conocido en el argot popular como Tengo el cuello
duro o tieso.
Algunos pacientes desarrollan una inflamacin seria de los nervios de los ojos, el
cerebro, y entre otros nervios se afecta la columna vertebral (meningitis).
278

Otro de los sntomas en la segunda fase consiste en el dolor de la parte superior
del abdomen, y los sntomas menos comunes se relacionan a la enfermedad del
hgado, los pulmones, los riones, y el corazn.
A propsito, la leptospirosis asociada con el hgado y enfermedad de los riones
se le conoce como el sndrome de Weil y se caracteriza por un color amarillo en
los ojos. Los pacientes con el sndrome de Weil desarrollan un estado mucho ms
serio con todos los rganos que se afectan con esta enfermedad.
Cmo se diagnostica la leptospirosis?
La leptospirosis humana se puede diagnosticar mediante aislamiento de la
bacteria o demostrando anticuerpo contra leptospiras. El cultivo tiene la desventaja
de que el perodo que tarda la bacteria en crecer y su bajo porcentaje de
aislamiento hacen que no sea til para un diagnstico oportuno.
El periodo de incubacin es usualmente de 7 10 das, en un lapso de 2 30
das.
Los humanos reaccionan a una infeccin con leptospira produciendo anticuerpos
espec-cos anti-leptospira.
La seroconversin puede ocurrir tan pronto como 3 7 das despus del inicio de
la infeccin pero algunas veces puede ocurrir despus de 10 das o ms.
Los anticuerpos IgM usualmente aparecen poco antes que los anticuerpos IgG, y
generalmente permanecen detectables por meses o an aos, pero a un nivel bajo
de ttulo.
Los anticuerpos IgG pueden ser completamente indetectables, o ser detectables
por periodos cortos de tiempo.
3. MATERIALES
279
Kits de prueba rpida

Kits para prueba de Elisa
Agua destilada
Muestra (suero)
Cronometro
Lector de Elisa
Pipeta

PROCEDIMIENTO PARA PRUEBA RAPIDA
Colocar 10ul de suero en el casete
Agregar 3 gotas de reactivo
Esperamos 15 a 20 minutos con ayuda de cronometro
PROCEDIMIENTO PARA METODO DE ELISA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Se realiza un protocolo con el orden de las muestras a trabajar

Se prepara la dilucin 1ml de liq de dilucin + 10ulde suero(muestra)
Colocar 100ul de la dilucin realizada en cada pocillo
Cubrir con cinta los pocillos
Dejar reposar 1H00 a 37grados
Se prepara la solucin de lavado (wash) dependiendo de la cantidad de
pocillos
7. Se enjuaga de 4 a 5 veces cada una de 30seg.
8. Colocar 100ul de conjugado
9. Dejar incubar por 30minutos a t.a
10. Se desecha el liquido
11. Lavar nuevamente por 4 a 5 veces por 30seg cada lavado
12. Agregamos 100ul de TMB por 15 minutos
13. Finalmente agregamos 100ul de solucin de stop
14. Leemos por coloracin y lector de Elisa.
15. Realizar el clculo respectivo para sacar los valores cuantitativos.
Es importante que la valoracin sintomatologa sea lo ms amplia y profunda
posible puesto que por la manifestacin que presenta en el individuo esta
patologa puede dar como resultado una prueba cruzada antes Hepatitis A y
Dengue.
280

6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES
La prueba rpida es de fcil de usar: No se necesita ningn equipo
Resultados de la prueba los dados en 20 minutos no es til para medir la
evolucin de la enfermedad.
La prueba de Elisa es compleja tarda aproximadamente en obtener el
resultado aprox 3 horas con una SENSIBILIDAD 97.7ESPECIFICIDAD
99.7 dando un grado de confianza alto para un buen diagnostico
La prueba por el mtodo de Elisa es muy necesaria para un control
evolutivo de la patologa frente al tratamiento.
281
PRACTICA N 42
TEMA: DETECCIN DE ANTICUERPOS CONTRA VIH POR EL MTODO
ELISA
1. OBJETIVOS
El alumno conocer el fundamento del mtodo de Laboratorio para la
deteccin de anticuerpos contra el Virus de la Inmunodeficiencia Humana
por la tcnica de ELISA, as como su aplicacin tcnica
2. MARCO TEORICO
El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) est formado por un nucleoide
envuelto en una matriz proteica, que a su vez est encerrada en una envoltura
lipdica. El nucleoide contiene el material gentico del virus y la enzima
transcriptasa inversa, necesaria para la replicacin vrica. Las glicoprotenas
Transmembrana gp 41 y de la envoltura gp 120, enlazadas con la envoltura vrica,
permiten al VIH acoplarse y fundirse con la clula diana.
El Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) es un retrovirus perteneciente a la
Familia Retroviridae; es el causante del Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida
(SIDA).
Los retrovirus se caracterizan porque su material gentico est en forma de ARN,
pero al entrar en la clula hospedante, transforman el ARN en ADN mediante la
enzima transcriptasa inversa.
La evidencia serolgica de la infeccin con vih se puede obtener analizando la
presencia de antgenos de vih o de anticuerpos en el suero o en el plasma de
individuos posiblemente infectados con VIH.
Generalmente, los anticuerpos solo se pueden detectar en la fase aguda y la fase
sintomtica del SIDA. Los anticuerpos frente al VIH-1 Y/o VIH-2 se pueden
detectar prcticamente durante todo el periodo de infeccin, desde o poco
despus de la fase aguda hasta la fase final del SIDA. Por ello, el uso de anlisis
de anticuerpos altamente sensibles es una aproximacin ampliamente utilizada en
el serodiagnstico de la infeccin.
282

3. MATERIALES
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Muestras
Pipetas
Kit con reactivo de VIH
Kit con reactivo de dengue
Papel absorbente
Agua destilada
Estufa
Cronometro
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Dejar reposar 30minuts a t.a
pocillos
9. Dejar incubar por 30minutos a t.a
La reactividad de los anticuerpos contra VIH-1 y VIH 2 no debe ser considerada
como un diagnstico del Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) o de la
infeccin por VIH.
Debido a que la produccin de anticuerpos contra VIH, despus del contacto inicial
puede ser tarda, un resultado negativo en esta prueba no debe ser considerado
como evidencia concluyente de que el paciente no ha sido expuesto ni se ha
infectado con el virus VIH. Debe ser verificada con una prueba confirmatoria, toda
muestra examinada
Donde se haya detectado la presencia de anticuerpos contra VIH1 o VIH-2
283

6. GRAFICOS
7. CONCLUSIONES
Luego de haber estudiado el fundamento de la tcnica de Elisa podemos
asegurar que esta es una prueba confiable que sirve para dar un
diagnstico de la enfermedad
Este proceso debe de ser realizado por personal capacitado en este tipo de
pruebas
Un resultado equivoco puede causar daos severos en el paciente
Es recomendable realizarse una prueba durante el periodo de incubacin
para una deteccin temprana
Cuntos das tardan los resultados de un examen de VIH sida?
La demora tpica oscila entre 14 y 21das
Cules son los sntomas de una persona que tiene el virus?
Entre un 50 y un 90 por ciento de las personas que se han infectado por el virus
del sida experimenta sntomas similares a un catarro o una gripe leve (cansancio,
fiebre, prdida de apetito) que remite a los pocos das, tambin puede
sufrir diarrea, sudoraciones nocturnas o aumento de los de los ganglios linfticos.
La nica forma de saber que se ha contrado la infeccin es con una prueba
especfica realizada por un profesional sanitario. Muchos VIH positivos no
manifiestan los sntomas de presentar la infeccin hasta que han transcurrido
varios aos, de ah la importancia de conocer qu prcticas y situaciones pueden
determinar la infeccin y actuar consecuentemente.
Cul es el tratamiento para la persona que tenga esta enfermedad?
El tratamiento vara dependiendo de cada paciente, pero la terapia incluye

alguno o algunos de las siguientes familias de frmacos: Inhibidores de la
transcriptasa inversa anlogos de nuclesidos (ITIAN). Inhibidores de la
transcriptasa inversa nucletido (ITINN). Inhibidores de la proteasa (IP).
284
PRACTICA N43
TEMA:
INVESTIGACION
VIROLOGICA
TOXOPLASMOSIS, CITOMEGALOVIRUS,)
(DENGUE,
HEPATITIS
1. OBJETIVO:
Conocer cuando una infeccin es de etiologa viral por medio de
diagnstico disponible ya sea de una forma directa o indirecta por mtodo
Elisa.
2. FUNDAMENTO
El dengue es una enfermedad infecciosa causada por el virus del dengue, del
gnero flavivirus, y que es transmitida por mosquitos, principalmente por el
mosquito Aedes aegypti. La infeccin causas sntomas gripales (sndrome gripal),
y en ocasiones evoluciona hasta convertirse en un cuadro potencialmente mortal,
llamado dengue graveo dengue hemorrgico.1 Es una infeccin muy extendida
que se presenta en todas las regiones tropicales y subtropicales del planeta. En
los ltimos aos la transmisin ha aumentado de manera predominante en zonas
urbanas y semi urbana y se ha convertido en un importante problema de salud
pblica, hasta el punto de que en la actualidad, ms de la mitad de la poblacin
mundial est en riesgo de contraer la enfermedad. La prevencin y el control del
dengue dependen exclusivamente de las medidas eficaces de lucha contra el
vector transmisor, el mosquito.
La hepatitis es una enfermedad inflamatoria que afecta al hgado. Su causa
puede
ser
infecciosa
(viral, bacteriana,
etc.), inmunitaria (por auto
anticuerpos, hepatitis
autoinmune)
o
txica
(por
ejemplo
por alcohol, venenos o frmacos). Tambin es considerada, dependiendo de su
etiologa, una enfermedad de transmisin sexual.
Hay virus especficos para la hepatitis (virus hepatotropos), es decir, aquellos que
slo provocan hepatitis. Existen muchos: virus A, virus B, C, D, E, F, G. Los ms
importantes son los virus A, B, C y, en menor medida, el D y el E, siendo los
ltimos, F y G los ltimos descritos y los menos estudiados.
285

La toxoplasmosis es una enfermedad infecciosa ocasionada por el protozoo
Toxoplasma gondii, un parsito intracelular obligado.1 La toxoplasmosis puede
causar infecciones leves y asintomticas, as como infecciones mortales que
afectan mayormente al feto, ocasionando la llamada toxoplasmosis congnita.
Tambin puede revestir gravedad cuando afecta a recin nacidos, ancianos y
personas vulnerables por su condicin de dficit de inmunidad.
Se considera la enfermedad como una zoonosis, lo cual significa que, de modo
habitual, se transmite desde los animales a los seres humanos a travs de
diferentes vas de contagio, siendo los hospedadores definitivos el gato y otras
seis especies de felinos.
Las medidas de prevencin son particularmente importantes en las mujeres
embarazadas y consisten en normas generales de higiene para evitar la
transmisin por alimentos o agua contaminada, no consumir carne cruda o poco
cocinada y evitar contacto con heces de gato.
El citomegalovirus (CMV), es una forma de herpesvirus; en humanos es
conocido
como Human
herpesvirus
5 (HHV-5).
Pertenece
a
la
subfamilia Betaherpesvirinae de la familia Herpesviridae. Su nombre alude al
aumento de tamao que se observa en las clulas infectadas producto del
debilitamiento del citoesqueleto. Este virus es una de las principales causas de
la mononucleosis infecciosa.
El CMV afecta a personas tanto inmunocompetentes como inmunodeprimidos. Es
en los pacientes inmunodeprimidos en los que produce complicaciones severas.
Sin embargo, en el resto tambin se han descrito afecciones tales como el
sndrome similar a mononucleosis, faringitis, linfoadenopatas o artralgias.1
El CMV principalmente ataca a las glndulas salivares y puede ser una
enfermedad grave o fatal para los fetos durante el embarazo. La infeccin por
CMV tambin puede poner en peligro la vida de los pacientes que
sufren inmunodeficiencia. Los virus se hallan en muchas especies de mamferos.
3. MATERIALES Y REACTIVOS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
286
Muestras
Pipetas
Kit con reactivo de VIH
Kit con reactivo de dengue
Hepatitis
Papel absorbente
Agua destilada
Estufa
Cronometro

4. PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA
Requisitos previos para realizar las practica:
Reactivos y muestras deben estar a temperatura ambiente
Revisar fecha de caducidad de Kits
La temperatura de la incubadora debe de estar a 37C
TECNICA PARA DENGUE IGM
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Dejar incubar durante 1 hora a 37c
pocillos
8. Colocar 100ul de conjugado(antgeno +liquido diluido)
9. Dejar incubar durante 1 hora a 37c
TECNICA PARA HEPATITIS
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Dejar incubar durante 1 hora a 37c
pocillos
287

TECNICA PARA TOXOPLASMOSIS Y CITOMEGALOVIRUS
1. Se realiza un protocolo con el orden de las muestras a trabajar
2. Se realiza la dilucin 100ul de liq de dilucin + 50ulde suero(muestra) en
cada pocillo
3. Cubrir con cinta los pocillos
5. Se prepara la solucin de lavado (wash) dependiendo de la cantidad de
pocillos
GRAFICOS:
288
BIBLIOGRAFIA
ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin, Editorial Mdica
Panamericana, Bogot, 2.001
Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin, Editorial Salvat
Mdica, Mxico, 1.993
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra, 1.992
Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica, Editorial Mdica

Panamericana, Mxico, 2.001
Kolmer
and
Boerner
,aproved
Laboratory
Panamericana,Mexico,1948
Manual de Practicas de Bioquimica del Instituto de Higiene
289
technic,Editorial
UNIVERSIDAD LAICA ELOY ALFARO DE MANABI

ALUMNO:
DOCENTE:
TITULO DE LA PRCTICA:
PRACTICA #:
CURSO:
FECHA:
DESARROLLO:
Objetivos. Son las metas que se persiguen al realizar la experimentacin.
Fundamento/Generalidades. Se trata de un resumen de los principios

y teoras de la prctica que se ilustra o aplica en la experiencia respectiva.
Datos / observaciones. Los datos importantes necesarios
son
anotaciones sobre los fenmenos observados en la prctica y que no
necesariamente son medidos.
Grficos. Aquellos
grficos que hacen parte de un informe por lo

general cumplen dos objetivos:
(a) Proporcionan informacin a partir de la cual se pueden obtener datos

complementarios y necesario s; en otras palabras, hacen parte de los datos.
(b) Representan la informacin derivada de todo el desarrollo de la prctica.
290
Conclusiones y discusiones. Aqu se trata del anlisis de los resultados

obtenidos a la luz de los comportamientos o valores esperados
tericamente. Especficamente la discusin y las conclusiones se hacen
con base en la comparacin entre los resultados obtenidos y los valores
tericos exponiendo las causas de las diferencias y el posible origen de los
errores.
Preguntas y respuestas. Debe escribirse la pregunta junto con una
respuesta clara y coherente.
Bibliografa. Se consigna la bibliografa consultada y de utilidad en la

elaboracin del informe. La bibliografa de libros y/o artculos debe ajustarse
a las normas establecidas internacionalmente.
Textos. (ejemplo)
Autor(es), ttulo del texto, edicin, editorial, ciudad y fecha y pginas consultadas.
Whitten Kennet W. y otros. Qumica General. Tercera edicin, Mc. Graw Hill,
Mxico, D.F. Diciembre de 1991, PP. 341-351.
Artculos de revistas:
Apellidos de los autores seguidos por las iniciales del nombre, ttulo de la revista,
ao, volumen (en negrilla), nmero de entrega cuando existe, nmero de la
pgina.
George, G. N. J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 3182.
TODO ESTUDIANTE DEBE PRESENTAR EN ESTE FORMATO EL INFORME,

CONSULTA O TRABAJO GRUPAL RESPECTIVO CON LETRA CLARA,
COHERENTE, DE MANERA ORGANIZADA Y CON RESPONSABILIDAD EN
PRESENTACIN DEL INFORME EN LA FECHA INDICADA.
--------------------------------------------
----------------------------------------------------
DOCENTE
C.I
291
PRESIDENTE DE CURSO
C. I

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PARTE III: HIDRATOS DE CARBONO

PARTE IV: LIPIDOS

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PARTE VI: FUNCION RENAL

Dosificacin de urea en sangre.

PARTE VII: FUNCION HEPATICA

PARTE VIII: VARIOS

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Identificacin de sfilis mediante prueba cuantitativa.

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ENFOQUE GENERAL DE LA ASIGNATURA Y CAMPO DE

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1. Observar donde se dejan los materiales antes de tomarlo en mano.

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NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

No fumar, comer o beber en el laboratorio.

Utilizar una bata y tenerla siempre bien abrochada.

Guardar tus prendas de abrigo y los objetos personales en un armario o

No llevar bufandas, pauelos largos ni prendas u objetos que dificulten la

Si tiene cabello largo, recogerlo.

Tener siempre tus manos limpias y secas. Si tiene alguna herida,

No pruebe ni ingiera los productos.

En caso de producirse un accidente, quemadura o lesin, comunicarlo.

Tener un botiqun a disposicin.

Mantn el rea de trabajo limpia y ordenada.

NORMAS PARA MANIPULAR INSTRUMENTOS Y PRODUCTOS

Antes de manipular un aparato o montaje elctrico, desconctalo de la red

No utilizar ninguna herramienta o mquina sin conocer su uso,

Manejar con especial cuidado el material frgil, por ejemplo, el vidrio.

Informar al profesor del material roto o averiado.

Fijarse en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los

Al acabar la prctica, limpiar y ordenar el material utilizado.

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Si se salpica accidentalmente, lave la zona afectada con agua abundante.

Evitar el contacto con fuentes de calor. No manipules cerca de ellas

Todos los productos inflamables deben almacenarse en un lugar adecuado

No dejes destapados los frascos ni aspires su contenido. Muchas

La Bioseguridad tiene por finalidad la proteccin del personal de diagnstico e

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Todo material de trabajo usado en el laboratorio, ya sea muestras de sangre,

Superficie y equipos que no pueden esterilizarse por autoclave.

2.- DESCONTAMINACION POR ESTERILIZACION

AUTOCLAVE SE UTILIZA PARA:

Materiales contaminados biolgicamente como suero, antes de ser

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Usar matraces con tapones que permitan el intercambio de aire, llenarlos a

HORNO SE USA EN:

Secar y esterilizar material de vidrio previamente auto clavado.

Esterilizar puntas de pipetas automticas previamente auto clavado y

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EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO

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Se emplea para trasvasar lquidos o disoluciones de un recipiente a otro y tambin

El Buchner es un embudo de porcelana, tiene una placa filtrante de agujeros

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Recipiente de vidrio, de volumen variable, normalmente pequeo. Sirven para

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Recipiente de vidrio para medir volmenes, su precisin es bastante aceptable,