Halaman 101

TABEL 2
Daftar Batas Deteksi untuk Teknik Analisis yang paling banyak digunakan dalam Penelitian
fitokimia
Gambar
Tiga isomer dapat ditemukan, sehingga teknik yang lebih sederhana dibandingkan GC
dapat diterapkan, meskipun pemisahan total konstituen mungkin disarankan. Metode HPLC
dapat memberikan pemisahan tiga kurkuminoid yang jelas untuk kontrol kualitas. Oleoresin ini
digunakan sebagai pewarna makanan dan kadang rasa dari oleoresin itu penting, kandungan
senyawa berwarna dari oleoresin merupakan harga yang penting di pasaran. Kurkuminoid tidak
stabil dengan metode non volatil seperti HPLC.
III. Kromatografi Kolom
Kromatografi Kolom adalah teknik lama untuk review pemisahan yang digunakan di
laboratorium fitokimia dan hanya digunakan untuk tujuan preparatif. Hal ini digunakan untuk
pemisahan berdasarkan adsorpsi, partisi, pertukaran ion, filtrasi gel, dan penembusan gel.
Sebagai aturan praktis kita menggunakan filtrasi gel (bahan Sephadex) untuk pemisahan
senyawa yang berat molekulnya tinggi (peptida, protein, polisakarida, dll); pertukaran ion untuk
alkaloid, asam, dan basa; partisi untuk senyawa ionik yang hidrofilik, dan teknik adsorpsi untuk
zat lipofilik non ionik seperti steroid. Pemisahan, pengayaan, atau fraksinasi dari ekstrak dapat
dilakukan dengan analisis elusi, perpindahan, atau analisis partisi dan sering dilakukan lebih dari
satu jenis interaksi pada waktu yang sama. Oleh karena itu sulit untuk "sebelum program"
perpisahan. Oleh karena itu, kromatografi kolom pada skala preparatif sering dilakukan berulang
atau daur ulang kromatografi. Oleh karena itu Kromatografi kolom sering digunakan sebagai
teknik sebelum fraksinasiekstrak kasar dimurnikan sebelum di analisis kuantitatif. Teknik ini
sering diterapkan dalam analisis klinis dan mungkin ada petunjuk penting tentang masalah
pemisahan ekstrak tumbuhan yang bisa didapat dari hasil pada analisis cairan tubuh.
Kualitas pemisahan akhir dilakukan oleh metode GC atau HPLC sangat tergantung pada
sebelum fraksinasi yang dilakukan pada tanaman ekstrak mentah. Ini adalah bidang yang sangat
penting di mana kromatografi kolom sering diterapkan.
IV. Kromatografi Lapis Tipis
Berbeda dengan kromatografi kolom, TLC dilakukan pada lapisan tipis (kolom terbuka).
Prinsip-prinsip pemisahan akan sama seperti pada kromatografi kolom. Lapisan tipis memberi
kita kemungkinan penyemprotan pada piring dan membuat senyawa tanpa warna terlihat. Semua
pemisahan dengan kromatografi kolom dapat dilakukan pada skala yang lebih kecil dengan TLC
dalam waktu yang jauh lebih singkat dan sering diperoleh efek pemisahan yang lebih baik. TLC

membutuhkan peralatan sederhana dan murah untuk analisis kualitatif dan dapat dipercaya dan
populer dari teknik pemisahan kompatibel dengan GC dan HPLC.
Jika tujuan utama adalah dengan menggunakan teknik pemisahan sebagai
semipreparative atau sebagai metode kualitatif TLC akan sering menjadi metode pilihan. TLC
kromatogram dapat dijalankan unidimensional, melingkar, wedge-strip, atau dua dimensi.
Aplikasi utama dan teknik standartd adalah unidimensional, kromatografi naik. Kromatografi
gradien sekarang dapat juga diterapkan sebagai teknik standar. Pada saat ini semua jenis piring
lapisan tipis yang tersedia secara komersial dan membuat TLC teknik yang sangat kompetitif
dibandingkan dengan GC dan HPLC.
Di TLC nilai Rf adalah ukuran dari tingkat migrasi zat yang berbeda dalam pelarut
tertentu. Diketahui standart harus dijalankan bersama-sama dengan sampel untuk memastikan
identitas atau identifikasi. Hal ini sangat penting ketika ekstrak tumbuhan yang akan diselidiki.
Karena variasi dari lapisan tipis, nilai Rf tidak didapat nilai yang mutlak. TLC adalah suatu
metode analisis yang bekerja terutama sebagai kromatografi adsorpsi, tetapi juga dapat
digunakan dalam fase terbalik, partisi, pertukaran ion, atau sistem gel atau untuk pemisahan
isomer optik.
Preparatif TLC disebutkan secara singkat sebagai teknik yang cukup sering diterapkan
untuk penyelidikan ekstrak tanaman. Untuk penyelidikan produk tanaman sangat sering
membutuhkan zat referensi. Kromatografi lapis tipis preparatif menawarkan kemungkinan yang
sangat nyaman untuk mendapatkan sejumlah kecil senyawa referensi tersebut. Lapisan biasanya
lebih tebal daripada standar, analisis kualitatif yang akan digunakan, tetapi pemisahan dan
penanganan piring tetap sama. Zona dengan senyawa tersebut bersama-sama dengan lapisan
penyerap dihapus dari piring setelah jangka kromatografi dan diekstraksi dan diidentifikasi
dengan teknik spektroskopi yang berbeda.
Sampai dengan tahun 1987 penekanan TLC adalah sebagai kualitatif dan atau sebagai
metode semipreparative. Namun, perkembangan instrumental mikroprosesor dan aplikasi
komputer yang didedikasikan untuk instrumen analitis telah membuat kuantitatif TLC dilakukan
oleh eluasi senyawa yang menarik dan ukuran dengan spektroskopi jumlah yang ada dalam
ekstrak. Teknik ini, jika berlaku, itu sangat memakan waktu, membosankan, terjadi kesalahan
yang besar dan karena itu dihindari. Munculnya densitometri modern telah benar-benar berubah
gambar ini. TLC kuantitatif telah menjadi metode juga berlaku sebagai GC dan HPTLC.
Ketika kromatografi telah dilakukan dan absorbansi atau fluoresensi diukur langsung
pada lapisan tipis. Dengan cara ini beberapa campuran dapat diukur di piring sama. Untuk
kontrol ekstrak tanaman kuantitatif TLC telah menjadi metode yang sangat nyaman untuk
kontrol kualitas. Hal ini juga sangat menekankan bahwa TLC sebagai metode pembersihan untuk
ekstrak kasar dianjurkan sebelum GC atau analisis HPLC.