UNIVERSIDAD

TECNICA DE
MANABI
Obtencin de la protena verde
fluorescente (gFp)
BIOTECNOLOGIA

Ing. Ernesto Rosero

DOCENTE
Vicky Alejandra Mendoza
Pico
8 NIVEL PARALELO F

TEMA:

Obtencin de la protena verde fluorescente

OBJETIVO:

Describir los principales procesos que se dan para obtener la protena verde
fluorescente.

INTRODUCCION:
La biotecnologa en la actualidad se ha convertido en una herramienta que ayuda en
todos los sentidos a mejorar procesos antiguos, entre ellos tenemos la obtencin de la
protena GFP por medio de una bacteria como es la E. coli y un tratamiento adecuado
para obtenerla.

CONTENIDO:
E.Coli
INOCULACION

GLUCOSA
MEZCLA

FERMENTACON

NaCl
pH 8

CENTRIFUGADO
RA

(NH4)SO4

CENTRIFUGADO
RA

CROMATOGRAFI
A

FILTRACION

ESTERILIZACI
ON

liquido clarificado

solidos

Para obtener la protena verde fluorescente se necesitan de tres procedimientos bsicos:

Fermentacin, Recuperacin y Purificacin.
Fermentacin: comienza con el cultivo de la bacteria E. coli modificada, luego de su
reproduccin se mezcla con un medio ms amplio para su mayor reproduccin, despus
de que se tiene la bacteria en volumen suficiente se comienza por limpiar el rea donde
ser la fermentacin, se limpia el reactor y se alistan los materiales con los que se van a
trabajar.
Despus de estos se colocan 10 kg de agua purificada para probar que no hallan fuga en
el reactor a 121C por 30 minutos, una vez comprobado que el reactor funciona
correctamente, se colocan los nutrientes y 10 kg ms de agua en el reactor para que
comience la fermentacin con la mezcla que contiene la E. coli, por 30 minutos ms a
131C; el vapor que sale del reactor se utiliza para esterilizar la glucosa que va a entrar
en el mismo y mezclarse en la fermentacin por 5 horas y as termina la etapa de
fermentacin y comienza la etapa de separacin.
Recuperacin: la protena verde fluorescente ya se encuentra pero dentro de la E. coli
por lo que este proceso lo que va a realizar es sacar la protena de la bacteria, para esto
el caldo de la fermentacin es llevado hacia una centrifugadora, donde lo que se hace es
separar el lquido que se lo conoce como clarificado de los slidos, los slidos son los
que contienen la E. coli que an sigue teniendo un 40% de lquido, se coloca una
solucin tamponadora y se pasa de nuevo los slidos por la centrifugadora para asi que
se eliminen los contaminantes que quedaron en la fermentacin.
Despus de la centrifugacin las clulas estn listas para la ruptura llamada Lisis, pasan
por un homogeneizador a 900 bar y 13 000 libras por pulgada cuadrada, en el
organizador pasan por un pequeo orifico muy pequeo que rompen la tensin y se
libera la protena de la bacteria, quedando una mezcla de plasma con la protena, por lo
que pasa por un nuevo proceso de centrifugacin, pero esta vez no se desecha el lquido
clarificado si no que los slidos, ya que el lquido clarificado obtiene la GFP, este lisado
clarificado se bombea a un recipiente ventilado para controlar la temperatura para pasar
al siguiente proceso que es la Purificacin.
Purificacin: este proceso comienza cuando la protena verde fluorescente da un
intercambio anicnico cuando el pH es 8, que entra a una etapa de cromatografa para
eliminar las impurezas, y a una segunda cromatografa pero esta vez con una sustancia
tamponadora de NaCl, despus de este proceso de cromatografa, pasa a una proceso de
filtracin de manera horizontal, donde la GFP pasa d largo por las membranas y dentro
de las membranas se quedan los residuos de impurezas que pudieron haber quedado
durante todo el proceso y como resultado se obtiene la GFP pura, que fue obtenida de
manera eficaz
BIBLIOGRAFIA:

https://www.youtube.com/watch?v=5eKdZ0dVCCo
https://www.youtube.com/watch?v=VKpthcW1llU
https://www.youtube.com/watch?v=N7vxq948l-U