Anda di halaman 1dari 52

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA


EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA
ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S.
aureus.
APNDICE NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Participaron en la elaboracin de este protocolo.


Csar Omar Glvez Gonzlez
Comisin de Control Analtico y Ampliacin de
Cobertura.
Coordinador de proyectos analticos
55 50805200 ext 2022
cgalvez@cofepris. gob.mx

Odilia Hernndez Hernndez


Laboratorio Estatal Salud Pblica Veracruz.
Jefa del Departamentos de Anlisis Sanitarios.
229 9811390 Ext: 117
lesp.ohernandez@gmail.com

Mara Esperanza Rodrguez Parra


Laboratorio Estatal Salud Pblica Tamaulipas
Responsable de Laboratorio de Microbiologa de Aguas y
Alimentos
834 312 6633
lespt@hotmail.com

Anastasio Palacios Marmolejo


Laboratorio Estatal de Salud Pblica de Aguascalientes
449 9775511
anastaciopalacios73@gmail.com

Participaron en la revisin de este protocolo.


Liliana Cano Ramrez
Comisin de Control Analtico y Ampliacin de
Cobertura.
Q. Analista
55 50805200 EXT. 2045
lcano@cofepris.gob.mx

Mirella Paredes Salas


Laboratorio Estatal de Salud Pblica de Aguascalientes
449 9775511
mireparedes.salas@gmail.com

Autorizacin
Imelda Roco Guzmn Cervantes
Comisin de Control Analtico y Ampliacin de
Cobertura.
Directora Ejecutiva de Control Analtico
Telfono: 01 55 50 80 52 00 ext. 2043
irguzman@cofepris.gob.mx

Josefina Gutirrez Ramrez


Comisin de Control Analtico y Ampliacin de
Cobertura.
Directora Ejecutiva de Innovacin.
01 55 50 80 52 00 ext. 2005
jgutierrez@cofepris.gob.mx

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

1. OBJETIVO.
Que los miembros de la Red Nacional de Laboratorios realicen de modo armonizado la evaluacin del
desempeo del Apndice B Normativo. Mtodo de referencia para la estimacin de la cuenta de S.
aureus, NOM-210-SSA1-2014 mediante la comprobacin de los parmetros de desempeo: Repetibilidad,
Reproducibilidad, Recuperacin, Sesgo, Selectividad e Incertidumbre.
2. CAMPO DE APLICACIN.
Este protocolo armonizado es de aplicacin a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de
implementacin y autorizacin inicial del Apndice B Normativo. Mtodo de referencia para la
estimacin de la cuenta de S. aureus, NOM-210-SSA1-2014 para el anlisis de los productos de inters.
Puede considerarse un documento externo del sistema de gestin de calidad y por lo tanto no requiere ser
modificado para hacerlo coincidir con los procedimientos internos.
3. MTODO DE ENSAYO.
3.1. Apndice B Normativo. Mtodo de referencia para la estimacin de la cuenta de S. aureus, NOM210-SSA1-2014, Productos y Servicios. Mtodos de prueba microbiolgicos. Determinacin de
microorganismos indicadores. Determinacin de microorganismos patgenos.
3.2. En el proyecto de modificacin de sta norma se consideran los siguientes cambios:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Dice
B.6.4. Invertir las placas e incubar por 44h a
48h a 36C 1C, buscar colonias con
morfologa colonial tpica: colonias negras,
circulares, brillantes, convexas, lisas, de
dimetro de 1mm a 2mm y muestran una
zona opaca, hmedas y con un halo claro
(debido a la actividad de la lecitinasa)
alrededor de la colonia.
NOTA: En algunas ocasiones cepas que han
sido aisladas de productos congelados o
deshidratados que han sido almacenados por
periodos largos de tiempo, frecuentemente
desarrollan colonias menos negras con
apariencia rugosa y textura seca. Las colonias
atpicas son similares en apariencia pero sin
halo claro alrededor.

B.6.5 Seleccionar las placas que tengan entre


15 y 150 colonias tpicas y atpicas de S.
aureus; si no es posible, seleccionar las
placas de las diluciones ms altas no obstante
tengan ms de 150 colonias. Seleccionar por
muestra 5 colonias tpicas para su
confirmacin o 5 colonias atpicas, para la
realizacin de la tincin de Gram, en el caso
de observar bacilos positivos, la colonia se
tomar como negativa para S. aureus, por lo
contrario si se observan cocos se seguir con
su confirmacin.

B.6.6 Cuando las placas tengan menos de 15


colonias tpicas se debe agregar la nota de
"valor estimado" al reporte de los resultados.

Debe decir
B.6.4. Invertir las placas e incubar por 24h 2h a 36C
1C, marcar en la base de la placa la posicin de las
colonias tpicas y atpicas, re-incubar por 24h 2h 36C
1C, marcar en la base de la placa la posicin de las
nuevas colonias tpicas y atpicas 44h a 48h a 36C 1C,
buscar colonias con morfologa colonial tpica: colonias
negras, circulares, brillantes, convexas, lisas, de dimetro de
1mm a 2mm y muestran una zona opaca, hmedas y con un
halo claro (debido a la actividad de la lecitinasa) alrededor de
la colonia.
NOTA: En algunas ocasiones cepas que han sido aisladas de
productos congelados o deshidratados que han sido
almacenados por periodos largos de tiempo, frecuentemente
desarrollan colonias menos negras con apariencia rugosa y
textura seca. Las colonias atpicas son similares en
apariencia pero sin halo claro alrededor.
B.6.4.1 Colonias Tpicas: colonias negras o grises,
circulares, brillantes, convexas, lisas, de dimetro de 1mm a
1.5mm a las 24h de incubacin y 1.5 a 2.5 mm despus de
48h de incubacin, rodeadas por una zona clara que puede
ser parcialmente opaca. Despus de 24 h, en esa zona clara,
se puede observar un halo opalescente en la periferia de las
colonias. Colonias Atpicas: Son colonias de las mismas
dimensiones de las colonias tpicas, pueden ser negras
brillantes con o sin un pequeo borde blanco, la zona clara es
muy pequea o no visible, y el halo opalescente no est o es
apenas visible. Tambin son colonias atpicas las colonias
grises sin zona clara, del mismo tamao que las colonias
tpicas. Hay bacterias de gneros distintos al Staphylococcus,
que pueden dar la morfologa colonial tpica o atpica, por lo
que la observacin microscpica usando una tincin de Gram
puede ayudar en la distincin del gnero.
B.6.5 Seleccionar las placas que como mximo 300
colonias con 150 colonias tpicas y/o atpicas y las dos
diluciones siguientes. Si solo estn presentes colonias
tpicas, seleccionar por placa por un nmero de colonias
tpicas Ac (generalmente 5), Si solo estn presentes
colonias atpicas seleccionar un nmero de colonias atpicas
Anc, Si hay de ambos tipos de colonias seleccionar colonias
tanto tpicas Ac como atpicas Acn.
entre 15 y 150 colonias tpicas y atpicas de S. aureus; si no
es posible, seleccionar las placas de las diluciones ms altas
no obstante tengan ms de 150 colonias. Seleccionar por
muestra 5 colonias tpicas para su confirmacin o 5 colonias
atpicas, para la realizacin de la tincin de Gram, en el caso
de observar bacilos positivos, la colonia se tomar como
negativa para S. aureus, por lo contrario si se observan cocos
se seguir con su confirmacin.
B.6.6 Cuando las placas de la dilucin ms baja tengan
menos de 15 colonias tpicas y/o atpicas se debe agregar la
nota de "valor estimado" al reporte de los resultados..

Justificacin
Se hace la modificacin conforme a la
versin vigente de la norma de referencia,
antes se indicaba una sola lectura a las
44h, con la modificacin se hacen dos
lecturas, dado que no hay temperaturas
adicionales ni el tiempo total excede al
original, no se crean nuevos requisitos ni
costos para la implementacin del mtodo.
La adicin del punto B.6.4.1
y la
eliminacin de la nota es un cambio que
mejora la redaccin, por lo que no se crean
nuevos requisitos, pero se facilita la
ejecucin del mtodo.

Se hace la modificacin conforme a la


versin vigente de la norma de referencia,
nota es un cambio que mejora la redaccin,
por lo que no se crean nuevos requisitos,
pero se facilita la ejecucin del mtodo.

La aclaracin de la dilucin, evita


ambigedades o confusiones en la
aplicacin del mtodo. Al ser una precisin,
no se generan costos adicionales.

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Dice
B.6.8.1 Prueba de coagulasa. Seleccionar y
sembrar cada colonia tpica en tubos con
0.5mL de BHI y en tubos con AST. Utilizar
simultneamente un control positivo de S.
aureus y un control negativo de S.
epidermidis. Incubar a 35C 1C en bao de
agua, durante 20h a 24h. Mantener los
cultivos en AST a no ms de 27C 1C para
pruebas posteriores. Agregar a 0.1mL del
cultivo anterior a 0.3mL de plasma de conejo
con EDTA (a menos que el fabricante indique
otras cantidades). Incubar a 37C 1C en
bao de agua y observar peridicamente a
intervalos de 1h durante las primeras 4h a 6h;
si no hay formacin de cogulo, observar
hasta las 24h. Considerar la prueba positiva
cuando el cogulo se forma completamente y
es firme al invertir el tubo. En otro caso se
debern realizar las pruebas auxiliares,
descritas en el punto B.6.9.
B.7.2 Si al menos el 80% de las colonias
tpicas seleccionadas fueron coagulasa
positiva y/o termonucleasa positiva tomar el
nmero total de las colonias contadas como
presuntivas de S. aureus.

Debe decir
B.6.8.1 Prueba de coagulasa. Seleccionar y sembrar cada
colonia seleccionada tpica en tubos con 0.5mL de BHI y en
tubos con AST. Utilizar simultneamente un control positivo
de S. aureus y un control negativo de S. epidermidis. Incubar
a 35C 37C 1C en bao de agua, durante 20h a 24h.
Mantener los cultivos en AST a no ms de 27C 1C para
pruebas posteriores. Agregar a 0.1mL del cultivo anterior a
0.3mL de plasma de conejo con EDTA (a menos que el
fabricante indique otras cantidades). Incubar a 35 o 37C
1C en bao de agua y observar peridicamente a intervalos
de 1h durante las primeras 4h a 6h; si no hay formacin de
cogulo, observar hasta las 24h. Considerar la prueba
positiva cuando el cogulo se forma completamente y es
firme al invertir el tubo. En otro caso se debern realizar las
pruebas auxiliares, descritas en el punto B.6.9.

Justificacin
Cambio de redaccin, para que tenga
relacin con la redaccin de los prrafos
anteriores. Se aclara que el bao de aguas
e puede usar a 35C 37C

B.7.2 Si al menos el 80% de las colonias tpicas


seleccionadas fueron coagulasa positiva y/o termonucleasa
positiva tomar el nmero total de las colonias contadas como
presuntivas de S. aureus. Clculo del nmero a de S.
aureus confirmado por placa.
B.7.2.1 Calcule el nmero de colonias confirmadas de S.
aureus por placa a utilizando la siguiente frmula

Se hace la modificacin conforme a la


versin vigente de la norma de referencia,
y se incluye el subndice B.7.2.1 mejorando
la redaccin del punto.

a=

bc
b nc
x Cc+
xCnc
Ac
Anc

Ac es el nmero de colonias tpicas seleccionadas a


confirmar
Anc es el nmero de colonias atpicas seleccionadas a
confirmar
bc es el nmero de colonias tpicas confirmadas
bnc es el nmero de colonias atpicas confirmadas
Cc es el nmero de colonias tpicas contadas en la placa
Cnc es el nmero de colonias atpicas contadas en la placa
Redondear los resultados a un nmero entero.

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Dice
B.7.3 En otros casos, calcular el nmero de
colonias presuntivas de S. aureus a partir del
porcentaje obtenido de colonias coagulasa y/o
termonucleasa positivas confirmadas.

Debe decir
B.7.3 En otros casos, calcular el nmero de colonias
presuntivas de S. aureus a partir del porcentaje obtenido de
colonias coagulasa y/o termonucleasa positivas confirmadas.
Clculo del nmero N de S. aureus confirmado por muestra
B.7.3.1 Para las placas con menos de 300 colonias de las
cuales existan menos de 150 colonias tpicas y/o atpicas en
dos diluciones consecutivas, calcular el nmero de S. aureus
por placa como se indica en B.7.2 y calcular el nmero N
como una medida ponderada de las dos diluciones
sucesivas, usando la siguiente ecuacin:

N=

B.7.4 Promediar los resultados de los


duplicados.

Justificacin
Se hace la modificacin conforme a la
versin vigente de la norma de referencia,
y se incluye el subndice B.7.3.1 mejorando
la redaccin del punto.

V ( n1+ 0.1n 2 ) d

a es la suma de las cuentas encontradas en las placas


V es el nmero de mL en cada placa, en mL
n1 es el nmero de placas seleccionado en la primera dilucin
n2 es el nmero de placas seleccionadas en la segunda
dilucin
d es el factor de dilucin seleccionado en la primer dilucin
Redondear los resultados utilizando dos cifras significativas.
B.7.4 Promediar los resultados de los duplicados Reportar los
resultados como el nmero de S. aureus por mL o g de
producto

Se adapta a la actualizacin del mtodo y


en coherencia a los puntos anteriores.

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Dice
B.7.5 Cuando en dos diluciones consecutivas
se obtienen cuentas entre 15 y 150 colonias
(tpicas o atpicas) calcular el nmero de S.
aureus para cada dilucin como se especifica
en los puntos anteriores, calcular la cuenta de
S. aureus considerando el factor de dilucin,
calcular el logaritmo en base diez de cada
dilucin y realizar la resta de stos, si la
diferencia entre los logaritmos de las dos
diluciones es menor a 0.3, reportar el
promedio de las dos diluciones. Si por el
contrario la diferencia entre los logaritmos es
mayor a 0.3; reportar el valor ms bajo.

Debe decir
B.7.5 Cuando en dos diluciones consecutivas se obtienen
cuentas entre 15 y 150 colonias (tpicas o atpicas) calcular el
nmero de S. aureus para cada dilucin como se especifica
en los puntos anteriores, calcular la cuenta de S. aureus
considerando el factor de dilucin, calcular el logaritmo en
base diez de cada dilucin y realizar la resta de stos, si la
diferencia entre los logaritmos de las dos diluciones es menor
a 0.3, reportar el promedio de las dos diluciones. Si por el
contrario la diferencia entre los logaritmos es mayor a 0.3;
reportar el valor ms bajo.Estimacin de las cuentas bajas
B.7.5.1 Si las dos placas de la muestra directa o de la
primera dilucin contiene menos de 15 colonias, reportar los
resultados como sigue:
a) Para los productos lquidos, estime el nmero de S.
aureus por mililitro.

Ne=

Justificacin
Se hace la modificacin conforme a la
versin vigente de la norma de referencia,
y se incluye el subndice B.7.5.1 mejorando
la redaccin del punto.

V X2

Ne es el nmero estimado de colonias confirmadas de S.


aureus
a es el nmero de colonias confirmadas en las dos placas
V es el volumen inoculado en las placas
b) Para otros productos, estime le nmero de S. aureus por
gramo

Ne=

a
V x 2x d

Ne es el nmero estimado de colonias confirmadas de S.


aureus
a es el nmero de colonias confirmadas en las dos placas
V es el volumen inoculado en las placas
D es el factor de dilucin en la primera dilucin

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Dice
B.7.7 Ejemplo para el clculo de S. aureus.
Por ejemplo, el 0.1mL del inculo de la
dilucin 10-2 de la muestra da como resultado
65 y 85 colonias tpicas por placa.
Ninguna colonia atpica fue identificada en las
placas.
Todas las 5 colonias seleccionadas de la
placa conteniendo 65 colonias fueron
coagulasa y termonucleasa positiva por lo que
las 65 colonias fueron consideradas como S.
aureus.
3 de las 5 colonias seleccionadas de la placa
que contiene 85 colonias fueron coagulasa y
termonucleasa positiva por lo que el 60%, es
decir, 51 colonias son consideradas como S.
aureus.
La cuenta promedio tomando en cuenta solo
las positivas es:
65+51/2 = 58 S. aureus. Redondeando a dos
cifras significativas 60
58 por el inverso del factor de dilucin (1/10-2)
es 5800 UFC.
Si se considera que el inculo fue de 0.1mL
habr que multiplicar por 10 para obtener
58000 UFC/mL o g segn la naturaleza de la
muestra.
Tambin puede aplicarse la siguiente formula:

Debe decir
B.7.7 Ejemplo para el clculo de S. aureus.
Se inocul Por ejemplo, el 0.1mL de cada dilucin inculo de
En la dilucin 10-2 de la muestra da como resultado se
encuentran 65 y 85 colonias tpicas por placa
respectivamente y ninguna colonia atpica en ambas placas.
En la siguiente dilucin 10-3 se encontraron 3 y 7 colonias
tpicas en cada placa respectivamente y ninguna atpica en
ambas placas.
Se realizaron los siguientes clculos
De las 65 colonias, se seleccionaron 5 colonias, y las 5
fueron confirmadas como S. aureus. Dando a=65
De las 85 colonias, se seleccionaron 5 colonias, y solo 3
fueron confirmadas como S. aureus. Dando a=51
De las 3 colonias, se probaron las 3 y las 3 fueron
confirmadas como S. aureus. Dando a=3
De las 7 colonias, se probaron 5 y las mismas fueron
confirmadas como S. aureus. Dando a=7
Entonces
N=(65+51+3+7)/ 0.1 (2+ 0.1 (2)) 10-2
N= 126 /0.22 X 10-2
N=57 272
El resultado despus del redondeo quedara como: 5.7 x 10 4
UFC/g
Ninguna colonia atpica fue identificada en las placas.
Todas las 5 colonias seleccionadas de la placa conteniendo
65 colonias fueron coagulasa y termonucleasa positiva por lo
que las 65 colonias fueron consideradas como S. aureus.
3 de las 5 colonias seleccionadas de la placa que contiene 85
colonias fueron coagulasa y termonucleasa positiva por lo
que el 60%, es decir, 51 colonias son consideradas como S.
aureus.
La cuenta promedio tomando en cuenta solo las positivas es:
65+51/2 = 58 S. aureus. Redondeando a dos cifras
significativas 60
58 por el inverso del factor de dilucin (1/10-2) es 5800 UFC.
Si se considera que el inculo fue de 0.1mL habr que
multiplicar por 10 para obtener 58000 UFC/mL o g segn la
naturaleza de la muestra.
Tambin puede aplicarse la siguiente formula:

Justificacin
Se hace la modificacin conforme a la
versin vigente de la norma de referencia,
la observacin se hace para mejorar
redaccin

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014
Dice
Debe decir
B.9.9 Caldo Rojo de Fenol (para B.9.9 Caldo Rojo de Fenol (para fermentacin de
fermentacin de carbohidratos).
carbohidratos).
B.9.9.1 Frmula
Seguir las instrucciones de preparacin conforme se
Tripticasa o proteona peptona No. 3
10g
describe en C.9.8. sustituyendo ramnosa y xilosa por
NaCl
5g
manitol o glucosa segn se requiera
Extracto de carne (opcional).
1g
B.9.9.1 Frmula
Rojo de fenol (7.2mL de solucin de rojo de 0.018g Tripticasa o proteosa proteona peptona No. 3
10g
fenol al 0.25%)
NaCl
5g
Agua destilada
1L
Extracto de carne (opcional).
1g
pH 7.4 0.2.
Rojo de fenol (7.2mL de solucin de rojo de fenol al 0.018g
Carbohidrato*
0.25%)
B.9.9.2 Preparacin: Disolver los ingredientes Agua destilada
1L
sin el carbohidrato, en 800mL de agua pH 7.4 0.2.
destilada con calentamiento y agitacin Carbohidrato*
ocasional. Distribuir en volmenes de 2mL en B.9.9.2 Preparacin: Disolver los ingredientes sin el
tubos de 13mm x 100mm con campana de carbohidrato, en 800mL de agua destilada con calentamiento
Durham. Esterilizar a 121C por 15 min y dejar y agitacin ocasional. Distribuir en volmenes de 2mL en
enfriar. Disolver 20g del carbohidrato en tubos de 13mm x 100mm con campana de Durham.
200mL de agua destilada y esterilizar por filtro Esterilizar a 121C por 15 min y dejar enfriar. Disolver 20g del
de membrana, adicionar aspticamente 0.5mL carbohidrato en 200mL de agua destilada y esterilizar por
del filtrado a cada tubo con medio esterilizado filtro de membrana, adicionar aspticamente 0.5mL del
y enfriado a menos de 45C, agitar filtrado a cada tubo con medio esterilizado y enfriado a
suavemente para mezclar.
menos de 45C, agitar suavemente para mezclar.

Justificacin
Al eliminar este medio y permitir el uso de
otro medio base permite aprovechar un
solo medio base para dos metodologas,
reflejndose en reduccin de costos y
procesamiento.

3.3. Diagrama de flujo.


Revisar punto B.8 Ayuda visual de la norma de referencia.

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

El diagrama de flujo es una representacin grfica del mtodo, en todo momento se debe tener acceso al
mtodo de prueba original.

4. EQUIPOS E INSTRUMENTOS
4.1. Los equipos listados a continuacin son los crticos requeridos por el mtodo. En el informe de evaluacin

de desempeo deber completarse la Tabla equipos de instrumentos empleados


Nombre

Caractersticas

Estado deseado

Balanza
Granataria

Sensibilidad de 0.1 g

Calibracin vigente y verificada el da de uso.

Marco de pesas

Clase F1 o E2
10 20 g;
y 100 g 200 g
500 g

Calibrado

Bao de agua

Temperatura
controlada a 35C
1C 37C 1C.

Calificada1 35C 37C 1C, por 24 h mnimo.


Con termmetro calibrado o verificado para realizar la
lectura de la temperatura de la cmara por lo menos dos
veces al da. Divisin mnima de 0.5C. Adecuadamente
inmerso.2

Incubadora

Temperatura
controlada a 36C
1C

Calificada 36C 1C, por 24 h mnimo.


Con termmetro calibrado o verificado para realizar la
lectura de la temperatura de la cmara por lo menos dos
veces al da. Divisin mnima de 0.5C. Adecuadamente
inmerso.

Homogeneizador
o licuadora

Funcionando

Mantenimiento Vigente.

5. MATERIALES

1 Se entiende que la calificacin de los equipos para incubacin consiste en un procedimiento interno o externo por el cual se
demuestre, a travs del monitoreo en diferentes puntos que la temperatura de la cmara durante un periodo determinado
mantiene una homogeneidad trmica, asegurando las condiciones de incubacin de la prueba.
2 Para la medicin de la temperatura tambin se puede utilizar un termgrafo o termocupla trazable

10

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

5.1. El material de trabajo debe ser estril, cuando no se indique otra cosa, el material esterilizado por calor

seco o calor hmedo se considera estril hasta por un mes siempre que se mantenga la integridad del
empaque; todo el material debe ser adecuadamente identificado, sealando la fecha de esterilizacin de
material y la fecha de uso. Se deben anexar evidencias al informe.
5.2. Cuando se use material estril ste deber ser evaluado por lote antes de su uso o documentar la
esterilidad mediante certificado de calidad, una vez abierto el empaque los materiales no deben ser
usados despus de tres das. Se deben anexar evidencias al informe.
5.3. El material de vidrio re-usado deber demostrar que fue lavado adecuadamente, mediante registros de
supervisin y demostrar la ausencia de residuos de detergente. Se deben anexar evidencias al informe.
5.4. Los siguientes materiales son de carcter enunciativo, el laboratorio deber reportar los utilizados y sus
caractersticas en el informe.

Bolsas estriles para homogeneizador peristltico o vasos de


licuadora de vidrio o aluminio.

Cajas Petri de vidrio o desechable, dimetro de 90mm a 100mm.

Cucharas, tenedores y cuchillos estriles para el manejo de la


muestra

Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables

Gradillas para tubo de ensaye esterilizables

Mecheros Bunsen o Fisher.

Perillas o propipetas.

Pipetas estriles de vidrio graduadas con diferentes capacidades:


10 y 5 mL con divisiones de 0.5 mL y 1 mL y con divisin mnima de 0.1 mL.

Micropipetas 100 a 1000 L calibradas y/o verificadas.

Matraces Erlenmeyer con tapn de rosca de 250 mL.

Tubos de ensaye de 18 por 150 mm con tapn de rosca.

Puntas para micropipetas estriles y desechables.


6. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO (MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS Y MATERIAL BIOLGICO

DE REFERENCIA).
La preparacin de los medios de cultivo se debe realizar conforme a las instrucciones del fabricante.
En el informe, se debern incluir evidencias de la preparacin de los medios y su control de calidad.
6.1.

MEDIOS DE CULTIVO y REACTIVOS


Agar Baird Parker;
BHI;
Solucin reguladora de fosfatos;
Agua peptonada;
Solucin Salina 0.85%;
Agar Azul de Toluidina-ADN;
11

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

6.2.

Plasma de Conejo con EDTA;


Agua peptonada amortiguada;
Perxido de hidrgeno al 3%;
Reactivos para la tincin de Gram;
Caldo para la fermentacin de carbohidratos.
CEPAS
S. aureus ATCC 6538 25923;
Para la prueba de selectividad se pueden escoger cepas que sean interferentes en la determinacin como S.
epidermidis ATCC 12228 o Listeria monocytogenes ATCC19115.

7. MUESTRAS
7.1. Para la autorizacin inicial cada laboratorio deber realizar la evaluacin del desempeo del mtodo con al

menos una matriz del grupo de alimentos prioritario para el laboratorio.


7.2. El laboratorio deber contar con un programa para realizar la evaluacin de desempeo en una matriz por

cada grupo de alimentos.


7.3. En el informe de validacin se deber reportar los criterios para la seleccin de la matriz inicial
considerando lo siguiente:
Grupo de
alimentos

Tipos de producto

Tipo de producto
recibido en el
laboratorio.

Matriz representativa
mayormente recibida en
el laboratorio.

Prioridad para el
laboratorio. 3

Productos
Crnicos

Crudo
Procesados
trmicamente
Congelados
Fermentados
Curado
Pate

Reportar en el
informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Pescado y
Productos de la
pesca

Crudos
Congelados

Reportar en el
informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Frutas y
Vegetales

Crudos

Reportar en el
informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Leche y lcteos

Crudos
Congelados
fermentados

Reportar en el
informe

3 Reportar numricamente indicando 1 para el ms prioritario.


12

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Queso artesanal

Agua

Agua potable
Agua embotellada
Agua de pozo
Hielo

Reportar en el
informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Otros Productos

Para ser llenado por


cada laboratorio

Reportar en el
informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

7.4. La seleccin de las muestras debe realizarse con base en las prioridades del laboratorio considerando; la

frecuencia de recepcin y los programas prioritarios.


7.5. Para la ejecucin de este protocolo es necesario contar con una muestra con cuentas altas de S. aureus, pudiendo ser esta
naturalmente contaminada o fortificada.

7.6. Para la seleccin de las muestras se deber contar con aproximadamente 1.5 kg o L de muestra y

almacenar en condiciones adecuadas, dependiendo de la matriz. Adems se debe tener trazabilidad de


la muestra por ejemplo: marca, nmero de lote, fecha de caducidad, para productos como frutas,
vegetales, agua de la llave, se deben contener informacin de los datos de muestreo o lugar de la compra,
fecha de la compra, etc.
8. DESARROLLO EXPERIMENTAL

Considerando que el mtodo de S. aureus tiene tres etapas; aislamiento y seleccin de colonias
sospechosas (tpicas y atpicas), la confirmacin de estas colonias, y el clculo. Resulta necesario evaluar
la capacidad de cada laboratorio para poder distinguir y seleccionar las colonias sospechosas, que sern
despus incluidas en el clculo de estimacin de UFC de S. aureus, lo cual ser evaluado por la medicin
de la selectividad.
8.1. Ajuste del inculo del microorganismo de inters.

Previo al ensayo de evaluacin se debe identificar la dilucin adecuada de los microorganismos para

preparar la suspensin de trabajo, en las concentraciones que se indican ms adelante.

El protocolo de preparacin del inculo puede ser elegido a conveniencia del laboratorio, ste debe
describirse en el informe.

Para la preparacin del inculo puede consultarse la Gua para la Evaluacin del Desempeo de Mtodos
de Prueba Microbiolgicos para el Anlisis de Alimentos (CCAYAC-CR-018).

Inocular aproximadamente 1,200,000 UFC en la primera dilucin (250mL), para obtener una cuenta
aproximada de 480 UFC en la primera serie de placas, 48 UFC en la segunda y 5 UFC en la tercera.
8.2. Ajuste del inculo de los microorganismos para la prueba de selectividad.

13

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Preparar un inculo de < 25,000 UFC del microorganismo de inters y >250,000 UFC del microorganismo
interferente.
Tabla 1 Preparacin de muestras Repetibilidad, Reproducibilidad, Recuperacin, Selectividad, Sesgo e
Incertidumbre.
Parmetro

Analistas

Muestra

Diluciones
decimales

Nmero de
rplicas

Microorganismo

Verificacin de la
muestra

Al menos un
analista

25 g o 25mL

Sin microorganismo

Repetibilidad
Recuperacin
Sesgo

Un analista

10

Staphylococcus aureus

1,200,000 UFC
aproximadamente

10 por
analista o
cada tiempo.

Staphylococcus aureus

1,200,000 UFC
aproximadamente

25 g 25 mL por
rplica

Tamao de Inculo

Sin inculo

3 diluciones
Reproducibilidad

Al menos 2 analistas,
o 2 tiempos diferentes

25 g 25 mL por
rplica

Staphylococcus aureus

Selectividad

8.3.

Un analista

25 g 25 mL por
rplica

10 por
analista

S. epidermidis ATCC
12228
o
Listeria
monocytogenes ATCC
19115

< 25,000 UFC

> 250,000 UFC

Repetibilidad
Medir 10 alcuotas de 25 g o 25 mL de la matriz seleccionada en 225 mL de agua peptonada amortiguada.
Inocular cada alcuota con aproximadamente 1,200,000 UFC.
Verificar el inculo utilizando la tcnica de vaciado en placa, empleando para el clculo 6 cajas.
Proceder como lo establece el mtodo de prueba correspondiente basado en el Apndice B Normativo.
NOM-210-SSA1-2014.4
Registrar los resultados en el formato del informe.

8.4. Reproducibilidad

Un segundo analista simultneamente con el que realiza repetibilidad el mismo en un tiempo diferente,

deber ejecutar lo descrito en repetibilidad.


Registrar los resultados en el formato del informe.
4 Para los clculos se debern considerar las modificaciones a la norma.
14

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

8.5. Recuperacin
Obtener el logaritmo de los resultados obtenidos de las cuentas de S. aureus en la repetibilidad, y calcular
la media de los logaritmos de stas.
Dividir la media del logaritmo de los resultados obtenidos de las cuentas de S. aureus (Vo) entre el
logaritmo de las UFC inoculadas (Ve), y multiplicarlo por 100 para calcular el porcentaje de recuperacin
segn se indica en el apartado 10.4.
8.6. Sesgo
Obtener el sesgo sacando el valor absoluto de la diferencia entre la media del logaritmo de los resultados
obtenidos de las cuentas de S. aureus (Vo) menos el logaritmo de las UFC inoculadas (Ve).
8.7. Selectividad

Preparar una dilucin de la muestra midiendo 10 alcuotas de 25 g o 25 mL de muestra en 225 mL de de

agua peptonada amortiguada, inocular < 25,000 UFC del microorganismo de inters y >250,000 UFC del
microorganismo interferente, a partir de esta, inocular por extensin en placa dos placas de ABP y
continuar con el mtodo de prueba correspondiente basado en el Apndice B normativo NOM-210-SSA12014. Simultneamente verificar ambos inculos utilizando la tcnica de vaciado en placa, empleando para
ello 6 placas con cada cepa.
Proceder como lo establece el mtodo de prueba correspondiente basado en el Apndice B Normativo.
NOM-210-SSA1-2014.4
Registrar los resultados en el formato del informe.

9. Resultados
9.1. Registrar resultados en el informe de desempeo.

9.2. Para el clculo de los resultados se podr usar el formato CCAYAC-F-731


10. Anlisis estadstico
10.1. Repetibilidad

Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizar automticamente el clculo.

El valor de r se calcula como:


DSR=

r=2.8

s
x

DSR2
n
15

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Dnde:
s=desviacin estndar
r= repetibilidad
DSR=Desviacin estndar relativa
n = nmero de rplicas

x = Promedio
10.2. Reproducibilidad

Calcular la reproducibilidad utilizando los resultados obtenidos de las 10 rplicas de la prueba de

repetibilidad de un analista, ms los resultados de un segundo analista, o el mismo analista en un segundo


tiempo.
Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizar automticamente el clculo.
El valor de R se calcula como:

DSR21 + DSR 22
R=2.8
n
Dnde:
R= Reproducibilidad (por analista)
DSR1=Desviacin estndar relativa del analista 1
DSR2=Desviacin estndar relativa del analista 2
n= Total de rplicas considerando los dos analistas

10.3. Recuperacin

Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizar automticamente el clculo.

El valor de % de recuperacin se calcula como:

% Recuperacin= Media del logaritmo de las cuentas x100


Logaritmo de las UFC inoculadas
10.4. Sesgo

El sesgo es la diferencia absoluta entre el valor conocido como verdadero y el valor obtenido

experimentalmente.
Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizar automticamente el clculo.
El sesgo se calcula como:
Sesgo= [Ve-Vo]
Dnde Ve= valor esperado
16

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Vo= valor obtenido


10.5. Selectividad

Al menos en el 80% de los resultados se obtienen confirmacin de S. aureus.


No. de resultados confirmados como S . aureus
S=
100
No . de resul tados esperados
Considerando que se requieren 10 rplicas por analista y al menos 1 analista el nmero
total de resultados esperados debera ser 10.

10.6. Estimacin de la incertidumbre

Identificar y mencionar las posibles fuentes de incertidumbre.

Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizar automticamente el clculo.
La incertidumbre expandida U tal como se define por GUM, se deriva de la incertidumbre estndar
combinada uc(y), con un factor de cobertura k elegido en esta especificacin tcnica como un valor de 2
(que aproximadamente corresponde a un nivel de confianza del 95%.

U = 2 sR

Dnde:
U= Incertidumbre expandida.
YiA
= Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) log10 (ufc/ml) del analista A
YiB
= Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) log 10 (ufc/ml) del analista B
n
= 20
11. CRITERIOS DE ACEPTACIN
Parmetro
Repetibilidad

Criterio de aceptacin
10 Rplicas un analista.
Nivel de fortificacin: valor medio
Resultado r < 3

17

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Parmetro

Criterio de aceptacin

Reproducibilidad

10 Rplicas por cada analista, 2 analistas.


Nivel de fortificacin: valor medio
Resultado R < 3

Recuperacin

10 Rplicas, un analista.
Nivel de fortificacin valor medio
Resultado entre 90 y 110% log

Sesgo

10 rplicas un analista.
Nivel de fortificacin: valor medio
La diferencia absoluta de lo recuperado y lo inoculado es <0.3 log

Selectividad.

10 Rplicas por analista.


Al menos 1 analista.
Nivel de fortificacin:
< 10 UFC por placa de microorganismos de inters.
> 100 UFC por placa del microorganismo interferente.
Resultado: confirmacin del microorganismo de inters en > 80 % de las
muestras.

Incertidumbre

Especificar el mensurando
Listar las fuentes de incertidumbre
Realizar los clculos de la incertidumbre expandida.

Referencia: Gua para la Evaluacin del Desempeo de Mtodos de Prueba Microbiolgicos para anlisis
de alimentos. CCAYAC-CR-018.

18

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

INFORME PARA LA EVALUACIN DEL


DESEMPEO DEL MTODO DE
REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE
LA CUENTA DE S. aureus
APNDICE B NORMATIVO, NOM-210SSA1-2014

19

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Participaron en la elaboracin de este informe


Mara Esperanza Rodrguez Parra
Laboratorio Estatal Salud Pblica
Tamaulipas
Responsable de Laboratorio de
Microbiologa de Aguas y Alimentos
834 312 6633
lespt@hotmail.com

Odilia Hernndez Hernndez


Laboratorio Estatal Salud Pblica
Veracruz.
Jefa del Departamentos de Anlisis
Sanitarios.
229 9811390 Ext: 117
lesp.ohernandez@gmail.com

Paul Castro
Laboratorio Estatal de Salud Pblica
de Baja California Sur.
Aseguramiento de Calidad
ibqpaul@gmail.com

Karina Guerrero Colina


Laboratorio Estatal Salud Pblica
Veracruz.
Q. Analista de Anlisis Microbiolgicos
229 9811390 Ext: 117
qcguerrero@hotmail.com

Csar Omar Glvez Gonzlez


Comisin de Control Analtico y
Ampliacin de Cobertura.
Coordinador de la Oficina de Proyectos
Analticos.
5550805200 ext. 2022
cgalvez@cofepris.gob.mx

Mirella Paredes Salas


Laboratorio Estatal de Salud Pblica
de Aguascalientes
449 9775511
mireparedes.salas@gmail.com

Participaron en la revisin de este informe.


Odilia Hernndez Hernndez
Laboratorio Estatal de Salud Pblica
de Veracruz
Jefe de Departamento de Anlisis
Sanitarios
(229) 9811390 Ext.117
lesp.ohernandez@gmail.com

IBQ Claudia Lorena Garcia Green


Laboratorio Estatal de Salud Pblica
de Baja California Sur.

Maria Esperanza Rodriguez Parra


Laboratorio Estatal Salud Pblica Tamaulipas
Responsable de Laboratorio de Microbiologa de Aguas y
Alimentos
834 312 6633 lespt@hotmail.com

Geovani Ramrez Hernndez


Gerencia de la Red nacional de
laboratorios.
50805200 ext. 2016
gramirez@cofepris.gob.mx

Liliana Areli Cano Ramirez


Comisin de Control Analtico y Ampliacin de Cobertura
Coordinadora de Microbiologa Sanitaria.
50805200 ext. 2043
lcano@cofepris.gob.mx

Autorizacin
Imelda Rocio Guzman
Directora Ejecutiva de Control Analtico.
Comisionada de Control Analtico y Ampliacin de Cobertura.
Telfono: 01 55 50 80 52 00 ext 2043
irguzman@cofepris.gob.mx

Josefina Gutirrez Ramrez


Comisin de Control Analtico y Ampliacin de
Cobertura.
Directora Ejecutiva de Innovacin.
01 55 50 80 52 00 ext 2005
jgutierrez@cofepris.gob.mx

20

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

1.

OBJETIVO
Reportar los resultados de Repetibilidad, Reproducibilidad, Recuperacin, Sesgo, Selectividad e
Incertidumbre, obtenidos en el desarrollo del protocolo armonizado para la evaluacin del desempeo del
Mtodo de referencia para la estimacin de la cuenta de S. aureus, Apndice B Normativo. NOM-210SSA1-2014 en la matriz(ces) <<indicar la matriz>> utilizado el mtodo interno <<colocar la clave del
mtodo interno>> .

2.

CAMPO DE APLICACIN
Este informe es de aplicacin a la Red Nacional de Laboratorios en la implementacin y evaluacin del
desempeo del Apndice B Normativo, Mtodo de referencia para la estimacin de la cuenta de S.
aureus NOM-210-SSA1-2014.

3.

EQUIPOS E INSTRUMENTOS
Equipo

Descripcin:

Estado deseado5

Evidencia del estado.6

Identificacin, Marca,
Modelo
Balanza Granataria

Haga clic aqu para


escribir texto.

Verificado el da de
uso y Calibrado7

<<Registro de verificacin diaria>>


<<certificado de calibracin de la
balanza>>

Marco de pesas

Haga clic aqu para


escribir texto.

Calibrado 7

<<Certificado de calibracin>>

Incubadora
36C 1C

Haga clic aqu para


escribir texto.

Calificada

<<Informe de calificacin>>

Instrumento de
medicin de
temperatura

Haga clic aqu para


escribir texto.

Calibrado o verificado

<<Informe de calibracin o verificacin


vigente>>

Bao de agua
35C 37C 1C

Haga clic aqu para


escribir texto.

Calificado

<<Informe de calificacin>>

5 Seguir los criterios de aplicacin descritos en http://www.cofepris.gob.mx/TyS/Paginas/TercerosAutorizados.aspx


6Hacer referencia al registro, nmero de informe de calibracin/calificacin. Anexar copia de las
evidencias al presente informe.
7 Se recomienda implementar el uso del CCAYAC-CR-13.

21

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Equipo

Descripcin:

Estado deseado

Evidencia del estado.

Identificacin, Marca,
Modelo
Instrumento de
medicin de
temperatura

Haga clic aqu para


escribir texto.

Calibrado o verificado

<<Informe de calibracin o verificacin


vigente>>

Homogeneizador
peristltico, licuadora

Haga clic aqu para


escribir texto.

Mantenimiento
Vigente

<<Evidencia de mantenimiento>>.

Report

Supervis

Firma

4.

Firma

Nombre

Haga clic aqu para escribir texto.

Nombre

Fecha

Haga clic aqu para escribir una fecha.

Fecha

MATERIALES
Material

Descripcin

Clave de
Procedimiento

Material
de
vidrio <<Indique qu tipo de material <<Lavado
utiliza, por ejemplo pipetas, varillas material>>.
reutilizable estril.

de

etc.>>

Material
estril

desechable <<Indique qu tipo de material <<Verificacin de la


utiliza, pipetas, asas, etc.>>

esterilidad de
material>>

Evidencia8
<<Procedimiento de
lavado de material y
control del material
lavado y Registros
de
lavado
de
material
y
su
control.>>
<<Procedimiento y
registros de la
verificacin de la
esterilidad o
certificados de
esterilidad del
material>>

8 Cuando se use material esterilizado en el laboratorio, se deber anexar evidencias de la prueba de


esterilidad realizada al material.

22

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Report
Firma
Nombre
Fecha
5.

Supervis

Haga clic aqu para escribir texto.


Haga clic aqu para escribir una fecha.

Firma
Nombre
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


Haga clic aqu para escribir una fecha.

REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO


Reactivo o medio de
cultivo

Marca

Lote y caducidad

Resultados de desempeo
y fecha de evaluacin.9

Lote de preparacin.
Fecha de vida til del
medio preparado.

Agar Baird Parker

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

BHI

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Solucin reguladora de
fosfatos
o
agua
peptonada amortiguada

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Solucin salina 0.85%

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

AST

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Agar azul de toluidinaADN

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Plasma de conejo con


EDTA

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

9 Enviar evidencia de la preparacin y de la evaluacin del desempeo los medios utilizados en este
informe.

23

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Reactivo o medio de
cultivo

Marca

Lote y caducidad

Resultados de desempeo
y fecha de evaluacin.

Perxido de hidrgeno al
3%

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Kit para tincin de Gram

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Caldo rojo fenol (glucosa


y manitol)

Haga clic aqu


para escribir
texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Report

Supervis

Firma
Nombre
Fecha

6.

Firma
Haga clic aqu para escribir texto.
Haga clic aqu para escribir una fecha.

Nombre
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


Haga clic aqu para escribir una fecha.

CEPAS
Cepas utilizadas

ATCC u origen de la Certificado u hoja de identidad y


aseguramiento de calidad
cepa.

Staphylococcus aureus

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para escribir texto.

Staphylococcus epidermidis o
Listeria monocytogenes

Haga clic aqu para escribir


texto.

Haga clic aqu para escribir texto.

Report
Firma
Nombre
Fecha

7.

Lote de preparacin.
Fecha de vida til del
medio preparado.

Supervis
Firma

Haga clic aqu para escribir texto.


Haga clic aqu para escribir una fecha.

Nombre
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


Haga clic aqu para escribir una fecha.

MUESTRAS
24

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

7.1.

Criterio de seleccin de la muestra


En la tabla se indica en una escala de 1 al 5 la prioridad para el laboratorio, donde uno es el ms
importante y 5 el menos importante.
Criterio de
seleccin de la
muestra

Tipos de producto

Tipo de producto
recibido en el
laboratorio.

Matriz
representativa,
mayormente
recibida en el
laboratorio

Productos Crnicos

Crudo
Procesados
trmicamente
Congelados
Fermentados
Curado
Pate

Reportar en el
informe

Ejemplo
Carne molida
congelada

Ejemplo 4

Crudos
Congelados

Reportar en el
informe
Ejemplo Pescado
refrigerado
Crudos
Congelado

Reportar en el
informe

Ejemplo 2

Pescado y
Productos de la
pesca

Prioridad para el
laboratorio

Ejemplo
Crnico crudo
Crnico congelado

Ejemplo
Tilapia

Frutas y Vegetales

Crudos
Mnimamente
procesados

Reportar en el
informe
Ejemplo fruta cruda
No recibe

Reportar en el
informe
Ejemplo
No recibe

Ejemplo 3

Leche y lcteos

Fresco
Crudos
Queso artesanal

Reportar en el
informe
Ejemplo
Queso Fresco

Reportar en el
informe
Ejemplo
Queso fresco

Ejemplo 1

Otros Productos

Para ser llenado por


cada laboratorio

Ejemplo
No aplica

Reportar en el
informe
Ejemplo
No aplica

Ejemplo 5

Muestra Seleccionada Haga clic aqu para escribir


texto.

Cantidad de Muestra Haga clic aqu para escribir


texto.

25

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Descripcin de la muestra (cuando aplique: marca, lote, fecha de caducidad, condiciones de preservacin): Haga
clic aqu para escribir texto.
Report

Supervis

Firma
Nombre
Fecha

8.
8.1.
8.1.1.

Firma
Haga clic aqu para escribir texto.
Haga clic aqu para escribir una fecha.

Nombre
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


Haga clic aqu para escribir una fecha.

DESARROLLO EXPERIMENTAL.
Preparacin del Inculo. (Ver punto 8.1 del protocolo)
Descripcin de la preparacin del inculo:
Escriba en esta seccin el protocolo empleado, por ejemplo:
Se inocul una asada de Staphylococcus aureus en 10 mL de Caldo Infusin Cerebro
Corazn, se incub a 36 o C +/- 1o C por 22 a 24 h. A partir del cultivo se realizaron una
serie de diluciones con solucin salina 0.85% hasta llegar a la dilucin 10 -9.
Se coloc 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilucin 10 -7 a 10-9 y se adiciona agar
mtodos estndar, se incub a 36 o C +1o C por 22 a 24 h. Se realiz el conteo en cada
dilucin y se realiz el registro de los resultados de la concentracin del microorganismo
en cada dilucin.
Se seleccion la dilucin con cuentas aproximadamente de 12 X 10 5UFC.
Las diluciones se mantuvieron en refrigeracin y no son utilizadas por ms 26 h.
Ver resultados en 9.1
Verificacin de la muestra.
8.2.1. Descripcin de la verificacin de la muestra.
<< Describa las actividades para la verificacin de la muestra, por ejemplo:
8.2.

Se seleccion una muestra de queso de rancho, sin nmero de lote, de 2 kg de peso.


El da 20 de mayo de 2016 se tomaron 3 porciones de 25 g de muestra y se analizaron
siguiendo el mtodo del Apndice B normativo, utilizando como diluyente agua peptonada
26

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

amortiguada lote 23, las muestras se inocularon en placas de ABP Lote 233 y se
incubaron en la incubadora ID 422 a 36C por 24h.
El da 21 de mayo se contaron las colonias tpicas y atpicas, y se volvieron a incubar por
24h ms.
El da 22 de mayo despus del tiempo de incubacin se volvieron a revisar las placas y se
contaron las nuevas colonias tpicas y atpicas, para este protocolo se seleccion una
colonia tpica y una atpica (para S. aureus) de cada placa, de cada dilucin, si esta
confirma se contina con el clculo, en caso contrario se seleccionan otras 4 y se
someten al proceso de confirmacin los registros de anotaron en la bitcora 1 hoja 6 a 12,
las colonias seleccionadas fueron sembradas en AST a 35C, y caldo BHI incubadas a
35C en bao de agua.
El dia 23 de mayo con el cultivo en caldo BHI se corrieron la determinacin de coagulasa,
incubado a 35C en el bao de agua ID 229 realizando lecturas cada hora durante las
primeras cuatro horas, y posteriormente hasta 24h. Del mismo cultivo se corrieron las
pruebas de termonucleasa usando el agar azul de toluidina lote 5, incubando a 35C en
la incubadora ID6, despus de 4 horas se report como negativo.
El da 24 se leyeron los resultados de la prueba de coagulasa reportando todos los
cultivos como negativo, por lo que todas las porciones de la muestra fueron reportadas
como <100 UFC/g de muestra.
Los resultados se encuentran en el punto 9.2 de este informe>>

8.3. Repetibilidad
<< Describa las actividades para la evaluacin de este parmetro.
Ver resultados en 9.3>>
8.4. Reproducibilidad
<< Describa las actividades para la evaluacin de este parmetro.
Ver resultados en 9.4>>

27

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

8.5. Selectividad
<< Describa las actividades para la evaluacin de este parmetro. Ver resultados en 9.5>>

28

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.

Resultados.
Preparacin del Inculo. Registro
<Haga clic aqu para escribir una fecha.>>
9.1.

Fecha de preparacin:
Fecha de lectura:

<Haga clic aqu para escribir una fecha.>>

Diluciones

<<10.7>>

Cuenta de colonias

145

UFC/<<mL>>

150

<<10.8>>
160

12

<<10.9>>
18

15

Tamao de inculo deseado <<1 200 000 UFC>>


Clculo:
<< Si en la dilucin 10-7 hay 150 UFC/mL
Entonces se puede estimar que
En la dilucin 10-6 hay 1 500 UFC/mL
10-5 hay 15 000 UFC/mL
10-4 hay 150 000 UFC/mL
10-3 hay 1 500 000 UFC/mL
Entonces se selecciona la dilucin 10-3 donde hay 1 500 000 UFC/mL
1 500 000 UFC --- 1 mL
1 200 000 UFC --- X
X = 0.8 mL
Por lo tanto se usar como inculo 0.8 mL de las dil 10-3 >>
Report
Nombre y <<>>
Nombre
Firma
Firma
Fecha
Fecha

Supervis
y

<<>>

29

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.2.

Resultados de Verificacin de la muestra:


9.2.1.
Fecha de preparacin de

la

Cantidad pesada por muestra:


rplica 1 <<>>
rplica 2 <<>>
rplica 3 <<>>

Balanza
<<>>

Nmero de diluciones realizadas


rplica 1 <<>>
rplica 2 <<>>
rplica 3 <<>>

Diluyente
<<Nombre >> <<lote de preparacin>>

mL de muestra inoculados por placa


<<0.1>>

Medio de cultivo
<<Nombre >> <<lote de preparacin>>

muestra:

Incubacin:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termmetro <<>>
Report
Nombre
Firma
Fecha

<<>>

Supervis
Nombre
Firma
Fecha

<<>>

30

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.2.2 Primera lectura


Fecha:

Placa 1

Rplica 3

Rplica 2

Rplica 1

Dilucin

Nombre
Y firma
Fecha

Placa 2

<<10-1>>

<<10-2>>

<<10-3>>

d=

<<10-1>>

<<10-2>>

<<10-3>>

Colonias tpicas contadas en la


placa

cc

<<>>

<<>>

<<>>

cc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias atpicas contadas en la


placa

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias tpicas contadas en la


placa

cc

<<>>

<<>>

<<>>

cc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias atpicas contadas en la


placa

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias tpicas contadas en la


placa

cc

<<>>

<<>>

<<>>

cc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias atpicas contadas en


la placa

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

Analista
Haga clic aqu para escribir texto.
Haga clic aqu para escribir una fecha.

Nombre
firma
Fecha

Supervisor
Haga clic aqu para escribir texto.
Haga clic aqu para escribir una fecha.

31

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.2.3 Segunda lectura


Fecha:

Placa 1

Rplica 3

Rplica 2

Rplica 1

Dilucin

Nombre
Y firma
Fecha

Placa 2

<<10-1>>

<<10-2>>

<<10-3>>

d=

<<10-1>>

<<10-2>>

<<10-3>>

Colonias tpicas contadas en la


placa

cc

<<>>

<<>>

<<>>

cc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias atpicas contadas en la


placa

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias tpicas contadas en la


placa

cc

<<>>

<<>>

<<>>

cc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias atpicas contadas en la


placa

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias tpicas contadas en la


placa

cc

<<>>

<<>>

<<>>

cc

<<>>

<<>>

<<>>

Colonias atpicas contadas en


la placa

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

cnc

<<>>

<<>>

<<>>

Analista
Haga clic aqu para escribir texto.
Haga clic aqu para escribir una fecha.

Nombre
firma
Fecha

Supervisor
Haga clic aqu para escribir texto.
Haga clic aqu para escribir una fecha.

32

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.2.4 Confirmacin10, 11
BHI Lote de preparacin <<>>
AST Lote de preparacin <<>>
Coagulasa Lote <<>> Fecha de hidratacin
Azul de Toluidina Lote de preparacin Haga clic aqu para escribir texto.
Bioqumicas Lote <<>> Manitol lote <<>> Glucosa lote <<>>
Catalasa Lote <<>>
Bao de agua <<ID>> Temperatura <<C>> Termmetro <<ID>>
Incubadora <<ID>> Temperatura <<C>> Termmetro <<ID>>
Muestra

Cepa

Resultado coagulasa

Tiempo de incubacin
para coagulasa

Resultado
Termonucleasa

Control
Positivo

S. aureus <ATCC>>

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Control
Negativo

S. epidermidis <<ATCC>>

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

Haga clic aqu para


escribir texto.

9.2.4.1 Para el registro de resultados de confirmacin utilice el formato anexo 13.1 Registro de resultados
de confirmacin o los formatos internos del laboratorio y anexe al informe la cantidad de formatos
necesarios.
Analista
Nombre
Firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervisor
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

10 De las siguientes tabla solo utilice las celdas necesarias, cancela las celdas que no use siguiendo las
buenas prcticas de documentacin
11 Las pruebas auxiliares pueden hacerse para apoyar la determinacin de coagulasa y termonucleasa.

33

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.2.4.2 Para la interpretacin de los resultados y clculos utilice el CCAYAC-F-731 anexe a este informe.
9.2.5 Resumen de resultados.
Rplica

Resultado

1
2
3

Report
Nombre
firma
Fecha

Valor esperado

Haga clic aqu


escribir texto.

para

Haga clic aqu


escribir texto.

para

Haga clic aqu


escribir texto.

para

Cumple

Muestras no contaminadas:
< 100 UFC/g o <1 UFC/g
Muestras naturalmente
contaminadas:No aplica

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

si
no
no aplica

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

34

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.3.

Repetibilidad y Reproducibilidad
9.3.1.
Analista 1
Nombre del Analista: <<>> Fecha de inicio de la Prueba <<>>
9.3.1.1. Registro de preparacin de la
muestra.
Fecha de preparacin de la muestra: <<>>
Identificacin de la Balanza <<>>
Nmero de diluciones realizadas por muestra <<3>>
Diluyente <<Nombre >> <<lote de preparacin>>
mL de muestra inoculados por placa <<0.1>>
Medio de cultivo: <<ABP >> <<lote de preparacin>>
Por cada muestra registre la cantidad pesada realmente.
Rplica

10

Cantida
d real
pesada
(g)

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Haga
clic
aqu
para
escribir
texto.

Report
Nombre
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

35

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.3.1.2. Registro de inoculacin de la muestra


y verificacin del inculo.
Fecha de la preparacin del inculo:

<>> Fecha de la verificacin:

<>>

Microorganismo: <<>>
mL inoculados a la muestra: <<1 mL>> UFC esperado (terico) << 1 200 000>> UFC/mL.
9.3.1.3 Verificacin del inculo.
mL inoculados por placa para la cuenta en placa: <<>>
Mtodo de recuento: Vaciado en placa , Extensin en superficie
Medio de cultivo <<AST u otro medio sin inhibidores >> Lote de preparacin: <<>>
Incubacin:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termmetro <<>>
Dilucin en la que se cuentan < 300 UFC <<>>
Resultados:
Rplica

UFC en la placa 1

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

UFC en la placa 2

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Promedio por rplica.

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Promedio de las 6 rplicas

Haga clic aqu para escribir texto.

Valor esperado por g o mL de muestra

Haga clic aqu para escribir texto.

Report
Nombre
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

36

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.3.1.4 Registro de incubacin


Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termmetro <<>>
Fecha de incubacin:
<>>
Report
Nombre
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

9.3.1.5 Registro de lectura: Utilizando el formato anexo 13.2 Registros de cuentas registre el nmero de
colonias de cada rplica.
9.3.1.6 Confirmacin Registre los resultados de confirmacin en el formato anexo 13.1 registro de
resultados de confirmacin.
9.3.1.7 Clculos Realice el clculo de UFC por g o mL de muestra utilice el formato CCAYAC-F-731.
9.3.1.8 Resuma los resultados en el punto 9.3.3.

37

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.3.2. Analista 2
Nombre del Analista: <<>> Fecha de inicio de la Prueba
<>>
9.3.2.1. Registro de preparacin de la
muestra.
Fecha de preparacin de la muestra:

<>>

Identificacin de la Balanza Haga clic aqu para escribir texto.


Nmero de diluciones realizadas por muestra <<3>>
Diluyente <<Nombre >> <<lote de preparacin>>
mL de muestra inoculados por placa <<0.1>>
Medio de cultivo: <<ABP >> <<lote de preparacin>>
Por cada muestra registre la cantidad pesada realmente.
Rplica

10

Cantidad real pesada (g)

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Report
Nombre
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

38

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.3.2.2. Registro de inoculacin de la muestra


y verificacin del inculo.
Fecha de la preparacin del inculo: <<>>
Fecha de la verificacin: <<>>
Microorganismo: <<>>
mL inoculados a la muestra: <<1 mL>>
UFC esperado (terico) << 1 200 000>> UFC/mL.
9.3.2.3 Verificacin del inculo.
mL inoculados por placa para la cuenta en placa: <<>>
Mtodo de recuento : Vaciado en placa , Extensin en superficie ,
Medio de cultivo <<AST u otro medio sin inhibidores <<>> Lote de preparacin: <<>>
Incubacin:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termmetro <<>>
Dilucin en la que se cuentan < 300 UFC <<>>
Resultados:
Rplica

UFC en la placa 1

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

UFC en la placa 2

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Promedio por rplica.

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Promedio de las 6 rplicas

Haga clic aqu para escribir texto.

Valor esperado por g o mL de muestra

Haga clic aqu para escribir texto.

Report
Nombre
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

39

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.3.2.4 Registro de incubacin


Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termmetro <<>>
Fecha de incubacin:
<>>
Report
Nombre
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

9.3.2.5 Registro de lectura: Utilizando el formato anexo 13.2 Registros de cuentas registre el nmero de
colonias de cada rplica.
9.3.2.6 Confirmacin Registre los resultados de confirmacin en el formato anexo 13.1 registro de
resultados de confirmacin.
9.3.2.7 Clculos Realice el clculo de UFC por g o mL de muestra utilice el formato CCAYAC-F-731.
9.3.2.8

Resuma los resultados en el punto 9.3.3.

40

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.3.3 Resumen de resultados de la evaluacin del desempeo. 12


Analista 1
Rplica

Analista 2

UFC/g o mL

Log(UFC)

UFC/g o mL

Log(UFC)

Valor esperado

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

10

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Promedio por analista

<<>>

<<>>

Desviacin estndar
por analista

<<>>

<<>>

DSR

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

% de recuperacin

<<>>

<<>>

Sesgo

<<>>

<<>>

<<>>

12 Para la realizacin de los clculos puede apoyarse de la siguiente


herramienta.https://docs.google.com/spreadsheets/d/1Abkig3HwxozC-xrT01eU-DK-q-MejFNRCqSkRWeFso/edit?usp=sharing

41

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.4. Selectividad.
9.4.1.
Fecha de preparacin de la muestra:

Registro de preparacin de la muestra.

<>>

Identificacin de la Balanza <<>>


Nmero de diluciones realizadas por muestra <<3>>
Diluyente <<Nombre >> <<lote de preparacin>>
mL de muestra inoculados por placa <<0.1>>
Medio de cultivo: <<ABP >> <<lote de preparacin>>
Por cada muestra registre la cantidad pesada realmente.
Rplica

10

Cantida
d real
pesada
(g)

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Report
Nombre
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

9.4.2.

42

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.4.2

Registro de inoculacin de la muestra y verificacin de los inculos.

Fecha de la preparacin del inculo:


Fecha de la verificacin:

<>>

Fecha de la preparacin del inculo:

<>>

Fecha de la verificacin:

<>>

<>>

Microorganismo de inters: <<S. aureus>>


mL inoculados a la muestra: <<1 mL>>
UFC esperado (terico) << < 10 >> UFC

Microorganismo Interferente: <<>>


mL inoculados a la muestra: <<1 mL>>
UFC esperado (terico) << >100 >> UFC.

Verificacin del inculo.


mL inoculados por placa para la cuenta en placa: <<>>
Mtodo de recuento : Vaciado en placa , Extensin en
superficie
Medio de cultivo <<AST>> Lote de preparacin: <<>>
Incubacin:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>>
Termmetro <<>>

Verificacin del inculo.


mL inoculados por placa para la cuenta en placa: <<>>
Mtodo de recuento : Vaciado en placa , Extensin en
superficie
Medio de cultivo <<AST>> Lote de preparacin: <<>>
Incubacin:
Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>>
Termmetro <<>>

Resultados:

Resultados:

Rplica

Rplica

Dilucin
en la que
se
cuentan <
300 UFC

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Dilucin
en la que
se
cuentan <
300 UFC

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

UFC en la
placa 1

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

UFC en la
placa 1

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

UFC en la
placa 2

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

UFC en la
placa 2

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Promedio
por
rplica

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Promedio
por
rplica

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

Promedio

<<>>

Promedio

<<>>

Valor esperado por g o mL de muestra

Report
Nombre
firma
Fecha

<<>>

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Valor esperado por g o mL de muestra

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

<<>>

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

43

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

44

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.4.2.1. Registro de incubacin


Temperatura <<>> Tiempo <<>> Incubadora <<>> Termmetro <<>>
Report
Nombre
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.


y
Haga clic aqu para escribir una
fecha.

Supervis
Nombre
y
firma
Fecha

Haga clic aqu para escribir texto.

Haga clic aqu para escribir una fecha.

9.4.2.2 Lectura Utilizando el formato anexo 13.2 registros de cuentas registre el nmero de colonias de
cada rplica.
9.4.2.3 Confirmacin Utilizando el formato anexo 13.1 registro de resultados de confirmacin anote los
resultados de la confirmacin.
9.4.2.4 Clculos Realice el clculo de UFC por g o mL de muestra utilice el formato CCAYAC-F-731

45

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.4.3 Resumen de resultados de selectividad.


Rplica

Cuenta de S. aureus
UFC/g o mL

Log(UFC)

Valor esperado

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

<<>>

10

<<>>

<<>>

Promedio

<<>>

% de recuperacin

<<>>

46

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.5.

Clculo de incertidumbre.

Describa los clculos

47

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

9.6.

Comparacin de los resultados obtenidos con los criterios

de aceptacin.
Parmetro
Repetibilidad

Reproducibilidad

Resultados
obtenidos

Criterio de aceptacin

Dictamen

Analista 1
Haga clic aqu para
escribir texto.
Analista 2
Haga clic aqu para
escribir texto.

r<3

Haga clic aqu para


escribir texto.

R<3

Cumple
No
cumple

Cumple
No
cumple

Recuperacin

Analista 1
Haga clic aqu para
escribir texto.
Analista 2
Haga clic aqu para
escribir texto.

Entre 90 y 110 log

Cumple
No
cumple

Sesgo

Analista 1
Haga clic aqu para
escribir texto.
Analista 2
Haga clic aqu para
escribir texto.

Diferencia absoluta entre lo recuperado


e inoculado < 0.3 log

Cumple
No
cumple

Selectividad

1 Analista
Haga clic aqu para
escribir texto.

Inculo confirmado < 25, 000 UFC por placa Cumple


de microorganismos de inters.
No
Inculo confirmado de > 250 000 UFC por cumple
placa del microorganismo interferente.
Resultado: confirmacin del microorganismo
de inters en > 80 % de las muestras.
Las recuperaciones deberan estar dentro
del 80%, del valor esperado.
48

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

Parmetro
Incertidumbre
expandida

Resultados
obtenidos
Haga clic aqu para
escribir texto.

Criterio de aceptacin
No aplica

Dictamen
No aplica

10. Discusin de los resultados


Por ejemplo:
Los resultados del anlisis estadstico realizado, demuestran que al aplicar el mtodo se obtienen
resultados confiables y reproducibles y por tanto se puede utilizar para el anlisis de los productos
descritos en este informe.
La presencia de microorganismos interferentes no afecta sustancialmente la recuperacin del
microorganismo de inters.

49

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE
PUBLICACIN:
Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL


MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

11. CONCLUSIN
Al cumplirse todos los criterios de validez se concluye que el Mtodo de Referencia para la
estimacin de la cuenta de S. aureus Apndice B Normativo. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la
clave y nombre del documento que describe el mtodo del laboratorio), al ser aplicado por el
Laboratorio Estatal de Salud Pblica de XXXXXXX es adecuado para el anlisis del grupo de alimentos
(matriz especfica).

Al NO cumplirse los criterios de validez (indicar cuales no se han cumplido) se concluye que el
Mtodo

de Referencia para la estimacin de la cuenta de S. aureus Apndice B

Normativo.Apndice Normativo. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del


documento que describe el mtodo del laboratorio), al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud
Pblica de XXXXXXX NO es adecuado para el anlisis del grupo de alimentos crnicos o para la matriz
especfica.

12. BIBLIOGRAFA
12.1 Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, PRODUCTOS Y SERVICIOS. MTODOS DE
PRUEBA MICROBIOLGICOS. DETERMINACIN DE MICROORGANISMOS INDICADORES.
DETERMINACIN DE MICROORGANISMOS PATGENOS. APNDICE B NORMATIVO. Mtodo de

Referencia para la estimacin de la cuenta de S. aureus.


12.2 Gua para la Evaluacin del Desempeo de Mtodos de Prueba Microbiolgicos para
anlisis de alimentos. CCAYAC-CR-18/2 2016.
13. ANEXOS
13.1 Registros de resultados de confirmacin.
13.2 Registros de cuentas.
Anexe copia de las evidencias referidas en el protocolo e informe.

50

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

13.1 Registro de resultados de confirmacin


Prueba :__________________ <<por ejemplo: verificacin de la muestra >>
Replica ___________________<<1, 2, 3 ...n>>
Dilucin ____________<< 10-1 >>
Placa:______________ <<1>>
Colonias Tpicas
1

Colonias Atpicas
3

Resultado
coagulasa13
Tiempo de
incubacin
Resultado
Termonucleasa14
Gram15
Bioqumica
Catalasa/
Manitol/
Glucosa16
Interpretacin17

13 (+) = Positivo (-) = negativo


14 (+) = Positivo (-) = negativo
15 (+) = Gram Positivo (-) = Gram negativo
16 Si se usan bioqumicas colocar (+) = si confirma S. aureus (-) = para otro microorganismo, para
catalasa/manitol/glucosa colocar (+) = Positivo (-) = negativo, por ejemplo S. aureus sera +/+/+
17 (+) = si confirma S. aureus (-)= para otro microorganismo

51

FECHA DE
PUBLICACIN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016
PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIN DEL DESEMPEO DEL
MTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIN DE LA CUENTA DE S. aureus. APNDICE
NORMATIVO B,
NOM-210-SSA1-2014

13.2 Registros de cuentas


Analista: _________________________
Fecha de incubacin: ________________
Fecha de primer lectura: ____________________
Fecha de segunda lectura: ____________________
Replica __________
Dilucin
d=
Total de colonias
24h
tpicas contadas en la

cc

<<10-3>>

<<10-1>>

Placa 2
<<10-2>>

<<10-3>>

24h
cnc

48h

la placa
Colonias tpicas
seleccionadas a

Placa 1
<<10-2>>

48h

placa
Total de colonias
atpicas contadas en

<<10-1>>

Ac

confirmar
Colonias atpicas
seleccionadas a

Anc

confirmar

52

Anda mungkin juga menyukai