ACTIVIDAD ENZIMATICA DEL SUELO

Las enzimas son un tipo especial de protenas que se combinan con un sustrato
especfico y actan para catalizar una reaccin bioqumica, sin experimentar
cambios en su estructura; en trminos generales las enzimas en el suelo son
esenciales para la transformacin de energa y el ciclaje de nutrientes. Debido
a su naturaleza proteica pueden ser afectadas por factores ambientales como
son la temperatura y el pH (Alexander 1980, Coyne 2000, Paul y Clark 2007).
Las enzimas de suelo son producidas por plantas, animales y microorganismos
y pueden estar presentes en clulas muertas y restos celulares que son
absorbidos por arcillas e incorporados en sustancias hmicas (Baleentien y
Klimas 2009). Las enzimas intervienen en la mayora de los procesos que
tienen lugar en el suelo y las funciones que realizan son de gran importancia.
Son responsables de la formacin de molculas orgnicas y particularmente
tienen una participacin vital en el ciclo nitrgeno, fsforo y carbono.
Cumplen un papel vital en procesos tales como la mineralizacin,
inmovilizacin de nutrientes y fijacin biolgica de nitrgeno, entre otros
(Caldwell 2005, Carpa 2009, Coyne 2000, Dick y Tabatabai 1993).
Especficamente en relacin con la mineralizacin, las enzimas participan en la
transformacin de compuestos orgnicos complejos a sustancias asimilables
por las plantas que catalizan las etapas limitantes en la mineralizacin de
nutrientes. Esta es la razn hacer grupos similares segn el tipo de cultivo, lo
que evidencia el potencial de utilizacin que tiene esta propiedad para realizar
estudios ms detallados. Por la cual se relaciona su actividad con la liberacin
de nutrientes inorgnicos procedentes de la materia orgnica (Coyne 2000,
Dick y Tabatabai 1993, Li et l. 2008).
Una parte de las enzimas de suelo son extracelulares, y liberadas durante el
metabolismo y muerte celular, otras son intracelulares y que forman parte de
la biomasa microbiana o bien estn adsorbidas en la materia orgnica y en el
sistema coloidal, lo cual sugiere que el suelo puede actuar como un reservorio
temporal; lo anterior implica que en un momento dado la actividad enzimtica
podra no estar ligada necesariamente con la actividad microbiana (Alef y
Nannipieri 1995, Alexander 1980, Paul y Clark 2007).
Las principales enzimas se pueden clasificar en oxidoreductasas como por
ejemplo la catalasa, glucosa oxidasa, deshidrogenasa y peroxidasa, las
transferasas como la transaminasa y las hidrolasas como la celulasa, lipasa, glucosidasa, fosfatasa y ureasa (Alef y Nannipieri 1995, Paul y Clark 2007). Las
enzimas Deshidrogenasa, -glucosidasa, Fosfatasa y Ureasa se han utilizado
como indicadores para evaluar el efecto del manejo agronmico sobre
caractersticas de calidad o estado de sanidad del suelo (Gajda y Mortyniuk
2005, Baleentien y Klimas 2009); estas enzimas son responsables de la
liberacin de C, N, y P, elementos importantes en la nutricin de las plantas

KIT ACTIVIDAD ENZIMATICA

TSI (rojo) --- Medio universalmente empleado para la diferenciacin de entero

bacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la
produccin de cido sulfhdrico.
Citrato (verde)- Medio utilizado para la diferenciacin de entero bacterias, en
base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.
SIM (beish) Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad,
produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia Entero bacteriaceae.

LIA (morado) ---Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos,

especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin
de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico.
UREA (amarillo)-- utilizado para diferenciar microorganismos en base a la
actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea,
tales como Proteus spp., otras entero bacterias y estafilococos. En el medio de
cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos.
ACTIVIDAD ENZIMATICA DEL SUELO (suelo del invernadero Ucsur)
Las muestras analizadas derivan del suelo extrado del invernado de la
universidad, se realiz una disolucin seriada para poder bajar las
concentraciones de la poblacin microbiana y poder caracterizar ptimamente
a ciertos microorganismos del suelo.
1. se hizo una disolucin seriada en 5 tubos de ensayo que contenan 9 ml de
agua (rotulados del 1 al 5).
2. Se agreg 1ml del homogenizado de suelo y agua destilada al tubo 1,
enseguida tambin se homogenizo esta mezcla y se pas 1ml de este tubo 1 al
tubo 2, continuamente del homogenizado del tubo 2 tambin de saco 1 ml para
el tubo 3 realizando diluciones seriadas hasta el tubo.

3. incubamos en agares por una semana, luego cultivamos en los tubos que
contenan las enzimas para poder ver la actividad enzimtica de nuestro
microorganismos.
4. Para poder apreciar la actividad enzimtica tenemos que llevar a incubar a
37 C para luego comparar nuestros tubos.

RESULTADOS: tubos del 1A al 5

KIT SIN SEMBRAR Y SIN INCUBAR (tubo 5)

KIT SEMBRADO E INCUBADO (tubo 5)

ANLISIS:
Tubo 1A: (medio TSI) presencia de hidratos de carbono fermentables (lactosa,
sacarosa y glucosa)
Se puede apreciar en primaria instancia un cambio de color del rojo (debido al
PH del medio) a un color anaranjado llevndolo para amarillo indicando la
presencia de microorganismos que fermentan la glucosa , anaerobios
facultativos (Gram negativas ) posiblemente encontremos Escherichia Coli O K.
pneumoniae ATCC.
Tambin se puede apreciar rupturas del medio de cultivo informndonos de
presencia de microorganismos que producen gas posiblemente encontremos S.
enteritidis ATCC .
Tubo 2A: (medio CITRATO) las sales de fosfato forman un sistema buffer, el
magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul
en medio alcalino
Se puede apreciar un cambio de color azul debido a un crecimiento bacteriano
indicndonos que nuestros microorganismos utilizan el citrato como fuente de
carbono , sales de amonio como nica fuente de nitrgeno en este medio
podemos encontrar Klebsiella pneumoniae ATCC o S. typhimurium ATCC.

Tubo 3A: (medio LIA) La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la

lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas

decarboxilasa y deaminasa, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el

medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta.
Se puede apreciar una ligero cambio de color ms claro mantenindose el
purpura, dando positivo al medio donde posiblemente encontremos salmonella
typhimurium , Salmonella enteritidis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae
ATCC
Tubo 4A: (medio SIM) Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por
la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra.
Se puede apreciar turbidez dando resultado a la presencia de movilidad y de
sulfuro de hidrogeno donde posiblemente encontremos posiblemente S.
enteritidis ATCC o E. coli ATCC en el medio.
Tubo 5A: (medio UREA) la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico, y el rojo de fenol es el indicador de pH.
Se puede apreciar que el medio mantiene su color inicial dando negativo a que
los microorganismos realizan la actividad ureasica caso contrario podramos
decir que se puede encontrar Proteus mirabilis ATCC o K. pneumoniae ATCC .

BALEENTIEN L., KLIMAS E. 2009. Effect of organic and mineral fertilizers and
land management on soil enzyme activities. Effect of organic and mineral
fertilizers and land management on soil enzyme activities (Special issue I)
9:191-197.
DICK W.A., TABATABAI M.A. 1993. Significance and potencial uses of soil
enzymes. Soil Microbial Ecology Meeting, pp. 95-127. Jr., F.B. (ed.). Soil
Microbial Ecology. Marcel Dekker, New York.
ALEF K., NANNIPIERI P. 1995. Methods in applied soil microbiology and
biochemistry. Academic Press. 576 p.