17.2.

08
AOAC Official Method 995.21
Yeast and Mold Counts in Foods
Hydrophobic Grid Membrane Filter
(ISO-GRID) Method Using YM-11 Agar
First Action 1995
Final Action 1999

open Petri dishes and placing them in incubator 1520 min at 35C.
(j) ChlortetracyclineHCl
supplement.Dissolve
0.5
g
chlortetracyclineHCl in 100 mL H2O. Stir without heating until
dis- solved. Filter-sterilize solution. Unused portion of supplement
can be
stored 2 months at 46C, if protected from evaporation.

(Applicable to enumeration of total yeasts and molds in all foods.)

See Table 995.21A for the results of the interlaboratory study
sup- porting acceptance of the method.
A. Principle

Method uses membrane filter imprinted with hydrophobic

mate- rial in grid pattern. Hydrophobic lines act as barriers to
spread of col- onies, thereby dividing membrane filter surface into
separate compartments of equal and known size. Squares occupied
by colo- nies are counted and converted to most probable number
(MPN) value of organisms.
B. Apparatus, Media, and Reagents

(a) Hydrophobic grid membrane filter (HGMF).Pore size,

0.45 m; imprinted with nontoxic hydrophobic material in grid
pattern.
(b) Filtration units for HGMF.Equipped with 5 m mesh prefilter
to remove food particles during filtration. Use one unit/test.
(c)Pipets.1.0, 5.0, and 10.0 mL, serological with 0.1 mL graduations; 1.1 or 2.2 mL milk pipets may also be used.
(d) Blender.Multi-speed with low-speed operation at 10
00012 000 rpm with 250 mL glass or metal blender jars with
covers. Use one jar/test.
(e) Vacuum pump.H2O aspirator vacuum source is
satisfactory.
(f) Manifold or vacuum flask.
(g) Peptone diluent.Dissolve 1.0 g peptone (gelatin
hydrolysate peptone) in1L H2O. Dispense peptone diluent into
dilu- tion bottles to obtain 90 1 mL or 99 1 mL after
autoclaving 15 min at 121C.
(h) PeptoneTween 80 (PT) diluent.Dissolve 1.0 g peptone (gelatin
hydrolysate peptone) and 10.0 g Tween 80 i n1 L H2O. Dis- pense
PT diluent into dilution bottles to obtain 90 1 mL or 99 1 mL
after autoclaving 15 min at 121C.
(i) YM-11 agar.Dilute 20.0 g soy peptone, 20.0 g tryptone,
5.0 g D-glucose, 5.0 g NaCl, 2.4 g anhydrous K2HPO4, 0.03 g
trypan blue, 0.1 g chloramphenicol, and 15.0 g agar to 1 L with
H2O. Heat to boiling while stirring. Autoclave 15 min at 121C
and then temper to
4550C in H2O bath. Temper chlortetracyclineHCl supplement,
(j), to 4550C. Add 20 mL supplement to 1 L YM-11 medium
and mix well. Aseptically pour sufficient volume of complete
YM-11 agar into small weighing boat or Petri dish to obtain 3
mm layer of
agar. Let agar solidify.
Check pH using flat-surface combination electrode. Adjust pH,
if necessary, to 7.0 0.2 by adding sterile 1M NaOH or 1M HCl,
as re- quired. Aseptically pour another small portion of medium
and check pH as before. Continue adjustments until pH is within
specified range. Dispense ca 1820 mL agar into 15 100 mm
Petri dishes. Let agar solidify. Surface-dry medium before use by
inverting partly

2000 AOAC INTERNATIONAL

(k) Papain stock solution.16 000 Food Chemicals Codex papain

units/mg. Reconstitute 10.0 g sterile papain powder with 100 mL
sterile H2O. Unused portion of solution can be stored frozen
3 months.
(l) Hemicellulase stock solution.1500 hemicellulase units/g. Reconstitute 20.0 g sterile hemicellulase powder with 100 mL
sterile H2O. Unused portion of solution can be stored frozen 3
months.
Items (a), (b), (i), and (j)(l) are available from QA Life
Sciences,
Inc., 6645 Nancy Ridge Dr, San Diego, CA 92121, USA.
C. Preparation of Test Portion

(Note: See Table 995.21B for diluents and enzymes to be used

for various foods.)
(a)Liquid egg.Thoroughly mix test sample using sterile spoon or
spatula. Aseptically weigh 11 g egg material into sterile widemouth, screw-top bottle. Add 99 mL PT diluent, B(h), and 1
tbsp of sterile glass shot. Thoroughly agitate 1:10 dilution
suspen- sion to ensure complete distribution of egg material in
diluent by shaking each bottle rapidly 25 in 7 s, using an upand-down movement of ca 30 cm for each shake. Let bubbles
escape. If enzyme treatment is needed (see Table 995.21B),
combine 5 mL homoge- nate (1:10 dilution) with 1 mL
appropriate enzyme stock solution,
mix well, and incubate 2030 min in H2O bath at 3537C.
Correct for additional dilution by filtering 1.2 mL enzymetreated test por- tion homogenate.
(b) Other liquid products.Thoroughly mix contents of con- tainer.
Prepare 1:10 dilution by aseptically transferring 10 mL test
portion into 90 mL peptone diluent, B(g), or 90 mL PT diluent,
B(h), (see Table 995.21B) in sterile wide-mouth, screw-top
bottle. Mix by shaking bottle 25 through 30 cm arc in 7 s. If

enzyme treatment is needed, combine 5 mL homogenate (1:10

dilution) with 1 mL appro- priate enzyme stock solution, mix well,
and incubate 2030 min in H 2O bath at 3537C. Correct for
additional dilution by filtering
1.2 mL enzyme-treated test portion homogenate.
(c)Whole egg powder.Thoroughly mix with sterile spoon or spatula.
Dilute 1:10 by aseptically weighing 11 g egg material into sterile
wide-mouth, screw-top bottle. Add 99 mL PT diluent, B(h), and 1
tbsp of sterile glass shot. Shake rapidly as in (a) to ensure complete distribution of egg material in diluent.
Prepare 1:100 dilution by aseptically transferring 10 mL
homoge- nate (1:10 dilution) into 90 mL PT diluent. Combine 10
mL of 1:100 dilution with 1 mL papain stock solution, B(k), mix
well, and incu- bate 2030 min in H2O bath at 3537C. Filter
entire 11 mL volume of enzyme-treated 1:100 dilution.
(d) Other powders.Thoroughly mix with sterile spoon or spat- ula.
Prepare 1:10 dilution by aseptically weighing 10 g test portion
into sterile wide-mouth, screw-top bottle. Add 90 mL peptone,
B(g), or PT diluent, B(h), (see Table 995.21B). Shake each bottle
rapidly 25 in 7 s, using an up-and-down movement of ca 30 cm
for each shake. Let bubbles escape. If enzyme treatment is needed,
combine 5 mL homogenate (1:10 dilution) with 1 mL appropriate
enzyme
stock solution, mix well, and incubate 2030 min in H 2O bath at
3537C. Correct for additional dilution by filtering 1.2 mL enzyme-treated test portion homogenate.
(e)Other foods.Prepare 1:10 dilution by aseptically weighing 10 g
test portion into sterile blender jar. Add 90 mL peptone, B(g), or
PT, B(h), diluent (see Table 995.21B), and blend 2 min at low
speed (10 00012 000 rpm). If enzyme treatment is needed,
combine 5 mL homogenate (1:10 dilution) with 1 mL appropriate
enzyme stock so- lution, mix well, and incubate 2030 min in
H2O bath at 3537C.

2000 AOAC INTERNATIONAL

Table 995.21A

Food

Interlaboratory study results for enumeration of yeast and mold in foods by ISO-GRID and reference methods

Method

Precision estimatesa

r
R
sr
sR
RSDr,
RSDR, %
%27.49
ISO0.
1.
0.
0.40
32.09
GRID
9
1
3
Refere
0.
1.
0.
0.44
29.12
40.19
nce
9
2
3
B
ISO0.
1.
0.
0.36
22.35
30.03
GRID
7
0
2
Refere
0.
1.
0.
0.43
28.95
36.10
nce
9
2
3
C
ISO0.
1.
0.
0.36
16.11
30.42
GRID
5
0
1
Refere
1.
1.
0.
0.53
40.00
44.18
nce
3
4
4
Ove
ISOrall
GRID
Refere
nce
Raw
A
ISO3.61
0.
1.
0.
0.38
7.50
10.60
ground
beef
GRID
7
0
2
Refere
3.59
0.
1.
0.
0.38
8.23
10.61
nce
8
0
2
B
ISO3.91
0.
1.
0.
0.47
8.70
11.99
GRID
9
3
3
Refere
3.84
0.
1.
0.
0.36
5.94
9.36
nce
6
0
2
C
ISO4.43
1.
1.
0.
0.60
8.82
13.60
GRID
0
6
3
Refere
4.28
0.
1.
0.
0.52
6.88
12.03
nce
8
4
2
Ove
ISO3.99
rall
GRID
Refere
3.90
nce
Walnuts
A
ISO3.57
0.
0.
0.
0.26
6.77
7.15
GRID
6
7
2
Refere
3.68
0.
0.
0.
0.19
4.93
5.07
nce
5
5
1
B
ISO4.08
0.
0.
0.
0.23
2.47
5.59
GRID
2
6
1
Refere
4.23
0.
0.
0.
0.16
1.90
3.81
nce
2
4
0
C
ISO3.66
0.
0.
0.
0.25
5.97
6.74
GRID
6
7
2
Refere
3.79
0.
0.
0.
0.21
5.43
5.43
b
nce
5
5
2
ISO3.76
Overa
ll
GRID
Refere
3.90
nce
Flour/meal
A
ISO3.36
1.
1.
0.
0.43
12.80
12.80
GRID
2
2
4
Refere
3.52
1.
1.
0.
0.36
10.23
10.23
nce
0
0
3
B
ISO4.63
0.
1.
0.
0.42
4.45
9.05
GRID
5
1
2
Refere
4.76
0.
0.
0.
0.33
5.66
6.97
nce
7
9
2
C
ISO3.38
1.
1.
0.
0.42
10.57
12.46
GRID
0
1
3
Refere
3.20
0.
1.
0.
0.39
8.19
12.23
nce
7
0
2
Ove
ISO3.80
rall
GRID
Refere
3.83
nce
Orange
A
ISO3.11
0.
0.
0.
0.23
5.91
7.19
juice
GRID
5
6
1
Refere
3.32
0.
0.
0.
0.23
4.39
6.85
nce
4
6
1
B
ISO7.20
1.
1.
0.
0.42
5.16
5.87
GRID
0
1
3
Refere
6.66
1.
2.
0.
0.75
6.06
11.31
nce
1
1
4
C
ISO6.00
0.
1.
0.
0.62
4.39
10.26
GRID
7
7
2
Refere
5.45
1.
1.
0.
0.55
8.35
10.08
b
nce
2
5
4
ISO5.45
Overa
ll
GRID
Refere
5.15
nce
Yogurt
A
ISO6.54
0.
1.
0.
0.49
2.51
7.44
GRID
4
3
1
Refere
6.75
0.
1.
0.
0.65
1.59
9.58
nce
3
8
1
B
ISO6.46
0.
1.
0.
0.66
2.46
10.25
GRID
4
8
1
Refere
6.61
0.
2.
0.
0.85
1.81
12.85
nce
3
3
1
C
ISO6.72
0.
1.
0.
0.53
3.07
7.83
GRID
5
4
2
Refere
6.66
0.
1.
0.
0.69
3.25
10.36
nce
6
9
2
Ove
ISO6.60
rall
GRID
Refere
6.67
a
nceafter conversion of the data to log ;r= 2.8 s ;R= 2.8 s ; s = repeatability standard deviation; s = reproducibility standard
Precision estimates were calculated
10
r
R r
R
Garlic
powder

Lot

Log10
mean,
count/g or
mL
1.23
1.08
1.20
1.20
1.18
1.20
1.20
1.18

deviation; RSDr = repeatability relative standard deviation; RSD R = reproducibility relative standard deviation.
Difference between the methods is statistically significant at the 5% level.

Table 995.21B

Diluents and enzyme treatments for various

a
foods

Food

Correct for additional dilution by filtering 1.2 mL enzyme-treated

sample homogenate.

Diluent

Enzyme

Flour/meal

Peptone

None

D. Analysis

Black pepper

Peptone

None

Onion powder

Peptone

Papain

Garlic powder

Peptone

Papain

Soy beans

Peptone

None

Pinto beans

Peptone

None

Rice

Peptone

None

Coffee beans

Peptone

None

Cocoa beans

Peptone

None

Cream cheese
Other cheeses

Peptone
PT

Hemicellulase
Other cheeses

See Figures 986.32A and B (see 17.2.05) for filtration unit

and fil- tration unit clamp.
Turn on vacuum source. Place sterile filtration unit on
manifold or vacuum flask. Open clamp A. Rotate back funnel
portion C. Asep- tically place sterile filter, B(a), on surface of
base D. Rotate funnel forward. Clamp shut by sliding jaws L
of stainless steel clamp over entire length of flanges B that
extend from both sides of funnel C and base D, and rotating
moving arm K into horizontal (locked) position.
Aseptically add ca 1520 mL sterile H2O to funnel. Pipet
1.0 mL homogenate (1:10 dilution) or appropriate volume
of en- zyme-treated homogenate into funnel. Apply free end
of vacuum tubing E to suction hole F to draw liquid through
prefilter mesh G.

Sour cream

Peptone

Papain

Vegetable juices

Peptone

None

Fruit juices

Peptone

None

Raw tomato

Peptone

None

Frozen strawberries

Peptone

None

Fresh blackberries

Peptone

None

Fruit preserves

Peptone

None

Walnuts

Peptone

Papain

Peanuts

Peptone

Papain

Raw ground beef

PT

None

Summer sausage

PT

None

Roast beef

PT

None
B

Based on analysis of 1 mL 1:10 dilution. Foods tested at dilutions of 1:100

or
higher do not usually need enzyme treatment. See Table 986.32 (see
17.2.05) for recommended enzyme treatments of foods not listed in this
table.
PeptoneTween 80 diluent, B(h).

Aseptically add additional 1015 mL sterile H2O to funnel and

dr through mesh as before. Close clamp A to direct vacuum to
base of
filtration unit and draw liquid through filter.
Open clamp A.Rotate moving arm K of stainless steel
clamp into unlocked (ca 45 angle) position and slide jaws L
off flanges B. Ro- tate back funnel C.
Place filter on surface of predried YM-11 plate, B(i). Avoid
trap- ping air bubbles between filter and agar. Incubate plates
50 2 h at 25 1C.
Count all squares containing one or more colonies (positive
squares). Colonies are usually some shade of blue. Examine
filter us- ing illuminated magnification as some colonies may
be only pin- point in size. To confirm that filter does not
contain any positive squares, hold up Petri dish and examine
horizon of filter for raised bumps or areas that reflect light
differently. These may be either very small or very pale
colonies. While hydrophobic lines act as bar- riers to spread of
colonies, some fast-growing molds produce too much
mycelium to remain completely confined within a single
square (spreader). In case of spreader, only count the square of
ori- gin, which usually has the densest or tallest growth. Do not
count squares into which colony has spread.
Count squares containing one or more colonies as described
above. Convert total number of positive squares to MPN index
as follows:
MPN = 1600 loge [1600/(1600 x )]
where x = number of positive squares.
Multiply MPN by reciprocal of dilution factor, round to 2
signifi- cant figures, and report as yeast and mold count/g or
mL.
Reference: J. AOAC Int. 79, 1069(1996).
Revised: June 2000

AOAC Official Method 995.21

Levaduras y mohos en los alimentos Condes
Rejilla filtro hidrofbico de membrana
(ISO-GRID) Mtodo Usando YM-11 Agar
Primera Accin 1995
Accin Final 1999
(Aplicable a la enumeracin de levaduras y mohos en el total de todos los
alimentos.)
Vase la Tabla 995.21A de los resultados del estudio entre laboratorios
apoyo aceptacin portar del mtodo.
A. Principio
Mtodo utiliza filtro de membrana impresa con material hidrfobo en el
patrn de cuadrcula. hidrofbicas lneas actan como barreras a la
propagacin de las colonias, dividiendo as la superficie de filtro de
membrana en compartimentos separados de igual tamao y conocido.
Plazas ocupadas por colonias se cuentan y se convierten en la mayor parte
de valor del nmero ms probable (NMP) de los organismos.

(k) La papana Stock solution.-16 000 unidades de papana Food Chemicals

Codex / mg. Reconstituir 10,0 g de polvo de papana estril con 100 ml de
H2O estril. parte no utilizada de la solucin se puede almacenar congelado
<3 meses.
(l) hemicelulasa Stock solution.-1500 unidades de hemicelulasa / g. Vuelva a
constituir 20,0 g de polvo hemicelulasa estril con 100 ml de H2O estril.
parte no utilizada de la solucin se puede almacenar congelado <3 meses.
Los productos que (a), (b), (i) y (j) - (l) estn disponibles a partir de garanta
de calidad Life Sciences, Inc., 6645 Nancy Ridge Dr, San Diego, CA 92121,
EE.UU.
C. Preparacin de la muestra problema
(Nota: Vase la Tabla 995.21B de diluyentes y enzimas que se utilizarn
para diversos alimentos.)
(a)

Lquido egg.-Mezclar bien la muestra de ensayo utilizando una

cuchara o una esptula estril. Aspticamente pesan 11 g de material
de huevo en botella de boca ancha estril, con tapa de rosca. Aadir 99
ml de diluyente PT, B (h), y 1 cucharada de tiro de vidrio estril. Agite
dilucin 1:10 de suspensin para asegurar una distribucin completa
del material de huevo en diluyente agitando cada botella rpidamente
en 25x <7 s, usando un up-and-down circulacin de ca 30 cm para
cada sacudida. Deje que las burbujas se escapan. Si se necesita
tratamiento enzimtico (vase la Tabla 995.21B), se combinan 5 ml
homogeneizacin nate (dilucin 1:10) con 1 ml de solucin de enzima
apropiada de valores, mezclar bien e incubar 20-30 minutos en un
bao de H2O a 35-37 C . Correcta para la dilucin adicional
mediante el filtrado de 1,2 ml de prueba homogeneizado porcin
tratado con enzimas.

(b)

Otros productos.-lquidos se mezclan a fondo los contenidos de

recipiente. Prepare la dilucin 1:10 en aspticamente la transferencia
de una porcin de 10 ml de prueba en 90 ml de peptona diluyente, B
(g), o diluyente de 90 ml PT, B (h), (ver Tabla 995.21B) de boca ancha
estril, una botella con tapn de rosca . Se mezcla agitando la botella
25 x 30 cm a travs del arco en <7 s. Si se necesita tratamiento
enzimtico, se combinan 5 ml de homogeneizado (dilucin 1:10) con 1
solucin de enzima apropiada ml, mezclar bien e incubar 20-30
minutos en un bao de H2O a 35-37 C. Correcta para la dilucin
adicional mediante el filtrado de 1,2 ml tratado con enzimas porcin de
ensayo homogeneizado.

(c)

huevo entero en polvo.-Mezclar bien con una cuchara o una esptula

estril. Diluir 1:10 en un peso de 11 g aspticamente material de huevo
en una botella de boca ancha, con tapa de rosca estril. Aadir 99 ml
de diluyente PT, B (h), y 1 cucharada de tiro de vidrio estril. Agitar
rpidamente como en (a) para asegurar una distribucin completa del
material de huevo en el diluyente.

B. Aparatos, los medios de comunicacin, y Reactivos

(a) filtro de membrana de rejilla hidrofbica (HGMF) .- El tamao de
poro, 0,45 m; impresa con material hidrfobo no txico en el patrn de
cuadrcula.
(b) unidades de filtracin para HGMF.-Equipado con 5 um prefiltro de
malla para eliminar las partculas de comida durante la filtracin. Utilice
una unidad / prueba.
(c) Pipets.-1.0, 5.0 y 10.0 ml, serolgica con graduaciones de 0,1 ml; 1,1 o
2,2 ml pipetas de leche tambin pueden ser utilizados.
(d) .- Licuadora con varias velocidades con funcionamiento a baja
velocidad a 10 000-12 000 rpm con 250 ml de vidrio o de metal licuadora
frascos con tapas. Utilice un frasco / prueba.
(e) la bomba de vaco.-H2O fuente aspirador es satisfactoria.
(f) frasco colector o vaco.
(g) Peptona diluyente. Se disuelven 1,0 g de peptona (hidrolizado de
gelatina peptona) in1L H2O. Dispensar el diluyente de peptona en botellas
de dilucin para obtener 90 +/- 1 ml o 99 +/- 1 ml despus de tratamiento
en autoclave de 15 min a 121 C.
(h) Peptona-Tween 80 (PT) diluyente.-Se disuelven 1,0 g de peptona
(hidrolizado de gelatina peptona) y 10,0 g de Tween 80 in1L H2O. Disdiluyente pense PT en botellas de dilucin para obtener 90 +/- 1 ml o 99
+/- 1 ml despus de tratamiento en autoclave de 15 min a 121 C.

Preparar una dilucin 1: 100 transfiriendo aspticamente 10 ml de

homogeneizado (dilucin 1:10) en 90 ml PT diluyente. Combinar 10
ml de 1: 100 dilucin con 1 ml de solucin de papana de valores, B
(k), mezclar bien e incubar 20-30 minutos en un bao de H2O a 35-37
C. Filtrar todo el volumen de 11 ml de 1 tratado con enzimas: 100
dilucin.

(i) YM-11-agar. Diluir 20,0 g Peptona de soja, 20,0 g de triptona,

5,0 g de D-glucosa, 5,0 g de NaCl, 2,4 g K2HPO4 anhidro, 0,03 g de azul
de tripano, 0,1 g de cloranfenicol, y 15,0 g de agar a 1 L con H2O. Se
calienta a ebullicin con agitacin. Autoclave 15 minutos a 121 C y
luego temperamento a 45-50 C en bao de H2O. Temper clortetraciclinaHCl suplemento, (j), a 45-50 C. Aadir 20 ml de suplemento para 1 l de
medio YM-11 y mezclar bien. Aspticamente vierta volumen suficiente de
completa YM-11 en agar pequeo bote pesaje o placa de Petri para
obtener> 3 mm de la capa de agar. Deje solidificar el agar.

(d)

Otros polvos.-Mezclar bien con una cuchara o una esptula estril.

Prepare la dilucin 1:10 en un peso aspticamente porcin de muestra
en 10 g de boca ancha estril, una botella con tapa de rosca. Aadir 90
ml de peptona, B (g), o diluyente PT, B (h), (ver Tabla 995.21B).
Agitar cada botella rpidamente en 25x <7 s, usando un up-and-down
circulacin de ca 30 cm para cada sacudida. Deje que las burbujas se
escapan. Si se necesita tratamiento enzimtico, se combinan 5 ml de
homogeneizado (dilucin 1:10) con 1 solucin de enzima apropiada
ml, mezclar bien e incubar 20-30 minutos en un bao de H2O a 35-37
C. Correcta para la dilucin adicional mediante el filtrado de 1,2 ml
en- enzima tratada con la muestra de ensayo homogeneizado.

(e)

Otros alimentos.-Prepare la dilucin 1:10 en un peso aspticamente

porcin de muestra de 10 g en jarra de la batidora estril. Agregar 90
ml de peptona, B (g), o PT, B (h), diluyente (vase la Tabla 995.21B),
y mezclar 2 minutos a baja velocidad (10 000-12 000 rpm). Si se
necesita tratamiento enzimtico, se combinan 5 ml de homogeneizado

Verificar el pH utilizando electrodo de combinacin de la superficie plana.

Ajustar el pH, si es necesario, a 7,0 +/- 0,2 mediante la adicin de NaOH 1
M estril o HCl 1 M, como requerida. Aspticamente vierta otra pequea
porcin del medio y comprobar el pH como antes. Continuar ajustes hasta
que el pH est dentro del rango especificado.
dispensar ca 18-20 ml de agar en 15 x 100 mm placas de Petri. Deje
solidificar el agar. medianas superficie seca antes de su uso mediante la
inversin de los platos de Petri parcialmente abiertas y colocarlos en la
incubadora 15-20 min a 35 C.
(j) La clortetraciclina-HCl supplement.-Disolver 0,5 g clortetraciclina-HCl
en 100 ml de H2O. Revuelva hasta que se disuelva sin calentamiento.
Filtrar esterilizar solucin. parte no utilizada del suplemento puede ser
almacenado <2 meses a 4-6 C, si se protege de la evaporacin.

(dilucin 1:10) con 1 solucin de enzima apropiada ml, mezclar bien

e incubar 20-30 minutos en un bao de H2O a 35-37 C.
Tabla 995.21A resultados del estudio entre laboratorios para la enumeracin de levaduras y mohos en los alimentos por la norma ISO-GRID y mtodos de
referencia

alimento

Lot

metodo

ISOGRID
Referenc

B
ajo en
polvo

C
genera
l
A
B

Carne de
vaca
molida

C
genera
l

Nueces

A
B
C
generalb

Harina /
comida

A
B
C
genera
l

Jugo de
naranja

A
B
C
generalb

Yogurt

A
B
C
genera
l

e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e
ISOGRID
Referenc
e

Log10 media,
Contar /g
or mL
1.23
1.08
1.20
1.20
1.18
1.20
1.20
1.18
3.61
3.59
3.91
3.84
4.43
4.28
3.99
3.90
3.57
3.68
4.08
4.23
3.66
3.79
3.76

Estimacin de precisina
r

sr

sR

0.9
5
0.9

1.1
2
1.2

0.3
4
0.3

0.4
0
0.4

0
0.7
6
0.9
8
0.5
3
1.3
4

3
1.0
1
1.2
0
1.0
1
1.4
8

2
0.2
7
0.3
5
0.1
9
0.4
8

4
0.3
6
0.4
3
0.3
6
0.5
3

0.7
6
0.8

1.0
6
1.0

0.2
7
0.2

0.3
8
0.3

1
0.9
5
0.6
4
1.0
9
0.8
1

6
1.3
2
1.0
1
1.6
8
1.4
6

9
0.3
4
0.2
3
0.3
9
0.2
9

8
0.4
7
0.3
6
0.6
0
0.5
2

0.6
7
0.5

0.7
3
0.5

0.2
4
0.1

0.2
6
0.1

3
0.2
8
0.2
2
0.6
2
0.5
9

3
0.6
4
0.4
5
0.7
0
0.5
9

9
0.1
0
0.0
8
0.2
2
0.2
1

9
0.2
3
0.1
6
0.2
5
0.2
1

1.2
0
1.0

1.2
0
1.0

0.4
3
0.3

0.4
3
0.3

1
0.5
9
0.7
6
1.0
1
0.7
3

1
1.1
8
0.9
2
1.1
8
1.0
9

6
0.2
1
0.2
7
0.3
6
0.2
6

6
0.4
2
0.3
3
0.4
2
0.3
9

0.5
3
0.4
2
1.0
4
1.1
2
0.7
3
1.2
9

0.6
4
0.6
4
1.1
8
2.1
0
1.7
4
1.5
4

0.1
9
0.1
5
0.3
7
0.4
0
0.2
6
0.4
6

0.4
8
0.3

1.3
7
1.8

1
0.4
5
0.3
4
0.5
9
0.6
2

2
1.8
5
2.3
8
1.4
8
1.9
3

RSDr,

RSDR,

27.49

32.09

29.12
22.35
28.95
16.11
40.00

40.19
30.03
36.10
30.42
44.18

7.50

10.60

8.23
8.70
5.94
8.82
6.88

10.61
11.99

6.77

7.15

4.93
2.47
1.90
5.97
5.43

5.07
5.59
3.81
6.74
5.43

12.80

12.80

10.23
4.45
5.66
10.57
8.19

10.23
9.05
6.97
12.46
12.23

0.2
3
0.2
3
0.4
2
0.7
5
0.6
2
0.5
5

5.91

7.19

4.39
5.16
6.06
4.39
8.35

6.85
5.87
11.31
10.26
10.08

0.1
7
0.1

0.4
9
0.6

2.51

7.44

1
0.1
6
0.1
2
0.2
1
0.2
2

5
0.6
6
0.8
5
0.5
3
0.6
9

1.59
2.46
1.81
3.07
3.25

9.58
10.25
12.85
7.83
10.36

9.36
13.60
12.03

3.90
3.36
3.52
4.63
4.76
3.38
3.20
3.80
3.83
3.11
3.32
7.20
6.66
6.00
5.45
5.45
5.15
6.54
6.75
6.46
6.61
6.72
6.66
6.60
6.67

estimaciones de precisin se calcularon despus de la conversin de los datos a log10; r = 2,8 x sr; R = 2,8 x sR; sr = desviacin estndar de repetibilidad; sR = Desviacin estndar
de la reproducibilidad; RSDr = desviacin estndar de repetibilidad relativa; RSDR = reproducibilidad desviacin estndar relativa.
b

Diferencia entre los mtodos es estadsticamente significativa al nivel del 5%.

Tabla 995.21B tratamiento con diluyentes y enzimas para varios un alimentos

Comida

Correcta para la dilucin adicional mediante el filtrado de 1,2 ml de

homogeneizado de la muestra tratada con enzima.

Harina / comida de

Diluent
Peptone

Enzyme
Ninguna

Pimienta negra

Peptone

Ninguna

D. Anlisis

Cebolla en polvo

Peptone

Papana

Polvo de ajo

Peptone

Pepsina

Vea las Figuras 986.32A y B (vase 02.17.05) por unidad de filtracin

y la abrazadera de la unidad de filtracin.

Los frijoles de soya

Peptone

Ninguna

frijoles pintos

Peptone

Ninguna

arroz

Peptone

Ninguna

Granos de caf

Peptone

Ninguna

Granos de cacao

Peptone

Ninguna

Queso crema
otros quesos
CCrea agria
Los jugos vegetales

Peptone
PT
Peptone
Peptone

hemicelulasa
otros quesos
Papana
Ninguna

Jugos de fruta

Peptone

Ninguna

sin procesar del tomate

Peptone

Ninguna

fresas congeladas

Peptone

Ninguna

moras frescas

Peptone

Ninguna

conservas de frutas

Peptone

Ninguna

Nueces

Peptone

Papana

Miseria

Peptone

Papana

carne picada cruda

PT

Ninguna

salchichas

PT

Ninguna

Carne asada

PT

Ninguna

Con base en el anlisis de dilucin de 1 ml 1:10. Los alimentos ensayados en

diluciones de 1: 100 o superior por lo general no necesitan tratamiento enzimtico.
Vase la Tabla 986.32 (vase 02.17.05) para los tratamientos enzimticos recomendadas
de alimentos que no aparecen en esta tabla.
b

Peptona-Tween 80 diluyente, B (h).

Encienda la fuente de vaco. Coloque la unidad de filtracin estril

sobre matraz colector o vaco. Abrir la abrazadera A. Girar de nuevo
parte de embudo C. aspticamente lugar filtro estril, B (a), en la
superficie de la base D. Girar canalizar hacia adelante. Abrazadera
de cierre por deslizamiento mandbulas L de abrazadera de acero
inoxidable sobre toda la longitud de las bridas B que se extienden
desde ambos lados del embudo C y D de base, y la rotacin de
movimiento del brazo K en la posicin horizontal (bloqueado).
Aadir aspticamente ca 15-20 ml de H2O estril para canalizar.
Pipetear 1,0 ml de homogeneizado (1:10 dilucin) o volumen
apropiado de homogeneizado tratado con enzimas en el embudo.
Aplicar extremo libre del tubo de vaco al orificio de aspiracin E F
para extraer lquido a travs del prefiltro con malla G. Agregar
aspticamente adicional de 10-15 ml estril H2O al embudo y dr
travs de una malla como antes. Cierre la abrazadera A a vaco
directo a la base de la unidad de filtracin y drenaje de lquido a
travs del filtro.
Abrir la abrazadera A. Girar el brazo en movimiento K de la
abrazadera de acero inoxidable en su posicin desbloqueada
(aproximadamente 45 de ngulo) y deslice fuera de las mandbulas
L bridas B. Realice la rotacin hacia atrs embudo de filtracin C.
Ubicar sobre una superficie de pre secado placa YM-11, B ( yo).
Evitar las burbujas de aire trampa- ping entre el filtro y el agar. placas
se incubaron 50 +/- 2 horas a 25 +/- 1 C.
Contar todos los cuadrados que contienen una o ms colonias
positivas (cuadrados). Las colonias son por lo general un poco de
sombra de color azul. Examine filtro utilizando magnificacin
iluminada ya que algunas colonias pueden ser nico punto de alfiler
de tamao. Para confirmar que el filtro no contiene ningn cuadrados
positivos, con capacidad placa de Petri y examinar "horizonte" de
filtro para planteados "piel" o reas que reflejan la luz de forma
diferente. Estos pueden ser cualquiera de los dos colonias muy
pequeas o muy plidos. Mientras que las lneas hidrfobos actan
como barreras a la propagacin de las colonias, algunos moldes de
rpido crecimiento producen demasiado micelio permanecer
completamente confinadas dentro de un solo cuadrado (spreader).
En caso de separacin, slo cuentan la plaza de origen, que por lo
general tiene el crecimiento ms denso o ms alto. No cuente los
cuadrados en los que se ha extendido colonia.
Contar cuadrados que contienen uno o ms colonias como se
describe anteriormente. Convertir el nmero total de plazas positivos
al ndice de la MPN de la siguiente manera:
NMP = 1,600 loge [1600 / (1600 - x)]
donde x = nmero de plazas positivos.
Multiplicar MPN recproca del factor de dilucin, redondo de 2 cifras
significativas, y el informe como levaduras y mohos recuento / go ml.
Referencia: J. AOAC Int. 79, 1069 (1996).
Revisado: Junio 2000