Herana Gentica
Em busca do material gentico
um pouco de histria:
Johann Gregor Mendel, 1856 a 1863
Cruzou e produziu hbridos de plantas com
caractersticas distintas:
Plantas altas com ans,
Cor das flores,
Ervilhas amarelas com verdes, etc.
Observando o aparecimento e desaparecimento
de caractersticas aps cruzamentos induzidos com
as plantas hbridas
Pisum sativum
caractersticas
herdadas
so passadas
igualmente por
Produzia
ervilhas
amarelas
cada um dos pais. No se misturam.
no verde-amareladas
"lei da variao
independente"
Regidos por leis da probabilidade e independentes.
as instrues para altura no tm nada a ver com as instrues
para a cor.
Erich Tschermak
austraco
Karl Correns
alemo
cido desoxirribonuclico
DNA
Mendels factors
Sugere que os fatores citados por Mendel
(genes) residem nos cromossomos
Movimento dos cromossomos durante a meiose
em gafanhotos e observou:
Clulas somticas:
11 Pares de cromossomos homlogos
Gametas:
Metade do nmero de cromossomos.
Um membro de cada par.
Drosophila melanogaster
1909: o americano Thomas Hunt Morgan comea
a estudar o inseto, com o que vai demonstrar as
teorias de Mendel.
1915: Morgan e seus colaboradores publicam
Mechanism of mendelian heredity. Descrevem o
sistema dos genes e formulam a teoria
cromossmica da herana
pneumoniae.
Causa pneumonia em camundongos
(cpsula de polissacardeo)
S-strain
colnias rugosas
(sem cpsula de polissacardeo)
R-strain
A cepa S patognica.
Experimento 3:
Experimento 2:
Experimento 4:
Experimentos de Griffith
Concluses:
A procura continua
transformao
foram mortos dentro do laboratrio num
bombardeio
DNA era oalemo.
material gentico
Muitos cientistas duvidaram.
DNA ou protenas?
Acreditavam que
protenas eram as responsveis por
guardar a informao gentica.
Porque?
macromolculas com grande
heterogeneidade e especificidade
funcional.
A possibilidade de transferncia
de material gentico de um
organismo para outro.
Conjugao
Bacterifago T2.
Demonstraram claramente que o DNA era o
material gentico
Transformao:
Assimilao de um material gentico
externo por uma clula.
Composio do DNA
Razes de Chargaff
Adenina
Timina
Guanina
Citosina
A+T/G+C
EcoliK12
26
23,9
24,9
25,2
1,0
Sreptococcus
pneumoniae
29,8
31,6
20,5
18
1,59
Mycobacterium
tuberculosis
15,1
14,6
34,9
35,4
0,42
Leveduras
31,3
32,9
18,7
17,1
1,79
Homo sapiens
30,3
30,3
19,5
19,9
1,53
Methanococcus
jannaschii
34,4
34,1
15,5
15,8
2,18
Archaeoglobus
fulgidus
25,8
25,6
24,2
24,3
1,05
1953: oEstrutura
americano James
Dewey Watson
ingls Francis
Harry
molecular
doe oDNA,
1953
Compton Crick, auxiliados pelas pesquisas do ingls Maurice Hugh
Frederick Wilkins, descobrem a estrutura do DNA.
A structure for Deoxyribose Nucleic Acid
2 April 1953
Meselson-Stahl, 1957-58
Replicao semiconservativa
Desvendando
mistrios
O cdigo
Ao se desvendar a estrutura da
molcula
de DNA
o princpio
da
Em
1948:
o astrofsico
sovitico
George
1954,
formulou:
Os
quatro
tipos deGamow
bases
pode
visualizado
sem
formula
a hiptese
do ser
cdigo
gentico.
cidos
dos replicao
desoxirribonucleotdios
seqencialmente
dificuldades.
nuclicos
determinam
deconstituiriam
protena a ser
dispostos
na molcula odetipo
DNA
as
sintetizada
formae com
que cdigo
as
letrasTodavia,
de um acdigo
que este
protenas
geradas
partir destanas
comandaria
a eram
seqncia
dos aaminocidos
molcula
informacional
ainda
protenas.
constitua um mistrio
O aminocido correspondia a cada cdon: cada uma das possveis
combinaes das quatro bases, trs a trs.
A questo inicial
Como o sistema de 4 bases estava organizado
para sinalizar aos 20 tipos de aminocidos que
participam das protenas?
deveria existir uma molcula intermediria entre
as bases dos cidos nuclicos e os aminocidos das
protenas
Hall e Spiegelman,1961
Hall e Spiegelman:hibridizao
Bactrias e bacterifagos
Composio do RNA
1957 1961
Instituto Pasteur
Franois Jacob
Jacques Monod
A b-galactosidase
Ao
adicionarem degrada
lactoselactose
ao em glicose + galactose.
E. coliobservaram
produz cerca de 0,5
a 5 molculas
ativas da enzima, quando
meio
que
a
cultivadas na ausncia de lactose.
atividade
da b-galactosidade,
nas
clulas,
aumentava
drasticamente.
a transferncia das clulas
para um meio sem lactose,
mas com glicose como fonte
de carbono, implicava em
parada imediata da sntese de
b-galactosidase
Complementando
Bussard et al., 1960: 5-flor-uracila
foi
adicionado a existncia
culturas de de
E. coli
,
fortemente
RNA
(anlogo
incorporado no lugar da uracila) durante a
no
estvel
sntese de RNA. A atividade de b-galactosidase
sintetizado
e degradado rapidamente,
produzida a partir da incorporao do anlogo, caa
serviria
de molde para a sntese da protena.
abruptamente.
de as
detectar
difcil
Quando
clulas retornavam a um meio sem 5fluor-uracila,
a atividade era recuperada.
alta
labilidade.
Isto
5-flor-uracila
sugeria
Cdigo Gentico
DNA
RNA
Sntese de DNA
Arthur Kornberg
Enzimas de Restrio
Sistema Restrio-Modificao
Descrito em 1953: Fagos & Bactrias
Fenmeno
da Restrio:de
ocorre
por nucleases
que
Enzimas Endonucleases
Restrio
e Metilases.
clivam ligaes fosfodister internas de uma fita dupla de
DNA sempre que identificar uma seqncia particular de
nucleotdeos.
Fenmeno de modificao: ocorre quando metilases adicionam um
grupo metil em uma molcula em stios especficos para proteger o
stio da clivagem pelas endonucleases de restrio.
Aplicao na Clonagem
Stios de reconhecimento,
modificao e clivagem
Enzima
EcoRI
HindIII
TaqI
Stio de restrio
Organismo de origem
Escherichia coli
Haemophilus influenza
Thermus aquaticus
Pesquisas aplicadas
Tecnologia do DNA Recombinante
Clonagem
DNA Recombinante.
inserto
vetor
vetor
2o. estgio
Transgenes
os resultados
1982.1982:
Richardapresentam-se
Palmiter e Ralph Brinster
"criam" o um rato
gigante, que contm
gene do hormnio
de eucariotos
crescimento
experimentos
deoTransgenia
com
humano.
Ratos e Homens
Knockout Mice
K. Mullis
O aprimoramento
A descoberta
Saiki
R. R,
K et
directed enzymatic
amplification
of DNA genomic
with a
Saiki
K.al.etPrimeral. Enzymatic
amplification
of beta-globin
thermostable DNA polymerase. 1988.
sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell
Science, 239(4839):487-91.
Resultados
Curiosidades
A PCR de Mullis: manual, lenta e
muito trabalhosa
Automatizao do
"Mr. Cycle"
processo.
Em 15 de Janeiro de 1989,
Consrcio: Cetus e Hoffman-LaRoche
aprimoramento da tecnologia de PCR.
Popularizando a PCR
Appenzeller T. Democratizing the DNA sequences.
Science, 1990 Mar 2, 247(4946).
Erlich, H. A; Gelfand, D; Sninsky, J. J. Recent advances
in Polymerase Chain Reaction Science, 1991, v.252,
n.5013, 1643-1651.
Arnheim, N. Polymerase Chain Reaction Strategy
C.
Aplicaes Clnicas
Nested,
Multiplex,
Real time.
DNA Imagem
1989. Pesquisadores da Califrnia obtm a
primeira imagem direta da molcula de
DNA
David Dunlap e Carlos Bustamante,
Universidade do Novo Mxico, EUA,
desenrolam e fotografam um filamento de
DNA. A imagem coincide com a projetada
teoricamente em 1961.
Ensaios em transgenia
Insero de um gene estranho no
patrimnio gentico de outro
organismo
Transgenia em animais
A partir de 1988
Rato transgnico
1991.Touro transgnico
Transgenia em plantas
Histrico geral, objetivos e mtodos
comuns
As mais importantes:
alimentao e txtil
Milho, batata, tomate, soja, feijo.
Algodo
Melancia, couve, cenoura, alfafa, arroz, trigo,
girassol, alface, melo, ma, amendoim.
Flores
Objetivos
Resistncia:
a pragas
a insetos
ao apodrecimento
Enriquecimento:
Menos gordura
Mais aminocidos essenciais e vitaminas
Vacinas
Metodologia Geral
cry gene
Agrobacterium
tumefaciens
Bacillus thuringiensis
Sementes Comercializadas
J
existem vrias
plantasYieldGard
engenheiradas:
Monsanto
MaisGard,
Bt corn,
hbridos Bt de milho, tabaco, algodo e batata.
Favr Sadr
Em estudo e teste:
Resistncia a doenas causadas por vrus, fungos e bactrias;
Tolerncia seca, ao frio e alta salinidade.
Comerciais
Cenoura: Mais doce do que as cenouras comuns, a cenoura
betasweet contm doses extras de beta-caroteno,
Melancia
Canola
Soja
Tabaco Sanguneo
Tabaco sanguneo
Estudos moleculares
Outros resultados
Obrigada,
Tnia Freitas, Maro, 2005