TUGAS ULASAN

MEKANISME KERJA MOLEKULAR OBAT

DAN
PENYIMPANAN ENERGI DALAM SENYAWA ORGANIK

OLEH
ISMIYATI HI YUSUF (G451150151)
SILVIA MONICA (G451150306)
AGRIN F PRADANA (G451150316)
SITI AISYAH (G44120105)

MK KIMIA BIOORGANIK PS S2 KIMIA IPB

DOSEN: NOVRIYANDI HANIF, DSc

PROGRAM STUDI MAGISTER KIMIA

SEKOLAH PASCASARJANA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2016

LEMBAR PARTISIPASI

1. Target Obat Baru untuk Diabetes Tipe 2 dan Sindrom Metabolik

(AGRIN FEBRIAN PRADANA)

2. Hubungan Struktur dan Interaksi Obat-Reseptor

(ISMIYATI HI YUSUF)

3. Mekanisme Molekuler Dari Antibakterial

(ISMIYATI HI YUSUF)

4. Penyimpanan Energi dalam Senyawa Organik

(SILVIA MONICA)

1. Target Obat Baru untuk Diabetes Tipe 2 dan Sindrom Metabolik

a. Pendahuluan

Peningkatan berbahaya yang utama dari 'sindrom metabolik' - obesitas, resistensi

insulin dan dislipidemia- telah bersekongkol untuk menghasilkan epidemi di seluruh dunia
dari tipe 2 diabetes mellitus resisten insulin. Kebanyakan terapi saat ini, penyakit ini
dikembangkan dengan tidak adanya target molekul ditentukan atau pemahaman
patogenesis penyakit. Muncul pengetahuan tentang mekanisme patogen utama, seperti
gangguan sekresi insulin-dirangsang glukosa dan peran 'lipotokisitas' sebagai
kemungkinan penyebab resistensi hati dan otot untuk efek insulin pada metabolisme
glukosa, telah menyebabkan sejumlah target obat molekul baru. Beberapa telah
divalidasi melalui rekayasa genetika pada tikus atau penggunaan awal senyawa timbal
dan agen terapeutik pada hewan dan manusia.

b. Materi Isi

Diabetes mellitus tipe 2 resisten insulin menyumbang 90-95% dari semua

diabetes. Gangguan heterogen ini menimpa sekitar 6% dari populasi orang dewasa di
masyarakat Barat; frekuensi di seluruh dunia diperkirakan akan terus tumbuh sebesar
6% per tahun, berpotensi mencapai total 200-300 juta kasus pada tahun 2010 (Kopelman
dan HItman 1998 dan Amos et al. 1997). Kekuatan utama yang mendorong
meningkatnya insiden ini adalah peningkatan mengejutkan dalam obesitas, kontributor
paling penting untuk patogenesis diabetes.
Sekarang jelas bahwa kontrol agresif hiperglikemia pada pasien dengan diabetes
tipe 2 dapat melemahkan perkembangan komplikasi kronis seperti retinopati dan
nephropa-Mu (UKPDS 1998). Saat ini, terapi untuk diabetes tipe 2 terutama bergantung
pada beberapa pendekatan yang dimaksudkan untuk mengurangi hiperglikemia sendiri:
sulfonilurea (dan sekretagog insulin terkait), yang meningkatkan pelepasan insulin dari
pankreas; metformin, yang bertindak untuk mengurangi produksi glukosa hepatik;
Peroksisom proliferator-diaktifkan reseptorg (PPARg) Agonis (thiazolidinediones), yang

meningkatkan aksi insulin; Sebuahinhibitor -glucosidase, yang mengganggu glukosa

usus penyerapan; dan insulin itu sendiri, yang menekan produksi glukosa dan menambah
penggunaan glukosa (Tabel 1). Terapi ini telah efikasi, tolerabilitas terbatas dan efek
samping

berbasis

mekanisme

signifikan

terbatas.

Perhatian

khusus

adalah

kecenderungan untuk sebagian besar perawatan untuk meningkatkan berat badan.

Beberapa pendekatan saat ini juga terkait dengan episode hipoglikemia, dan beberapa
terapi yang tersedia secara memadai mengatasi cacat yang mendasari seperti obe-sity
dan / atau resistensi insulin. Sebuah masalah tertentu dengan sulfonilurea adalah bahwa
banyak pasien yang merespon awalnya menjadi refrakter terhadap pengobatan dari
waktu ke waktu ('kegagalan sekunder'). Dengan demikian, pendekatan baru yang sangat
dibutuhkan. Penekanan khusus harus ditempatkan pada menemukan dan menggunakan
mekanisme yang bergantung pada respon fisiologis (misalnya, sekretagog insulinmediated glukosa), dan yang menghasilkan penurunan berat badan (atau kurangnya
berat badan).
'Sindrom metabolik' meliputi diabetes tipe 2 (atau pradiabetes) dan konstelasi
umum terkait erat klinis ketik. Faktor karakteristik termasuk resistensi insulin sendiri,
Obesitas (terutama perut adipositas), hipertensi, dan bentuk umum dari dislipidemia
(meningkat trigliserida dan rendah high-density lipoprotein (HDL)-kolesterol dengan atau
tanpa elevasi rendah Density lipoprotein (LDL)-kolesterol) . Sindrom metabolik adalah
terkait dengan kejadian nyata meningkat dari penyakit arteri koroner, serebral dan perifer.
Dengan demikian, penyakit kardiovaskular aterosklerotik (ASCVD) bertanggung jawab
untuk 80% dari kematian diabetes dan lebih dari 75% dari semua rumah sakit untuk
komplikasi diabetes. Memang, diabetes tipe 2 sekarang merupakan penyakit jantung
koroner 'risiko setara'; ini berarti bahwa risiko infark miokard pada pasien dengan
diabetes dan tidak ada riwayat penyakit jantung kira-kira setara dengan risiko pada
pasien non-diabetes dengan penyakit jantung diketahui5. Dengan kata lain, untuk setiap
kelainan pada faktor risiko, penderita diabetes memiliki dua sampai empat kali lipat risiko
ASCVD lebih besar daripada orang tanpa diabetes. Dengan demikian, pendekatan terapi
yang glukosa tidak hanya rendah, tetapi juga secara khusus menangani diabetes
dislipidemia dan ASCVD komplikasi yang sangat dibutuhkan. Selain itu, terapi saat ini

tidak secara langsung menjawab komplikasi lain tahap akhir dari diabetes (misalnya,
neuropati dan retinopati) yang merupakan beban penyakit utama (lihat review di masalah
ini dengan Brownlee, halaman 813-820, untuk pembahasan lebih lanjut).
Tabel 1 agen terapi saat ini untuk diabetes tipe 2
Kelas obat

Target Molekuler Tapak aktif

Efek samping

Insulin

Reseptor insulin Hati, otot, lemak

Hipoglikemia,
berat badan

Sulfonilurea

SU reseptor /

Pankreas b-sel

(misalnya glibenklamid) Channel K + ATP

Hipoglikemia,
berat badan

ditambah nateglinide
dan repaglinide
Metformin - biguanides

Tidak diketahui

Hati (otot)

Gastrointestinal
gangguan,
asidosis laktat

Acarbose

Sebuahglucosidase

Usus

Gastrointestinal
Gangguan

Pioglitazone,

PPARg

Lemak, otot, hati

Berat badan,

rosiglitazone

busung,

(thiazolidinediones)

anemia

Sebagai pendekatan terapi untuk diabetes tipe 2 terus berkembang dan

meningkatkan, tujuan pengobatan masa mendatang akan melakukan intervensi ketika
tanda-tanda klinis sangat awal, seperti gangguan toleransi glukosa dan aspek lain dari
sindrom metabolik, manifest pertama. Ketersediaan obat yang mempengaruhi
mekanisme mendasari-ing dapat menyebabkan paradigma terapi baru untuk
pencegahan diabetes dan komplikasinya.
Pendekatan terapi saat ini sebagian besar dikembangkan dengan tidak adanya target
molekul ditentukan atau bahkan padat di bawah-berdiri dari patogenesis penyakit.
Dalam beberapa tahun terakhir, pemahaman kita tentang jalur biokimia terkait dengan

pengembangan sindrom metabolik telah diperluas. Ada berbagai belum pernah terjadi
sebelumnya dari target obat molekul dalam jalur ini. Mereka telah diidentifikasi atas
dasar peran diprediksi dalam modulasi satu atau lebih aspek kunci dari patogenesis
diabetes dan sindrom metabolik. Beberapa kategori mekanistik untuk pendekatan terapi
baru dapat dipertimbangkan. Pertama adalah pendekatan yang bertujuan untuk
mengurangi produksi glukosa berlebihan oleh hati; kedua, mekanisme untuk
meningkatkan sekresi insulin-dirangsang glukosa; ketiga, target molekul tertentu dalam
jalur sinyal insulin; dan keempat, pendekatan baru untuk obesitas dan metabolisme lipid
diubah, yang menawarkan prospek perbaikan bersih dalam aksi insulin (atau sekresi)
(Gambar. 1).

Target obesitas:
Nafsu makan
Pengeluaran energi

Karbohidrat
Glukosa

Glukosa

GLP-1
GLP-1 reseptor
DP-IV

Reseptor glukagon
Glikogen
fosforilase
Glukosa-6fosfatase
Fruktosa-1,6bisphosphatase

Insulin

Reseptor insulin, PTP-1B,

regulator negatif lainnya
signal insulin-reseptor
(SHIP2, GSK-3, sayaB kinase, PKC

Gambar 1 Pemahaman yang lebih baik dari cacat yang melibatkan beberapa sistem
organ utama telah menyebabkan untuk target obat baru untuk diabetes tipe 2. Hati adalah
sebagian besar bertanggung jawab untuk produksi glukosa terkendali melalui
peningkatan tingkat glukoneogenesis dan glikogenolisis. Potensi target obat yang
memodulasi proses ini termasuk reseptor glukagon (antagonis), glikogen fosforilase

(inhibitor), dan enzim tingkat-mengendalikan lainnya seperti glukosa-6-fosfatase dan

fruktosa-1,6-bisphosphatase (inhibitor). Cacat-dirangsang glukosa sekresi insulin oleh
pankreas islet b-cells bisa diatasi dengan rekombinan glucagon-like peptide 1 (GLP-1)
atau agonis dari GLP-1 reseptor. Atau, penurunan GLP-1 izin dapat dicapai dengan
penghambatan Dipeptidylpeptidase IV (DP-IV). Untuk mengurangi resistensi insulin, aksi
insulin ditingkatkan dalam hati dan otot (dan lemak) dapat dicapai dengan aktivator kecilmolekul reseptor insulin atau inhibitor tirosin protein fosfatase (PTP) -1B. Target obat
potensial lainnya di jalur sinyal insulin dibahas dalam teks. Pengembangan agen antiobesitas yang menghasilkan berkurang nafsu makan dan / atau pengeluaran energi
meningkat juga akan menyebabkan pengobatan yang efektif (dan pencegahan) diabetes
tipe 2.

Mengurangi produksi glukosa hepatik yang berlebihan

Hati memiliki peran penting dalam mengatur produksi glukosa endogen dari de
novo sintesis (glukoneogenesis) atau catabo-lism glikogen (glikogenolisis). Peningkatan
tingkat

produksi

glukosa

hepatik

sebagian

besar

bertanggung

jawab

untuk

pengembangan hiperglikemia terbuka, di hiperglikemia puasa tertentu, pada pasien

dengan diabetes6. Penurunan relatif kadar insulin, atau dikurangi tanggap hati terhadap
insulin, dapat menyebabkan peningkatan output glukosa oleh hati. Beberapa target obat
dalam hati menawarkan cara-cara baru pelemahan produksi glukosa hepatik yang
berlebihan.
Glukagon adalah hormon juga dijelaskan bahwa kontribusi untuk hypergly-kemia
melalui induksi dari kedua jalur gluconeogenic dan glycogenolytic7-9. Reseptor glukagon,
reseptor tujuh trans-membran domain G-protein-coupled, merupakan target yang jelas
untuk pengembangan antagonis molekul kecil10. Antibodi11 dan antagonis reseptor
peptida-12 keduanya telah terbukti efektif antagonis in vivo. Beberapa antagonis reseptor
glukagon-peptida

non-telah

dilaporkan

sejauh10;

meskipun

hanya

satu

telah

menunjukkan petunjuk dari keberhasilan dalam tahap awal uji klinis manusia 13.
Di luar kendali aksi glukagon, beberapa enzim yang mengendalikan laju langkah
regu-akhir jalur gluconeogenic atau glycogenolytic adalah target molekul yang jelas untuk

intervensi terapeutik (Gbr. 2). Pendekatan yang tampaknya telah maju ke tahap awal uji
klinis memerlukan penghambatan hati glikogen fosforilase 14, Enzim yang mengkatalisis
pelepasan glukosa monomer dari glikogen yang tersimpan. Meskipun beberapa bukti
glikogenolisis yang dapat menjelaskan hanya sebagian kecil dari produksi glukosa hati
pada diabetes tipe 215, Molekul hambat (senyawa chloroindole karboksamida) yang
mengikat ke situs baru alosterik (berbeda dari situs aktif enzim) pada glikogen fosforilase
telah sangat effec-tive dalam model tikus diabetes14. Potensi inhibitor tersebut untuk
mengganggu katabolisme latihan-dimediasi glikogen otot, bagaimanapun, kekhawatiran
bahwa manfaat studi lebih lanjut.
Target enzim hati lain yang telah menerima perhatian lebih terbatas termasuk
fruktosa-1,6-bisphosphatase dan glukosa-6-phosphatase16,17. Penghambatan mantan
selektif akan memblokir glukoneogenesis dengan mengganggu konversi fruktosa-1,6-bisfosfat

menjadi

fruktosa-6-fosfat.

Penghambatan

glukosa-6-phos-phatase

akan

melemahkan langkah terakhir dalam produksi glukosa hepatik umum untuk kedua jalur
gluconeogenic dan glycogenolytic. Meskipun penghambatan produksi glukosa hepatik
tetap attrac-tive untuk studi lebih lanjut, ada beberapa kewajiban potensial yang melekat
dalam pendekatan ini, termasuk hipoglikemia, akumulasi trigliserida hati dan peningkatan
kadar laktat plasma.

Meningkatkan sekresi insulin-glukosa dirangsang

Sebuah komponen kunci dari patofisiologi diabetes tipe 2 melibatkan cacat relatif
selektif dalam kemampuan glukosa untuk memprovokasi sekresi insulin dari pankreas
pulau b-cells (lihat di masalah ini dengan Mathis, Vence dan Benoist, halaman 792-798).
Cacat ini menyumbang kegagalan b-cell untuk mengimbangi peningkatan insulin resisdikan dan untuk pengembangan utama hiperglikemia terbuka. Selain itu, banyak bukti
menunjukkan bahwa cacat bFungsi -cell dapat menjadi predisposisi factor18 awal. Tidak
seperti sulfonilurea dan senyawa terkait, yang merangsang sekresi insulin dalam
ketiadaan kadar glukosa yang tinggi dan bekerja dengan menghalangi ATP-sensitif K +
channel, pendekatan alternatif yang lebih diinginkan akan mempotensiasi sekresi insulin
secara murni glukosa tergantung.

Dalam hal ini, dua hormon peptida usus yang diturunkan berbeda - GLP-1 (GLP1) dan lambung penghambat peptide (GIP)- Tindakan melalui masing-G-protein-coupled
reseptor mereka pada b-cells untuk mempotensiasi sekresi insulin-glukosa dirangsang19.
Administrasi baik hormon manusia dapat mempotensiasi sekresi insulin, sedangkan
gangguan gen selektif baik GLP-1 atau GIP reseptor menghasilkan fenotip gangguan
secretion19,20 insulin-dirangsang glukosa. Mekanisme tambahan dimana GLP-1 bisa
memiliki

efek

anti-diabetes

meliputi

penghambatan

pengosongan

lambung,

mengganggu-ment sekresi glukagon dan potensi efek anoreksia pusat 19. Selain itu,
penelitian berbasis sel dan hewan menunjukkan bahwa GLP-1 memiliki potensi untuk
mendorong pertumbuhan pulau baru dan bhiperplasia -cell19. Administrasi baik eksogen
GLP-1 atau ampuh GLP-1 agonis (exendin 4) berasal dari kadal racun telah ditunjukkan
untuk menekan asupan energi pada manusia (Ulasan di ref. 19), memberikan validasi
bahkan lebih kuat dari GLP-1 sebagai terapi agen. Sebuah potensi efek anti-obesitas
sehingga dapat dibayangkan. Sebaliknya, infus dari GLP-1 antagonis (exendin 9-39
amida) gangguan kontrol post-prandial glukosa21.
Meskipun kedua GLP-1 (dan GIP) memiliki potensi yang kuat sebagai terapi kronis
untuk diabetes, keduanya mengalami degradasi amino-terminal yang cepat (t1/2 ~ 1
menit) oleh Dipeptidylpeptidase-IV (DP-IV, juga dikenal sebagai CD26), sebuah serin
dipeptidase-prolin spesifik. GLP-1 sehingga menjadi tidak aktif oleh DP-IV in vitro
(kkucing/Km ~ 12106 M-1 s-1) untuk menghasilkan GLP-1 [9-36] (Gambar. 3). Salah satu
pendekatan untuk masalah ini bias menjadi penggunaan dimodifikasi agonis GLP-1
peptida yang tahan terhadap DP-IV (seperti exendin 4). Yang penting, spesifik inhibitor
DP-IV juga telah terbukti meningkatkan sirkulasi GLP-1 di kedua tikus dan manusia.
Validasi DP-IV sebagai target obat yang relevan yang didukung oleh pengamatan bahwa
tikus DP-IV-nol telah meningkat beredar aktif GLP-1 [7-36] bersama dengan sekresi
insulin ditingkatkan dan phenotype22 sehat. Selain itu, awal tahap uji klinis telah
menyediakan 'bukti-of-konsep' untuk keberhasilan penghambatan DP-IV pada manusia
dengan tipe 2 diabetes23,24.

Glikogen
9
UDP-glukosa

Kunci enzim bernomor

10
Glukosa 1-P
1
Glukosa-6-P

Glukosa
2

Fruktosa-6-P
4

Fruktosa-1,6-P2

SEMAN
GAT

Oksaloasetat

Glukosa-6-fosfatase
Glukokinase
Fosfofruktokinase-1
Fruktosa-1,6-bisphosphatase
Kinase piruvat
Piruvat dehidrogenase
Karboksilase piruvat
PEPCK
Glikogen sintase
Glikogen fosforilase

Alanin

Oksaloasetat

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Piruvat

Laktat

Sitosol

Piruvat
6

TCA
sepe
da

Asetil-CoA

Mitokondria

NEFA

Gambar 2 Jalur penting yang mengatur metabolisme glukosa di hati. Output glukosa
hepatik yang berlebihan terjadi pada diabetes melalui peningkatan glikogenolisis dan/
atau glukoneogenesis. Inhibitor glikogen fosforilase menghambat produksi glukosa
hepatik dengan mengurangi glikogen katabolisme. Target lain yang relevan termasuk
fruktosa-1,6-bisphosphatase,

yang

mengontrol

langkah

tingkat-pembatas

dalam

glukoneogenesis, dan glukosa-6-fosfatase, yang mengkatalisis langkah akhir yang umum

diperlukan untuk pelepasan glukosa dari hati. NEFA, asam lemak non-esensial; PEP,
fosfoenolpiruvat. [Diadaptasi dari ref. 77 dengan izin]
Meskipun agonis molekul kecil dari GLP-1 (dan GIP) reseptor tampaknya akan
memberikan pilihan obat logis, keberadaan senyawa timbal yang layak belum dilaporkan.
Pengembangan lebih lanjut dari GLP-1 analog dan inhibitor DP-IV, bagaimanapun,
mungkin untuk menghasilkan pendekatan terapi baru yang penting yang mungkin
menghindari kewajiban hipoglikemia, kenaikan berat badan dan kegagalan sekunder
yang terkait dengan penggunaan sulfonilurea.

Menargetkan jalur sinyal insulin

Peran resistensi insulin perifer dan hati dalam patogen-esis diabetes tak
terbantahkan. Seperti yang dibahas oleh Saltiel dan Kahn dalam tinjauan yang
menyertainya (halaman 799-806), resistensi insulin dapat disebabkan beberapa cacat
pada transduksi sinyal (seperti gangguan activa-tion insulin reseptor-tirosin kinase dan
aktivasi mengurangi phosphatidylinositol- insulin-dirangsang 3-OH kinase (PI (3) K)).
Sejumlah target molekul yang sekarang sedang diselidiki sebagai cara meningkatkan
insulin-mediated transduksi sinyal (Tabel 2).
Pengolahan pro-glukagon dalam usus L-sel
Glicentin

GRPP

Glukagon

IP-1

GLP-1

IP-2

GLP-2

Prohormon konvertase 1
Diatur oleh inaktivasi
Agonis (aktif)
DP-IV

t1/2~ 1 min

Non-aktif

Gambar 3 Biosintesis dan regulasi glukagon-like peptide 1 (GLP-1). GLP-1 adalah

produk dari gen pra-pro-glukagon. Pro-glukagon dibelah oleh prohormon konvertase 1
untuk menghasilkan aktif GLP-1 [7-36], yang dilepaskan dari L-sel usus selama proses
pencernaan nutrisi. GLP-1 dengan cepat dihidrolisis in vivo (t1/2 ~ 1 min) untuk
menghasilkan produk yang tidak aktif, GLP-1 [9-36]. DP-IV, serin dipeptidase-prolin
spesifik, bertanggung jawab untuk inaktivasi ini. Oleh karena itu inhibitor DP-IV
merupakan pendekatan terapi langsung ke menstabilkan endogen GLP-1.

Non-peptida molekul kecil yang dapat mengaktifkan reseptor insulin, atau

mempotensiasi aktivasi oleh insulin, telah terbukti sulit dipahami. Tapi penemuan terbaru
dari kecil-molekul alam-produk derivatif yang memediasi aktivasi selektif reseptor
insulin25 adalah mendorong.
Pendekatan alternatif untuk menargetkan reseptor insulin sendiri akan
menghambat enzim yang bertanggung jawab untuk deaktivasi reseptor atau target hilir
dalam jalur sinyal (misalnya, protein IRS). Sejumlah fosfatase tirosin protein spesifik
(PTP) telah diidentifikasi sebagai target calon 26. Vanadium, peroxovanadium dan
turunannya merupakan inhibitor PTP non-selektif. Namun demikian, demonstrasi khasiat
insulin-sensitiz-ing dari vanadyl sulfat pada manusia menunjukkan bahwa satu atau lebih
PTP mungkin target obat yang layak27. PTP-1B adalah enzim intraseluler khusus terlibat
dalam regulasi negatif sinyal insulin26. Hasil terbaru dari sistem gugur genetik PTP-1B
memberikan validasi kuat PTP tertentu sebagai target potensial. Tikus PTP-1B-nol yang
sehat dan telah nyata ditingkatkan sensitivi-ty terhadap insulin28. Anehnya, mereka juga
menunjukkan ketahanan yang cukup besar untuk diet-induced obesitas28. Pengamatan
ini sulit untuk berdamai dengan kenyataan bahwa insulin berfungsi sebagai hormon
anabolik utama untuk mempotensiasi pertambahan adiposa. Aksi insulin di otak, namun,
dapat meningkatkan rasa kenyang dan memediasi pengeluaran energi meningkat.
Validasi lebih lanjut dari PTP-1B sebagai target obat telah disediakan oleh bukti
peningkatan aksi insulin pada tikus resisten insulin diperlakukan dengan PTP-1B
antisense oligonukleotida29. Perawatan ini tampaknya telah bekerja dengan suntikan
oligonukleotida antisense sekali untuk dua kali seminggu, dan bisa menjadi pendekatan
yang layak untuk pengujian pada manusia.
Regulator negatif diduga lain dari sinyal insulin (Tabel 2) baru-baru ini terlibat
sebagai target obat independen. Glikogen sintase kinase-3 (GSK-3) memiliki peran yang
jelas dalam menentang efek insulin, dengan menghambat aktivasi glikogen sintase dan
akumulasi sub-berturut-turut dari glikogen dalam otot30. Hasil terakhir dengan inhibitor
poten dan selektif menunjukkan bahwa mengurangi GSK-3 kegiatan in vivo memang bisa
meningkatkan aksi insulin, dan bahwa ini mungkin terjadi di beberapa langkah31. Ini
kinase serin-treonin mungkin, namun, memiliki peran penting dalam regulasi proliferasi
sel dan apoptosis melalui fungsinya dalam jalur sinyal Wnt30.

SH2-domain yang mengandung inositol 5-fosfatase tipe 2 (SHIP2) dapat berfungsi

untuk dephosphorylate fosfolipid kunci (misalnya, phosphatidylinositol-3-fosfat; PtdIns (3)
P) yang dihasilkan oleh insulin-mediated PI (3) aktivasi K ( melihat ulasan dalam masalah
ini dengan Saltiel dan Kahn, halaman 799-806). Enzim ini terlibat baru sebagai target
diabetes, tikus nol heterozigot telah nyata meningkatkan sensitivitas untuk insulin32.
Shoelson dan rekan baru-baru ini mengungkapkan potensi target33,34 obat
diabetes baru dan menarik. Dua baris bukti menunjukkan peran penting bagi sayakB
kinase (IKK) sebagai mediator peningkatan serin protein atau fosforilasi treonin, yang
memiliki potensi untuk downregulate sinyal insulin. Pertama, dosis tinggi salisilat dapat
menghasilkan peningkatan sensitivitas insulin dalam hubungan dengan IKK inhibi-tion,
dan kedua, tikus IKK-nol heterozigot memiliki fenotipe sensitivitas insulin meningkat.
Sebagai tumor necrosis factorSebuah (TNFSebuah), Mediator potensi obesitas terkait
resistance35 insulin, dapat mengaktifkan kompleks IKK, peran khusus untuk IKK di
TNFSebuahresistensi insulin -dimediasi dapat implicated33. Demikian pula, protein
kinase Cu (PKCu) Bisa menjadi sasaran obat tambahan, seperti peningkatan PKC ototu
Kegiatan telah diamati dalam konteks lemak-asam-induced resistance36 insulin.
Penjelasan lebih lanjut dari regulator kunci dalam jalur sinyal insulin tidak diragukan lagi
akan mengarah pada penemuan target obat tambahan untuk diabetes tipe 2.

Menargetkan obesitas, metabolisme lipid dan 'lipotoxicity'

Mengingat peran penting dari obesitas dalam pengembangan resistensi insulin,

dan fitur lain dari sindrom metabolik (lihat ulasan di masalah ini dengan Zimmet, Alberti
dan Shaw, halaman 782-787, dan Bell dan Polonsky, 788-791), berhasil pendekatan
untuk attenuat-ing nafsu makan dan / atau meningkatkan pengeluaran energi akan
membuktikan dari besar manfaat dalam mencegah dan mengobati diabetes tipe 2.
Berbagai target obat untuk obesitas sendiri sedang aktif diselidiki37,38. Sebagai contoh
potensi manfaat modulasi satu target tersebut, agonis reseptor (MCR-4) melanocortin-4
menawarkan prospek ameliorating obesitas dan diabetes tipe 2. Dengan demikian, baik
peningkatan ekspresi alami MCR-4 antagonis (Agouti) atau knock-out dari reseptor itu

sendiri menghasilkan fenotipe yang kuat dengan beberapa fitur dari sindrom
metabolik39,40. Sebuah baru yang menarik mengembangkan-ment41 melibatkan
kesadaran bahwa pendekatan yang dirancang untuk memodulasi sistem neuroendokrin
pusat yang mengontrol metabolisme energi, seperti jalur melanocortin, dapat memiliki
efek selektif dan menguntungkan pada metabolisme perifer (misalnya, untuk mengubah
efek insulin pada hati sendiri). Prospek pendekatan baru untuk pengurangan nafsu
makan melalui penghambatan pusat lemak-asam synthase juga menawarkan sebuah
jalan baru yang menarik untuk penelitian obat di daerah ini42
Kelainan metabolisme lemak-asam semakin diakui sebagai komponen kunci dari
patogenesis sindrom metabolik dan diabetes tipe 243. Lemak-makan dan mengangkat
tingkat sirkulasi asam lemak bebas (FFA) yang jelas cukup untuk menginduksi resistensi
insulin perifer dan hati44. Akumulasi lipid dalam sel otot45 dan peningkatan tertentu dalam
otot rantai panjang lemak-asil-CoA konten44 telah terlibat dalam menyebabkan resistensi
insulin. Selain itu, akumulasi lipid dalam pulau pankreas telah pro-berpose untuk merusak
sekresi insulin46. Seorang pemain penting dalam potensiasi efek mempromosikan
hiperinsulinemia pada akumulasi lipid hati adalah faktor transkripsi anabolik SREBP-1,
yang meregulasi gen seperti itu untuk asam lemak sintase 47. Observasi ini mendukung
'lipotoxicity' hipotesis terpadu, yang menyatakan bahwa diabetes sindrom metabolik dan
tipe 2 dapat disebabkan oleh akumulasi trigliserida dan rantai panjang lemak-asil-CoA
dalam hati dan otot (yang mengarah ke pengurangan metabolisme insulin-mediated
aktivitas) dan di pulau yang (yang mengarah ke gangguan sekresi insulin). Memang,
hormon leptin berat mengurangi dapat mencegah diabetes diet-induced pada hewan
pengerat terutama melalui mengurangi akumulasi lemak atau 'Steatosis' di jaringanjaringan utama48. Beberapa target terapi dibahas di bawah, termasuk AMP-activated
protein kinase (AMPK), asetil-CoA karboksilase (ACC), adiposit-terkait protein
komplemen 30 (Acrp30), PPARg dan PPARSebuah, Merupakan mekanisme yang dapat
dimanfaatkan untuk membalikkan atau mencegah obesitas yang berhubungan
lipotoxicity.

AMP-activated kinase dan asetil-CoA karboksilase

AMPK diaktifkan dalam menanggapi mengurangi biaya energi sel 49. Pada gilirannya,
ACC, sebuah AMPK substrat kunci, tidak aktif dalam menanggapi phos-phorylation.
Sebagai ACC mengkatalisis pembentukan malonil-CoA, sebuah inhibitor ampuh oksidasi
asam lemak dan langkah pertama dalam lemak-asam sintesis, aktivasi AMPK dan
konsekuen ACC inaktivasi akan menghasilkan pengurangan sintesis lipid dan
peningkatan oksidasi lemak. Aktivasi AMPK juga menyebabkan berkurangnya hati
SREBP-1 dan ekspresi ditekan dari genes49,50 lipogenik hilir. Selain itu, aktivasi AMPK
terdiri dari mekanisme untuk uptake51,52 glukosa otot latihan-dimediasi. Aktivasi
alosterik AMPK dengan analog adenosin, Aicar, telah terbukti untuk menghasilkan
beberapa efek metabolik yang menguntungkan, termasuk penghambatan output glukosa
hepatik dan peningkatan uptake49 glukosa otot. Hasil yang lebih baru juga menunjukkan
bahwa kemampuan metformin obat yang banyak digunakan untuk menghambat produksi
glukosa hepatik dan menipiskan steatosis hati melibatkan AMPK activation50. Secara
bersama-sama, efek menguntungkan dari aktivasi AMPK oleh Aicar, dan peran
kemungkinan aktivasi AMPK sebagai kontributor terhadap efek metabolik metformin,
memberikan alasan yang kuat untuk menargetkan aktivasi AMP sebagai pendekatan
terapi baru. ACC juga target obat independen menarik, tikus kekurangan salah satu dari
dua isoform ACC utama (ACC2) yang karakter-kan oleh peningkatan oksidasi asam
lemak dengan nyata mengurangi berat badan dan adiposity53. Sejauh mana
penghambatan ACC dapat melindungi terhadap diabetes belum, bagaimanapun, telah
sepenuhnya dinilai.

Adiposit pelengkap terkait protein 30

Acrp30, atau adiponektin, protein-adiposit spesifik disekresikan dari Mr 30.000, baru-baru

ini telah ditunjukkan untuk menghasilkan metabolisme menguntungkan efek pada tikus,
termasuk kemampuan untuk mengurangi glukosa, trigliserida dan FFAs54-56. Hormon
ini juga diduga dapat menyebabkan fatty- jaringan oksidasi asam dan mengurangi
steatosis jaringan di resisten insulin models54,56 hewan. Efek akut tambahan dalam
meningkatkan aksi insulin hati juga telah suggested55. Oleh karena itu, baik turunan
Acrp30 rekombinan atau kecil-molekul senyawa Acrp30-mimesis dapat digambarkan
sebagai pendekatan terapi baru.

Spesifik
ekspresi gen
di adiposit

Serapan FA
Lipolisis

PPAR-
ligan

Ekspresi CAP

FFAs
Insulin-sensitisasi
Faktor (s)
(mis Acrp30)
Ekspresi /
tindakan
insulin-resistance
Faktor (s)
(mis resistin / TNF)

11HSD1

ekspresi; gen lain ...

Adiposit insulinsensitif kecil

Adipositas
viseral

Aksi insulin di otot / liver

PDK4)

Gambar 4 Mekanisme potensial insulin sensitisasi PPARg ligan. The PPAR reseptorg
dominan dinyatakan dalam jaringan adiposa. Interaksi ligan dengan reseptor menengahi
perubahan spesifik dalam ekspresi gen adiposa. Ekspresi diubah gen adiposa seperti
lemak-asam transporter 1 dapat berkontribusi untuk mengurangi produksi asam lemak
bebas (FFA), yang, pada gilirannya, diperkirakan memiliki efek insulin-kepekaan dalam
otot dan hati. Perubahan ekspresi gen lain seperti CAP atau 11bHSD1 dapat
berkontribusi untuk meningkatkan aksi insulin secara lokal di jaringan adiposa dan / atau
dikurangi adipositas viseral. Ekspresi diubah faktor yang beredar termasuk TNFSebuah,

Resistin dan Acrp30 juga cenderung tidak langsung menengahi peningkatan aksi insulin
di hati atau otot dan pemanfaatan glukosa; penekanan aktivitas PDK4 di otot adalah
contoh dari satu (mungkin tidak langsung) efek

PPARs menyajikan target terapi beberapa

PPARs merupakan faktor transkripsi ligand-diaktifkan (anggota keluarga reseptor

nuklir) yang menawarkan pendekatan terapi yang menjanjikan untuk sindrom metabolik.
Efek menguntungkan yang dikenal dari PPAR ligan sebagian besar konsisten dengan
mekanisme yang dapat ame-liorate lipotoxicity. PPARg adalah target molekul dominan
untuk thiazolidinedione (TZD) obat insulin-sensitizing57,58. Heran, kelas obat TZD
ditemukan lebih dari satu dekade mekanisme ini ditemukan. Sebagai TZDs menderita
hanya khasiat bersih sederhana dan beberapa efek samping, banyak peneliti telah
terlibat dalam pencarian ditingkatkan PPARg ligan sebagai obat potensial. Senyawa baru
dengan nyata ditingkatkan potensi dan selektivitas untuk reseptor-baru ini ditemukan.
Sebuah hipotesis yang berlaku untuk regulasi sensitivitas insulin dengan PPARg
melibatkan efek utama dari PPARg pada transkripsi gen dalam jaringan adiposa (tempat
yang paling berlimpah diungkapkan), yang ulti-kira mengarah pada peningkatan aksi
insulin di otot dan hati (Gbr. 4). Aktivasi langsung dari PPARg mengarah ke induksi gen
adiposit seperti untuk lipoprotein lipase dan lemak-asam transporter 1, yang pada
gilirannya berkontribusi menurunkan trigliserida dan tingkat FFA, respectively61.
Demikian pula, penekanan TNFSebuah ekspresi gen oleh PPARg di jaringan adiposa
telah reported61. Sebagai FFA dan TNF Sebuah keduanya mediator sistemik potensi
resistensi insulin, efek tersebut kemungkinan untuk berkontribusi pada keberhasilan
PPARg aktivasi dalam meningkatkan sensitivitas insulin. Sebagai konsekuensi dari
ketersediaan lipid sistemik berkurang, tingkat lipid otot juga dapat reduced62.
Upaya terakhir untuk menjelaskan gen diatur oleh PPARg dan terlibat dalam
sensitivitas insulin telah menjelaskan beberapa bidang minat untuk penelitian penemuan
obat. Dalam beberapa contoh yang dibahas di bawah, target hilir diduga dari PPARg
(Gambar. 4) diidentifikasi menggunakan layar PCR-diferensial messenger RNA, DNA
microarray dan teknik terkait63-65. Resistin adalah protein baru yang dikeluarkan oleh

jaringan adiposa dengan kemampuan nyata memusuhi aksi insulin 64. Meskipun ekspresi
adiposa dari resistin awalnya dilaporkan ditekan oleh rosiglitazone, temuan ini telah
kemudian dipertanyakan66. Ekspresi otot gen untuk piruvat dehidrogenase kinase 4
(PDK4) ditindas oleh in vivo pengobatan tikus dengan PPARg agonis65. Efek bersih dari
menghambat PDK4 harus meningkatkan piruvat dehidrogenase dan kegiatan untuk
meningkatkan

pemanfaatan

glukosa.

Di

jaringan

perifer,

11b-hydroxysteroid

dehidrogenase tipe 1 (11bHSD1) mengkatalisis konversi kortison ke glukokortikoid aktif,

kortisol. Atas dasar fenotip ternyata sensitif terhadap insulin dari 11bTikus HSD1-null,
penghambatan enzim ini telah diusulkan sebagai target obat potensial untuk sindrom
metabolik67. Penekanan 11bHSD1 oleh PPARg agonis di jaringan adiposa tampaknya
akan memberikan lebih vali-dation untuk target ini68. Demikian pula, in vivo aktivasi
PPARg keduanya animals56,69 dan humans70 juga baru-baru telah ditunjukkan untuk
meningkatkan tingkat sirkulasi Acrp30. Mengingat efek menguntungkan dari rekombinan
Acrp30 dijelaskan di atas, temuan ini merupakan mekanisme potensial menarik untuk
sensitisasi insulin dan merupakan incen-tive lebih lanjut untuk mengejar Acrp30 sebagai
target. PPARginduksi -dimediasi dari ekspresi protein adaptor, Cblprotein -associated
(CAP), juga menunjukkan link mekanistik menarik antara PPARg dan sensitisasi insulin
dari adiposit sendiri (ref. 71, dan melihat ulasan dalam masalah ini dengan Saltiel dan
Kahn, halaman 799-806).
Sebuah reseptor nuklir terkait erat, PPARSebuah, Adalah target molekul untuk
kelas fibrat dari drugs57-modulasi lipid. Mengingat potensi manfaat pengobatan fibrate
untuk penyakit koroner, terutama pada pasien dengan diabetes dan syndrome72
metabolisme, dan pengamatan terakhir menunjukkan efek insulin-sensitizing independen
PPARSebuah agonists73 (yang bisa timbul dari penurunan content74 lipid otot),
penggabungan PPAR tambahanSebuah Kegiatan menjadi senyawa dengan PPARg
aktivitas agonis telah proposed75. Sebagai efek klinis yang merugikan dari TZD dan obat
fibrat kelas adalah insulin-sensitisasi dan lipid-altering senyawa yang berbeda, aman dan
efektif yang melibatkan kedua mekanisme aksi sebagai entitas tunggal mungkin bisa
dikembangkan.

Dengan memanfaatkan fakta bahwa PPARs berfungsi seperti reseptor nuklir lain
seperti reseptor estrogen, mungkin juga diasumsikan bahwa senyawa dengan efek
jaringan atau-gen tertentu dapat diidentifikasi. Untuk reseptor estrogen, pengikatan
agonis parsial seperti tamoxifen dikaitkan dengan konformasi reseptor alternatif, potensi
profil yang berbeda dari rekan-faktor reseptor terkait, dan respons biologis selektif
terhadap agonis klasik seperti oestradiol76. Meskipun gen tertentu yang memediasi efek
samping dan menguntungkan dari PPARg aktivasi belum sepenuhnya karakter-ized,
kesempatan ada untuk menentukan in vitro profil lengkap dibandingkan parsial agonis
dan untuk menguji senyawa yang dipilih in vivo untuk menyaring orang-orang dengan
indeks terapeutik ditingkatkan.

c. Ringkasan dan Komentar

Basis pengetahuan kolektif kita dari jalur dan protein diskrit yang berkontribusi
terhadap sifat-sifat khas yang mendasari patofisiologi sindrom metabolik dan diabetes
tipe 2 berkembang dengan cepat. Momentum ini didorong oleh lompatan kuantum dalam
potensi 'pemain' yang disediakan oleh database urutan genom manusia dijelaskan dan
teknik molekuler seperti DNA microarray dan KO gen, dan identifikasi gen penyakit
potensial pada manusia dan spesies Model. Contoh target obat baru ditemukan
dijelaskan di atas sangat menyarankan bahwa peningkatan komponen baru diidentifikasi
dari kerentanan penyakit akan menghasilkan sebuah array bahkan lebih luas dari
pendekatan potensi intervensi terapeutik. Selain modulator kecil-molekul reseptor atau
enzim target 'klasik', penelitian dapat mengidentifikasi terapi protein tambahan, seperti
GLP-1 analog, dan bahkan lebih baru pendekatan, seperti terapi berbasis oligonukleotida
antisense.
Studi intensif tentang mekanisme kerja obat yang lebih tua telah memberikan
validasi lebih lanjut dari beberapa target obat baru-baru diidentifikasi. Upaya lebih lanjut
ke arah ini kemungkinan akan berbuah. Mengingat sifat multifaktorial faktor genetik dan
lingkungan yang berkontribusi terhadap asal-usul sindrom metabolik dan diabetes tipe 2,
adalah mungkin bahwa upaya lebih lanjut untuk mengkarakterisasi penyakit 'subfenotipe' dan penanda genetik tertentu akan diterjemahkan ke dalam lebih selektif terapi

dibuat khusus untuk sub kelompok yang berbeda dari pasien atau mereka yang berisiko
terkena penyakit. Individu-individu dapat diidentifikasi berdasarkan genotipe tertentu atau
penanda klinis yang lebih spesifik derangements fisiologis yang berbeda.

Daftar Pustaka

1.

Kopelman, P. G. & Hitman, G. A. Diabetes. Meledak Tipe II. Lanset 352, SIV5

(1998).
2.

Amos, AF, McCarty, DJ & Zimmet, P. meningkatnya beban global diabetes dan

komplikasinya: perkiraan dan proyeksi tahun 2010. Diabet. Med. 14(Suppl. 5), S5-S85
(1997).
3.

UKPDS. UK studi prospektif diabetes 33: kontrol glukosa darah intensif dengan

sulfonilurea atau insulin dibandingkan dengan pengobatan konvensional dan risiko

komplikasi dengan diabetes tipe 2. Lanset 352, 837-853 (1998).
4.

Ringkasan eksekutif laporan ketiga dari Kolesterol Nasional Pendidikan Panel Ahli

Programpada Deteksi, Evaluasi, dan Pengobatan Kolesterol Darah Tinggi di Dewasa.

Selai. Med. Assoc. 285, 2486-2496 (2001).
5.

Haffner, SM, Lehto, S., Ronnemaa, T., Pyorala, K. & Laakso, M. Kematian

akibat penyakit jantung koroner pada subyek dengan diabetes tipe 2 dan dalam mata
pelajaran non-diabetes dengan dan tanpa infark miokard sebelumnya. N. Engl. J.
Med. 339, 229-234 (1998).
6.

DeFronzo, RA, Bonadonna, RC & Ferannini, E. Patogenesis NIDDM: gambaran

yang seimbang. Diabet. peduli 15, 318-368 (1992).

7.

Unger, RH Glukagon fisiologi dan patofisiologi. N. Engl. J. Med. 285, 443-449

(1971).
8.

Roden, M. et al. Peran insulin dan glukagon dalam regulasi sintesis glikogen hati

dan omset pada manusia. J. Clin. Menginvestasikan. 97, 642-648 (1996).

9.

Shah, P., Vella, A., Basu, R., Schwenck, WF & Rizza, RA Kurangnya

penekanan glukagon kontribusi untuk hiperglikemia postprandial pada subyek

dengan diabetes mellitus tipe 2. J. Clin. Endocrinol. Metab. 85, 4053-4059 (2000).
10.

Connell, RD Glukagon antagonis untuk pengobatan diabetes tipe 2. Exp. Opin.

Ther. Paten 9, 701-709 (1999).

11.

Merek, C. L. et al. Immunoneutralization glukagon endogen dengan antibodi

monoklonal glukagon menormalkan hiperglikemia pada tikus cukup streptozotocindiabetes. Diabetologia 37, 985-993 (1994).

12.

Unson, CG, Andreu, D., Gurzenda, EM & Merrifield, RB antagonis peptida

sintetik glukagon. Proc. Natl Acad. Sci. Amerika Serikat 84, 4083-4087 (1987).
13.

Petersen, K., Sullivan, J., Amatruda, SJ, Livingston, J. & Shulman, G.

Diabetologia 42(Suppl.), A42 (1999).

14.

Treadway, JL, Mendys, P. & Hoover, DJ Glikogen fosforilase inhibitor untuk

pengobatan diabetes mellitus tipe 2. Exp. Opin. Menginvestasikan. Narkoba 10, 439454 (2001).
15.

Magnusson, I., Rothman, DL, Katz, ID, Shulman, RD & Shulman, GI Peningkatan

laju glukoneogenesis di diabetes mellitus tipe II: studi resonansi magnetik nuklir 13C.
J. Clin. Menginvestasikan. 90, 1323-1327 (1992).
16.

Zhang, B. & Moller, pendekatan DE Baru dalam pengobatan diabetes tipe 2. Curr.

Opin. Chem. Biol. 4, 461-467 (2000).

17.

Parker, J. C. et al. Kadar glukosa plasma berkurang pada tikus dan tikus yang

diobati dengan inhibitor translocase-6-fosfat glukosa. Diabetes 47, 1630-1636

(1998).
18.

Porte, DJ Banting Kuliah 1990:-sel beta pada diabetes melitus tipe II. Diabetes 40,

166-180 (1991).
19.

Drucker, D. J. peptida glucagon-like. Endokrinologi 142, 521-527 (2001).

20.

Miyawaki, K. et al. Intoleransi glukosa yang disebabkan oleh cacat dalam sumbu

entero-insular: studi di lambung tikus polipeptida knockout penghambatan. Proc. Natl

Acad. Sci. Amerika Serikat 96, 14.843-14.847 (1999).
21.

Edwards, C. M. et al. Glukagon-like peptide 1 memiliki peran fisiologis dalam

kontrol glukosa postprandial pada manusia. Diabetes 48, 86-93 (1999).

22.

MARGUET, D. et al. Sekresi insulin ditingkatkan dan toleransi glukosa membaik

pada tikus kurang CD26. Proc. Natl Acad. Sci. Amerika Serikat 97, 6874-6879 (2000).
23.

Demuth, H.-U. et al. Pengobatan dosis tunggal pasien diabetes dengan DP IV

inhibitor P32 / 98. Diabetes 49(Suppl. 1), A102 (2000).

24.

Ahren, B. et al. Penghambatan DPPIV oleh NVP DPP728 meningkatkan kontrol

metabolik selama 4 minggu di diabetes tipe 2. Diabetes 50(Suppl. 2), A104 (2001).

25.

Zhang, B. et al. Penemuan dari mimesis insulin molekul kecil dengan aktivitas

antidiabetes pada tikus. Ilmu 284, 974-977 (1999).

26.

Goldstein, BJ, Li, PM, Ding, WD, Ahmad, F. & Zhang, WR di Vitamin dan

Hormones- Kemajuan dalam Penelitian dan Aplikasi Vol. 54 (ed. Litwack, J.) 67-96
(Academic, San Diego, 1998).
27.

Cohen, N. et al. Oral vanadyl sulfat meningkatkan sensitivitas insulin hepatik dan

perifer pada pasien dengan non-insulin dependent diabetes mellitus. J. Clin.

Menginvestasikan. 95, 2501-2509 (1995).
28.

Elchebly, M. et al. Meningkatkan sensitivitas insulin dan resistensi obesitas

pada tikus yang tidak memiliki tirosin protein gen fosfatase-1B. Ilmu 283, 1544-1548
(1999).
29.

Bush, E. N. et al. Pengobatan Zucker tikus diabetes dengan lemak antisense

oligonukleotida untuk phosphotyrosine fosfatase-1B selama 5 minggu menghentikan

perkembangan diabetes. Diabetes 50(Suppl. 2), A81 (2001).
30.

Weston, CR & Davis, RJ Signaling spesifisitas-urusan yang kompleks. Ilmu 292,

2439-2440 (2001).
31.

Henriksen, E. J. et al. Glikogen sintase kinase-3 inhibitor mempotensiasi toleransi

glukosa dan aktivitas sintase glikogen otot di Zucker Diabetes Fatty Tikus. Diabetes
50(Suppl. 2), A279 (2001).
32.

Clement, S. et al. The lipid fosfatase SHIP2 mengontrol sensitivitas insulin. Alam

409, 92-97 (2001).

33.

Yuan, M. et al. Pembalikan gangguan dengan obesitas dan diet yang diinduksi

resistensi insulin dengan salisilat atau target IKKb.Ilmu 293, 1673-1677 (2001).
34.

Kim, J. K. et al. Pencegahan lemak yang diinduksi resistensi insulin oleh salisilat.

J. Clin. Menginvestasikan. 108, 437-446 (2001).

35.

Moller, Potensi peran D. E. TNFSebuah dalam patogenesis resistensi insulin dan

diabetes tipe II.Tren Endocrinol. Metab. 11, 212-217 (2000).

36.

Shulman, mekanisme GI Seluler resistensi insulin. J. Clin. Menginvestasikan. 106,

171-176 (2000).

37.

Moller, D. E. & Van der Ploeg, L. H. T. di Handbook of Experimental Farmakologi:

Patologi Obesitas dan Terapi (eds Lockwood, D. & Heffner, T.) 404-426 (Springer,
Berlin, 2000).

2. Hubungan Struktur dan Interaksi Obat-Reseptor

Reseptor obat adalah suatu makromolekul jaringan sel hidup, mengandung gugus
fungsional atau atom-atom terorganisasi, reaktif secara kimia dan bersifat spesifik, dapat
berinteraksi secara reversibel dengan molekul obat yang mengandung gugus fungsional
spesifik, menghasilkan respons biologis yang spesifik pula.
Interaksi obat-reseptor terjadi melalui dua tahap, yaitu:
a. Interaksi molekul obat dengan reseptor spesifik. Interaksi ini memerlukan afinitas
b. Interaksi yang dapat menyebabkan perubahan konformasi makromolekul protein
sehingga timbul respons biologis.

Crum, Brown dan Fraser (1869), mengatakan bahwa aktivitas biologis suatu
senyawa merupakan fungsi dari struktur kimianya dan tempat obat berinteraksi pada
sistem biologis mempunyai sifat yang karakteristik. Langley (1878), dari studi efek
antagonis dari atropin dan pilokarpin, memperkenalkan konsep reseptor yang pertama
kali dan kemudian dikembangkan oleh Ehrlich. Ehrlich (1907), memperkenalkan istilah
reseptor dan membuat konsep sederhana tentang interaksi obat-reseptor yaitu corpora
non agunt nisi fixata atau obat tidak dapat menimbulkan efek tanpa mengikat reseptor.
Clark (1926), memperkirakan bahwa satu molekul obat akan menempati satu sisi
reseptor dan obat harus diberikan dalam jumlah yang berlebih agar tetap efektif selama
proses pembentukan kompleks.

Obat akan berinteraksi dengan reseptor membentuk kompleks obat-reseptor. Clark

hanya meninjau dari segi agonis saja yang kemudian dilengkapi oleh Gaddum (1937),
yang meninjau dari segi antagonis.
Respons biologis yang terjadi setelah pengikatan obat-reseptor dapat merupakan:
1.

Rangsangan aktivitas (efek agonis)

2.

Pengurangan aktivitas (efek antagonis)

Ariens (1954) dan Stephenson (1956), memodifikasi dan membagi interaksi obat-

reseptor menjadi dua tahap, yaitu:

1.

Pembentukan kompleks obat-reseptor

2.

Menghasilkan respons biologis

Setiap struktur molekul obat harus mengandung bagian yang secara bebas dapat

menunjang afinitas interaksi obat-reseptor dan mempunyai efisiensi untuk menimbulkan

respons biologis sebagai akibat pembentukan kompleks obat reseptor. Croxatto dan
Huidobro (1956), memberikan postulat bahwa obat hanya efisien pada saat berinteraksi
dengan reseptor.
Paton (1961), mengatakan bahwa efek biologis dari obat setara dengan kecepatan
ikatan obat-reseptor dan bukan dari jumlah reseptor yang didudukinya. Senyawa
dikatakan agonis bila mempunyai kecepatan asosiasi atau sifat mengikat reseptor besar
dan disosiasi yang besar. Senyawa dikatakn antagonis bila mempunyai kecepatan
asosiasi sangat besar sedang disosiasi nya sangat kecil. Senyawa dikatakan agonis
parsial bila kecepatan asosiasi dan disosiasinya tidak maksimal.
Menurut Koshland (1958), ikatan enzim (E) dengan substrat (S) dapat
menginduksi terjadinya perubahan konformasi struktur enzim sehingga menyebabkan
orientasi gugus-gugus aktif enzim. Belleau (1964), memperkenalkan teori model kerja
obat yang disebut teori gangguan makromolekul. Menurut

Belleau, interaksi

mikromolekul obat dengan makromolekul protein (reseptor) dapat menyebabkan

terjadinya perubahan bentuk konformasi reseptor sebagai berikut:
1.

Gangguan konformasi spesifik (Specific Conformational Perturbation = SCP)

2.

Gangguan konformasi tidak spesifik (Non Specific Conformational Perturbation =

NSCP.

Obat agonis adalah obat yang mempunyai aktivitas intrinsik dan dapat mengubah
struktur reseptor menjadi bentuk SCP sehingga menimbulkan respons biologis. Obat
antagonis adalah obat yang tidak mempunyai aktivitas intrinsik dan dapat mengubah
struktur reseptor menjadi bentuk NSCP sehingga menimbulkan efek pemblokan. Pada
teori ini ikatan hidrofob merupakan faktor penunjang yang penting pada proses
pengikatan obat-reseptor.
Ariens dan Rodrigues de Miranda (1979), mengemukakan teori pendudukanaktivasi dari model dua keadaan yaitu bahwa sebelum berinteraksi dengan obat, reseptor
berada dalam kesetimbangan dinamik antara dua keadaan yang berbeda fungsinya,
yaitu:
1.

Bentuk teraktifkan (R*) : dapat menunjang efek biologis

2.

Bentuk istirahat (R) : tidak dapat menunjang efek biologis

Reseptor dari banyak hormon berhubungan erat dengan sistem adenil siklase.

Sebagai contoh katekolamin, glukagon, hormon paratiroid, serotonin dan histamin telah
menunjukkan pengaruhnya terhadap kadar siklik-AMP dalam intrasel, tergantung pada
hambatan atau rangsangan adenil siklase. Bila rangsangan tersebut meningkatkan kadar
siklik-AMP, hormon dianggap sebagai kurir pertama (first messenger), sedang siklik-AMP
sebagai kurir kedua (second messenger).
Teori mekanisme dan farmakofor sebagai dasar rancangan obat dapat
diilustrasikan oleh obat antihipertensi penghambat kompetitif enzim pengubah
angiotensin (Angiotensin-converting enzyme = ACE).

3. Mekanisme Molekuler Dari Antibakterial

Multidrug resistance atau 'Kebal Aneka Obat' adalah kemampuan organisme
penyebab-penyakit untuk bertahan atas obat atau bahan kimia yang dibuat untuk
melawan organisme. Organisme tersebut dapat merupakan sel patologik, termasuk
bakteri dan sel tumor neoplastik. Dalam koleksi terbaru dari soildwelling Streptomyces,
setiap organisme adalah multidrug resistant. Kebanyakan resisten terhadap tujuh
antibiotik yang berbeda, dan fenotip dari beberapa resistensi termasuk untuk 15-21 obat
yang berbeda (D'Costa et al., 2006).

Selain itu, banyak isolat resisten terhadap daptomycin, quinupristin-dalfopristin,

dan telitromisin. Di Amerika Serikat resistensi Campylobacter terhadap quinolon
meningkat secara tajam dalam waktu singkat. Menurut Food and Drugs Administration
(FDA) Amerika 52 Serikat, timbulnya resistensi Campylobacter terhadap fluoroquinolon
didapatkan dari konsumsi ayam yang makanannya dicampur antibiotika agar ternak
menjadi gemuk, atau antibiotika ini diberikan untuk mengobati penyakit infeksi
unggas.(12) Resistensi terhadap quinolon dilaporkan dari banyak negara di dunia, baik
negara industri maupun negara berkembang. Paparan terhadap fluoroquinolon, baik
pada manusia maupun pada hewan, dapat menginduksi terjadinya resistensi pada
Campylobacter. Resistensi Campylobacter jejuni terhadap antimikroba bahkan
ditemukan pada burung-burung liar di Swedia. (Masak et al., 1989).
Resistensi terhadap antibiotik menjadi terkemuka di organisme yang ditemui
secara komersial yang diproduksi antibiotik. Contoh yang paling penting adalah resistensi
terhadap penisilin pada staphylococci, ditentukan oleh enzim (penisilinase) yang
terdegradasi antibiotik (Barber, 1947).
Selama bertahun-tahun, telah dilakukan uji selektif dari berbagai obat yang
menghasilkan organisme berbagai jenis tambahan mekanisme resistensi yang
menyebabkan resistensi multidrug (MDR)-protein pengikat penisilin (PBP), mekanisme
enzimatik dari modifikasi obat, target obat bermutasi, dan permeabilitas membran diubah.
Beberapa organisme MDR yang paling bermasalah yang dihadapi saat ini termasuk
Pseudomonas aeruginosa (mikroba lain asal tanah), Acinetobacter baumannii,
Escherichia coli dan Klebsiella pneumoniae bantalan extended-spectrum -laktamase
(ESBL),vancomycinresistant enterococci (VRE), methicillin-resistant Staphylococcus
aureus (MRSA), vancomycin-resistant MRSA, dan resistan terhadap obat-ekstensif
(XDR) Mycobacterium tuberkulosis. Beberapa seperti methicillin-resistant S. aureus
beberapa MDR dengan kemampuan yang luar biasa virulensi (Miller et al., 2005).

Genetika Multidrug Resistance

Resistensi antibiotik bakteri dapat dicapai melalui mekanisme intrinsik (Gambar 1).
Pada dasarnya mekanisme yang yang ditentukan oleh yang terjadi secara alami gen

yang ditemukan pada kromosom inang, seperti, AmpC -laktamase bakteri gram negatif
dan banyak MDR. Diakuisisi mekanisme melibatkan mutasi pada gen yang ditargetkan
oleh antibiotik dan transfer penentu resistensi ditanggung pada plasmid, bakteriofag,
transposon, dan lainnya ponsel genetik bahan.

Gambar 1. Akuisisi Resistensi antibiotik

Bakteri dapat menjadi resisten antibiotik (Abr) oleh mutasi gen target dalam kromosom. Mereka dapat
memperoleh bahan genetik asing dengan memasukkan segmen DNA bebas ke kromosom mereka (transformasi). Gen juga
dapat ditransfer setelah infeksi oleh bakteriofag (transduksi) dan melalui plasmid dan conjugative transposon selama
konjugasi. Unsur transposabel istilah umum telah digunakan untuk menunjuk (1) urutan penyisipan, (2) komposit
(senyawa), kompleks, dan conjugative transposon, (3) transposing bakteriofag, atau (4) integron.

Secara umum, pertukaran ini dicapai melalui proses transduksi (melalui

bakteriofag), konjugasi (melalui plasmid dan transposon conjugative), dan transformasi
(melalui penggabungan ke dalam kromosom DNA kromosom, plasmid, dan DNA lainnya
dari organisme) (Levy dan Marshall, 2004).
Meskipun transfer gen antara organisme dalam genus yang sama adalah umum,
proses ini juga telah diamati bahwa sangat berbeda, termasuk transfer antar seperti
evolusi organisme sebagai gram positif dan gram negatif bakteri (Courvalin, 1994).
Transposon Conjugative unik dalam memiliki kualitas plasmid dan dapat memfasilitasi
transfer plasmid endogen dari satu organisme ke organisme lain. Integrons berisi koleksi
gen (kaset gen) yang umumnya diklasifikasikan menurut urutan dari protein (integrase)
yang menanamkan fungsi rekombinasi (Mazel, 2006) (Gambar 2A).

Gambar 2. transposabel Elemen yang berunding Resistensi antibiotik

(A) Organisasi kelas 1 integron. int1 menentukan integrase (protein rekombinasi), att1 adalah
situs rekombinasi utama, ATTC adalah Elemen pasangan 59 basis substrat dari integrase,
dan Pc merupakan promotor umum yang mendorong ekspresi tingkat tinggi resistensi
antibiotik determinan (Abr) seperti untuk aminoglikosida, b-laktam, kloramfenikol, dan
trimetoprim dimasukkan. qacE dan sul1 menentukan gen untuk resistensi terhadap
senyawa amonium kuaterner (sebagian dihapus) dan sulfonamid, masing-masing; dua gen
ini ditemukan khususnya di kelas 1 integrons.
(B)
The Vana cluster gen (diadaptasi dari Courvalin, 2006). ORF1 dan ORF2 menanamkan
fitur transposisi. VanR (respon regulator) dan van (histidin kinase) terdiri dari sistem dua
komponen yang mengatur ekspresi vanHAXYZ. Vana (ligase) dan VanH (dehidrogenase)
bertanggung jawab untuk sintesis depsipeptide dimodifikasi (D-Ala-D-Lac, lihat teks)
sementara VanX (D, D-dipeptidase) dan Vany (D, D-Carboxypeptidase) membelah
substrat peptidoglikan normal. VanZ adalah fungsi yang tidak diketahui. PR dan PH adalah
promotor yang mengontrol ekspresi dua transkripsi terpisah unit, dan seluruh elemen diapit
oleh mengulangi terbalik sempurna.

Obat antibiotik yang digunakan untuk membasmi mikroba penyebab infeksi pada
manusia, ditentukan harus memiliki sifat toksisitas selektif setinggi mungkin. Artinya, obat
tersebut haruslah bersifat sangat toksik untuk mikroba, tetapi relatif tidak toksik untuk
hospes. Antibiotik hanya untuk bakteri dan tidak digunakan untuk virus.Aplikasi antibiotik
tidak hanya untuk kemoterapi. Beberapa aplikasi antibiotik lainnya adalah antibiotik
antitumor (agen sitostatik), antibiotik untuk patologi tanaman, antibiotik sebagai bahan
tambahan makanan, antibiotik dalam bidang peternakan dan kesehatan hewan.
Berdasarkan mekanisme kerjanya dapat dibagi menjadi lima kelompok yaitu:
1. Mengganggu metabolisme sel mikroba

Antimikroba yang termasuk dalam kelompok ini adalah sulfonamid, trimetoprin,

asam p-aminosalisilat (PAS), dan Sulfon.
2. Menghambat sintesis dinding mikroba
Obat yang termasuk dalam kelompok ini ialah penisilin, sefalosporin, basitrasin,
vankomisin, dan sikloserin.
3. Mengganggu permeabilitas membran sel mikroba
Obat yang termasuk dalam kelompok ini adalah polimiksin, golongan polien serta
berbagai antimikroba kemoterapeutik, umpamanya antiseptik surface active
agents.
4. Menghambat sintesis protein sel mikroba
Obat yang termasuk dalam kelompok ini ialah golongan aminoglikosid, makrolid,
linkomisin, tetrasiklin, dan kloramfenikol.
5. Menghambat sintesis atau merusak asam nukleat sel mikroba
Obat yang termasuk dalam kelompok ini adalah rifampisin, dan golongan kuinolon.

Proses penghambatan mekanisme sintesis asam nukleat bisa diupayakan dengan

antibiotik, beberapa antibiotik yang dapt digunakan untuk menghambat sintesis asam
nukleat berdasarkan mekanisme targetnya yaitu:
1. Antifolat

digunakan

untuk

menghambat

metabolisme

purin,

sehingga

menghambat sistesi DNA dan RNA.

2. Inhibitor topoisomerase atau kuinolon mekanismenya menghambat replikasi DNA.
3. Anaerobik inhibitor DNA
4. Penghambat sintesis RNA atau Rifamisin

Antifolat adalah obat yang mengganggu fungsi asam folat. Banyak digunakan
dalam kemoterapi kanker. Beberapa digunakan sebagai antibiotik atau agen
antiprotozoal. Antifolat bereaksi selama sintesis DNA dan RNA, dan dengan cara
sitotoksik selama fase-S dari siklus sel. antifolates lebih sering memiliki efek toksik lebih
besar pada saat pembelahan sel (seperti sel-sel ganas dan myeloid, dan GI & mukosa
oral), yang mereplikasi DNA, sehingga menghambat pertumbuhan dan proliferasi sel-sel
non-kanker (Morgan, 1995).

DNA inhibitor (seperti kuinolon, bertindak atas girase DNA sebagai inhibitor
topoisomerase). Kelompok lain dari inhibitor DNA bertindak atas bakteri anaerob. DNA
inhibitor bertindak dengan menghasilkan metabolit yang dimasukkan ke dalam untai
DNA, yang kemudian lebih rentan terhadap kerusakan. Obat-obat ini selektif beracun
bagi organisme anaerobik , tetapi dapat mempengaruhi sel manusia (Moore dkk, 2005).
Kuinolon menghambat girase DNA bakteri atau enzim topoisomerase II, sehingga
menghambat replikasi DNA dan transkripsi (Isea et all., 1992). Dimana proses
penghambatan sintesis asam nukleat sel mikroba ini dengan cara perkembang biakkan
kuman pada saat proses replikasi dan transkripsi dimana terjadi pemisahan double helix
dari DNA kuman menjadi 2 utas DNA. Pemisahan ini akan selalu menyebabkan puntiran
berlebihan pada double helix DNA sebelum titik pisah. Hambatan mekanik ini dapat
diatasi kuman dengan bantuan enzim DNA girase. Peranan antibiotika golongan Kuinolon
menghambat kerja enzim DNA girase pada kuman dan bersifat bakterisidal, sehingga
mikroba mati (Thomas et all., 2009).

Resistant melalui Kromosom Mutasi Fluoroquinoleness

Antibiotik golongan fluorokkuinolon seperti halnya siprofloksasin dan norfloksasin

terikat pada subunit enzim DNA girase, dan memblok aktivitas enzim yang essensial
dalam menjaga supercoling DNA dan penting dalam proses replikasi DNA. Mutasi pda
gen pengkode DNA girase menyebabkan diproduksinya enzim yang aktif namun tidak
dapat diikat oleg fluorokuinolon.
Resistensi fluorokuinolon dapat dikaitkan dengan mutasi dalam target obat, Girase
DNA dan topoisomerase IV. Multisubunit kompleks ini melakukan kritis Fungsi ATPdependent selama replikasi DNA; setiapnya terdiri dari dua subunit: Gyra dan gyrB untuk
DNA gyrase and ParC/GrlA and ParE/GrlB untuk topoisomerase IV. Gyra dan Parc / GrlA
protein mengandung fungsi binding DNA dan ditargetkan oleh fluoroquinolones (yang
murni antibiotik sintetis), sedangkan gyrB dan Pare / GrlB melakukan peran ATP
mengikat dan menghidrolisis dan dihambat oleh kumarin antibiotik. Pada bakteri gram
negatif, mutasi pada DNA girase terjadi pertama, sedangkan pada gram positif organisme

mutasi ditopoisomerase IV timbul resistensi fluorokuinolon klinis yang relevan (Drlica dan
Malik, 2003).

Rifamycins

Rifamycins adalah obat bakterisida yang menangkap transkripsi dengan

berinteraksi dengan rpoB, subunit dari RNA polimerase (RNAP). Meskipun rejimen
kombinasi yang mencakup rifampisin atau rifapentin dan isoniazid, pirazinamid,
etambutol, streptomisin atau tetap primer pilihan untuk terapi lini depan infeksi M.
tuberculosis, resistensi melalui mutasi titik dalam rifampisin mengikat wilayah rpoB terjadi
pada frekuensi 1 10-8 dan tersebar luas. M. tuberculosis resisten terhadap rifampisin
dan isoniazid minimal didefinisikan sebagai multidrug resistant dan menghambat
keberhasilan terapi antara pasien di semua wilayah di dunia (Sharma dan Mohan, 2006).
Aktivitas biologis rifamycins bergantung pada penghambatan sintesis RNA. Hal ini
disebabkan afinitas tinggi dari rifamycins untuk RNA polimerase prokariotik. Mekanisme
kerja rifamycin

menyebabkan bentrokan sterik kuat dengan oligonukleotida. Jika

rifamipsin mengikat polymerase setelah proses elongasi dimuali, maka tidak ada efek
yang diamati pada biosintesis, yang konsisten menunjukkan rifamycin memblok proses
elongasi. Selain itu, rifamycins menunjukkan potensi terhadap HIV. Hal ini disebabkan
oleh inhibisi mereka tentang enzim reverse transcriptase, yang penting bagi
keberlangsungan virulensi. Namun, potensi rifamycin terbukti menjadi sangat kecil untuk
menghambat proses sintesis RNA bakteri (Fuda dan Mobashery, 2005)

Sulfonamide dan Trimethoprim Antibiotics

Sulfonamida adalah anti mikroba yang digunakan secara sistemis maupun topikal
untuk beberapa penyakit infeksi. Sebelum ditemukan antibiotik, sulfa merupakan
kemoterapi yang utama, tetapi kemudian penggunaannya terdesak oleh antibiotik.
Pertengahan tahun 1970 penemuan preparat kombinasi trimetoprim dan sulfametoksazol
meningkatkan kembali penggunaan sulfonamida. Selain sebagai kemoterapi derivat
sulfonamida juga berguna sebagai diuretik dan anti diabetik oral (ADO). Sulfonamida,

antimikroba pertama kali dikembangkan untuk skala besar pengenalan ke dalam praktek
klinis (pada tahun 1935), menargetkan synthase dihidropteroat (Levy, 2002).
Kuman memerlukan PABA (p-aminobenzoic acid) untuk membentuk asam folat
yang di gunakan untuk sintesis purin dan asam nukleat.Sulfonamid merupakan
penghambat kompetitif PABA. Efek antibakteri sulfonamide di hambat oleh adanya darah,
nanah dan jaringan nekrotik, karena kebutuhan mikroba akan asam folat berkurang
dalam media yang mengandung basa purin dan timidin. Sel-sel mamalia tidak
dipengaruhi oleh sulfanamid karena menggunakan folat jadi yang terdapat dalam
makanan (tidak mensintesis sendiri senyawa tersebut). Dalam proses sintesis asam folat,
bila PABA di gantikan oleh sulfonamide, maka akan terbentuk analog asam folat yang
tidak fungsional (Li dan Nikaido, 2004).
Trimetoprim, diperkenalkan pada tahun 1968, menghambat dihidrofolat reduktase
dan yang terakhir antibiotik struktural unik disetujui sebelum rilis linezolid pada tahun
2000. Mutasi di gen menentukan dihidropteroat synthase menurunkan afinitas enzim
untuk sulfonamid dan telah ditemukan dalam percobaan laboratorium menggunakan E.
coli dan Streptococcus pneumoniae dan isolat klinis Campylobacter jejuni dan
Haemophilus influenzae (Skold, 2001).

Tetracycline, Aminoglycoside, dan MLS Antibiotics

Agen dalam tetrasiklin, aminoglikosida dan kelas macrolide- lincosamidestreptogramin (MLS) antibiotik menargetkan ribosom untuk menghambat translasi
protein. Sebagai konsekuensi, resistensi melalui mutasi kromosom jarang terjadi.
Tetrasiklin dan aminoglikosida berinteraksi dengan 16S rRNA (RRS) dan macrolidelincosamide streptogramin (MLS) keluarga mengikat 23S rRNA (RRl). Dalam
kebanyakan bakteri, beberapa RRS dan operon RRl adalah hadir dan kerentanan
dimediasi oleh salah satu dari ini target dapat menjadi dominan, membuat perlawanan
sulit untuk mencapai tanpa mutasi pada semua atau sebagian besar lainnya operon.
Namun, dalam organisme dengan rendah rRNA (RRN) copy nomor, mutasi kromosom
resistansi telah muncul. Resistensi tetrasiklin melalui mutasi titik di Propionibacterium
acnes (3 rRNA operon) dan Helicobacter pylori (2 salinan RRN) (Gerrits et al., 2002; Ross

et al., 1998) telah didokumentasikan. mutasi di RRS resistansi pada amikasin dan
kanamisin dan perubahan dalam protein ribosom kecil S12 (rpsL) atau RRS
mempengaruhi streptomisin (semua obat aminoglikosida) kerentanan di klinik TB M. (1
RRN operon) telah dijelaskan (Alangaden et al., 1998). Munculnya resistensi terhadap
eritromisin (makrolida a) selama Terapi disebabkan oleh RRl mutan di S. pneumoniae (4
salinan RRN) telah dilaporkan (Musher et al., 2002). Selain itu, mutasi pada protein
ribosom besar L4 (rplD) juga telah ditunjukkan untuk mengubah MLS kerentanan (TaitKamradt et al., 2000).

Oxazolidinones

Linezolid (inhibitor lain sintesis protein) disetujui baru-baru ini sebagai agen untuk
mengobati infeksi methicillin-resistant S. aureus dan vankomisin-tahan enterococci.
Ketersediaannya di kedua intravena dan oral formulasi membuatnya berguna untuk
mengobati infeksi baik dirumah sakit dan masyarakat. Resistensi terhadap linezolid
dalam penelitian laboratorium telah dikaitkan dengan titik mutasi di RRl di S. aureus dan
E. faecalis. Sekarang, isolat klinis Staphylococcus epidermidis, S. aureus, Streptococcus
oralis, Enterococcus faecium, dan E. faecalis resisten terhadap linezolid telah
didokumentasikan dan banyak strain menanggung mutasi RRl (Meka dan Emas, 2004).
Seperti dengan fluoroquinolones, tingkat resistensi S. aureus meningkat dengan
mutasi pada beberapa alel RRl yang mengarah ke resistensi klinis yang relevan (Wilson
et al., 2003).

Lipopeptides

Disetujui oleh FDA pada tahun 2003 dan sementara itu telah berhasil digunakan
untuk mengobati infeksi yang disebabkan oleh methicillin S. aureus yang resisten dan
bakteri gram positif lainnya, kegagalan pengobatan telah dicatat (Hayden dkk., 2005).
Percobaan laboratorium telah menetapkan bahwa mutasi di beberapa kromosom
lokus (yaitu, mprF, yycG, rpoB, dan rpoC) mempengaruhi daptomycin kerentanan
(Friedman et al., 2006). Berkenaan dengan mprF, yang menentukan sebuah

lysylphosphatidylglycerol sintetase, mutasi yang sama memiliki telah diidentifikasi di

isolat klinis nonsusceptible serta (Friedman et al., 2006).

Genomic Duplikasi
Dasar dari perubahan struktur pada tingkat genom adalah terjadinya mutasi. Mutasi inilah yang
mendasari terjadinya evolusi genom. Mutasi muncul disebabkan oleh beberapa cara. Salah satunya
adalah penggantian nukleotida individu oleh nukletoda lainnya. Jika penggantian nukleotida tersebut
terjadi pada daerah yang tidak dikode, atau pada daerah yang identik, maka penggantian tersebut tidak
akan memberikan pengaruh pada asam amino yang di kode, tetapi sebaliknya, jika terjadi pada daerah
yang dikode atau pada daerah yang tidak identik, maka dapat menentukan perubahan pada asam
amino dengan membentuk kodon terminasi terlalu awal, sehingga produk gen akan terpotong. Mutasi
gen lainnya timbul akibat kesalahan dalam replikasi dan rekombinasi (Harwell, et al. 2011).
Mutasi pada wilayah promotor atau enhanser (faktor transkripsi spesifik dapat menyebabkan kerugian
akibat adanya proses regulasi positif atau regulasi positif dalam transkripsi gen tersebut. Mutasi selalu
terjadi dalam genom organisme dan dapat menyebabkan efek negatif, efek positif, atau sama sekali
tidak berpengaruh. Jika perubahan bentuk dasar dari genom diakibatkan oleh terjadinya mutasi, maka
kemungkinan bentuk paling awal dari kehidupan memiliki gen dalam jumlah yang sedikit. Jika benar
demikian, maka salah satu aspek dari evolusi adalah peningkatan ukuran genom (Campbell, et al,
2008)
Sebuah mekanisme untuk resistensi obat umum di eukariotiksel (misalnya, kanker
mamalia tertentu dan parasit) adalah amplifikasi gen, yang mengarah ke berlebih
transporter multidrug dan target obat (Albertson, 2006). Duplikasi tandem baru besar dari
E. coli acrAB lokus dalam mutan terisolasi di hadapan tetrasiklin ditemukan overexpress
obat AcrAB pompa penghabisan, menghasilkan fenotip MDR (NICOLOFF et al., 2006).
Mutan, namun, yang tidak stabil dan dikembalikan ke tipe liar fenotipe dalam
ketiadaan obat (NICOLOFF et al., 2007). Amplifikasi genom memiliki juga terbukti
mempengaruhi kerentanan terhadap methicillin di S. Diharapkan bahwa contoh duplikasi
gen sebagai mekanisme resistensi, tidak mutasi, akan meningkatkan pengakuan antara
isolat bakteri. Kemungkinan fenotip akan menjadi bentuk stabil perlawanan aureus
(Matthews dan Stewart, 1988).

Acquired Resistance: enzimatik Modifikasi Obat

Enzim yang mengubah obat antibakteri dibagi menjadi dua kelas umum: yaitu laktamase yang menurunkan antibiotik dan lain-lain (termasuk macrolide dan
aminoglikosid-memodifikasi protein) yang melakukan transformasi kimia (Martinez et al,
1998).
-Lactam Antibiotics
Beta-laktamse (-laktamase) merupakan salah satu dari kelompok enzim yang
dihasilkan oleh hampir semua bakteri gram-negatif. Berfungsi untuk menghidrolisis cincin
-laktam dari penisilin dan sefalosporin sehingga dapat menghancurkan aktivitas
antibiotiknya. Enzim tersebut mungkin disebut penicillinase atau cephalosporinase
berdasarkan kekhususan mereka (Sapunaric, 2005).
Antibiotik ini memiliki unsur biasanya dalam struktur molekul mereka, yaitu empat
cicin atom yang dikenal sebagai beta-laktam. Enzim laktamase memecah cincin ini
menjadi terbuka sehingga menonaktifkan sifat anti bakteri molekul ini. Antibiotik Betalaktam biasanya digunakan untuk mengobati spektrum yang luas dari bakteri Gram-positif
dan Gram-negatif. Beta-laktamase yang dihasilkan oleh organisme Gram-negatif
biasanya dapat disekresikan Ada ratusan -laktamase yang telah ditemukan dan
ditandai, dan gambaran yang lebih lengkap enzim individu dalam kelompok protein ini
tersedia di tempat lain. Sebagian besar resistensi ini ditetapkan oleh gen terletak pada
plasmid dan transposon; kromosom lain dan memberikan perlawanan intrinsik (Jacoby
dan Munoz-Harga, 2005).
-laktamase diklasifikasikan menggunakan skema berdasarkan pada fungsi
(sistem Bush-Jacoby-Medeiros) atau struktur (klasifikasi Ambler) tetapi secara umum
luas dipisahkan menjadi enzim dengan situs aktif serin dan orang-orang yang
membutuhkan kofaktor ion logam (Jacoby dan Munoz-Harga, 2005).
Klasifikasi skema Ambler membagi -laktamase menjadi empat kelompok: kelas
A, C, dan D enzim adalah protein dengan serin residu di situs aktif dan protein kelas B
adalah metalloenzymes tergantung seng. beberapa kelas Sebuah protein berfungsi

sebagai diperpanjang-spektrum -laktamase dan sebagai carbapenemases. Kelas B

Metallo-enzim yang carbapenems menghidrolisis rentan terhadap penghambatan oleh
EDTA, sedangkan mereka tidak rentan terhadap penghambatan oleh klavulanat (inhibitor
-laktamase).

Gambar 3. Aksi -laktamase dan dekarboksilasi intermediet

Di antara bakteri Gram-negatif, munculnya resistensi terhadap sefalosporin

spektrum diperluas telah menjadi perhatian utama. Ternyata pada awalnya dalam jumlah
terbatas spesies bakteri ( E. cloacae , C. freundii , S. marcescens , dan P. aeruginosa )
dapat mengalami mutasi dengan produksi berlebihan kromosom kelas C -laktamase.
Beberapa tahun kemudian, resistensi muncul pada spesies bakteri yang tidak alami
menghasilkan enzim AmpC ( K. pneumoniae , Salmonella spp,. P. mirabilis ) karena
produksi TEM atau SHV-jenis ESBLs. Resitensi khas tersebut sudah termasuk oxyimino
(misalnya ceftizoxime , cefotaxime , ceftriaxone , dan seftazidim , serta oxyiminomonobactam

aztreonam

),

tetapi

bukan

pada

7-alpha-metoksi-sefalosporin

cephamycins ), dalam kata lain, ( cefoxitin dan cefotetan ) telah diblokir oleh inhibitor
seperti klavulanat , sulbaktam , atau tazobactam , dan tidak melibatkan carbapenems.
AmpC -laktamase yang dimediasi plasmid merupakan ancaman baru, karena mereka
memiliki resistensi terhadap 7-alpha-metoksi-sefalosporin ( cephamycins ) seperti
cefoxitin atau cefotetan tidak terpengaruh oleh inhibitor -laktamse yang tersedia secara
komersial dan memiliki strain dengan hilangnya porins pada membran luar sehingga
dapat memberikan resistensi terhadap carbapenem (Perretn, 2003).

Aminoglycosides

Sejumlah besar aminoglikosida-modifikasi enzim ditentukan oleh gen pada

elemen tersebar luas dalam organisme klinis yang relevan (Davies dan Wright, 1997). Di
sini, perlawanan dilakukan dengan protein yang N-acetylate (acetyltransferases),
memfosforilasi

(phosphotransferases),

dan

adenilat

(nucleotidyltransferases)

aminoglikosida. Acetyltransferases mampu memodifikasi tobramycin, gentamisin,

netilmisin, dan amikasin; nucleotidyltransferase yang protein mengubah aktivitas
tobramycin; dan yang phosphotransferases mempengaruhi amikasin kerentanan.
Banyak enzim aminoglikosida-memodifikasi adalah ditemukan di integrons dan elemen
genetik mobile lainnya di mana mereka kaitkan dengan determinan resistensi tambahan.
Misalnya, tiga gen yang acetyltransferase ditemukan pada kelas 1 integron dari P.
aeruginosa yang juga ditentukan perlawanan terhadap carbapenems dan sulfonamid
(Poirel et al., 2001).

MLS Antibiotics

Ada sejumlah menonaktifkan enzim yang bekerja pada antibiotik MLS. Gen
mengkodekan

esterase,

hidrolase,

glycosylases,

phosphotransferases,

nucleotidyltransferases, dan acetyltransferases dan ditemukan kurang sering daripada

penghabisan dan gen ribosom-memodifikasi di isolat klinis (Weisblum, 1998). Esterase
bertindak atas 14- (misalnya, eritromisin) dan 15- (misalnya, azitromisin) beranggota
makrolida; yang hidrolase mempengaruhi streptogramin Obat B; yang acetyltransferases
menonaktifkan

streptogramin

menganugerahkan

perlawanan

Sebuah
terhadap

antibiotik;

dan

lincosamides

nucleotidyltransferases
(misalnya,

klindamisin).

Phosphotransferases memodifikasi 14 15-, dan 16-beranggota makrolida dengan

berbagai kekhususan dan telitromisin (Matsuoka dan Sasaki, 2004).

Chloramphenicol

Acetyltransferases yang menonaktifkan kloramfenikol (a inhibitor umumnya

bakteriostatik sintesis protein) mekanisme resistensi yang paling umum untuk ini
antibiotik dan dipisahkan menjadi tipe A dan protein B. Kedua jenis fungsi enzim sebagai
homotrimers tetapi tidak berhubungan berdasarkan amino urutan asam analisis. Enzim
tipe B juga disebut acetyltransferases xenobiotik dan muncul untuk berbagi garis
keturunan evolusi yang mencakup beberapa streptogramin- menonaktifkan enzim yang
ditemukan di enterococci yang dan staphylococci. Ekspresi konstitutif serta redaman
translasi mendasari regulasi jenis Protein A dan B (Schwarz et al., 2004).

Tetracyclines

Baru-baru ini, sebuah monooxygenase tergantung flavin, yang ditunjuk tet (X),
awalnya diidentifikasi dalam Bacteroides fragilis, yang bekerja pada tetrasiklin tua (seperti
tetrasiklin, oxytetracycline, dan klortetrasiklin) serta yang lebih baru senyawa (seperti
doxycycline, minocycline, dan tigecycline) telah ditandai (Moore et al., 2005). Enzim
mengkatalisis hidroksilasi regioselective ke menonaktifkan substrat, tetapi produk
modifikasi diproduksi oleh TetX tidak stabil pada pH fisiologis. The tet (X) determinan
belum ditemukan kesamaan, klinis isolat resisten terhadap tetrasiklin yang relevan,
meskipun tet terkait (X) -seperti gen di P. aeruginosa memiliki dilaporkan (A. Nakamura
et al., 2002, makalah yang disajikan di Interscience Conference on Antimicrobial Agen
dan Kemoterapi, San Diego, CA).
Altered, Substituted, and Protected Drug Targets -Lactam Antibiotics

Pertama penisilin S. aureus yang resisten diidentifikasi di pertengahan 1940-an

mengungkapkan laktamase (disebut PCI) yang resistensi diberikan. Sebuah penisilin
derivatif, methicillin, yang tahan terhadap -laktamase ini adalah kemudian diperkenalkan
pada tahun 1959 untuk mengobati isolat resisten penisilin, tapi methicillin-resistant S.
aureus diidentifikasi tak lama kemudian (Barber, 1961). Di sini, -laktam resistensi terkait

dengan akuisisi gen untuk sebuah PBP diubah. Perlawanan di stafilokokus yang (Fuda
et al., 2005) dan streptokokus (Jacobs, 1999) sering terjadi setelah akuisisi gen untuk
PBP yang tidak sensitif terhadap beta-laktam penghambatan. The diubah PBP
methicillin-resistant S. aureus, PBP2a, ditentukan oleh mecA dan diangkut pada elemen
genetik bergerak disebut "staphylococcal kaset kromosom" (SCCmec) (Fuda et al.,
2005). Selain mecA, SCCmec berisi lokus peraturan mecR1-MECI dan mengkodekan
enzim yang terlibat dalam situs-spesifik rekombinasi.
Dalam keadaan normal, S. aureus menggunakan beberapa PBP selama
biosintesis dinding sel. Satu, PBP2, adalah enzim bifunctional dengan transpeptidase dan
transglycosylase kegiatan. Ketika methicillin-resistant S. Aureus terkena methicillin,
fungsi PBP2 sebagai transglycosylase yang sedangkan PBP2a kontribusi transpeptidase
yang Kegiatan dalam rangka untuk memberikan resistensi terhadap hampir semua laktam antibiotik. Penghapusan transglycosylase yang fungsi PBP2 menanamkan laktam kerentanan dan menunjukkan pentingnya kedua atribut dari enzim (Ulasan di
Fuda et al., 2005).
Strain baru methicillin-resistant S. aureus yang telah muncul baru-baru ini di luar
rumah sakit di masyarakat berbagi beberapa fitur dengan rumah sakit terkait strain (Naimi
et al., 2003). Ini termasuk hampir lengkap -laktam resistensi fenotipe dan kemampuan
menyebabkan berbagai infeksi yang mengancam jiwa yang serius. Meskipun banyak
strain masyarakat terkait yang multidrug (antibiotik kecuali untuk beta-laktam) rentan,
genom dari klon epidemi didistribusikan ke seluruh AS (USA300) mengandung mutasi
kromosom bahwa perlawanan berunding fluorokuinolon dan plasmid yang menengahi
resistensi terhadap tetrasiklin, eritromisin, klindamisin, streptogramin B agen, dan
mupirocin (Diep et al., 2006).

Glycopeptides

Glikopeptida (termasuk vankomisin dan Teicoplanin) berinteraksi dengan

prekursor peptidoglikan untuk mengerahkan bakterisida aktivitas. Perlawanan terhadap
glikopeptida di grampositive cocci adalah ilustrasi lain dari obat diubah Target (Courvalin,
2006). Dalam enterococci tersebut, diperoleh resistensi glycopeptide disebabkan Vana,

B, D, E, dan G fenotipe sedangkan VANC memberi intrinsik perlawanan. Vana dan Vand
memberikan perlawanan untuk kedua vankomisin dan Teicoplanin, sedangkan yang lain
memberikan resistensi terhadap vankomisin saja. Resistensi fenotipe dicapai
menggunakan beberapa protein tertentu dalam kelompok gen dan setiap hasil dalam
produksi dari peptidoglikan dimodifikasi. Dari sekian banyak obat-resistance penentu
saat ini dikenal, penentu untuk resistensi glycopeptide mungkin yang paling kompleks
(Gambar 2B).
Baru-baru ini, penterococcal Vana cluster gen memiliki membuat jalan ke
methicillin resistant S. aureus, memberikan full-blown resistensi vankomisin pada ini
menonjol patogen (Weigel et al., 2003).
Meskipun hal ini molekul Acara telah dibuktikan dalam percobaan laboratorium
tahun sebelumnya. Vankomisin-tahan S. aureus kini telah diidentifikasi pada pasien dari
tiga Lokal AS yang berbeda, Michigan, Pennsylvania, dan New York. Dalam semua
kasus, penentu resistensi berada pada plasmid-ditentukan transposon, Tn1546.
Vancomycin- tahan E. faecalis dan methicillin-resistant S. aureus juga diperoleh dari
pasien Michigan bore bahwa vankomisin-tahan S. aureus dan masing-masing berisi
plasmid yang identik, kecuali untuk kehadiran dari Tn1546 dalam isolat vankomisin-tahan
E. faecalis. Hal ini diasumsikan bahwa plasmid dari E. Faecalis adalah kendaraan untuk
Vana masuk ke S. aureus dan cluster gen Vana kemudian dipindahkan oleh sarana
transposisi ke plasmid S. Aureus (Noble et al., 1992).

Tetracyclines and MLS Antibiotics

Bentuk yang paling umum dari resistensi terhadap tetrasiklin di klinik yang
penghabisan obat (lihat di bawah) dan ribosom perlindungan. Penentu perlindungan
ribosom (Connell et al., 2003) memiliki kesamaan urutan ke bakteri faktor elongasi (EFG EF-Tu). Mereka juga memiliki Aktivitas GTPase dan fungsi untuk memfasilitasi rilis
tetrasiklin dari ribosom dalam energi-dependent cara. Bakteri yang menunjukkan
resistensi terhadap minocycline umumnya mengandung ribosom penentu perlindungan
(Connell et al., 2003).

Dalam Megasphaera elsdenii (bakteri rumen), sebuah gen mosaik yang

mengandung dua perlindungan ribosom unik determinan (TETO dan TetW) telah
dijelaskan (Stanton dan Humphrey, 2003). Selain itu, tet (P) penentu Clostridium
perfringens menentukan baik mekanisme perlindungan dan penghabisan ribosom dalam
tumpang tindih Unit genetik (Sloan et al., 1994).
Pengikatan obat dalam MLSK (macrolide-lincosamide- streptogramin-ketolide)
keluarga untuk 23S rRNA dipengaruhi oleh erm (eritromisin resistensi methylase atau
eritromisin ribosom metilasi) gen tertentu produk (Zhanel et al., 2001).
Mekanisme ini merupakan mekanisme resistensi makrolida dominan di Eropa dan
Afrika

Selatan.

Saat

ini,

ada

34

yang

berbeda

kelas

protein

Erm

(http:

//faculty.washington. edu / marilynr /), dan masing-masing fungsi dengan methylating

sebuah residu adenin tunggal dari E. coli 23S rRNA (pada posisi A2058). Hasil metilasi
dalam fenotipe MLSB, yang meliputi ketahanan terhadap 14-, 15-, dan 16-beranggota
makrolid, lincosamides, dan streptogramin B narkoba. Beberapa faktor penentu
resistensi diinduksi berikut paparan obat MLS, sedangkan yang lain konstitutif disintesis.
Dalam staphylococci, agen seperti eritromisin dan azitromisin menginduksi ekspresi erm,
tapi makrolid 16-beranggota tidak (Zhanel et al., 2001). Ekspresi erm konstitutif dalam
beberapa klinis dan strain laboratorium menganugerahkan perlawanan telitromisin
(Hisanaga et al., 2005).

Sulfonamide dan Trimethoprim Antibiotics

Kegiatan sulfonamida dan trimetoprim adalah juga dipengaruhi oleh gen yang
diperoleh menentukan enzim yang sensitif terhadap penghambatan obat. sul1 dan sul2
adalah penentu utama resistensi klinis untuk sulfonamide, sedangkan sul3 ditemukan
menjadi lazim pada hewan ternak (Perreten dan Boerlin, 2003).
Sebaliknya, lebih dari 20 faktor penentu resistensi trimetoprim (nomor kronologis
dari dfr1) didokumentasikan. Gen menentukan dihidropteroat sulfonamide-sensitif
Sintase hadir di kelas 1 integrons (sul1) atau plasmid (sul2), sedangkan varian dfr
(dengan dfr1 yang paling umum pada bakteri gram negatif) bergerak dari organisme

untuk organisme di kelas 1 dan 2 integrons. dfr1 hadir pada transposon TN7, sehingga
memfasilitasi integrasi ke dalam kromosom E. Coli (Skold, 2001).

Gambar 3. Antibiotik penghabisan Sistem Untuk mempermudah, ilustrasi

merupakan

gram

negatif

bakteri.

Beberapa

substrat

dari

AcrAB

(misalnya,

aminoglikosida) yang mungkin diakui oleh sebagian AcrB yang menghadapi sitoplasma
sementara yang lain (misalnya tetracycline) bermigrasi menyeluruh membran dalam ke
saku AcrB mengikat (s) (Murakami dan Yamaguchi, 2003). E. coli AcrAB-TolC dan sistem
penghabisan Tet adalah transporter sekunder bahwa gaya penggunaan proton motif (H
+) sementara Norma (Vibrio spp.) Adalah transporter sekunder yang mengeksploitasi
gradien ion natrium (Na +) untuk mendorong penghabisan (Li dan Nikaido, 2004). MacAB
adalah transporter utama yang menggunakan energi berasal dari hidrolisis ATP untuk
mendorong penghabisan (Li dan Nikaido, 2004). Sistem tunggal-komponen (misalnya,
norma, Tet) substrat transportasi melintasi membran dalam mana mereka kemudian
menyebar melalui porins (misalnya, OmpF) atau membran luar ke dalam media
ekstraseluler (Li dan Nikaido, 2004). Sistem multikomponen seperti AcrAB-TolC dan
MacAB-TolC mengarahkan transportasi substrat untuk media ekstraseluler. Singkatan:
LPS, lipopolisakarida; Ab, antibiotik; Tc, tetrasiklin; Mac, macrolide.

5. Mechanisme Molecular of Anticancer

Sebelumnya telah ditemukan bahwa polimer terkonjugasi untuk antikanker

neocarzinostatin protein, bernama smancs, akumulasi lebih dalam jaringan tumor
daripada neocarzinostatin. Untuk menentukan mekanisme umum akumulasi tumoritropic
smancs ini dan protein lain, di gunakan radioaktif (51Cr-label) protein dari berbagai
ukuran molekul (M, 12.000 untuk 160.000) dan properti lainnya. Selain itu, digunakan
pewarna-dikomplekskan albumin serum untuk memvisualisasikan akumulasi pada tumor
tumor-bearing tikus. Banyak protein semakin terakumulasi dalam jaringan tumor dari
tikus, dan rasio konsentrasi protein dalam tumor dalam darah 5 diperoleh dalam 19-72
jam. Sebuah protein besar seperti imunoglobulin G diperlukan waktu lebih lama untuk
mencapai nilai ini dari 5. rasio konsentrasi protein dalam tumor dengan yang di darah
tidak 1 atau 5 dicapai dengan neocarzinostatin, perwakilan dari kecil protein (M, 12.000)
di sepanjang waktu. Kami berspekulasi bahwa tumoritropic akumulasi protein ini
mengakibatkan karena hypervasculature itu, permeabilitas ditingkatkan untuk bahkan
makromolekul, dan sedikit pemulihan baik melalui pembuluh darah atau pembuluh
limfatik. Akumulasi makromolekul dalam tumor juga ditemukan setelah iv injeksi dari
kompleks albumin-dye (M, 69.000), serta setelah injeksi ke yang normal dan jaringan
tumor. Kompleks dipertahankan hanya oleh jaringan tumor untukwaktu yang lama. Ada
sedikit pemulihan limfatik makromolekul dari jaringan tumor. Temuan ini adalah nilai
potensial di makromolekul terapi tumor dan diagnosis (Ueda S, Basaki Y, Yoshie M, et
al, 2006).
Pengembangan obat-obat antikanker payudara dapat diarahkan target hormonal
dengan antiestrogen (Hilakivi-Clarke et al., 2004), penghambatan protein regulator positif
cell cycle dan checkpoint control seperti CycD (Hilakivi-Clarke et al., 2004), faktor
pertumbuhan dan growth factor signaling (Sledge and Miller, 2003), peningkatan ekspresi
protein proapoptosis seperti p53 dan Bax dan penghambatan protein anti-apoptosis
seperti Bcl-2 (Los et al., 2003), serta penghambatan faktor angiogenik seperti VEGF
(Cristofanilli and Hortobagyi, 2002).
Antibodi monoklonal yang dilambangkan dengan akhiran -mab ', Misalnya
trastuzumab untuk kanker payudara. Mereka biasanya membutuhkan intravena atau

subkutan administrasi. Antibodi ini diproduksi oleh teknologi DNA rekombinan dan dapat
terdiri dari manusia dan protein non-manusia, atau sebagian atau sepenuhnya
manusiawi. Antibodi chimeric lebih mungkin untuk menimbulkan reaksi hipersensitivitas
karena sudah ada kekebalan terhadap protein hewani asing. Antibodi monoklonal
menargetkan molekul permukaan sel, biasanya reseptor, atau ligan mereka. Mereka
mungkin mengerahkan efek mereka melalui gangguan dengan reseptor jalur atau melalui
mekanisme kekebalan tubuh seperti antibodi-bergantung sitotoksisitas seluler (Kareptis
dkk, 2008).

Molekul-molekul kecil biasanya memblokir jalur yang terus diaktifkan dalam selsel kanker. tirosin yang inhibitor kinase adalah yang paling umum dan bekerja dengan
menghambat kinase yang memfosforilasi protein kunci untuk mengaktifkan jalur
transduksi sinyal. Mereka dilambangkan dengan -nib akhiran, misalnya imatinib untuk
leukemia myeloid kronis, dan biasanya dikembangkan untuk pemberian oral. inhibitor ini
memblokir sejumlah tirosin kinase yang berbeda (Hanahan, 2011).
Kelas lain dari molekul kecil adalah inhibitor target mamalia dari rapamycin
(mTOR). Mereka memiliki -imus akhiran, misalnya everolimus untuk tumor neuroendokrin
pankreas atau temsirolimus karsinoma sel ginjal. Molekul-molekul ini mengikat ke protein
intraseluler (FKBP-12). Kompleks ini kemudian blok aktivitas mTOR kinase yang
menghambat angiogenesis dan pertumbuhan sel tumor, proliferasi dan kelangsungan
hidup.

Gambar 3. Mekanisme kerja obat antikanker

Mekanisme penghambatan pertumbuhan sel kanker adalah oleh golongan

alkilator secara umum adalah membentuk ion karbonium (alkil) yang sangat reaktif,
kemudian gugus alkil ini akan berikatan kovalen silang pada konstituen sel yang
nukleofilik. N7 dari guanin adalah nukleofilik kuat sehingga guanin merupakan basa purin
utama yang teralkilasi. Guanin biasanya terdapat dalam tautomer keto dan dapat
berikatan dengan sitosin, namun karena posisi N7 pada guanine teralkilasi, maka akan
terbentuk tautomer enol. Sehingga menyebabkan terjadinya pasangan basa yang
abnormal yaitu basa guanine berpasangan dengan basa Timin, dan terjadi miscoding
(Kosaka dkk, 2004).
Alkilasi juga menyebabkan labilnya cincin imidazo sehingga cincin tersebut dapat
terbuka ketika masih merupakan bagian DNA ataupun keluarnya residu guanin dari rantai
DNA. Hal ini menyebabkan ketidakstabilan dan pemecahan DNA. Pada akhirnya akan
terjadi cross link/ikatan silang (terjadi perubahan konformasi DNA), misalnya dapat terjadi
ikatan antara dua guanin sehingga menghambat pemisahan rantai komplemen DNA dan
replikasi DNA tidak terjadi, sehingga sintesis RNA dan protein tidak terjadi sehingga
dapat mengakibatkan matinya sel kanker. Cara kerja ini mirip dengan radiasi sehingga
disebut radiomimetik (Cunnigham et al, 2014).

Menurut capuzzo dkk (2005) Alkilator sebagai antikanker pada siklus sel dibagi ke
dalam beberapa sub golongan, yaitu:
1. Nitrogen Mustard
Nitrogen mustard berikatan dengan residu guanin dari DNA sehingga terjadilah
perubahan afinitas gugus pada DNA (dari sitosin ke timin), depurinasi akibat kerusakan
DNA mungkin juga terjadi. Senyawa pengalkil yang bifungsional dapat berikatan secara
kovalen dengan 2 gugus (residu guanin) asam nukleat pada untaian yang berbeda,
terjadilah ikatan silang (cross linking) sehingga terjadi kerusakan pada fungsi DNA.
Contohnya :

Siklofosfamid
Merupakan pro drug dengan metabolit berupa 4-hidroksisiklofosfamid dan

aldofosfamid yang merupakan obat aktif. Aldofosfamid selanjutnya mengalami

perubahan non enzimatik menjadi fosfaramid, akrolein, sitoksilamin, dan sitoksil alcohol.
Mekanisme aksi agen sitotoksik mengadakan alkilasi terhadap rantai DNA yang
menyebabkan cross link dan putusnya rantai (Capuzzo, 2005).
Kombinasi kemoterapi yang termasuk agen alkylating dan koordinasi platinum
kompleks memiliki tingkat respon tinggi pada wanita dengan kanker ovarium. Kombinasi
tersebut memberikan jangka panjang pengendalian penyakit di beberapa pasien. Kami
membandingkan dua kombinasi, cisplatin dan siklofosfamid dan cisplatin dan paclitaxel,
pada wanita dengan kanker ovarium. Metode digunakan secara acak kepada 410 wanita
dengan kanker ovarium dan massa lebih besar dari sisa 1 cm setelah operasi awal untuk
menerima cisplatin (75 mg) dengan baik cyclophosphamide (750 mg) atau paclitaxel (135
mg selama 24 jam). Hasil. Tiga ratus delapan puluh enam wanita bertemu semua kriteria
kelayakan. Faktor prognostik dikenal adalah serupa dalam dua kelompok perlakuan.
Alopecia, neutropenia, demam, dan reaksi alergi dilaporkan lebih sering dalam kelompok
cisplatin-paclitaxel. Di antara 216 perempuan dengan penyakit terukur, 73 persen di
cisplatin-paclitaxel Kelompok menanggapi terapi, dibandingkan dengan 60 persen dalam
kelompok cisplatin-siklofosfamid. Itu frekuensi respon lengkap pembedahan diverifikasi
adalahserupa pada kedua kelompok. Kelangsungan hidup bebas perkembangan itu
signifikan lebih lama di cisplatin-paclitaxel kelompok dibandingkan kelompok cisplatin-

siklofosfamid (median, 18 vs 13 bulan). Kelangsungan hidup juga secara signifikan lagi

pada kelompok cisplatin-paclitaxel (median, 38 vs 24 bulan) (William, dkk 1996).

Klorambusil
Mekanisme aksi mengalkilasi rantai DNA sehingga terjadi cross link DNA. Obat ini

merupakan mustar nitrogen yang paling rendah toksisitasnya dan paling lambat aksinya
(Capuzzo, 2005).
Klorambusil adalah mustard nitrogen yang biasa digunakan dalam kemoterapi
kanker. Penelitian dilakukan dalam dua tahap. Pada tahap klorambusil pertama
suspensed menjadi minyak wijen dan kemudian diberikan secara oral kepada tikus pada
dosis 20 mg / kg bb untuk mouse, Sementara di tahap kedua, dosis yang diberikan
kepada tikus itu 10 mg / kg bb dan diberikan hanya sekali. Dosis yang diberikan pada
tanggal 10, 11, 12 dan hari ke-13 kehamilan. Pengamatan efek dilakukan pada hari-hari
18 kehamilan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa tikus yang mati pada dosis 10 dan
20 mg / kg bb yang disebabkan oleh resorbsions janin yang jelas dan efek fetoxic
dibandingkan dengan kontrol perawatan. Pada dosis 10 mg / kg bb janin menunjukkan
morfologi aneh, yaitu pengembangan skelets janin aneh. Berdasarkan temuan kami
menyimpulkan bahwa klorambusil memiliki efek fetotoksik dan terratogenic ke dewasa
tikus janin (Johanes, 2005).

Melfalan
Merupakan mustar nitrogen dari fenilananin, dikenal juga sebagai L-sarkolisina..

Mekanisme aksi: mengalkilasi pada sekuen 5-GGC yang menyebabkan cross link DNA
(Capuzzo, 2005).

Mustine
Mekanisme aksi mengalkilasi rantai DNA sehingga terjadi cross link DNA.

Chlormethine (INN, BAN), Mechlorethamine (banyak digunakan di Amerika Serikat,

bukan USAN, namun) juga dikenal sebagai mustine dan HN2 dan di Uni Soviet dikenal
sebagai Embichin adalah mustard nitrogen dijual di bawah nama merek Mustargen. Ini
adalah prototipe agen alkylating, kelompok obat kemoterapi antikanker. Ia bekerja
dengan mengikat DNA, silang dua helai dan mencegah duplikasi sel. Ini mengikat
nitrogen N7 pada guanin basa DNA.

2. Kloretilamin
Dapat membentuk ion imonium yang bereaksi dengan bagian aktif asam nukleat,
dapat juga terbentuk ion karbonium yang bereaksi dengan bagian aktif asam nukleat
(DNA). Telah diderivatisasi ke estramustine analog estrogen, yang digunakan untuk
mengobati kanker prostat. Hal ini juga dapat digunakan dalam perang kimia di mana ia
memiliki kode-nama HN2. Kimia ini adalah bentuk gas mustard nitrogen dan
menyebabkan

bengkak

kuat.

Secara

historis,

beberapa

penggunaan

dari

Mechlorethamine telah mencantumkan keganasan limfoid seperti penyakit Hodgkin,

lymphosarcoma, leukemia mielositik kronis, polisitemia vera, dan karsinoma bronkogenik
Mechlorethamine sering intravena, tetapi ketika ditambah menjadi formulasi topikal juga
dapat digunakan untuk mengobati penyakit kulit. Ada penelitian yang menunjukkan
bahwa pemberian topikal dari Mechlorethamine memiliki khasiat dalam mikosis
fungoides-jenis kulit limfoma sel T Penggunaan penting dari chlormethine adalah dalam
sintesis meperidine (alias petidin, Demerol).

Epoksid
Membentuk ion karbonium dengan bagian nukleofilik pada asam ribonukleat (A-)

akan membentuk ikatan kovalen (Capuzzo, 2005).

Etilenimin
Etilenimin memiliki mekanisme aksi seperti mustard nitrogen. Contoh dari obat
kelompok

ini

adalah

trietilenatiofosforamida

(tiotepa).

dan

trietilenamelamina

(TEM/tretamine) (Bates dan Fojo, 2005).

Alkil Sulfonat
Mekanisme kerja dari ester asam sulfonat berlangsung disebabkan oleh hidrolisis
yang mengalami terjadi pemisahan O-R dan gugus alkil (R) ditransfer ke substrat. Yang
termasuk kelompok ini adalah busulfan (myleran) dan dimetil myleran (Bates dan Fojo,
2005).
Nitrosourea
Lipofilitas tinggi, dapat menembus Blood Brain Barrier, biasa digunakan untuk
tumor otak. Mekanisme aksi membentuk ikatan silang (cross link) pada DNA. Contohnya:
Karmustin dan Lomustin (Bates dan Fojo, 2005).

3. Metilhidrazin

Prokarbazin Merupakan turunan metilhidrazin yang bekerja sebagai antikanker

non-spesifik pada siklus sel. Mekanisme aksi belum jelas diketahui, tetapi diduga
mengalkilasi asam nukleat, namun obat ini dapat menghambat sintesis DNA, RNA, dan
protein, memperlama interfase, dan menyebabkan kromosom rusak. Metabolisme
oksidatif dari obat ini oleh enzim mikrosomal menghasilkan azokarbazine dan H 2O2 yang
menyebabkan terputusnya rantai DNA (Hirata et al, 2005).

Dakarbazin Diaktifkan dahulu oleh metabolisme oleh enzim mikrosomal hati

menjadi diazomethane yang memiliki metal karbonium yang bersifat sitotoksik.

Mekanisme aksinya dengan memetilasi sel kanker. Dakarbazin dapat membunuh sel
pada semua fase.
4. Platinum

Sisplatin Merupakan metal inorganic yang mampu membunuh sel pada semua
siklus pertumbuhannya. Mekanisme aksi : menghambat biosintesis DNA dan
berikatan dengan DNA membentuk ikatan silang (crosslink)

Karboplatin Merupakan analog platinum generasi kedua. Mekanisme aksi :

menghambat bosintesis DNA dan berikatan dengan DNA membentuk ikatan
silang (crosslink)

Oksaliplatin Merupakan analog platinum generasi ketiga. Mekanisme aksi :

mengikat DNA sehinga DNA berubah bentuk

5. Merkaptopurin
Menghambat sejumlah enzim interkonversi purin. Merkaptopurin merupakan
inhibitor kompetitif dari enzim yang menggunakan senyawa purin sebagai substrat. Suatu
alternative lain dari mekanisme kerjanya ialah dengan pembentukan 6-metil
merkaptopurin (MMPR) yang menghambat biosintesis purin, sehingga sintesis RNA,
CoA, ATP, dan DNA dihambat. 6-metil merkaptopurin (6-MP, puritenol) merupakan
substrat dari hipoxanthin guanine fosforibosil transferase (HGPRT). Di dalam tubuh akan

mengalami konversi menjadi 6-tioguanin-5-monofosfat (6-tionosin-5-monofosfat (T-IMP).

T-IMP menghambat sintesis basa purin. Pembentukan ribosil-5-monofosfat dan konversi
IMP menjadi adenine juga dihambat (Bates dan Fojo, 2005).
6. Tioguanin.
Menghambat interkonversi nukleotida purin, penurunan sintesis guanine
intraselular, mengganggu pembentukan sintesis DNA dan RNA. 6-tioguanin merupakan
substrat dari hipoxanthin guanine fosforibosil transferase (HGPRT). Di dalam tubuh akan
mengalami konversi menjadi 6-tioguanin-5-monofosfat (6-tionosin-5-monofosfat (T-IMP).
T-IMP menghambat sintesis basa purin. Pembentukan ribosil-5-monofosfat dan konversi
IMP menjadi adenine juga dihambat (Baker dkk, 2002).
Golongan gen yang lain, gen supresor tumor, dapat dihilangkan atau dirusak, yang
menyebabkan perubahan neoplastis. Sebuah gen tunggal dari golongan ini, yaitu gen
p53, telah terbukti mengalami mutasi dari gen supresor tumor menjadi onkogen
disejumlah besar kasus-kasus tumor manusia, termasuk hati, payudara, kolon, pary,
serviks, kandung kemih, prostat dan kulit. Bentuk liar yang normal pada gen ini
tampaknya berperan penting dalam mensupresi transformasi neoplastis: mutasi
membuat sel beresiko tinggi ini mengalami transformasi (Harris et al, 1993).

Gambar 4. Mekanisme molekuler terjadinya apotesis

Mekanisme apoptosis yang dipacu oleh adanya kerusakan DNA atau stres sel,
sinyal ini diteruskan protein Bax ke mitokondria sehingga menyebabkan lepasnya
sitokrom c, dilanjutkan dengan aktifasi jalur caspase. Proses ini dihambat oleh Bcl-2 dan
IAPs (Pecorino, 2005).

Gambar 5. Mekanisme molekuler terjadinya apotesis

Apoptosis terjadi melalui dua jalur yaitu ektrinsik dan instrinsik. Jalur ekstrinsik
distimulasi oleh FAS Death Receptor, jalur intrinsikdistimulasi oleh pelepasan
cytochrome-c oleh mitokondria. Hampir semua obat anti kanker yang di gunakan
sekarang, dikembangkan dengan penyaringan yang dirancang untuk mengidentifikasi
bahan yang secara selektif membunuh tumor. Hubungan antara apoptosis dengan
terjadinya kanker memberikan ide penelitian tentang target dan mekanisme farmakologi
obat-obat anti kanker. Suatu obat anti kanker yang poten untuk menginduksi dan
mengaktifkan apoptosis dapat menghindari bayaknya efek samping yang tidak
diharapkan karena pelepasan material-material sampah akibat nekrosis sel, dan
mengurangi kerusakan sel-sel normal yang disebabkanan oleh kemoterapi. Proses
apoptosis juga dapat digunakan untuk mengevaluasi toksistas obat. Gangguan dan
mutasi gen pada program apoptosis dapat mengurangi sensitivitas terapi dan
menyebabkan resistensi obat (Pecarino, 2005).

DAFTAR PUSTAKA

Albertson, D.G. (2006). Gene amplification in cancer. Trends Genet. 22, 447455.
Baker CH, Kedar D, McCartyMF, et al. Blockade of epidermal growth factor receptor
signaling on tumor cells and tumor-associated endothelial cells for therapy of
human carcinomas. Am J Pathol 2002;161: 929^38.
Barber, M. (1947). Staphylococci infection due to penicillin-resistant strains. BMJ 2, 863
865.
Barber, M. (1961). Methicillin-resistant staphylococci. J. Clin. Pathol. 14, 38539.
Bates E, FojoT. Epidermal growth factor receptor inhibitors: a moving target? Clin Cancer
Res 2005;11: 7203 ^ 5.
Campbell, A. Neil., et. al. 2008. Biologi Edisi 8, Jilid I . Penerbit Erlangga. Jakarta
Cappuzzo F, Hirsch FR, Rossi E, et al. Epidermal growth factor receptor gene and protein
and gefitinib sensitivity in non-small-cell lung cancer. JNatl Cancer Inst
2005;97:643^55.
Courvalin, P. (2006). Vancomycin resistance in gram-positive cocci. Clin. Infect. Dis. 42
(Suppl 1), S25S34.
CunninghamD, HumbletY, Siena S, et al. Cetuximab monotherapy and cetuximab plusiri
notecan in irinotecan- refractory metastatic colorectal cancer. N Engl J Med
2004;351:337^45.
DCosta, V.M., McGrann, K.M., Hughes, D.W., and Wright, G.D. (2006). Sampling the
antibiotic resistome. Science 311, 374377.
Drlica, K., and Malik, M. (2003). Fluoroquinolones: action and resistance. Curr. Top. Med.
Chem. 3, 249282.
Friedman, L., Alder, J.D., and Silverman, J.A. (2006). Genetic changes that correlate with
reduced susceptibility to daptomycin in Staphylococcus aureus. Antimicrob.
Agents Chemother. 50, 21372145.
Fuda, C.C., Fisher, J.F., and Mobashery, S. (2005). Beta-lactam resistance in
Staphylococcus aureus: the adaptive resistance of a plastic genome. Cell. Mol.
Life Sci. 62, 26172633.

Hartwell, L. H., Hood, L., Goldberg, M. L., Reynolds, A. E., Silver, L. M. 2011. Genetics,
From Genes to Genomes. Fourth Edition. The McGraw-Hill Companies, Inc. New
York.
Hayden, M.K., Rezai, K., Hayes, R.A., Lolans, K., Quinn, J.P., and Weinstein, R.A.
(2005). Development of daptomycin resistance in vivo in methicillin-resistant
Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol. 43, 52855287.
Jacoby, G.A., and Munoz-Price, L.S. (2005). The new beta-lactamases. N. Engl. J. Med.
352, 380391.
Kosaka T, Yatabe Y, Endoh H, Kuwano H, Takahashi T, Mitsudomi T. Mutations of
epidermal growth factor receptor gene in lung cancer: biological and clinical
implications. Cancer Res 2004;64: 8919^23.
Levy, S.B. (1992). Active efflux mechanisms for antimicrobial resistance.Antimicrob.
Agents Chemother. 36, 695703.
Levy, S.B. (2002). The Antibiotic Paradox: How the Misuse of Antibiotics Destroys Their
Curative Powers (Cambridge, MA: Perseus Publishing).
Levy, S.B., and Marshall, B. (2004). Antibacterial resistance worldwide: causes,
challenges and responses. Nat. Med. 10, S122S129.
Levy, S.B., Fitzgerald, G.B., and Macone, A.B. (1976). Spread of antibiotic-resistance
plasmids from chicken to chicken and from chicken to man. Nature 260, 4042.
Li, X.Z., and Nikaido, H. (2004). Efflux-mediated drug resistance in bacteria. Drugs 64,
159204.
Martinez-Martinez, L., Pascual, A., and Jacoby, G.A. (1998). Quinolone resistance from
a transferable plasmid. Lancet 351, 797799. Mazel, D. (2006). Integrons: agents
of bacterial evolution. Nat. Rev. Microbiol. 4, 608620.
Matsuoka, M., and Sasaki, T. (2004). Inactivation of macrolides by producers and
pathogens. Curr. Drug Targets Infect. Disord. 4,217240.
Matthews, P.R., and Stewart, P.R. (1988). Amplification of a section of chromosomal DNA
in

methicillin-resistant

Staphylococcus

aureus

following

growth

concentrations of methicillin. J. Gen. Microbiol. 134, 14551464.

in

high

Meka, V.G., and Gold, H.S. (2004). Antimicrobial resistance to linezolid. Clin. Infect. Dis.
39, 10101015.
Miller, L.G., Perdreau-Remington, F., Rieg, G., Mehdi, S., Perlroth, J., Bayer, A.S., Tang,
A.W., Phung, T.O., and Spellberg, B. (2005). Necrotizing fasciitis caused by
community-associated methicillinresistant Staphylococcus aureus in Los Angeles.
N. Engl. J. Med. 352, 14451453.
Moore, I.F., Hughes, D.W., and Wright, G.D. (2005). Tigecycline is modified by the flavindependent monooxygenase TetX. Biochemistry 44, 1182911835.
Nicoloff, H., Perreten, V., McMurry, L.M., and Levy, S.B. (2006). Role for tandem
duplication and lon protease in AcrAB-TolC- dependent multiple antibiotic
resistance (Mar) in an Escherichia coli mutant without mutations in marRAB or
acrRAB. J. Bacteriol. 188, 44134423.
Ono M, Hirata A, Kometani T, et al. Sensitivity to gefitinib (Iressa, ZD1839) in non-small
cell lung cancer cell linesco rrelates with dependence on the epidermal growth
factor (EGF) receptor/extracellular signal-regulated kinase 1/2 and EGF
receptor/Akt pathway for proliferation. Mol Cancer Ther 2004;3: 465^72.
Perreten, V., and Boerlin, P. (2003). A new sulfonamide resistance gene (sul3) in
Escherichia coli is widespread in the pig population of Switzerland. Antimicrob.
Agents Chemother. 47, 11691172.
Poirel, L., Lambert, T., Turkoglu, S., Ronco, E., Gaillard, J., and Nordmann, P. (2001).
Characterization of Class 1 integrons from Pseudomonas aeruginosa that contain
the bla(VIM-2) carbapenemhydrolyzing beta-lactamase gene and of two novel
aminoglycoside resistance gene cassettes. Antimicrob. Agents Chemother. 45,
546552.
Sapunaric, F.M., Aldema-Ramos, M., and McMurry, L.M. (2005). Tetracycline resistance:
efflux, mutation, and other mechanisms. In Frontiers in Antimicrobial Resistance:
A Tribute to Stuart B. Levy, D.G. White, M.N. Alekshun, and P.F. McDermott, eds.
(Washington, DC: ASM Press), pp. 3-18.

Schwarz, S., Kehrenberg, C., Doublet, B., and Cloeckaert, A. (2004). Molecular basis of
bacterial resistance to chloramphenicol and florfenicol. FEMS Microbiol. Rev. 28,
519542.
Sharma, S.K., and Mohan, A. (2006). Multidrug-resistant tuberculosis: A menace that
threatens to destabilize tuberculosis control. Chest 130, 261272.
Skold, O. (2001). Resistance to trimethoprim and sulfonamides. Vet. Res. 32, 261273.
Tait-Kamradt, A., Davies, T., Appelbaum, P.C., Depardieu, F., Courvalin, P., Petitpas, J.,
Wondrack, L., Walker, A., Jacobs, M.R., and Sutcliffe, J. (2000). Two new
mechanisms of macrolide resistance in clinical strains of Streptococcus pneumoniae
from Eastern Europe and North America. Antimicrob. Agents Chemother. 44, 3395
3401.
Ueda S, Basaki Y, Yoshie M, et al. PTEN/Akt signaling through epidermal growth factor
receptor is prerequisite for angiogenesis by hepatocellular carcinoma cellstha t is
susceptible to inhibition by gefitinib. Cancer Res2 006;66:5346^53.
Wilson, P., Andrews, J.A., Charlesworth, R., Walesby, R., Singer, M., Farrell, D.J., and
Robbins, M. (2003). Linezolid resistance in clinical isolates of Staphylococcus
aureus. J. Antimicrob. Chemother. 51, 186188.

Penyimpanan Energi dalam Senyawa Organik

1. Penyimpanan Energi Dalam Anhidrida (ATP)
ATP (adenosin trifosfat) merupakan suatu senyawaan anhidirida yang akan
melepaskan energi bila melepaskan gugus fosfat anorganik (Pi) dan membentuk ADP
(adenosin difosfat). Sintesis ATP dikatalisis oleh suatu enzim yang berotasi di dalam
membran dalam mitokondria pada hewan, membran tilakoid kloroplas pada tumbuhan,
dan membran plasma bakteri. Enzim ini disebut F1Fo-ATPase atau ATP sintase.
Efektivitas pembentukan ATP ditentukan oleh banyaknya subunit C (N) yang terdapat
pada rotor enzim ATP sintase. Semakin banyak subunit maka semakin banyak ATP yang
akan dihasilkan. Bakteri memiliki subunit paling sedikit, sehingga sel bakteri
memproduksi ATP lebih sedikit. Bakteri Escherichia coli memiliki delapan jenis subunit
yang berbeda dalam stoikiometri 33ab2c10. Enzim ATP sintase memiliki dua sektor
fungsional, yaitu F1 33 yang merupakan sisi untuk sintesis dan hidrolisis ATP dan Fo
ab2c10 yang merupakan pompa proton melalui membran. Secara mekanik, c10 adalah
subunit rotor dan komponen lainnya adalah stator (Ishmukhametov et al. 2008).
Pada E. coli, perpindahan proton melalui Fo meyebabkan rotasi subunit oligomer c
relatif terhadap subunit a yang akan membentuk lapisan antarmuka. Interaksi antara
subunit a dan subunit oligomer c penting untuk kopling translokasi proton untuk
pergerakan berputar enzim ATP sintase. Rotasi terus-menerus dan elongasi subunit
asimetri menyebabkan perubahan konformasi pada sisi ikatan nukleotida dalam F1
yang diperlukan untuk sintesis ATP. Sel melepaskan H+ ke luar sel dan menyebabkan
terjadinya gradien proton. Gradien proton disebabkan karena konsentrasi H+ di dalam
dan di luar sel berbeda. Gradien proton akan menggerakan rotor pada enzim ATP sintase
sehingga mengubah ADP dan Pi menjadi ATP. Tanpa keberadaan gradien proton,
hidrolisis ATP akan menyebabkan translokasi proton (Ishmukhametov et al. 2008).
Sintesis ATP dari ADP dan Pi menggunakan energi yang berasal dari perbedaan
potensial proton elektrokimia transmembran. Kinetika enzim didasarkan pada teori
perubahan ikatan yang menjelaskan kooperativitas dari tiga sisi katalitik oleh rotasi

subunit dengan 33. Mekanisme kopling antara pompa proton dan ATP sintase dapat
diamati dengan mengisolasi, memurnikan, dan rekonstruksi cairan liposom. Sistem
rekonstruksi ini berlangsung dengan konstanta laju yang tinggi hingga 200 s -1 dengan
respons perubahan pH dan perubahan yang digenerasi dalam transisi asam basa yang
telah dilaporkan sebelumnya. Jumlah kerja biokimia, struktural, dan fungsional yang
besar telah diangkut oleh bagian F1 enzim ATP sintase mitokondria. Akan tetapi, kopling
antara pompa proton dan ATP sintase belum banyak dipelajari. Sintesis ATP dari partikel
submitokondrial sapi dipicu oleh transisi asam-basa telah dilaporkan dan dari nilai TON
(turnover number) dalam orde 50 s-1 dapat dikalkulasi di bawah asumsi bahwa sintesis
ATP merepresentasikan 10% dari total protein. Beberapa prosedur isolasi bagian F 1
enzim ATP sintase mitokondria telah dilaporkan dan setelah direkonstitusi ke dalam studi
fungsional liposom menyatakan bahwa enzim tersebut muncul dan mampu untuk
menghidrolisis ATP untuk menyediakan energi membran oleh transpor proton dan untuk
mengkatalisis perubahan ATP-Pi (Frster et al. 2010).
Untuk menghasilkan aktivitas sintesis ATP yang tinggi, beberapa masalah harus
diselesaikan, seperti enzim ATP sintase mitokondria harus lebih kompleks daripada
enzim bakteri yang mirip dan enzim kloroplas, terdapat 20 subunit yang berbeda dan
dimungkinkan sebuah subunit penting hilang selama prosedur isolasi dan rekonstruksi.
Enzim ATP sintase mitokondria mampu membentuk kompleks supramolekular dan studi
mikroskopi elektron, kedua kompleks enzim ATP sintase mitokondria yang dapat larut
dalam deterjen dan membran mitokondria menyatakan penataan bersudut dari monomer
dalam dimer dan gabungan mirip pita dalam oligomer orde tinggi. Mitokondria FoF1
menentukan lekukan pada membran dalam mitokondria dan menghasilkan invaginasi
yang telah diusulkan berfungsi sebagai penjebak proton yang meningkatkan efisiensi
sintesis ATP. Namun, signifikansi fungsional oligomerisasi mitokondria FoF1 belum
dipahami sepenuhnya, tidak diketahui khususnya jika pembentukan monomer memenuhi
aktivitas yang tinggi. Purifikasi mitokondria FoF1 dengan misel deterjen harus
direkonstitusi ke dalam liposom yang dibentuk aktif secara fungsional. Kondisi optimal
untuk mengukur aktivitas yang tinggi harus ditetapkan. Akhir-akhir ini struktur kristal

pertama F1 dengan ikatan fosfat dalam sisi katalitiknya telah dilaporkan (Frster et al.
2010).
ATP sintase enzim kunci yang ada dimana-mana dalam metabolisme energi pada
semua sel hidup. Enzim menggunakan energi yang tersimpan dalam perbedaan
potensial elektrokimia transmembran dari ion kopling untuk produksi ATP. ATP sintase
bakteri disusun oleh sektor yang menempel pada membran dengan suatu subunit dan
bagian F1 yang bersifat hidrofilik dan mengikat subunit yang lain. Dalam enzim ATP
sintase mitokondria terdapat beberapa subunit periferal yang ditemukan sebagai
tambahan delapan subunit utama yang juga terdapat pada bakteri. Aliran air, dalam
kasus paling banyak adalah proton, melalui rotasi subunit oligomer cincin karbon yang
juga terjadi bersamaan dengan rotasi subunit dan dalam heksamer F1. Rotasi subunit
-lah yang memicu terjadinya sintesis ATP. Ketika struktur dasar dari ATP sintase dan
mekanismenya dalam rotasi katalis secara jelas terpelihara melalui tiga kerajaan dalam
hidup. ATP sintase dari organisme tertentu menunjukkan sifat tertentu yang menunjukkan
adanya adaptasi terhadap lingkungan yang spesifik. Sebagai contoh, ATP sintase dari
organisme yang dapat berfotosintesis membawa sekuens berupa 35 asam amino yang
dimasukkan dalam subunit yang mengizinkan regulasi redoks, mengatur aktivitas enzim
menjadi intensitas cahaya yang tersedia (Lu et al. 2014). Perbedaan subunit pada bakteri
standar, manusia, dan mikobakteri ditunjukkan pada Gambar 1.

Gambar 1 Komposisi subunit pada enzim ATP sintase yaitu pada bakteri E. coli (A),
mitokondria manusia (B), dan mikobakteri (C) (Lu et al. 2014)

ATP sintase pada bakteri termoalkalifili menunjukkan konversi residu basa dalam
subunit a, memfasilitasi penangkapan dan aliran proton di bawah kondisi basa. Sintesis
ATP dalam bakteri patogen memiliki kondisi pengecualian misalnya beberapa jenis
patogen membutuhkan kondisi energi rendah seperti tensi oksigen yang rendah atau
nutrisi yang terbatas. Beberapa strain mikobakterial melakukan metabolismenya dengan
memasuki kondisi yang disebut kondisi dorman. Bila dalam kondisi dorman proses
replikasi bakteri terhenti, ketebalan dinding sel akan meningkat, sintesis protein dan asam
nukleat secara signifikan kurang teregulasi, dan metabolisme lipid muncul sebagai
sumber energi primer. Kondisi dorman mikobakterial menunjukkan ketahanan hidup yang
sangat rendah, maka sering digunakan sebagai antibakteri. Spektrum antibakteri bekerja
dengan memblok metabolisme energi. Penelitian selanjutnya dibutuhkan untuk
meningkatkan wawasan mengenai ATP sintase dalam mikobakteri yang agak
menyimpang. Strategi purifikasi dan mutagenesis dibutuhkan untuk mengembangkan
pencirian protein ini yang diisolasi dari sekuens asam amino yang tidak biasa untuk
mengkhususkan fungsi atau adaptasinya (Lu et al. 2014).
Sintesis ATP pada respirasi glikolitik aerobik yang disebut sebagai efek Warburg,
memicu reduksi aktivitas fosforilasi oksidatif, mengurangi efisiensi atau memboroskan
gradien

proton

elektrokimia

transmembran

sehingga

meningkatkan

potensial

transmembran. Agen pemicu spesi oksigen reaktif (ROS) mentargetkan mitokondria

membentuk konjugasi dengan kation lipofilik yang diakumulasi dalam matriks mitokondria
berdasarkan hukum Nerst. ROS menyebabkan perubahan struktur dan sifat enzimatik
protein dan mendegradasi membran menjadi lipid peroksidasi. Pengembangannya
muncul sebagai kelas mitokan yang menjanjikan seperti agen antikanker yang bekerja
pada mitokondria dan mendestabilkannya (Sassi et al. 2014).
Ca2+ adalah pengantar pesan utama kedua yang memodulasi banyak fungsi
fisiologis sel. Kalsium dan ROS terhubung oleh interaksi resiprokal karena proses
generasi ROS dan menyebabkan ROS berdampak pada homeostasis ion Ca 2+. Stress
oksidatif baik akut maupun kronik dapat menghasilkan inhibisi atau penurunan regulasi
atau modulasi membran plasma Ca2+ATPase, Ca2+ATPase retikular, penukar kation
Na2+/Ca2+, dan komponen lain dari mesin homeostasis Ca2+. Berdasarkan level ROS,

efek-efek ini mungkin dimediasi oleh aksi kinase yang sensitif terhadap reaksi redoks
oleh modifikasi langsung pompa dan transporter, atau keduanya. Resveratrol kemudian
diketahui berikatan dengan bagian F1 dari ATP sintase mitokondria yang menginhibisi
enzim tersebut. Ke depannya dilakukan pemfokusan terhadap level Ca 2+ dan
fungsionalitas ATPase dalam respirasi dan produksi ROS (Sassi et al. 2014).
ATP sintase mitokondria merupakan penyedia utama dalam sel respirasi, harus
diregulasi dalam jumlah dan aktivitas tertentu untuk merespon berbagai permintaan ATP
oleh sel. Ada 80 inhibitor protein kinase yang dipayar dan telah dipilih target inhibisi
protein kinase. Ditemukan bahwa sel HeLa diperlakukan dengan empat inhibitor
memperlihatkan penurunan aktivitas sintesis ATP mitokondria. Dalam sel mamalia di
bawah kondisi aerobik, ATP sintase mitokondria memproduksi ATP sel paling banyak
dengan proses yang didasarkan oleh gaya gerak proton yang dibangun oleh kompleks
respirator. Jumlah dan aktivitas ATP sintase dalam sel harus diatur dalam respons ke
perubahan tingkat energi sel, tetapi sistem regulasi belum banyak diketahui (Sugawara
et al. 2013).
ATP dibutuhkan untuk pertumbuhan dan pengembangan yang menghalangi proses
produksi anaerobik. Asimilasi urea ATP independen akan menghasilkan net rendemen
ATP 1 mol per mol alanina, yang ekuivalen ke rendemen ATP dari fermentasi alkohol.
Asimilasi nitrogen merepresentasikan langkah pertama peningkatan efisiensi produksi
energi (Milne et al. 2015).
Baru-baru ini pengembangan sistem regulasi

protein kinase dalam fosforilasi

oksidatif mitokondria telah diketahui. Salah satu subunit kompleks respirator oleh protein
kinase A (PKA) dibutuhkan dalam mitokondria, yaitu subunit d ATP sintase difosforilasi
oleh faktor penstimulasi pertumbuhan. Dalam studi belakangan ini diadopsi suatu
pengembangan terbaru dalam asai high-throughput microplate untuk sintesis ATP
mitokondria.Dari metode pemayaran terhadap aktivitas sintesis ATP mitokondria,
diidentifikasi terdapat empat protein kinase (PKA, PKCd, CaMKII, dan smMLCK) yang
berkontribusi dalam regulasi aktivitas sintesis ATP mitokondria. PKA menon-aktifkan
protein yang memfasilitasi proses fisi menggunakan fosforilasi, memicu elongasi

mitokondria dan level ATP selama starvasi. Penelitian selanjutnya diperlukan untuk
menyelidiki mekanisme yang terjadi antara protein-protein kinase tersebut dalam
meregulasi populasi enzim ATP sintase mitokondria (Sugawara et al. 2013).
Pelepasan ATP dipolarisasi dalam normoksia dan hipoksia, meningkatkan
mekanisme yang menstimulasi induksi hipoksia pelepasan ATP dipolarisasi, atau
pelepasan ATP itu sendiri. Sejak ionofor Ca2+ membangkitkan lipatan-30 yang
meningkatkan pelepasan ATP dari permukaan apikal, tetapi hanya sekitar 20 persen
peningkatannya dari permukaan basolateral. Maka diusulkan vesikel berkualitas untuk
melepaskan ATP yang lebih disukai berlokasi dekat dengan permukaan apikal dan
memicu pembongkaran ATP oleh peningkatan Ca2+(Lim Toet al. 2015).
Hasil menunjukkan bahwa hipoksia akut adalah stimulus atau perangsang yang
efektif untuk pelepasan ATP dari HUVEC primer, secara utama dari permukaan apikal
seperti melalui aliran darah secara in vivo. Kemudian ditunjukkan bahwa ATP dilepaskan
dari vesikel yang berlokasi pada permukaan apikal, oleh eksositosis, termasuk
peningkatan Ca2+dan bergantung pada PI3K dan sinyal ROCK. Kemampuan ATP untuk
dikenali pada reseptor P2 meningkatkan Ca2+ yang diinhibisi oleh hipoksia, menyarankan
pelepasan ATP yang ditumpulkan oleh hipoksia. Maka disarankan untuk pelepasan ATP
dalam konsentrasi yang cukup dari HUVEC selama hipoksia untuk menstimulasi reseptor
P2Y untuk meningkatkan sintesis NO dan PGI2 (Lim Toet al. 2015).
Pelepasan ATP juga dapat diaktivasi oleh reseptor purinergik yang akan
melepaskan ATP ekstraselular (eATP) dari sel yang sakit dan diimplikasi lewat
patogenesis dari banyak kelainan neuronal. Reseptor P2X7, merupakan reseptor
purinergik selektif ion, yang berasosiasi dengan pengaktivan sinyal mikroglial parakrin.
Ditemukan bahwa level ATP ekstraselularditingkatkan oleh cairan cerebrospinal (CSF)
dari pasien RBI dan diasosiasikan dengan kelainan klinik yang rumit. Dalam model
eksperimen, perlakuan radiasi meningkatkan level ATP ekstraselular dalam supernatan
dari kultur utama neuron dan sel glial dan dalam CSF pada tikus iradiasi. Administrasi
ATP mengaktifkan mikroglia dan menginduksi pelepasan mediator pembengkakan
seperti siklooksigenase-2 (Xu et al. 2015).

Kondisi metabolik berhubungan dengan fungsi kognitif. Diketahui sinapsis

membutuhkan ATP dalam jumlah yang banyak, akan tetapi bagaimana bahan bakar dan
dampak aktivitas sinaptik terhadap level ATP dan bagaimana ATP dapat mengontrol
fungsi sinaptik dikembangkan dengan pengkodean optis secara kuantitatif. Aktivitas
bergantung kepada sintesis ATP yang cocok dengan kebutuhan energi pada fungsi
sinaptik dan menghasilkan 106 ATP bebas per terminal saraf. Stimulasi sintesis ATP
merupakan akibat dari stimulasi glikolisis dan fosforilasi oksidatif oleh aktivitas elektrik
yang bergantung pada influks kalsium. Rata-rata waktun pembentukan ATP diukur
dengan keberadaan dan ketidakhadiran Oligo atau dGlu selama periode 60 detik
(Rangaraju et al. 2013).
Untuk menginhibisi pelepasan ATP, banyak inhibitor telah didesain untuk
membentuk ikatan dengan sisi ikatan kofaktor ATP, yang bersifat spesifik dan ligan multi
target. Kedua sifat ini dapat ditingkatkan dengan pendekatan ini. Inhibitor ATP kompetitif
tipe I dikenali dengan konformasi kinase aktif dan secara khas memiliki inti cincin sistem
heteroatomik yang membentuk ikatan hidrogen pada kinase yang analog dengan ATP.
Interaksi pada wilayah lain pada sisi aktif kinase dapat diperkenalkan melalui ekstensi inti
selama perancah vektor yang disarankan (Allen et al. 2013).
ATP yang dihasilkan dapat digunakan pada proses respirasi sel sedangkan proses
penghasil ATP antara lain adalah glikolisis dan siklus krebs.
2. Proses Respirasi Sel Melibatkan Molekul Organik Penyimpan Energi
Proses respirasi merupakan proses kebalikan dari pembentukan energi. Misalnya
pada fotosintesis terjadi reaksi sebagai berikut.
CO2 + H2O + Energi (matahari) C6H12O6 + O2
Maka reaksi respirasi adalah sebagai berikut.
C6H12O6 + O2 CO2 + H2O + Energi (ATP)

Respirasi selular adalah proses perombakan molekul organik kompleks yang kaya
akan energi potensial menjadi produk limbah yang berenergi lebih rendah atau proses
katabolik yang terjadi pada tingkat seluler. Pada respirasi sel, oksigen terlibat sebagai
reaktan bersama dengan bahan bakar organik dan akan menghasilkan air, karbon
dioksida, serta produk energi utamanya berupa ATP. ATP memiliki energi untuk aktivitas
sel seperti melakukan sintesis biomolekul dari molekul pemula yang lebih kecil,
menjalankan kerja mekanik seperti pada kontraksi otot, dan mengangkut biomolekul atau
ion melalui membran menuju daerah berkonsentrasi lebih tinggi. Respirasi sel melibatkan
proses-proses yang disebut glikolisis, siklus krebs atau siklus asam sitrat, dan rantai
transpor elektron. Proses respirasi dalam sel terjadi dengan penukaran gas oksigen
menjadi gas karbondioksida disertai dengan reaksi pemecahan atau katabolisme dari
molekul organik penyimpan energi seperti protein, gula, maupun lemak. Pada beberapa
kasus seperti bila terdapat kolesterol yang tinggi, sintesis dan akumulasi kolesterol dapat
menurunkan respirasi dalam sel dan meningktkan aktivitas glikolitik. Kolesterol bersifat
hirofobik sehingga dapat menempel pada membran sel dan menurunkan fluiditas
membran. Hal ini menyebabkan adanya penghalang fisik yang menghambat difusi
oksigen, yang secara langsung mereduksi permeabilitas proton pasif dalam mitokondria
(Prabhu et al. 2013).
Membran mitokondria yang kaya kandungan kolesterol dapat juga merusak protein
mitokondria yang juga dapat mengganggu proses respirasi. Sebaliknya, menghilangkan
kolesterol dari mitokondria hepatoma meningkatkan efisiensi respirasi. Maka dari itulah,
aliran sitrat yang keluar dari siklus asam sitrat dapat merusak proses respirasi dan
memicu terjadinya sintesis kolesterol. Ekspresi berlebihan dari kunci regulasi dari
homeostatis, scap, ternyata dapat memicu proses respirasi dalam sel. Walaupun level
kolesterol dapat memberikan efek pada proses respirasi, dimungkinkan bahwa scap juga
mempengaruhi aliran glukosa (Prabhu et al. 2013).
Regulasi seluler dalam produksi energi adalah hal yang utama dalam bidang biologi
dan obat-obatan. Contohnya glukosa yang adalah sumber fundamental bagi ATP, yang
disintesis melalui glikolisis dan respirasi oksidatif dalam mitokondria. Sangat penting bagi
sel untuk mengubah sens dengan tingkat ketersediaan konsentrasi glukosa,

mentransduksi informasi secara internal, dan meregulasi ekspresi gen, penggunaan

glukosa, pembelahan sel, dan yang lainnya (Takeda et al. 2015).
Proliferasi sel secara cepat dalam media kaya glukosa, dapat memetabolisme
glukosa, menyintesis ATP lewat glikolisis, dan melepaskan etanol ke dalam media yang
disebut fermentasi. Jika glukosa terbatas, sel akan berubah dari fermentasi ke respirasi
aerobik, menggunakan etanol dalam media yang disebut pergeseran diauksik. Akhirnya
regulasi dari metabolisme glukosa diterima dengan koordinasi jalur pemberi sinyal,
termasuk SNF1/AMPK, cAMP/PKA dengan target kompleks rapamisin (Takeda et al.
2015).
Peningkatan produksi spesi oksigen reaktif (ROS) dalam mitokondria, memiliki
peran penting dalam sistem kardiovaskuler. Metabolisme oksidatif dari mitokondria terdiri
atas emisi biofoton, yang terhubung ke ROS dan stress oksidatif. Asosiasi antara
kemampuan sistem ClearViewTM untuk mengindikasi keberadaan atau ketidakhadiran
penyakit kardiovaskular melalui respirasi mitokondria yang digambarkan melalui emisi
biofoton (Rizzo et al. 2015).
Sensor STOXO2 yang sangat sensitif digunakan untuk menentukan distribusi gas
oksigen. Gas oksigen biasanya tidak dapat diukur dalam klorofil tetapi secara langsung
menentukan laju respirasi. Gradien oksigen yang dihasilkan menyerupai rangkaian
kompleks dari proses respirasi aerobik dan anaerobik dengan kedalaman tertentu, yang
diregulasi oleh level oksigen dan keberadaan donor elektron dan akseptor elektron relatif.
Berbagai variasi konsentrasi, kedalaman, dan wilayah oksigen dalam air teroksigenasi
rendah dapat mempengaruhi respirasi aerobik (Tianoet al. 2014).
Asam lemak nitro (NO2-FA) adalah elektrofili yang mempengaruhi metabolisme dan
pembengkakan dan memediasi aksi pemberi sinyal pleiotropik. Asam lemak nitro ini akan
berdampak pada reaksi redoks mitokondria untuk menginduksi pergeseran metabolik
yang melindungi jaringan di dalam sel. Asam oleat nitro (NO2-OA) secara reversibel
menginhibisi kompleks II yang berhubungan dengan proses respirasi yang bergantung

pada kondisi keasamaan atau derajat pH-nya dan pembentukan superoksidanya

(Koenitzeret al. 2015).
Nitroalkilasi subunit dapat memberikan efek yaitu mentranslasi hingga menginduksi
basal dan menyukai metabolisme glikolisis sehingga memberikan respirasi yang
maksimum. Produksi endogenus asam lemak nitroalkena selama stress iskemik
berhubungan dengan pembengkakan sebagai respon metabolismenya dan menyediakan
potensial target untuk intervensi farmakologikal (Koenitzeret al. 2015). Laju respirasi
diaktivasi oleh nilai basal dan ADP yang tinggi (Chekulayevet al. 2015).
Suatu pengembangan metode untuk mengukur fungsi respirasi mitokondria dan
fungsi profil respirasi mitokondria. Profil respirasi mitokondria dan glikolisis dikonfirmasi
bahwa porsin enterosit menghasilkan lebih banyak energi daripada glutamin daripada
glukosa. Mitokondria dianggap sebagai penyedia ATP utama untuk menyokong berbagai
fungsi biologis. Substrat seperti oksigen, glukosa, glutamin, dan yang lainnya diambil dan
secara seubkuens dikonversi menjadi energi melalui serangkaian reaksi enzimatik yang
dikontrol oleh reaksi oksidasi dan reduksi, menghasilkan ATP. Beberapa metode telah
diaplikasikan untuk mengukur fungsi dan disfungsi mitokondria dan analisis aliran
ekstraseluler sebagai asai terbaik pada sel utuh (Tanet al. 2015).
Akhir-akhir ini dikembangkan suatu metode untuk mengukur fungsi respirasi dan
fungsi dari profil mitokondria di bawah kondisi normal menggunakan analisis aliran
ekstraseluler. Metode yang optimal dikembangkan untuk mengukur respirasi mitokondria
menggunakan analisis fluks ekstraseluler adalah dengan densitas dan konsentrasi
komponen yang diinjeksikan yaitu 40000 sel per sumur. Profil respirasi mitokondria dan
glikolisis dikonfirmasi bahwa porsin enterosit secara istimewa memperoleh lebih banyak
energi dari glutamina daripada glukosa. Hasil ini menjadi dasar bagi penelitian
selanjutnya tentang fungsi dan bioenergetika dari mitokondria untuk porsin usus halus
(Tanet al. 2015).
3. Glikolisis dan Siklus Krebs

Glikolisis atau pemecahan glukosa merupakan serangkaian reaksi biokimia untuk

mengubah glukosa menjadi asam piruvat. Glikolisis adalah salah satu proses
metabolisme yang paling umum dan terjadi dengan banyak variasi di banyak jenis sel
dalam hampir seluruh bentuk organisme. Proses glikolisis sendiri menghasilkan lebih
sedikit energi per molekul glukosa dibandingkan dengan oksidasi aerobik yang
sempurna. Saat glikolisis, glukosa berupa gula berkarbon enam diuraikan menjadi dua
gula berkarbon tiga. Glukosa merupakan molekul gula yang termasuk monosakarida
dengan salah satu atom karbonnya merupakan gugus karbonil dan atom karbon lainnya
terikat pada gugus hidroksil. Setelah glukosa diubah menjadi gula yang lebih kecil,
kemudian dioksidasi dan atom sisanya disusun ulang untuk membentuk dua molekul
piruvat. Proses glikolisis menghasilkan 2 ATP, 2 NADH dan molekul organik untuk siklus
Krebs.Energi yang dihasilkan disimpan dalam senyawa organik berupa adenosine
triphosphate atau yang lebih umum dikenal dengan istilah ATP dan NADH. Lintasan
glikolisis yang paling umum adalah lintasan Embden-Meyerhof-Parnas atau jalur EMP,
yang pertama kali ditemukan oleh Gustav Embden, Otto Meyerhof dan Jakub Karol
Parnas. Selain itu juga terdapat lintasan EntnerDoudoroff yang ditemukan oleh Michael
Doudoroff dan Nathan Entner terjadi hanya pada sel prokariota, dan berbagai lintasan
heterofermentatif dan homofermentatif. Ringkasan reaksi glikolisis pada lintasan EMP
dituliskan sebagai berikut.
C6H12O6 + 2 ATP + 2 NAD+ 2 Asam piruvat + 4A TP + 2 NADH
Reaksi dari glikolisis, siklus asam sitrat dan fosforilasi oksidatif dituliskan sebagai
berikut.
C6H12O6 + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O + Energi (ATP)
Jalur glikolisis ditampilkan pada Gambar 2 (Fraga et al. 2012).

Gambar 2 Jalur glikolisis (Fraga et al. 2012)

Gambar 2 menunjukkan bahwa glikolisis merupakan proses pengubahan glukosa
menjadi suksinat dan menghasilkan ATP. Glikolisis terjadi di dalam cairan sitoplasma dan
mitokondria. Proses ini dimulai dengan masuknya glukosa ke dalam sitoplasma.
Terkadang proses glikolisis diinhibisi oleh parasit dengan polimerisasi -tubulin dalam
parasit dan menginterupsi pembentukan mikrotubular dan menginhibisi penangkapan
glukosa sehingga mengakibatkan level energi tidak cukup untuk bertahan hidup melalui
imobilisasi dan terjadilah

kematian akibat

kurangnya

produksi energi. Maka

dikembangkanlah suatu antiparasit berupa albendazole dan praziquantel yang secara

luas digunakan dan efektif. Aktivitasnya adalah menginhibisi penyerapan glukosa dan
menginduksi kontraksi otot dan meningkatkan kadar glikogen dalam tubuh. Akibatnya
transfer metabolisme energi parasit terganggu dan parasit mati (Fraga et al. 2012).

Gambar 3 Jalur glukoneogenesis (Fragaet al. 2012)

Glukoneogenesis merupakan kebalikan jalur glikolisis. Pada jalur ini glukosa
dihasilkan. Pertama kalinya oksaloasetat yang diproduksi pada siklus asam sitrat
digunakan sebagai substrat pada pembentukan glukosa. Perubahan pada proses
glikolisis, siklus asam trikarboksilat, dan konsentrasi glukosa yang disebabkan oleh
albendazole dan praziquantel dosis rendah. Analisis dilakukan menggunakan
kromatografi dan spektrofotometri. Perlakuan dosis rendah menyebabkan blokade
sebagian pada penyerapan glukosa oleh sistisersi dalam spite yang tidak menyebabkan
perubahan konsentrasi yang signifikan. Aktivasi siklus asam trikarboksilat (TCA) dengan
adanya peningkatan penerimaan sistisersi meningkatkan produksi sitrat, malat, dan ketoglutarat serta konsumsi oksaloasetat, suksinat, dan fumarat. Deteksi -ketoglutarat
mengindikasikan bahwa sistisersi telah terekspos oleh obat setelah perlakuan sehingga
melalui jalur metabolisme yang berbeda yang telah dijelaskan pada uji in-vitro (Fraga et
al. 2012).
Energi kimia dan senyawa pembangun untuk biosintesis digenerasi secara
bersamaan dengan aliran elektron dari molekul donor nutrisi menuju oksigen atau
akseptor elektron lainnya melalui proses glikolisis atau jalur fosfat pentosa (PPP), siklus
krebs, dan oksidasi terminal. Nutrien atau nutrisi ditransformasi menjadi glukosa dan
memasuki jalur glikolisis. Satu molekul tunggal glukosa dipercah menjadi dua molekul
asam piruvat melalui glikolisis dan/ atau jalur fosfat pentosa dan memproduksi dua

molekul ATP bersamaan dengan transfer elektron ke pembawa elektron yang

membentuk dua molekul NADH atau NADPH pada jalur fosfat pentosa (Paldi 2012).

Gambar 4 Skema peran kunci asetil koenzim A (Paldi 2012)

Satu molekul NADH diproduksi lebih jika piruvat didekarboksilasi menjadi asetil
koenzim A. Asetil koenzim A menunjukkan poin percabangan yang krusial seperti yang
terlihat pada Gambar 4. Asetil koenzim A memegang peran kunci pada metabolisme
sentral karbon pada jalur katabolik untuk memproduksi ATP dan jalur biosintesis. Ketika
oksigen tersedia, asetil koenzim A memasuki siklus krebs dan dioksidasi menjadi karbon
dioksida dan air.

Energi dilepaskan selama reaksi redoks dan digunakan untuk

membentuk ATP dengan jumlah akhir 36 dari molekul glukosa tunggal. Jalur paling
efisien bagi sel untuk dapat memproduksi ATP dalam jumlah besar adalah berbagai
variasi fungsi dikembangkan seperti potensial membran dan fungsi protein kontraktil.
Akan tetapi, karbondioksida dan air bukanlah substrat untuk memproduksi polisakarida,
lemak, dan polipeptida, kecuali pada fotosintesis. Jalur biosintesis menggunakan asetil
koenzim A sebagai substrat yang secara langsung berhubungan dengan fosfoenol
piruvat, oksaloasetat, dan 2-oksoglutarat. Nukleotida untuk sintesis DNA dan RNA
didasarkan pada intermediet PAP. Dengan kata lain, langkah kunci untuk jalur biosintetik
mereduksi elektron membawa NADH atau NADPH sebagai sumber energi (Paldi 2012).
Siklus asam sitrat atau citric acid cycle, tricarboxylic acid cycle, TCA cycle, krebs
cycle, Szent-Gyrgyi-Krebs cycle adalah sederetan reaksi metabolisme pernapasan

selular yang terpacu enzim yang terjadi setelah proses glikolisis, dan bersama-sama
merupakan pusat dari sekitar 500 reaksi metabolisme yang terjadi di dalam sel. Lintasan
katabolisme akan menuju pada lintasan ini dengan membawa molekul kecil untuk diiris
guna menghasilkan energi, sedangkan lintasan anabolisme merupakan lintasan yang
bercabang keluar dari lintasan ini dengan penyediaan substrat senyawaan karbon untuk
keperluan biosintesis (Che et al. 2013).
Berdasarkan jalur fundamental, jalur krebs diaktivasi dalam model neuronal
bergantung pada perturbasi kimia untuk melihat hubungannya dengan efek selular
(Pistollato et al. 2014).Proses glikolisis juga dapat diamati dengan suatu model imaging.
Glikolisis makrofag dapat menghasilkan sinyal yang mencapai scanner sehingga dapat
dimodelkan. Metabolisme dengan tekanan mekanik tinggi dapat digambarkan dengan
PET imaging, yang dikombinasikan dengan analisis tekanan dinding yang dapat secara
potensial memberikan prediksi yang dapat dipercaya. Selain itu, PET-CT scan juga dapat
digunakan untuk analisis elemen dan memonitor pengembangan dan evolusi AAA. Studi
berbasis populasi besar juga dibutuhkan untuk penemuan pendahuluan ini (Xu et al.
2010).
Metabolom dan jenjang reaksi pada siklus ini merupakan hasil karya Albert SzentGyrgyi and Hans Krebs. Sebelum masuk ke siklus Krebs, mula-mula piruvat diubah
menjadi asetil koenzim A. Kemudian asetat dari asetil koenzim A masuk sebagai molekul
berkarbon dua dan bertemu dengan oksaloasetat untuk membentuk sitrat. Langkahlangkah berikutnya menguraikan sitrat kembali menjadi oksaloasetat sehingga
membentuk siklus dengan melepaskan karbon dioksida, ATP dan molekul-molekul
pembawa elektron. Pada sel eukariota, siklus asam sitrat terjadi pada mitokondria,
sedangkan pada organismeaerob, siklus ini merupakan bagian dari lintasan metabolisme
yang berperan dalam konversi kimiawi terhadap karbohidrat, lemak dan protein menjadi
karbon dioksida, air, untuk menghasilkan energi. Reaksi lain pada lintasan katabolisme
yang sama, antara lain glikolisis, oksidasi asam piruvat dan fosforilasi oksidatif (Menga et
al. 2014).

Produk dari siklus asam sitrat adalah prekursor bagi berbagai jenis senyawa
organik. Asam sitrat merupakan prekursor dari kolesterol dan asam lemak, asam
ketoglutarat-alfa merupakan prekursor dari asam glutamat, purina dan beberapa asam
amino, suksinil-KoA merupakan prekursor dari heme dan klorofil, asam oksaloasetat
merupakan prekursor dari asam aspartat, purina, pirimidina dan beberapa asam amino
(Zhu et al. 2015).
4. Penyimpanan Energi dalam Biosintesis Asam Lemak
Asam lemak adalah senyawa alifatik dengan gugus karboksil. Bersama-sama
dengan gliserol, asam lemak merupakan penyusun utama minyak nabati atau lemak dan
merupakan bahan baku untuk semua lipid pada makhluk hidup. Asam ini mudah dijumpai
dalam minyak, margarin, atau lemak hewan dan menentukan nilai gizinya. Secara alami,
asam lemak bisa berbentuk bebas sebagai lemak yang terhidrolisis maupun terikat
sebagai gliserida. Pada daun hijau tumbuhan, asam lemak diproduksi di kloroplas. Pada
bagian lain tumbuhan dan pada sel hewan dan manusia, asam lemak dibuat di sitosol.
Proses esterifikasi yang merupakan pengikatan menjadi lipid umumnya terjadi pada
sitoplasma, dan minyak atau lemak disimpan pada oleosom. Banyak spesies tanaman
menyimpan lemak pada bijinya biasanya pada bagian kotiledon yang ditransfer dari daun
dan organ berkloroplas lain. Beberapa tanaman penghasil lemak terpenting adalah
kedelai, kapas, kacang tanah, jarak, raps/kanola, kelapa, kelapa sawit, jagung dan zaitun.
Proses biokimia sintesis asam lemak pada hewan dan tumbuhan relatif sama. Berbeda
dengan tumbuhan, yang mampu membuat sendiri kebutuhan asam lemaknya, hewan
kadang kala tidak mampu memproduksi atau mencukupi kebutuhan asam lemak tertentu.
Asam lemak yang harus dipasok dari luar ini dikenal sebagai asam lemak esensial karena
organisme yang memerlukan tidak memiliki cukup enzim untuk membentuknya.
Biosintesis asam lemak alami merupakan cabang dari daur Kalvin, yang memproduksi
glukosa dan asetil koenzim A. Proses berikut ini terjadi pada daun hijau tumbuhtumbuhan dan memiliki sejumlah variasi. Kompleks-enzim asilsintase III (KAS-III)
memadukan malonil-ACP (3C) dan asetil-KoA (2C) menjadi butiril-ACP (4C) melalui
empat tahap (kondensasi, reduksi, dehidrasi, reduksi) yang masing-masing memiliki
enzim tersendiri. Pemanjangan selanjutnya dilakukan secara bertahap, 2C setiap

tahapnya, menggunakan malonil-KoA, oleh KAS-I atau KAS-IV. KAS-I melakukan

pemanjangan hingga 16C, sementara KAS-IV hanya mencapai 10C. Mulai dari 8C, di
setiap tahap pemanjangan gugus ACP dapat dilepas oleh enzim tioesterase untuk
menghasilkan asam lemak jenuh bebas dan ACP. Asam lemak bebas ini kemudian
dikeluarkan dari kloroplas untuk diproses lebih lanjut di sitoplasma, yang dapat berupa
pembentukan ikatan ganda atau esterifikasi dengan gliserol menjadi trigliserida.
Pemanjangan lebih lanjut hanya terjadi bila terdapat KAS-II di kloroplas, yang
memanjangkan palmitil-ACP (16C) menjadi stearil-ACP (18C). Enzim 9-desaturase
kemudian membentuk ikatan ganda, menghasilkan oleil-ACP. Enzim tioesterase lalu
melepas gugus ACP dari oleat. Selanjutnya, oleat keluar dari kloroplas untuk mengalami
perpanjangan lebih lanjut. Posisi ikatan ganda juga menentukan daya reaksinya.
Semakin dekat dengan ujung, ikatan ganda semakin mudah bereaksi. Karena itu, asam
lemak Omega-3 dan Omega-6 yang merupakan asam lemak esensial lebih bernilai gizi
dibandingkan dengan asam lemak lainnya. Beberapa minyak nabati (misalnya linolenat) dan minyak ikan laut banyak mengandung asam lemak esensial. Karena
mudah terhidrolisis dan teroksidasi pada suhu ruang, asam lemak yang dibiarkan terlalu
lama akan turun nilai gizinya. Pengawetan dapat dilakukan dengan menyimpannya pada
suhu sejuk dan kering, serta menghindarkannya dari kontak langsung dengan udara. Ada
dua enzim kunci dalam biosintesis asam lemak (FA) yaitu ATP-sitrat liase (Acl) dan enzim
malat (Mae). Peran keduanya dianalisis lewat ragi oleaginous Yarrowia lipolytica
(Dulermo et al. 2015).
Pada ragi tersebut, enzim ATP-sitrat liase (Acl) dan enzim malat (Mae) disediakan
secara respektif, yaitu asetil koenzim dan NADPH untuk sintesis asam lemak. Studi level
biokimia dilakukan, akan tetapi tidak ada strain yang menempel pada enzim yang
dianalisis dalam mikroorganisme oleaginous. Pada lain pihak, peran enzim malat dalam
sintesis asam lemak menjadi kurang jelas sejak diusulkan menjadi enzim yang
bergantung pada NAD(H) mitokondria dan bukan enzim yang bergantung pada NAD(H)
sitosol. Kemudian dianalisis strain yang pertama kali tidak aktif terhadap gen
koresponden. Ketidakaktifan ACL1 menurunkan sintesis asam lemak 60 hingga 80
persen. Hal ini mengonfirmasi bahwa ACL1 memegang peranan esensial dalam sintesis

asam lemak pada ragi Yarrowia lipolytica. Akan tetapi, ketidakaktifan MAE1 tidak memiliki
efek pada sintesis asam lemak, kecuali jika asam lemak terlalu terakumulasi yang dapat
meningkatkan sintesis asam lemak sebanyak 35 persen. Hasil ini menunjukkan bahwa
asam malat bukan enzim kunci utama pada sintesis asam lemak ragi Yarrowia lipolytica
(Dulermo et al. 2015).
Selama analisis kedua mutan, diamati adanya korelasi negatif antara asam lemak
dan level manitol. Artinya banyaknya asam lemak berbanding terbalik dengan banyaknya
manitol. Ketika level asam lemak tinggi maka level manitol akan sedikit. Begitu pula
sebaliknya ketika level manitol tinggi maka level asam lemak akan sedikit. Hal ini terjadi
karena jalur sintesis asam lemak dan manitol saling berkompetisi terhadap penyimpanan
karbon, menonaktifkan YISDR, enkode manitol dehidrogenase dan mengonversi fruktosa
dan NADPH menjadi manitol dan NADP+. Konten asam lemak yang dihasilkan oleh
mutan meningkat 60 persen selama pertumbuhan fruktosa mendemonstrasikan bahwa
metabolisme manitol dapat memodulasi sintesis asam lemak pada ragi Yarrowia lipolytica
(Dulermoet al. 2015).
ATP-sitrat liase (Acl) esensial untuk sintesis asam lemak pada ragi Yarrowia
lipolyticakarena ketidakaktifan ACL1 secara dramatis menurunkan sintesis asam lemak
sambil mempromosikan sintesis sitrat dan manitol. Hasil yang paling mencolok adalah
untuk menemukan keseimbangan manitol dan asam lemak dalam strain yang tidak aktif
dalam mutan ACL1 dan MAE1. Hubungan antara asam lemak dan manitol juga diamati
ketika YISDR tidak aktif. Pada fruktosa, perubahan YISDR secara kuat merusak produksi
manitol dan fluks karbon sebagian diarahkan ke jalur sintesis asam lemak.
Keseimbangan antara manitol dan asam lemak dapat ditentukan oleh kompetisi aliran
karbon.

Sebagai

tambahan,

fenotip

YISDR

mengonfirmasi

bahwa

YISDR

mengenkodekan manitol dehidrogenase dan merepresentasikan contoh pertama dari

enzim tipe ini dalam ragi Ascomycetes. Mutan YISDR tetap dapat memproduksi manitol
dari fruktosa, yang mungkin bergantung pada aktivitas enzim yang dienkodekan oleh
YALI0D18964g and YALI0E12463g. Delesi gen-gen ini membantu untuk mengetahui
metabolisme manitol dalam ragi Ascomycetes dengan lebih baik (Dulermo et al. 2015).

DAFTAR PUSTAKA
Allen CE, Chow CL, Caldwell JJ, Westwood IM, Montfort RLM, Collins I. 2013. Synthesis
and evaluation of heteroaryl substituted diazaspirocyclesas scaffolds to probe the
ATP-binding site of protein kinases. Bioorganic & Medicinal Chemistry. 21: 5707
5724 http://dx.doi.org/10.1016/j.bmc.2013.07.021
Che X, Liu J, Huang H, Mi X, Xia Q, Li J, Zhang D, Ke Q, Gao J, Huang C. 2013. p27
suppresses cyclooxygenase-2 expression by inhibiting p38 and p38-mediated
creb phosphorylation upon arsenite exposure. Biochimica et Biophysica Acta. 1833:
20832091 http://dx.doi.org/10.1016/j.bbamcr.2013.04.012
Chekulayev V, Mado K, Shevchuk I, Koit A, Kaldma A, Klepinin A, Timohhina N, Tepp K,
Kandashvili M, Ounpuu L, Heck K, Truu L, Planken A, Valvere V, Kaambre T. 2015.
Metabolic remodeling in human color ectal cancer and surrounding tissues:
alteration sin regulation of mitochondrial respiration and metabolic fluxes.
Biochemistry and Biophysics Reports.4: 111125
Dulermo T, Lazar Z, Dulermo R, Rakicka M, Haddouche R, Nicaud JM. 2015. Analysis of
ATP-citrate lyase and malic enzyme mutants of Yarrowialipolytica points out the
importance of mannitol metabolism in fattyacid synthesis. Biochimica et Biophysica
Acta. 1851: 11071117http://dx.doi.org/10.1016/j.bbalip.2015.04.007
Frster K, Turina P, Drepper F, Haehnel W, Fischer S, Grber P, Petersen J. 2010. Proton
transport coupled ATP synthesis by the purified yeast H+-ATP synthase in
proteoliposomes.

Biochimica

et

Biophysica

Acta.

1797:

18281837

doi:10.1016/j.bbabio.2010.07.013
Fraga CM, Costa TL, Bezzera CJB, Junior LSR, Vinaud MC. 2012. Taenia crassiceps:
Host treatment alters glycolisis and tricarboxilic acid cyclein cysticerci. Experimental
Parasitology. 130: 146151 doi:10.1016/j.exppara.2011.11.001

Ishmukhametov RR, Pond JB, Al-Huqail A, Galkin MA, Vik SB. 2008. ATP synthesis
without R210 of subunit a in the Escherichia coli ATP synthase. Biochimica et
Biophysica Acta. 1777: 3238 doi:10.1016/j.bbabio.2007.11.004
Koenitzer JR, Bonacci G, Woodcock SR, Chen CS, Medellin NC, Kelley EE, Schopfer FJ.
2015. Fatty acid nitroalkenes induce resistance to ischemic cardiac injury by
modulating mitochondrial respiration at complex II.Redox Biology. 8: 110
http://dx.doi.org/10.1016/j.redox.2015.11.002
Lim To WK, Kumar P, Marshall JM. 2015. Hypoxia is an effective stimulus for vesicular
release of ATPfrom human umbilical vein endothelial cells. Placenta. 36: 759-766
http://dx.doi.org/10.1016/j.placenta.2015.04.005
Liu P, Lill H, Bald D. 2014. ATP syntase in mycobacteria: Special features and
implications for a function as drug target. Biochimica et Biophysica Acta. 1837:
12081218 http://dx.doi.org/10.1016/j.bbabio.2014.01.022
Menga A, Iacobazzi V, Infantino V, Avantaggiati ML, Palmieri F. 2014. The mitochondrial
aspartate/ glutamate carrier isoform 1 gene expression is regulated by creb in
neuronal cells. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 60: 157
166 http://dx.doi.org/10.1016/j.biocel.2015.01.004
Milne N, Luttik MAH, Rojas HFC, Wahl A, Maris AJA, Pronk JT, Daran JM. 2015.
Functional expression of a heterologous nickel-dependent, ATP-independent
urease in Saccharomycescerevisiae. Metabolic Engineering. 30: 130140
http://dx.doi.org/10.1016/j.ymben.2015.05.003
Paldi A. 2012. What makes the cell differentiate? Progress in Biophysics and Molecular
Biology. 110: 41-43 doi:10.1016/j.pbiomolbio.2012.04.003
Pistollato F, Louisse J, Scelfo B, Mennecozzi M, Accordi B, Basso G, Gaspar JA, Zagoura
D, Barilari M, Palosaari T, Sachinidis A, Hoffmann SB. 2014. Development of a
pluripotent stem cell derived neuronal model toidentify chemically induced pathway

perturbations in relation toneurotoxicity: Effects of creb pathway inhibition.

Toxicology

and

Applied

Pharmacology.

280:

378388

http://dx.doi.org/10.1016/j.taap.2014.08.007
Prabhu AV, Krycer JR, Brown AJ. 2013. Overexpression of a key regulator of lipid
homeostasis, Scap, promotesrespiration in prostate cancer cells. Federation of
European

Biochemical

Societies

Letters.

587:

983988

http://dx.doi.org/10.1016/j.febslet.2013.02.040
Rangaraju V, Calloway N, Ryan TA. 2014. Activity-driven local ATP synthesisis required
for synaptic function. Cell. 156: 825835 http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2013.12.042
Rizzo NR, Hank NC, Zhang J. 2015. Detecting presence of cardiovascular disease
through mitochondria respiration as depicted through biophotonic emission.Redox
Biology. 8: 1117 http://dx.doi.org/10.1016/j.redox.2015.11.014
Sassi N, Mattarei A, Azzolini M, Szabo I, Paradisi C, Zoratti M, Biasutto L. 2014.
Cytotoxicity of mitochondria-targeted resveratrol derivatives: Interactions with
respiratory chain complexes and ATP synthase. Biochimica et Biophysica Acta.
1837: 17811789 http://dx.doi.org/10.1016/j.bbabio.2014.06.010
Sugawara K, Fujikawa M, Yoshida M. 2013. Screening of protein kinase inhibitors and
knockdown experiments identified four kinases that affect mitochondrial ATP
synthesis activity. Federation of European Biochemical Societies Letters. 587:
38433847 http://dx.doi.org/10.1016/j.febslet.2013.10.012
Takeda K, Starzynski C, Mori A, Yanagida M. 2015. The critical glucose concentration for
respiration-independentproliferation of fission yeast, Schizosaccharomyces pombe.
Mitochondrion. 22: 9195 http://dx.doi.org/10.1016/j.mito.2015.04.003
Tan B, Xiao H, Li F, Zeng L, Yin Y. 2015. The profiles of mitochondrial respiration and
glycolysis usingextracellular flux analysis in porcine enterocyte IPEC-J2. Animal
Nutrition. Xxx: 1-5 http://dx.doi.org/10.1016/j.aninu.2015.08.004

Tiano L, Robledo EG, Dalsgaard T, Devol AH, Ward BB, Ulloa O, Canfield DE, Revsbech
NP. 2014. Oxygen distribution and aerobic respiration

in the north and south

eastern tropical Pacific oxygen minimum zones. Deep-Sea Research I. 94: 173183
http://dx.doi.org/10.1016/j.dsr.2014.10.001
Xu XY, Borghi A, Nchimi A, Leung J, Gomez P, Cheng Z, Defraigne JO, Sakalihasan N.
2010. High Levels of 18F-FDG uptake in aortic aneurysm wall are associated with
high wall stress. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 39: 295301 doi:10.1016/j.ejvs.2009.10.016
Xu P, Xu Y, Hu B, Wang J, Pan R, Murugan M, Wu LJ, Tang Y. 2015. Extracellular ATP
enhances radiation-induced brain injury throughmicroglial activation and paracrine
signaling via P2X7 receptor. Brain, Behavior, and Immunity. 50: 87100
http://dx.doi.org/10.1016/j.bbi.2015.06.020
Zhu Y, Li CS, Wang YY, Zhou SN. 2015. Change of microRNA-134, creb and p-creb
expression in epileptic rat. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 292-298
journal homepage:www.elsevier.com/locate/apjtm No:81371439